漁用微生物製劑的生產菌株及培養方法
2023-04-23 03:35:01
專利名稱：漁用微生物製劑的生產菌株及培養方法
技術領域：
本發明涉及農牧業和有機廢水處理用的微生物製劑的生產菌株及培養方法，特別涉及水產養殖動物用的微生物製劑的生產菌株及培養方法。該製劑包括光合細菌和異養細菌菌株。
微生物製劑生產的首要條件是適應生產要求的優良菌株及其優化組合。在已有文獻報導中，與光合細菌有關的微生物製劑或試驗用培養物多屬紅假單胞菌屬(Rhodopseudomonas)、紅螺菌屬(Rhodospirillum)、紅桿菌屬(Rhodobacter)的單種或兩種以上的混合培養物。這些菌株均屬於紫色非硫光合細菌，以利用較小分子有機物為主，對環境中硫化物耐受性較低，一般生長均較緩慢。已有一些應用試驗表明，某些菌株培養物有效期甚短。
1、Pradal.M，1992.The photosynthetic bacteria RhodobacterCapsulatus as the food Complement in the rainbow trout nutritioneffects on coloration and growth. ESGEC. 313.
法國pradal(1992)用Rhodobacert Capsulatus作為紅鱒，鯉類餌料添加劑時，必須用新鮮製備，陳的培養物則無效。
2、李光友、於義德、姜玉香、丁美麗，1993.光合細菌作為對蝦育苗期餌料添加劑試驗。海洋料學(1)52-54。
李光友等(1993)應用紅假單胞菌屬菌株(RhodoPseudomonas SP.)在對蝦育苗試驗中發現培養7日者效果好，成活率顯著高於對照組(48.8％)，30天者僅高於對照4％，而45天者與對照無異。
湖北光寶科技實業有限公司生產的光寶(PSB)製劑，保持期為3個月，要求30℃以下保存。·泰國產鶴標光合酵素(PSBIO)在室溫下存放不足2個月，要求冷葳，抗逆性差，有效期短。這些都是此類微生物製劑應用上的限制因素。
本發明的目的在於選育優良菌種，並進行優化組合，以獲得生長較快，適應淡水、海水不同水體和養殖對象，便於保存，有效期長的漁用微生物製劑。
為實現上述目的，其技術方案特點是1、結合生態研究，由不同水環境中採樣分離、選育具有生產應用潛力的光合細菌株和異養細菌株。
2、在研究各菌株生物學特性基礎上進行不同菌株的優化組合，包括光合細菌同異養細菌間不同組合的混合培養。以不同菌株特性發揮優勢互補。
3、通過選育和組合製備分別適用於淡水——半鹹水，半鹹水——海水養殖對象和環境的兩類微生物製劑。
4、採用三級培養方式，保證製劑質量。即一級菌種、二級菌種、三級擴大培養。
本發明與現有技術相比有以下優點和效果1、所選用的光合細菌株蛋白質含量高(60％)、人和動物必需胺基酸齊全，並有豐富的類胡羅卜素。
2、生長較快。選用的光合細菌株在適宜條件下3-5天即可達109個/ml；當與不同異養細菌株混合培養時，可提高其生物量1.34-5.6倍。
3、抗逆性強，有效期長。湖光、海光兩類製劑所用菌種在室溫條件下已分別保存6年和4年，仍可存活，並末見雜菌和雜藻大量生長。保存半年——2年的製劑還可用作餌料或作餌料添加劑使用，一般有效保存期半年。在40℃黑暗條件下歷時15天，仍保持活力。可遠途遠輸。
4、施用效果。
A、促進魚、蝦等水產動物生長生育，提高成活率，增重率。在羅氏沼蝦育苗水體中加入1％-1.5％的湖光製劑或海光製劑，其成活率一般均高於對照20％-25％，最高者達4倍之多，變態率也高於對照22-49％。海光製劑用於斑節對蝦，日本對蝦和新對蝦育苗，最高成苗率分別達到68.2％，81.3％和68.21％，並縮短育苗期1-2天。羅氏沼蝦養成期，作為餌料添加劑使用，提高產量21.5％，個體平均重量高於對照組10.6％，餌料係數下降22.2％。
在淡水優質魚種飼養中，添加0.5％湖光製劑於餌料內，草魚種日增重率較對照高36％，總增重率為對照組的216％。
B、促進餌料生物增殖。培養透明蚤時，添加1-2％海光製劑或湖光製劑，在110天內增殖90-100倍，對照則僅增殖6-8.4倍。
C、改善水質。施用本製劑後，水色好，水質改善，可減少換水量甚至不換水。添加6-7％固相化製劑後，96小時內，水體中氨氮、亞硝態氮和磷酸鹽類分別下降56.45％、100％和56.4％，而對照水體分別上升356.6％、217％和37.6％。有預防魚病的效果。
實施本發明的方法與步驟實施例1，湖光製劑，適用於淡水和半鹹水養殖水體。
A、湖光製劑生產菌株由光合細菌的紅假單胞菌(Rhodopseudomonas sp.)的DL·1-3菌株，菌種保存編號CCTCCM96018和異養細菌溶解桿菌(Lysobacter brunescens)M-4菌株，菌種保藏編號CCTCC M96020經混合培養而成。
B、培養基CCTCC M96018菌株用RCVBN培養基。
CCTCC M96020菌株用胰腖培養基，其組成與配比為胰旦白腖0.1-1％酵母浸膏0.1-0.5％牛肉浸膏0.2-0.5％醋酸鈉 0.1-0.2％pH 7-7.515磅蒸汽高壓滅菌20分鐘。
C、培養條件CCTCC M96018菌株要求光照，照度1700-2000Lux，好氣或壓氧培養，溫度30℃。
D、製劑生產步驟取CCTCC M96018菌株，CCTCC M96020菌株分別培養，將CCTCC M96018菌株接種入RCVBN培養基內，30℃光照培養72-120小時。取CCTCCM 96020菌株接種入胰腖培養基內，30℃培養48小時，然後將兩者液體培養物按1∶1比例混合再擴增培養，收穫。
實施例2，海光製劑，適用於半鹹水和海水養殖水體。
A、製劑菌株及培養條件由光合細菌著色菌(Chroiatium sp.)HQ菌株，菌種保藏號CCTCCM96017及異養細菌屈撓桿菌(Flexibacter chimensis)FCA菌株，菌種保藏號CCTCC M96019，經混合培養而成。
CCTCC M96017菌株用RCVBN培養。但要求鹽分，培養基中需增添0.5-7％的Nacl。照度1700-2000Lux，溫度30℃，厭氧培養。
CCTCC M96019菌株，用胰腖培養基，30℃培養。
B、製劑生產步驟取CCTCC M96017菌株，CCTCC M96019菌株分別培養，將CCTCC M96017菌株接種到增添0.5-7％Nacl的RCVBN培養基內，30℃光照厭氧培養72-120小時。CCTCC M96019菌株接種入胰腖培養基中30℃培養48小時，然後將兩者液體培養物按1∶1比例混合再擴增培養，收穫。
施用方法，劑量育苗期可直接噴灑於育苗池中，按養殖水體體積計算，施用量為5-10ppm，即每噸水中加入5-10ml。施用時間最好在上午。養成期可參照上述方法劑量施用，亦可按0.5％-1％比例量加入餌料中投喂。添加方法可採用噴灑吸附於顆粒餌料上，或者加入預混料中，然後製成顆粒餌料施用。
漁用微生物製劑適用於各種水產養殖動物，具有促進生長、發育，提高成活率和產量以及改善水質，預防疾病的作用，對觀賞魚飼養亦有同樣效果。本製劑在室溫自然光下保存，有效保存期長達半年，且無毒，無副作用。
權利要求
1.漁用微生物製劑生產菌株及培養方法，其特徵是光合細菌與異養細菌混合培養A、用於淡水和半鹹水養殖動物的湖光製劑由CCTCC M96018菌株及加入CCTCC M96020菌株經混合培養而成；B、用於半鹹水和海水養殖動物的海光製劑由CCTCC M96017菌株及加入CCTCC M96019菌株經混合培養而成；C、直接遍灑和添加餌料中兩種施用方法。
2.根據權利要求1所述的漁用微生物製劑其特徵是A、取CCTCC M96018菌株，CCTCC M96020菌株分別培養，將CCTCC M96018菌株接種入RCVBN培養基內，溫度30℃光照培養72-120小時，取CCTCC M96020菌株接種入胰腖培養基內，30℃培養48小時，然後將兩者液體培養物按1∶1比例混合擴增培養，製備湖光製劑；B、取CCTCC M96017菌株，CCTCC M96019菌株分別培養，將CCTCC M96017菌株接種到增添0.5-7％Nacl的RCVBN培養基內，30℃光照厭氧培養72-120小時，CCTCC M96019菌株接種入胰腖培養基中30℃培養48小時，然後將兩者液體培養物按1∶1比例混合擴增培養，製備海光製劑。
3.根據權利要求1所述的CCTCC M96020菌株和CCTCCM96019菌株其特徵是所用胰腖培養基的組成與配比為胰旦白腖0.1-1％酵母浸膏0.1-0.5％牛肉浸膏0.2-0.5％醋酸鈉 0.1-0.2％pH 7-7.5
4.根據權利要求1所述漁用微生物製劑的施用其特徵是直接向水體遍灑的劑量為5-10ppm；添加餌料中的劑量為0.5％-1％。
全文摘要
本發明涉及用於水產養殖動物的微生物製劑。以紅假單胞菌CCTCC M96018菌株和溶解桿菌CTCC M96020菌株培養製備適宜淡水和半鹹水養殖動物的湖光製劑，以著色菌屬CCTCC M96017菌株和屈撓桿菌CCTCC M96019菌株培養製備適宜半鹹水和海水養殖動物的海光製劑。該製劑營養豐富，生長快，抗逆性強，在室內自然光貯存，有效期長達半年，對促進各類水產養殖動物生長，發育，提高成活率和產量，改善水質、預防疾病均有顯著作用。
文檔編號A23K1/16GK1162016SQ9611967
公開日1997年10月15日 申請日期1996年11月7日 優先權日1996年11月7日
發明者李勤生, 王業勤, 李虹, 閔紅濤 申請人:中國科學院水生生物研究所