藻酸雙酯鈉在製備改善心臟功能藥物中的應用的製作方法

2023-04-23 01:58:01

專利名稱：藻酸雙酯鈉在製備改善心臟功能藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬中藥的醫藥用途，主要涉及中藥藻酸雙酯鈉在製備改善心臟功能 藥物中的應用，適合製備心臟缺血再灌注後預防心臟功能損傷藥物的場合。
技術背景心臟功能不全是冠心病的嚴重併發症，臨床上冠心病除以心絞痛和急性心 肌梗死表現外，相當一部分病人逐漸出現不同程度的心臟功能不全,且有較多病 人以頑固性心力衰竭居多。諸多抗心力衰竭藥物療效不甚理想，特別是對由急 性冠狀動脈症候群引起的心臟損傷和死亡。臨床上很多情況如冠脈成形術、溶 栓療法、冠狀動脈旁路手術等，都面臨著缺血再灌注後心臟功能損傷的問題。 為此，怎麼防止局部缺血再灌注損傷是相當受關注的問題。目前這方面的治療 主要依賴西藥，而在利用中藥保護心臟功能方面的研究未有突破性進展。因此， 如何發展祖國傳統醫學，利用我國特有資源，發揮中醫藥在保護冠心病並發心 髒功能不全方面的治療特色，具有重要的臨床意義和社會效益。鑑於這樣的背 景進行了本發明，其目的是提供用於由局部缺血再灌注引起的心臟功能障礙或 心肌損傷的預防或治療劑，其通過不同於現有療法的機理呈現出有效性。藻酸雙酯鈉是以海藻酸為基礎原料，用化學方法引入有效基團合成而得的 一種硫酸多糖，為半合成海洋藥物，屬酸性多糖類物質，藻酸雙酯鈉的平均分子量在12000—17000，它是一種線型陰離子聚電介質，具有類肝素樣的生 理活性，但無肝素樣的毒副作用，乃新型類肝素海洋藥物[1]。既往臨床實踐及 實驗研究證實，藻酸雙酯鈉具有陰離子聚電介質的線型結構，可增加紅細胞表 面的陰性電荷，增強相互間的排斥力、故能阻抗紅細胞之間或紅細胞與血管壁 之間的粘附，因而具有明顯的降低血液粘度的作用，同時具有抗凝血作用，其 效力相當於肝素的1/3 1/2，有明顯的降血脂、擴張血管、降血壓及降血糖等 功能[2，3'4]。藻酸雙酯鈉臨床主要用於缺血性腦血管病如腦血栓、腦栓塞、短暫 性腦缺血發作及心血管疾病如高血壓病、高脂血症、冠狀動脈粥樣硬化性心臟 病、心絞痛等疾病的防治。此外，也可用於治療慢性阻塞性肺疾病、肺源性心 髒病、腎病症候群、皮膚病、糖尿病周圍神經病、播散性血管內凝血、慢性腎 小球腎炎及出血熱等[5]。但是，迄今為止，並不清楚藻酸雙酯鈉是否可以作為 一種直接保護缺血再灌注後心臟功能損傷的治療藥物，因此，有待在此基礎上對藻酸雙酯鈉進行二次開發。 發明內容本發明的目的是提供中藥藻酸雙酯鈉在製備改善心臟功能藥物中的應用。 所述藻酸雙酯鈉的應用主要是在製備心臟缺血再灌注後預防心臟功能損 傷藥物中的應用。為觀察藻酸雙酯鈉對缺血再灌注後心臟心臟功能的直接保護作用，本發明採用離體心臟灌流技術(Langendorff模型)，以排除活體實驗中各種神經、體 液因素對心臟功能的影響。結果發現，藻酸雙酯鈉能夠直接改善缺血再灌注後 的心臟功能不全，且該作用與藻酸雙酯鈉拮抗炎症因子TNF-a的表達，抑制與 炎症有關的通路p38和JNK通路的激活有關。本發明所述的藻酸雙酯鈉可與藥效學允許的藥用賦形劑組合製備成製劑。本發明所述的藻酸雙酯鈉與藥用賦形劑製備的製劑形式主要包括液體制 劑和固體製劑。固體製劑主要包括顆粒劑、片劑、膠囊劑(含軟膠囊)、滴丸 劑。液體製劑主要包括口服液體製劑和注射液體製劑。所述製劑的給藥形式主要包括口服給藥和靜脈給藥。本發明的有益效果是1)對中藥藻酸雙酯鈉的藥理作用進行二次開放， 拓展了藻酸雙酯鈉的藥用範圍；2)利用藻酸雙酯鈉的改善心臟功能作用，將 藻酸雙酯鈉應用於各種心臟缺血再灌注後心臟功能不全情況的治療。


圖1是實驗步驟的具體圖解。圖2是藻酸雙酯鈉對離體心臟功能各指標的影響。圖3是藻酸雙酯鈉對離體缺血再灌注後心臟冠脈流出液中心臟損傷標誌物 CK和LDH釋放的影響。圖4是藻酸雙酯鈉對離體心臟組織和心臟灌流液中TNF-a量的影響。圖5是藻酸雙酯鈉對炎症相關通路p38， JNK和ERK通路表達的影響。
具體實施方式
本發明結合實施例和附圖作進一 步的說明。實施例1大鼠離體心臟全心缺血/再灌注模型 (1)實驗藥物藻酸雙酯鈉注射液為青島海爾藥業有限公司產品，原藥(50 g丄—1)以純水 為溶劑，臨用前以Krebs-Henseleit (KH, mmol'L": NaCl 118.3，KC1 4.74，K2HP04 1.18， MgS04 1.2， NaHC03 24.9， CaCl2 1.25，葡萄糖ll.l)液稀釋至所需濃度的藻酸雙酯鈉溶液備用。(2)實驗步驟 清潔級雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，體重250 300g。 大鼠擊昏脫頸髓後仰臥固定於鼠板上，開胸暴露心臟，快速取出心臟置於 盛4'CKH液的培養皿中使其暫時冷停跳。充分暴露其主動脈根部，將離體心臟 懸掛於Langendor璃體心臟灌流裝置上行主動脈逆行恆壓[100cmH20(1 cmH20=0.098 kPa)]灌注KH液。37°〇恆溫並以95%02和5%(202混合氣體持續充 氣。心臟剪去左心耳，經左房插入尖端帶有水囊的導管至左室，然後通過壓力 傳感器，接MEDLAB系統，通過微調注水器調節左心室舒張末壓(left ventricular end diastolic pressure, LVEDP)維持在4 8 mmHg範圍。記錄左心室發展峰壓 (left ventricular developed pressure, LVDP)、 LVEDP、左室內壓等容相最大上 升及下降速率(+dp/dtmax， -dp/dtmax)和心率(heart rate, HR)。記錄冠脈流量 (coronary flow, CF)。實驗大鼠分組如下所有心臟在幹預前先給予20 min的KH液灌注平衡期，然後做以下分組 (1)，正常對照組，給予KH液灌注60min (Al組)；(2)缺血對照組，20 min 全心缺血期後再給予60min的KH液復灌期(A2組)；(3)藻酸雙酯鈉組，20 min 全心缺血期後再給予含藻酸雙酯鈉0.3 mg/L (A3組)，1 mg/L (A4組)，3 mg/L (A5 組)，10mg/L(A6組)，30mg/L(A7組)，或100mg/L(A8組)的KH液復灌60 min。連續記錄各項心臟功能指標，參見圖l，圖中a:平衡期；b: KH液灌注期； C:全心缺血期；d: KH液復灌期；e:含各濃度藻酸雙酯鈉的KH液復灌期。實施例2藻酸雙酯鈉對大鼠離體心臟缺血再灌注後心臟功能的影響(1) 記錄平衡20min時的心臟功能各項指標。對正常對照組大鼠，平衡 後再灌注60 min期間每10 min記錄一次心臟功能指標。對缺血對照組和藻酸雙 酯鈉組缺血後再灌注的60 min期間每10 min記錄一次心臟功能指標。同時收集 冠脈流出液測定其中的CK和LDH的含量。(2) 結果參見圖2、圖3，全心缺血再灌注後和正常對照組相比，LVDP， +dp/dtmax， -(1 他11^乂降低，LVEDP升高，CF減少，HR無明顯改變，CK、 LDH釋放進 入冠脈流出液的量顯著增多。在藻酸雙酯鈉治療組觀察到，和缺血對照組相比， 1 30mg/L的藻酸雙酯鈉再灌注60min使得LVDP， +dp/dtmax， -dp/dtmax升高，LVEDP降低，CF增加，HR無明顯改變，，CK、 LDH釋放進入冠脈流出 液的量減少。0.3 mg/L的藻酸雙酯鈉對上述各項心臟功能無明顯改善作用。100 mg/L的藻酸雙酯鈉對心臟功能有抑制作用，應避免使用。實施例3藻酸雙酯鈉對大鼠心臟組織和冠脈流出液中TNF-a含量的影響(1) 取正常對照組平衡後KH液灌流30 min和60 min時的冠脈流出液， 以及缺血組再灌注後30 min和60 min的冠脈流出液，一20 'C保存。實驗結束 後將心臟迅速標記稱重，一70"C凍存。取新鮮標本每個樣本各100mg，抽提 全蛋白，測濃度後一7(KC凍存備用。測定收集的冠脈流出液和心臟組織中的 TNF-a含量。(2) 結果參見圖4，缺血再灌注後心臟組織和冠脈流出液中的TNF-a含量均明顯上 升，1 30 mg/L的藻酸雙酯鈉治療降低了 TNF-a的表達。0.3 mg/L和100 mg/L 的藻酸雙酯鈉對TNF-a的表達無明顯影響。實施例4藻酸雙酯鈉對大鼠心臟p38， JNK和ERK通路的影響(1) 實驗結束後將心臟迅速標記稱重，一70。C凍存。取新鮮標本每個 樣本各100mg，抽提全蛋白，測濃度後一7(TC凍存備用。取40嗎蛋白於8 % SDS-PAGE電泳後，轉至PVDF膜。用5%脫脂牛奶室溫封閉1 h，然後與 磷酸化p38單抗(l: 1000)，磷酸化JNK單抗(1: lOOO)或磷酸化ERK單抗(h 1000)4'C孵育過夜，之後與羊抗兔二抗(h 2500)和GAPDH(1: IOOOO)室溫孵 育lh， ECL試劑顯影檢測陽性信號。以GAPDH表達水平作為內參。(2) 結果參見圖5，全心缺血再灌注後和正常對照組相比，磷酸化p38和磷酸化JNK 的表達都增強。1 30 mg/L的藻酸雙酯鈉再灌注60 min後，磷酸化p38和磷 酸化JNK的表達均有減弱，但和正常對照組相比未降至正常水平。0.3 mg/L 和100 mg/L的藻酸雙酯鈉對磷酸化p38和磷酸化JNK的表達無影響。磷酸化 ERK在各組的表達均無差異。上述這些結果顯示出藻酸雙酯鈉對心臟缺血再灌注損傷引起的心臟功能 惡化和心肌損傷有保護作用。此外，藻酸雙酯鈉發揮該保護作用的有效濃度範 圍為1 30 mg/L。低於1 mg/L的劑量無明顯保護作用。100 mg/L的劑量對心 髒功能有抑制作用。
權利要求
1. 一種藻酸雙酯鈉在製備改善心臟功能藥物中的應用，其特徵是在製備心臟缺血再灌注後預防心功能損傷藥物中的應用。
2. 根據權利要求1所述的藻酸雙酯鈉的應用，其特徵是所述藥物的制 劑形式主要包括液體製劑和固體製劑。
3. 根據權利要求1所述的藻酸雙酯鈉的應用，其特徵是固體製劑主要 包括顆粒劑、片劑、膠囊劑、滴丸劑。
4. 根據權利要求1所述的藻酸雙酯鈉的應用，其特徵是液體製劑主要 包括口服液體製劑和注射液體製劑。
5. 根據權利要求1所述的藻酸雙酯鈉的應用，其特徵是所述藥物的給 藥方式包括口服給藥和注射給藥。
全文摘要
本發明提供中藥藻酸雙酯鈉在製備改善心臟功能藥物中的應用。主要是在製備心臟缺血再灌注後預防心臟功能損傷藥物中的應用。本發明提供的藻酸雙酯鈉能夠直接改善缺血再灌注後的心臟功能不全，且該作用與藻酸雙酯鈉拮抗炎症因子TNF-α的表達，抑制與炎症有關的通路p38和JNK通路的激活有關。本發明製備的藥物製劑形式主要包括液體製劑和固體製劑。本發明對中藥藻酸雙酯鈉的藥理作用進行二次開放，拓展了藻酸雙酯鈉的藥用範圍；並利用藻酸雙酯鈉的改善心臟功能作用，將藻酸雙酯鈉應用於製備治療各種心臟缺血再灌注後心臟功能不全情況的藥物。
文檔編號A61P9/10GK101284013SQ200810061910
公開日2008年10月15日 申請日期2008年5月12日 優先權日2008年5月12日
發明者瑩 楊, 胡申江 申請人:浙江大學