長綠期金銀木快速繁殖方法

2023-04-23 01:54:11 1

專利名稱：長綠期金銀木快速繁殖方法
長綠期金銀木快速繁殖方法
&術領域
本發明屬於植物快速繁殖技術領域，具體是指一種長綠期金銀木快速繁殖方法。
背景技術：
金銀木(丄o/w'cera i33朋cto)為忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬屬(Lonicera L.) — 落葉灌木樹種，具有喜光、抗旱、適應性強、管理粗放的特點，在中國北方園林造景中廣泛 應用，是中國北方城鄉綠化中廣泛應用的一種觀賞花灌木，具有抗逆性強、管理粗放等特點， 春季觀花，秋季觀果，花果入藥，具有較高的觀賞與藥用價值。正常落葉時間在每年的11 月中旬，主要通過播種方法繁殖。長綠期金銀木及其無性系後代的落葉時間在每年的12月 中下旬左右，比普通金銀木綠期長20 30天左右。長綠期金銀木是金銀木一優良自然變種， 只有通過組織培養等無性繁殖才能保持"長綠"優良性狀。
長綠期金銀木的也可通過扦插、嫁接等方法繁殖，由於母本少，成苗量少，扦插、嫁接 繁殖方法係數低特點，限制了這一優良類型的生產推廣。為快速推廣生產利用這一鄉土耐寒 樹種，需要研究長綠期金銀木快速繁殖的技術參數。

發明內容
本發明提供一種長綠期金銀木快速繁殖方法，所述的長綠期是指落葉時間的12月下旬左 右的金銀木，其綠期長，耐寒性能好。所述的繁殖方法選取材料為1 4年生長綠期金銀木 (丄o"iceraiH朋cAi' 'Canglvqi')植株。試驗選取長綠期金銀木基段作為外植體材料。具 體方法為
步驟一、外植體的採集。
日光溫室釆集一年生帶芽莖段，自來水衝洗乾淨後，採用70%酒精、0.1%HgCl2、 3% 5%次氯酸鈉、吐溫20、無菌蒸餾水等進行消毒。 步驟二、繼代培養。
在繼代培養基MS+BA0.3+NAA0. l+CM80ml. L1培養30天。 步驟三、生根培養。
繼代培養30天後，在生根培養基MS+IBA1.0上培養20天，暗培養時間4天。當長綠 期金銀木繼代苗長到3~4cm時，切取帶芽莖段轉入生根培養基中，IO天左右開始長出根 芽，15天左右根長達到lcm左右。經過3 4周生根培養，試管苗已具備了發達、健壯的 根，苗生長健壯時，即可進行煉苗移栽。
3步驟四、煉苗培養。
在生根培養20天後，將生長健壯的試管苗打開瓶口，預煉苗2 3天後進行煉苗移栽。 煉苗移栽前在培養瓶中倒入少許清水，將生根培養基浸軟，以減少試管苗根系損傷。然後用 鑷子輕輕取出帶根小苗，用清水洗淨根部附著的生根培養基，將根系小心展開，栽入裝有蛭 石的育苗盤中，煉苗培養在組培室瓶苗架進行，時間25 30天。
試管苗移栽初期對環境條件特別是水分要求較嚴格，空氣溼度要控制在90%左右，光照 強度5000~10000Lx,才能保證較高的煉苗移栽成活率。 步驟五、大田移栽。
煉苗培養25 30天後，將育苗盤中小畝及時轉移到日光溫室中培養30 40天，當苗 木高度為25 30cm時，即可移植到露地栽培。當年秋末長綠期金銀木高度可達到100~ 150cm。


圖1是本發明的快速繁殖方法的流程圖。
具體實施例方式
下面結合附圖對本發明的快速繁殖方法進行詳細說明。 本發明的快速繁殖方法包括如下步驟 步驟一、外植體的採集。
日光溫室釆集一年生帶芽莖段，自來水衝洗乾淨後，採用70%酒精、0.1%HgCl2 (也叫 升汞)、3% 5%次氯酸鈉、吐溫20、無菌蒸餾水等進行消毒。
所述的帶芽莖段就是所述外植體，該外植體的篩選及消毒處理過程如下
(a)休眠期1年生長綠期金銀木外植體選擇 在早春3月休眠期芽萌發前，從露地選取芽體飽滿的當年生長綠期金銀木帶芽莖段、半 木質化帶芽莖段、葉片、葉柄作為外植體材料。自來水衝洗乾淨後，採用70%酒精、 0.1%HgCl2、 3% 5%次氯酸鈉、吐溫20、無菌蒸餾水等進行消毒。試驗共設置13個處理 (見表1)，每個處理試驗30個帶芽莖段(即外植體)。培養溫度(25土1KC,光照度12001x， 光照時間12h . d-、
_表1長綠期金銀木外植體病菌汙染試驗表__
fl__消毒處理 外植體數/個汙染數/個汙染率/%
1 3%次氯酸鈉lOmin 30 30 100
2 4。/。次氯酸鈉10min 30 30 100
3 5。/。次氯酸鈉10min 30 30 100
4 6%次氯酸鈉10min 30 30 10050.1%升汞4min3030100
60.1%升汞5min3030100
70.1%升汞6min3030100
80.1%升汞7min3030訓
970%酒精30s + 0.1。/。升汞5min3030100
1070%酒精30s + 0.1%升汞6min3030100
1170%酒精30s + 0.1%升汞7min3030100
1270%酒精30s + 0.1%升汞8min3030100
1370%酒精30s + (0.1 。/。升汞+2滴 吐溫20)7min3030100
表1顯示對長綠期金銀木休眠期1年生枝進行的13個處理消毒試驗，外植體汙染率 為100%。重複試驗二次，汙染率仍為100%。
在生長期的6月份，在露地釆集長綠期金銀木帶芽莖段、半木質化帶芽莖段、成熟葉片、 葉柄作外植體材料，設置13個處理(同表1),進行消毒試驗，10d後外植體汙染率為100%。 重複試驗二次，汙染率仍為100%。
通過以上兩試驗可以看出，無論是生長期還是休眠期，從露地生長的長綠期金銀木帶芽 莖段、半木質化帶芽莖段、成熟葉片、葉柄不適宜作為外植體的材料。
(b)日光溫室內長綠期金銀木生長季半木質化帶芽莖段病菌汙染試驗
在早春4月份分別從溫室內選取長綠期金銀木半木質化帶芽莖段、成熟葉片、葉柄作外 植體材料，用0.1。/。HgCl2以1 8min不同消毒時間進行消毒，試驗分別設置8個處理(見 表2)。
表2不同消毒時間對半木質化帶芽莖段汙染率的影響
處理升汞/min段數/支汙染段數/支汙染率/0/0殺死數/支殺死率/%11202010000
22202010000
33202010000
4420840315
5520425525
66202101050
77202101575
88201520100
表2顯示綜合汙染率及殺死率兩項判定指標，在對長綠期金銀木新梢帶芽莖段進行消毒試驗時，前三個處理的汙染率高達100%,後三個處理的殺死率大於50%,因此適宜的消 毒處理為中間的兩個，即處理5及處理4，而處理5的汙染率和殺死率更小一些，因此更好。 在日光溫室內釆集的長綠期金銀木帶芽莖段、成熟葉片、葉柄作病菌汙染後，全部汙染。可 見，長綠期金銀木組培時，適宜的外植體材料為日光溫室內生長的半木質化帶芽莖段。
綜上，長綠期金銀木組織培養時，適宜的外植體材料為日光溫室內生長的半木質化帶芽 莖段，誘導出不定芽的發生。消毒時，以0.lQ/QHgCl2消毒5min為最好，汙染率為25%, 殺死率也為25%。帶芽莖段、成熟葉片、葉柄不適宜作為外植體的材料。 步驟二、繼代培養。 —
在繼代培養基MS+BA0.3+NAA0. l+CM80ml . L1培養30天。
首先是進行繼代培養基的篩選，具體如下 (a)不同濃度生長調節劑對長綠期金銀木生長的影響
在繼代30d時，在增殖培養基中添加不同濃度植物生長調節劑，依據增殖苗生長高度及 生長勢兩項指標篩選長綠期金銀木適宜的增殖培養基。結果見表3。
表3不同濃度生長調節物質對試管苗增殖生長的影響
處理培養基樣本數t30d苗木高度/cm生長勢
1MS+BA0.5+NAA0.1305苗細弱，葉色黃
2MS+BA0.5+NAA0.05304苗細弱，葉色較黃
3MS+BA0.5+NAA0.03303.5苗細弱，葉色較綠
4MS+BA0.5+NAA0.01302.8苗細弱，葉色較綠
5MS+BA0.3+NAA0.1304苗健壯，葉色濃綠
6MS+BA0.3+NAA0.03303苗較壯，葉色濃綠
7MS+BA0.3+NAA0.01302.5長勢一般，葉色較綠
8MS+BA0.3+NAA0.05303長勢一般，葉色較綠
9MS+BA0.2+NAA0.01303苗較壯，葉色較綠
10MS+BA0.2+NAA0.03303苗較壯，葉色偏黃
11MS+BA0.2+NAA0.05302.8長勢一般，葉色較綠
12MS+BA0.2+NAA0.1302.5長勢一般，葉色較綠
表3顯示處理1雖然苗木高生長量最大，但長勢弱；處理7、 12苗木高生長量最小， 生長勢緩慢。高濃度的生長素促進了苗木的高生長，但苗木變的細弱。從增殖苗生長高度及 生長勢綜合分析，適宜的增殖培養基為處理5。依照苗木生長量最大和生長勢最優的結合， 培養基為MS+BA0.3+NAA0.1時，苗木高度較高，為4cm，而且苗木的生長勢顯示，苗健 壯，葉色濃綠。依據此，選用MS+BA0.3+NAA0.1的培養基。(b)不同濃度椰汁對長綠期金銀木生長的影響
通過在增殖培養中添加不同濃度椰汁，觀測對長綠期金銀木生長的影響。依30d苗木平 均生長高度及生長勢兩項指標，選擇適宜的椰汁濃度，結果見表4。
_表4不同濃度椰汁對試管苗增殖的影響_
處理_培養基_樣本數30d苗木高度/cm 生長勢
1 MS+BA0.3+NAA0.1+CM50mlL1 30 6 生長旺盛，葉色濃綠
2 MS+BA0.3+NAA0.1+CM80m11/1 30 7 生長旺盛，葉色濃綠
3 MS+BA0.3+NAA0.1+CM120m11/1 30 5 生長旺盛，葉色濃綠 CK MS+BA0.3+NAA0.1__1_生長中等，葉色淺綠
表4可以看出椰汁對苗木生長高度有明顯促進作用。適宜的繼代培養基為 MS+BA0.3+NAA0.1+CM80ml L1。
在表3的基礎上，再添加不同濃度的椰汁促進苗木生長，得到表4中2號培養基為最適 繼代培養基。 步驟三、生根培養。
繼代培養30天後，在生根培養基MS+IBA1.0上培養20天，暗培養時間4d。
當長綠期金銀木繼代苗長到3 4cm時，切取莖尖轉入生根培養基中，IO天左右開始長 出根芽，15天左右根長達到lcm左右。經過3 4周培養，試管苗已具備了發達、健壯的 根，苗莖基部半木質化時，即可進行煉苗移栽。
所述的生根培養所需的生根培養基通過如下方式進行篩選。 (a)不同類型及濃度生長素對長綠期金銀木生根的影響
在MS生根培養基中加入不同濃度的IBA (吲哚丁酸)及NAA (奈乙酸)，生根培養20d 後，調査5種生根培養基試管苗的最初生根時間、平均生根數量、生根長度、根生長勢，依 此判斷適宜的IBA及NAA添加濃度。結果見表5。
表5不同濃度生長素對試管苗生根的影響
處理生根培養基樣本數/條開始生根時間/d平均根數/條根長/cm根生長勢
1MS+IBA1.530152 31.0根少
2MS+IBA1.0301051.5根健壯，短粗
3MS+IBA0.5301221.0根少
4MS+NAA1.03092~30.5有少量愈傷
5MS+NAA0.5301142.0根細長
表5顯示第二種生根培養基下生長的苗根健壯，短粗，根長1.5cm，並且生根時間適 宜，平均根數較多，因此適宜生根培養的的生根培養基為MS+IBA1.0。(b)不同時間暗培養對試管苗生根的影響。 在已選取的生根培養基MS+IBA1.0的基礎上，在試管苗接種初期進行暗培養，分5個 不同的處理時間進行暗培養，結果見表6。
表6不同時間暗培養對試管苗生根的影響
處理暗培養時間/d樣本數/條出根時間/d平均根數/條20d平均根長/cm
1230104 51.5
2330951.5
3430861.8
453085 62
5630952
表6顯示 一定時間的暗培養對生根培養基中的試管苗生根有促進作用。根據表5中選 擇的生根培養基，開始出根時間是10天，經過一定時間的暗培養後，處理3、 4的生根時間 比沒處理前提前了2天，處理2、 5提前了1天，處理1無變化。因此，根據平均根樹和根 長，選擇試管苗接種初期暗培養時間以第3個處理的4d為好。
步驟四、煉苗培養。
在生根培養20天後，將生長健壯的試管苗打開瓶口，煉苗2 3天後進行煉苗移栽。煉 苗移栽前在培養瓶中倒入少許清水，將生根培養基浸軟，以減少試管苗根系損傷。然後用鑷 子輕輕取出帶根小苗，用清水洗淨根部附著的培養基，將根系小心展開，栽入裝有蛭石的育 苗盤中。
試管苗煉苗移栽初期對環境條件特別是水分要求較嚴格，空氣溼度要控制在90%左右， 光照強度5000 10000Lx,才能保證較高的煉苗移栽成活率。 步驟五、大田移栽。
煉苗培養25 30天後，將小苗及時轉移到日光溫室中培養30 40天，當苗木高度為 25 30cm時，即可移植到露地栽培，即大田移栽。當年秋末長綠期金銀木高度可達到100 150cmo
實施 例
某園藝單位想要通過快速繁殖技術繁育長綠期金銀木，應用本發明提供的繁殖方法進行 快速繁殖的技術路線如下 步驟一、外植體的採集。
日光溫室採集一年生長綠期金銀木帶芽莖段，自來水衝洗乾淨後，採用70%酒精、 0.1。/。HgCl、 3%~5%次氯酸鈉、吐溫20、無菌蒸餾水等進行消毒。 步驟二、繼代培養。在繼代培養基MS+BA0.3+NAAO. l+CM80ml L1培養30天。 步驟三、生根培養。
繼代培養30天後，在生根培養基MS+舊A1.0上培養20天，暗培養時間4天。當長綠 期金銀木繼代苗長到3 4cm時，切取莖尖轉入生根培養基中，10天左右開始長出根芽， 15天左右根長達到lcm左右。經過3 4周培養，試管苗已具備了發達、健壯的根，苗莖 基部半木質化時，即可進行移栽。 步驟四、煉苗培養。
在生根培養20天後，將生長健壯的試管苗打開瓶口，煉苗2 3天後進行移栽。移栽前 在培養瓶中倒入少許清水，將培養基浸軟，以減少試管苗根系損傷。然後用鑷子輕輕取出帶 根小苗，用清水洗淨根部附著的培養基，將根系小心展開，栽入裝有蛭石的育苗盤中。
試管苗移栽初期對環境條件特別是水分要求較嚴格，空氣溼度控制在90%左右，光照強 度5000 10000Lx，保證較高的移栽成活率。 步驟五、大田移栽。
煉苗培養25 30天後，將小苗及時轉移到日光溫室中培養30 40天，當苗木高度為 25 30cm時，移植到露地栽培。當年秋末長綠期金銀木高度可達到100 150cm。
權利要求
1、長綠期金銀木快速繁殖方法，其特徵在於步驟一、外植體的採集；在日光溫室採集一年生長綠期金銀木帶芽莖段，自來水衝洗乾淨後，採用70％酒精、0.1％HgCl2、3％～5％次氯酸鈉、吐溫20、無菌蒸餾水等進行消毒；步驟二、繼代培養；在繼代培養基MS+BA0.3+NAA0.1+CM80ml·L-1培養30天；步驟三、生根培養；繼代培養30天後，在生根培養基MS+IBA1.0上培養20天，其中暗培養時間4天；步驟四、煉苗培養；在生根培養20天後，將生長健壯的試管苗打開瓶口，預煉苗2～3天後進行移栽；移栽前在培養瓶中倒入清水，將培養基浸軟，以減少試管苗根系損傷；然後用鑷子取出帶根小苗，用清水洗淨根部附著的培養基，將根系展開，栽入裝有蛭石的育苗盤中；試管苗移栽初期煉苗室空氣溼度控制在90％以上，光照強度5000～10000Lx；步驟五、大田移栽；煉苗培養25～30天後，將小苗轉移到日光溫室中培養30～40天，當苗木生長高度為25～30cm時，移植到露地栽培。
2、 根據權利要求1所述的長綠期金銀木快速繁殖方法，其特徵在於步驟三中的生根培養經過如下過程實現當長綠期金銀木繼代苗生長高度達到3~4cm時，切取帶芽莖段轉入生根培養基中，IO天后開始長出根尖，15天根長到lcm;經過3 4周培養，當試管苗已具備了發達、健壯的根，苗生長健壯時，即進行煉苗移栽。
全文摘要
本發明提供一種長綠期金銀木快速繁殖方法，包括外植體的採集、繼代培養、生根培養、煉苗培養、大田移栽。該方法具有成苗量多，繁殖係數高等特點，對長綠期金銀木進行了組織培養快速繁殖的研究，找到了長綠期金銀木快速繁殖的技術參數。為快速推廣生產利用這一鄉土耐寒樹種奠定了基礎。
文檔編號A01H4/00GK101485292SQ20091011882
公開日2009年7月22日 申請日期2009年3月2日 優先權日2009年1月20日
發明者石進朝, 解有利, 陳蘭芬 申請人:北京農業職業學院