全血質控物細胞生物活性保護劑及其製法的製作方法

2023-04-23 06:29:11 1

專利名稱：全血質控物細胞生物活性保護劑及其製法的製作方法
技術領域：
本發明涉及全血細胞生物活性保護劑配方及其血細胞分析儀質控物製備技術。
背景技術：
全血細胞質控物或校準品是血細胞分析儀溯源性必備計量物質；作為血細胞分析儀室內外質量控制，評價與確保臨床實驗結果準確性唯一依據。國內外全血質控物或校準品大多數採用動物(如禽類)血細胞或高分子材料(塑料粒子)作為替代品較廣泛的應用於臨床檢驗。正在臨床上使用的全血細胞質控物或校準品2～8℃保存有效期為3～6個月不等，開瓶後為一周。

發明內容
本發明利用多種細胞活性保護劑的組合效應，包括A液和B液，A液為全血細胞活性保養液、B液為全血細胞活性保護劑，1.配方組成①全血細胞活性保養液(A液)按以下組分和濃度範圍製成原料為分析純，氯化鈉5.8～9.0g/L、硼酸1.0～4.0g/L、硼酸鈉0.2～2.0g/L、海藻糖5.0～30.0g/L、海藻酸鈉0.5～3.0g/L、葡萄糖1.0～5.0g/L、環狀糊精0.2～1.00g/L、小牛血清0.2～2.0g/L。
②全血細胞穩定劑(B液)按以下組分和濃度範圍製成原料為分析純，其濃度範圍分別為甲醇0.5～3.0g/L、丙三醇1.0～6.0g/L、多聚甲醛0.01～0.20g/L、聚蔗糖0.4～2.00g/L、聚乙二醇1.0～3.50g/L、丙二醇1.0～3.50g/L、戊二醛0.2～1.50g/L、迭氮鈉0.5～1.50g/L。
③細胞儲存液即C液配製臨用時取A液、B液按1∶1的比例緩慢混合置2～8℃靜止8～12小時過濾(φ2μ)或取上清液使用。
2.全血質控物細胞活性保護劑配製工藝(1)血液來源省級中心血站健康人義務獻血。
(2)質量要求RBC、MCV、HGB、PLT和WBC及其分類值在正常範圍；生物源性病原體如B型肝炎病毒(HBsAg)、抗-HCV、抗-HIV等傳染性指標均為陰性。
(3)離心分離購買健康人獻血者新鮮抗凝全血(「0」、「A」、「B」血型)400ml，置水平離心機3000轉離心30分鐘使血細胞成分與血漿分離，緩慢吸取血漿，計其體積Xml(X為150～200ml)，剩餘血液體積為(400ml-X)待用。
(4)全血細胞處理先緩慢加入Xml A液，輕輕搖勻置2～8℃過夜保存；再緩慢加入Xml B液，輕輕搖勻置2～8℃過夜保存。
(5)全血細胞保存吸取處理好的全血細胞上清液2Xml。緩慢加入儲存液(C液)Xml血袋中，邊加邊輕輕搖勻，充分混勻後密封置2～8℃保存，過24小時再輕輕顛倒4～6次使其充分混勻，待留樣觀察結果可行後按規定量分裝使用。
(6)注意事項所有實驗器具必需潔淨並高壓消毒滅菌；實驗全過程必需無菌操作；加入A、B液應緩慢、混勻時不可用力振搖。
3.質量監測①對照(1～3號)管取血液分離前輕輕混勻血液吸取血液1ml×3支；②實驗(4～6號)管吸取離心血液與全血細胞活性保養液(A液)和全血細胞活性保護劑(B液)等量混合液(C液)2ml×3支作為留樣觀察；③1～6號血樣分別在標化好的血細胞分析儀(如TEK、Kx-21等)上隔2～3日連續測定10次分析其結果，觀察細胞變化過程，待全血細胞形態穩定後，進行定量分裝，衝入氮氣加蓋密閉後置2～8℃保存有限期為一年，開瓶使用室溫(25℃以下)可保存一周。該產品經過生物溯源性連結及賦值；在有效期內全血質控物或校準品，可作為血細胞分析儀的質控品或校準物。
本發明採用具有對組織細胞保護及蛋白質、酶和脂類緩慢固定的化學物質，使健康獻血員(「O」、「A」、「B」、「AB」血型)新鮮全血細胞離體後，全血細胞在較長時間內仍然保持代謝生理活性。血液離心分離獲得血細胞成分，在等量體積的細胞保養液(A液)和細胞穩定劑(B液)作用下，一方面，A液提供了維持血細胞正常生理活性所需要的營養成分進行無氧酵解；另一方面，B液中含有較低濃度的細胞膜及細胞質固定物質，利用多種細胞活性保護劑的組合效應，能夠緩慢地滲透細胞膜作用於細胞質，有效地與細胞成分-蛋白質、酶、脂類等生物分子牢固結合從而使白細胞、紅細胞、血小板不同程度地得到固定及有效保護；使血細胞保持其表觀形態特徵。因此，處理好的血細胞，經過生物溯源性連結及賦值；在有效期內全血質控物或校準品，可作為血細胞分析儀的質控品或校準物，當加入儀器配套試劑溶血劑和稀釋液時，質控物中的紅細胞能迅速溶解，而白細胞在受溶血劑中表面活性劑的作用下表觀體積及內部結構發生明顯變化，滿足血細胞分析儀計數及達到分類之效果。
本發明研製的全血細胞質控物或校準品粘稠度低，容易混勻；加蓋密閉後置2～8℃保存有限期為一年，開瓶使用室溫(25℃以下)可保存一周，可用於顯微鏡計數及細胞染色。
本發明採用健康人全血細胞，利用多種細胞活性保護劑的組合效應，經技術處理好的全血細胞質控物或校準品有良好的穩定性，不僅可以細胞染色及顯微鏡計數，而且有效期較臨床現有質控物或校準品長。
具體實施例實施例1本發明利用多種細胞活性保護劑的組合效應，包括A液和B液，A液為全血細胞活性保養液、B液為全血細胞活性保護劑，3.配方組成①全血細胞活性保養液(A液)按以下組分和濃度範圍製成原料為分析純，氯化鈉7g/L、硼酸3.0g/L、硼酸鈉0.5g/L、海藻糖20.0g/L、海藻酸鈉0.8g/L、葡萄糖3.0g/L、環狀糊精0.6g/L、小牛血清0.6g/L。
②全血細胞穩定劑(B液)按以下組分和濃度範圍製成原料為分析純，其濃度範圍分別為甲醇0.6g/L、丙三醇2.0g/L、多聚甲醛0.01g/L、聚蔗糖2.00g/L、聚乙二醇3.50g/L、丙二醇3.50g/L、戊二醛1.50g/L、迭氮鈉1.50g/L。
③細胞儲存液即C液配製臨用時取A液、B液按1∶1的比例緩慢混合置2～8℃靜止8～12小時過濾(φ2μ)或取上清液使用。
上述全血質控物細胞活性保護劑配製工藝如下(1)血液來源省級中心血站健康人義務獻血。
(2)質量要求RBC、MCV、HGB、PLT和WBC及其分類值在正常範圍；生物源性病原體如B型肝炎病毒(HBsAg)、抗-HCV、抗-HIV等傳染性指標均為陰性。
(3)離心分離購買健康人獻血者新鮮抗凝全血(「O」、「A」、「B」血型)400ml，置水平離心機3000轉離心30分鐘使血細胞成分與血漿分離，緩慢吸取血漿，計其體積160ml)，剩餘血液體積為240ml待用。
(4)全血細胞處理先緩慢加入160ml A液，輕輕搖勻置2～8℃過夜保存；再緩慢加入160ml B液，輕輕搖勻置2～8℃過夜保存。
(5)全血細胞保存吸取處理好的全血細胞上清液2Xml。緩慢加入儲存液(C液)160ml血袋中，邊加邊輕輕搖勻，充分混勻後密封置2～8℃保存，過24小時再輕輕顛倒4～6次使其充分混勻，待留樣觀察結果可行後按規定量分裝使用。
(6)注意事項所有實驗器具必需潔淨並高壓消毒滅菌；實驗全過程必需無菌操作；加入A、B液應緩慢、混勻時不可用力振搖。
實施例2包括A液和B液，A液為全血細胞活性保養液、B液為全血細胞活性保護劑，4.配方組成①全血細胞活性保養液(A液)按以下組分和濃度範圍製成原料為分析純，氯化鈉8.0g/L、硼酸4.0g/L、硼酸鈉1.5g/L、海藻糖10.0g/L、海藻酸鈉2.0g/L、葡萄糖3.0g/L、環狀糊精0.3g/L、小牛血清0.9g/L。
②全血細胞穩定劑(B液)按以下組分和濃度範圍製成原料為分析純，其濃度範圍分別為甲醇2.5g/L、丙三醇3.0g/L、多聚甲醛0.08g/L、聚蔗糖1.00g/L、聚乙二醇2.50g/L、丙二醇2.80g/L、戊二醛1.20g/L、迭氮鈉0.9g/L。
③細胞儲存液即C液配製臨用時取A液、B液按1∶1的比例緩慢混合置8℃靜止10小時過濾(φ2μ)。
上述全血質控物細胞活性保護劑配製工藝如下1.取健康人獻血者新鮮抗凝全血(「O」、血型)200ml，置水平離心機3000轉離心30分鐘使血細胞成分與血漿分離，緩慢吸取血漿，計其體積90ml，剩餘血液體積為110ml待用。
2.先緩慢加入90ml A液，輕輕搖勻置8℃過夜保存；再緩慢加入90ml B液，輕輕搖勻置7℃過夜保存。
3.吸取處理好的全血細胞上清液180ml。緩慢加入儲存液(C液)90ml血袋中，邊加邊輕輕搖勻，充分混勻後密封置7℃保存，過24小時再輕輕顛倒4～6次使其充分混勻，待留樣觀察結果可行後按規定量分裝使用。
權利要求
1.一種全血質控物細胞生物活性保護劑，其特徵在於利用多種細胞活性保護劑的組合效應，包括A液和B液，A液為全血細胞活性保養液、B液為全血細胞活性保護劑，(1)、全血細胞活性保養液按以下組分和濃度範圍製成氯化鈉5.8～9.0g/L、硼酸1.0～4.0g/L、硼酸鈉0.2～2.0g/L、海藻糖5.0～30.0g/L、海藻酸鈉0.5～3.0g/L、葡萄糖1.0～5.0g/L、環狀糊精0.2～1.00g/L、牛血清白蛋白0.2～2.0g/L迭氮鈉0.5～1.50g/L；(2)、全血細胞穩定劑按以下組分和濃度範圍製成甲醇0.5～3.0g/L、丙三醇1.0～5.0g/L、多聚甲醛0.01～0.20g/L、聚蔗糖0.4～2.00g/L、聚乙二醇1.0～3.50g/L、丙二醇1.0～3.50g/L、戊二醛0.2～1.50g/L。
2.一種如權利要求1所述的全血質控物細胞生物活性保護劑的製法，其特徵在於由以下工藝製成，(1)離心分離採集健康人獻血者新鮮抗凝全血400ml，要求採集的血液傳染性指標均為陰性，置水平離心機3000轉離心30分鐘，使血細胞成分與血漿分離，緩慢吸取血漿，計其體積Xml，X為150～200ml，剩餘血液體積為(400ml-X)待用；(2)、全血細胞處理先緩慢加入Xml A液，輕輕搖勻置2～8℃過夜保存；再緩慢加入Xml B液，輕輕搖勻置2～8℃過夜保存；(3)全血細胞保存吸取處理好的全血細胞上清液2Xml，取A液、B液按1∶1的比例緩慢混合置2～8℃靜止8～12小時過濾，φ2μ，即得儲存液，緩慢加入儲存液Xml到血袋中，邊加邊輕輕搖勻，充分混勻後密封置2～8℃保存，過24小時再輕輕顛倒4～6次使其充分混勻，待留樣觀察結果可行後按規定量分裝使用。
全文摘要
本發明利用多種細胞活性保護劑的組合效應，包括A液和B液，A液為全血細胞活性保養液、B液為全血細胞活性保護劑，一方面，A液提供了維持血細胞正常生理活性所需要的營養成分進行無氧酵解；另一方面，B液中含有較低濃度的細胞膜及細胞質固定物質，能夠緩慢地滲透細胞膜作用於細胞質，有效地與細胞成分－蛋白質、酶、脂類等生物分子牢固結合從而使白細胞、紅細胞、血小板不同程度地得到固定及有效保護；使血細胞保持其表觀形態特徵。本發明採用健康人全血細胞，有良好的穩定性，不僅可以細胞染色及顯微鏡計數，而且有效期較臨床現有質控物或校準品長。
文檔編號C12N5/08GK1683522SQ20051001834
公開日2005年10月19日 申請日期2005年3月4日 優先權日2005年3月4日
發明者顏簫, 周洪華 申請人:江西特康科技有限公司