作為活性物質載體的多瘤病毒蛋白2或3片段的製作方法

2023-05-25 00:15:41

專利名稱：作為活性物質載體的多瘤病毒蛋白2或3片段的製作方法
技術領域：
本發明涉及合成的生物活性分子及其製備方法。
Chen，X.S.，Stehle，T.和Harrison，S.C.(1998)多瘤病毒內部蛋白VP2與主要衣殼蛋白VP1的相互作用和VP2參與病毒進入的含義，EMBO J.Vol.17，No.12，pp3233-3240描述了負責錨定多瘤病毒的病毒蛋白VP2和VP3至病毒蛋白1的相互作用。根據該文獻，錨定發生在VP2或VP3的C末端區。
US4,950,599公開了多瘤病毒適合將活性物質轉運進細胞中。此外，DE 196 18 797 A1公開了來自多瘤病毒的殼粒適合將分子材料轉運進細胞。
EP 0 259 149 A2公開了使用輪狀病毒內部衣殼蛋白VP6作為免疫載體分子和疫苗，以刺激針對輪狀病毒感染的免疫應答。為此，免疫原性肽通過肽-肽相互作用與VP6結合，該相互作用的細節未披露。VP6在此並不形成結構殼粒，相反顯示獨特的結構多態性。VP6以單體或寡聚體形式存在。儘管寡聚體VP6可以形成顆粒，但這些顆粒不是衣殼或殼粒，而是非結構載體蛋白。
Redmond，M.J.等(1991)輪狀病毒顆粒作為免疫載體，傳遞來自感染物質和內源蛋白的肽，Mol.Immuno.28,269-278介紹了使用輪狀病毒內部衣殼蛋白VP6作為轉運顆粒。為此，VP6通過來自於輪狀病毒蛋白VP4的肽序列的結合蛋白與免疫原性肽或蛋白結合。與來自VP4的肽序列偶聯的抗原定位於轉運顆粒之外，因此不能受到保護免於降解。
GB 22 57 431 A描述了來自噬菌體MS-2膜蛋白的嵌合蛋白的用途。改蛋白可以形成衣殼。抗原肽或偶聯於其上的肽與衣殼外部結合。在大腸桿菌中表達時嵌合蛋白的自發組裝導致被細菌DNA或蛋白汙染的高風險。
DE 43 35 025 A1公開了一種內體溶解活性病毒樣顆粒，其已用膜活性肽在其外表面上修飾過。所述顆粒的製備複雜。
本發明的目的是克服現有技術的缺陷。具體說，本發明意在方便地提供一種與多瘤病毒VP1特異性結合的活性物質。
該目的通過權利要求1、9和19的特徵達到。合適的實施方案可由權利要求2到8、10到18和20到24的特徵產生。
本說明書使用以下定義衍生胺基酸序列與其來源胺基酸序列相比沒有改變或有胺基酸交換、插入或缺失的胺基酸序列。
C末端在C末端的區域。
合成分子人工製備分子。
偶聯或附著共價或非共價結合。非共價結合可以通過例如螯合結合實現。
遺傳工程包括將限定核酸導入細胞中的方法的技術。
本發明提供一種合成的生物活性分子，其中衍生自多瘤病毒病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)C末端的胺基酸序列與活性物質連接。
設想的合成生物活性分子使其可以以簡單方式將活性物質與多瘤病毒VP1特異性締合。這導致結構殼粒的形成。使用該殼粒可以以簡單方式製備作為活性物質通用載體的衣殼。
有利地是，胺基酸序列(A1)包括10到55，優選28到38個胺基酸。限定到相對較短的胺基酸序列降低了製備合成生物活性分子的費用並簡化了其製備過程。
有利地是，該胺基酸序列至少在某些區段相應於以下VP2序列胺基酸250到319，優選胺基酸260到300，特別優選胺基酸287到297。所述胺基酸序列確保了對VP1的錨定。
在合成生物活性分子中，優選胺基酸序列(A1)具有以下序列Trp Met Leu Pro Leu Ile Leu Gly Leu Tyr Gly15 10優選活性物質與胺基酸序列(A1)通過接頭結合。該接頭可以由至少一個胺基酸，一種肽、蛋白、脂質等組成。活性物質可以選自以下核酸、寡核苷酸、蛋白、肽、肽類物質、PNA、所述物質的修飾形式和低分子量藥物活性物質。特別合適的是通過以下所述反應基團之一與胺基酸序列偶聯的活性物質。
合成生物活性分子可以是偶聯於多瘤病毒VP1衍生胺基酸序列和/或是一種藥物的成分。
本發明另一方面提供一種製備本發明的合成生物活性分子的方法，該方法具有以下步驟a)提供衍生自多瘤病毒病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)C末端的胺基酸序列(A1)，該胺基酸序列(A1)具有偶聯劑，並且b)將活性物質與胺基酸序列(A1)通過偶聯劑結合。
偶聯劑可以具有胺基酸甘氨酸、半胱氨酸或通過賴氨酸結合的甘氨酸。偶聯劑優選是與胺基酸序列(A1)N或C末端結合的另一種合成胺基酸序列(A2)。
合成生物活性分子可以至少部分通過遺傳工程製備。為此，胺基酸序列(A1)、另一種胺基酸序列(A2)和活性物質可以完全或部分通過遺傳工程製備。另一種胺基酸序列(A2)具有甘氨酸和/或具有功能側鏈基團的胺基酸較為便利，功能側鏈基團可以選自氨基、巰基、羧基、羥基、胍、苯基、吲哚和咪唑基。
偶聯劑可以是通過胺基酸優選甘氨酸與胺基酸序列(A1)C或N末端結合的反應基團。可以是下列成分之一具有單溴乙醯基的胺基酸，具有單氯乙醯基的胺基酸，具有3-硝基-2-吡啶次磺基(pyridinesulfenyl)(Npys)的胺基酸。設想的反應活性基團可以通用。它們適於偶聯多個活性物質。
已經證實，通過硫醚或二硫鍵將活性物質結合到胺基酸序列(A1)或另一種胺基酸序列(A2)特別有利。實踐中，這類鍵可以方便地製備。當然，使用其他反應活性基團也是可行的。合適的基團包括N-琥珀醯亞胺基溴乙酸酯(succinimidyl bromoacetate)或N-琥珀醯亞胺基3-(2-吡啶基硫代)丙酸酯(SPDP)。
活性物質可以通過接頭與胺基酸序列(A1)或另一種胺基酸序列(A2)結合。接頭可以由至少一個胺基酸、一種肽、蛋白、脂質等組成。
本發明還提供一種製備本發明的合成生物活性分子的方法，該方法具有以下步驟aa)合成衍生自多瘤病毒病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)C末端的胺基酸序列(A1)，和bb)合成活性物質即一種肽並偶聯至胺基酸序列(A1)，
其中步驟aa和bb通過肽合成或遺傳工程方法進行。
在步驟bb)中，胺基酸序列(A1)通過活性物質延伸。活性物質的延長和附著通過重複附著胺基酸殘基進行。該方法可以特別方便地進行。
上述兩種方法的其他優選實施方案可參見下文。
實施例A.肽的合成和純化通過同時多個肽合成在肽合成儀(PSSM-8型，SHIMADZU，Japan)上合成肽(Schnorrenberg，G.和Gerhardt，H.(1989)Tetrahedron 45，7759)，使用Shepppard的9-芴甲氧羰基(Fmoc)/tert.丁基(But)策略(Atherton，E.和Sheppard，R.C.(1989)《固相肽合成實用方法》IRLPress，Oxford)。偶聯反應使用6當量Fmoc保護的胺基酸/1-羥基苯並三唑(HOBt)/12當量正甲基嗎啉，在聚合物載體樹脂(Tentagel S Trityl樹脂，RAPP聚合物，Tubingen，Germany)上使用2-(1H-苯並三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸鹽(TBTU)，裝載量為2mmol/克樹脂。肽含有C末端COOH基團。
在合成中使用以下保護基團Cys(Trt)，Arg(Pbf)，Ser(But)，Thr(But)，Asp(OBut)，Glu(OBut)，Asn(Trt)，Gln(Trt)，Lys(Boc)，His(Trt)，Trp(Boc)，其中Trt為三苯甲基，But為叔丁基，OBut為叔丁基酯，Boc為叔丁氧羰基，Pbf為2，2，4，6，7-五甲基二羥基苯並呋喃-5-磺醯基。
所有保護基團通過以下方法除去使用三氟乙酸(TFA)/苯甲硫醚/硫甲酚(95∶2.5∶2.5)室溫下作用3小時以上，加入3％三異丙基矽烷並隨後加入10％三甲基氯矽烷作用1小時。凍幹後，肽以其三氟乙酸鹽形式存在。
肽通過製備性HPLC在BischoffPolyencap 300分離柱(10μm，250×16mm)純化，使用自水中的0.05％三氟乙酸(洗脫液A)到80％乙腈中的0.05％三氟乙酸(洗脫液B)的梯度。
或者，使用Vydac分離柱218型TP 101522(10-15μm，250×22mm)，43-73％洗脫液B的梯度，30分鐘，流速為15毫升/分鐘。
通過肽合成，合成了下列胺基酸序列
Trp Met Leu Pro Leu Ile Leu Gly Leu Tyr Gly15 10在該序列中，反應基團通過一種胺基酸優選通過甘氨酸結合到胺基酸序列的N末端。反應基團可以由單氯乙醯基甘氨酸組成。或者，也可以附著一個單溴乙基。
在固相合成中偶聯單氯乙醯基甘氨酸等當量單氯乙醯基甘氨酸和1-羥基苯並三唑(HOBt)溶解在二甲基甲醯胺(DMF)中，與等當量N，N』-二異丙基碳二亞胺(DIC)混合，並加入到肽樹脂中。相對於加載的肽樹脂，單氯乙醯基甘氨酸以過量存在。不時攪動使反應進行，持續至少1小時。
反應基團促進這樣製備的生物活性分子共價結合於具有有利SH基團的活性物質如肽。SH基團與單氯乙醯基的氯原子反應按照下面的等式形成穩定的硫醚化合物蛋白-SH+Cl-CH2-CO-Gly肽→蛋白-S-CH2-CO-Gly肽單氯乙醯基修飾的錨定肽與具有末端半胱氨酸的肽的輟合物的形成單氯乙醯基修飾的錨定肽較待輟合的肽過量使用。反應在0.1M碳酸氫鈉pH7-8時在室溫下進行。若肽或錨定物在水溶液中的溶解性差，輟合物形成在4M鹽酸胍，pH8.0中進行(Lindner，W.和Robey，F.A.(1987)Int J.Pept.Protein Res.30，794-800)。或者，增加反應混合物中有機溶劑如DMSO的比例。為了避免不需要的副產物，可以加入水溶性膦作為還原劑。
或者可以在下列條件下進行輟合反應。單氯乙醯基化錨定肽和具有末端SH基團的肽在室溫下於1-甲基-2-吡咯烷酮中溫育，其中存在有約10倍過量的二異丙基乙基胺和約5倍過量的三丁基膦。反應後加入水，產物通過加入醚沉澱，通過凝膠過濾純化(Defoort，J.P.，Nardelli，B.，Huang，W.和Tam，J.P.(1992)Int.J.Protein Res.40，214-221)。
或者輟合反應也可以如下進行。含有SH基團的肽溶解在0.2M磷酸緩衝液，10mM EDTA，pH7.4中。向該混合物中加入溶解在二甲基甲醯胺中的單氯乙醯基修飾的錨定肽。反應後，通過凝膠過濾或RP-HPLC進行純化(Zhang，L.和Tam，J.P.(1997)J.Am.Chem.Soc.119，2363-2370)。
分離的VP1五聚體通過在大腸桿菌中表達具有N末端6×組氨酸親和標誌(His標誌)的VP1重組蛋白製備。該蛋白通過Ni-NTA親和層析純化。His標誌通過用因子Xa處理除去。蛋白在SDS-PAGE凝膠中分析然後進行考馬斯染色。
該起始材料(在20mM Hepes，pH7.3，1mM EDTA，200mM NaCl，5％甘油中的VP1蛋白)在centricon 100(Amincon，原文如此)中濃縮，通過FPLC凝膠過濾(Superdex 200，洗脫緩衝液為50mM Tris，0.15MNaCl，5mM EDTA，pH8.5)分離成高分子量衣殼級分和五聚體亞單位(分子量約225kD)。以10倍摩爾過量向含五聚體的溶液中加入碘乙醯胺(SIGMA)，以封閉可能的反應性SH基團。反應在室溫下進行2小時。修飾的五聚體級分通過凝膠過濾同過量碘乙醯胺分離。VP1特異性單克隆抗體藉助於VP1特異性抗體和親和基質(蛋白A支持物，BIORAD)吸附。抗體包被的基質用來沉澱純化的五聚體級分。在進一步的溫育步驟中，錨定序列加入至五聚體基質中。樣品在SDS聚丙烯醯胺凝膠(12.5％)中分析。
Npys修飾的錨定肽和具有末端半胱氨酸的肽的輟合物形成除了單氯或單溴乙醯基錨定肽和具有末端半胱氨酸的肽之間的反應形成硫醚之外，錨定肽和肽序列之間的輟合物也可以通過3-硝基-2-吡啶次磺基(Npys)在錨定肽的末端半胱氨酸和待偶聯的肽的SH基團之間形成。為此，Npys修飾的半胱氨酸代替單氯乙醯基甘氨酸N末端偶聯於錨定序列。所述Npys修飾的半胱氨酸是活化的二硫鍵，它能夠與半胱氨酸等硫醇反應，形成不對稱二硫鍵。這便除去了3-硝基-2-硫代吡啶酮，其329納米的最大紫外吸收允許通過光譜測定法研究兩個化合物之間的反應動力學。
基-2-吡啶次磺基(Npys)在錨定肽的末端半胱氨酸和待偶聯的肽的SH基團之間形成。為此，Npys修飾的半胱氨酸代替單氯乙醯基甘氨酸N末端偶聯於錨定序列。所述Npys修飾的半胱氨酸是活化的二硫鍵，它能夠與半胱氨酸等硫醇反應，形成不對稱二硫鍵。這便除去了3-硝基-2-硫代吡啶酮，其329納米的最大紫外吸收允許通過光譜測定法研究兩個化合物之間的反應動力學。
選擇下列條件進行反應(Albericio，F.，Andreu，D.，Giralt，E.，Navalpotro，C.，Pedroso，E.，Ponsati，B.and Ruiz-Gayo，M.(1989)Int.J.Peptide Res.34，124-128)。Npys修飾肽被加入到具有末端SH基團、溶解於0.1M乙酸鈉、0.1M氯化鈉，pH4.5的待偶聯肽中，將pH調整到5，然後攪動下溫育至少12小時。通過加入1N氫氧化鈉調整pH到7.0，再溫育3小時。反應後，混合物對10mN碳酸氫鈉透析。
反應的最適pH範圍是4.5到7.0。這些條件保證不希望的副反應最小化，所述副反應如在待偶聯的肽分子之間形成對稱二硫鍵或除去了Npys基團。Npys修飾肽應當以相對於待輟合肽過量的量存在於反應中(Albericio，F.，Andreu，D.，Giralt，E.，Navalpotro，C.，Pedroso，E.，Ponsati，B.and Ruiz-Gayo，M.(1989)Int.J.Peptide Res.34，124-128)。
本發明的實例在以下序列中說明。
序列1顯示衍生自多瘤病毒VP2的胺基酸序列，位置287-297。在合成生物活性分子時其作為錨定活性物質至VP1的錨定物。
序列2顯示合成的生物活性分子的第一個示例性實施方案。HIV-1衍生的肽序列相應於位置1-21；附著的胺基酸序列作為錨定物佔有位置22-33。其衍生自多瘤病毒VP2。
序列3顯示適合作為錨定物的胺基酸序列的另一個實例。
序列4顯示多瘤病毒VP2序列。顯示了作為錨定物的250到300位的序列。
序列5顯示另一個合成的生物活性分子。它們可以與多瘤病毒VP1偶聯，然後為了處理HIV感染，被導入感染細胞。
序列1110november AG120合成胺基酸分子130VP2基本序列1401411601170PatentIn Ver.2.1210121111212PRT213多瘤病毒300302源自VP2的序列位置282-297303EMBO J.304199830517/123063233-3240308J02288/EMBL3091995-08-224001Trp Met Leu Pro Leu Ile Leu Gly Leu Tyr Gly1 5 10序列2110november AG120合成胺基酸分子130VP2錨定物和活性物質肽實例1401411601170PatentIn Ver.2.1210121133212PRT213人工序列220223人工序列說明HIV-1 RT位置1-21；多瘤病毒VP2序列位置22-334001Leu Ala Glu Asn Arg Glu Ile Leu Lys Glu Pro Val His Gly Val Tyr1 5 10 15Tyr Asp Pro Ser Lys Pro Asp Trp Met Leu Pro Leu Ile Leu Gly Leu20 25 30Tyr序列3110november AG120合成胺基酸分子130VP2錨定物位置263-2961401411601170PatentIn Ver.2.1210121134212PRT213多瘤病毒300302VP2錨定物VP2序列位置263-296303EMBO J.304199830517/123063233-3240308J02288/EMBL3091995-08-224001Gln Asp Glu Ser Gly Glu Val Ile Lys Phe Tyr Gln Ala Gln Val Val1 5 10 15Ser His Gln Arg Val Thr Pro Asp Trp Met Leu Pro Leu Ile Leu Gly20 25 30Leu Tyr序列4110november AG120合成胺基酸分子130多瘤病毒VP2蛋白序列1401411601170PatentIn Ver.2.1210121l319212PRT213多瘤病毒300302VP2(衣殼蛋白)，基因座PLY2CG，多瘤病毒株a2和a3全基因組，歐洲分子生物學實驗室入藏號J02288(EMBL，Outstation Eur.
Bioinform.Inst.)303EMBO J.304199830517/123063233-3240308J02288/EMBL3091995-08-224001Met Gly Ala Ala Leu Thr Ile Leu Val Asp Leu Ile Glu Gly Leu Ala1 5 10 15Glu Val Ser Thr Leu Thr Gly Leu Ser Ala Glu Ala Ile Leu Ser Gly20 25 30Glu Ala Leu Ala Ala Leu Asp Gly Glu Ile Thr Ala Leu Thr Leu Glu35 40 45Gly Val Met Ser Ser Glu Thr Ala Leu Ala Thr Met Gly Ile Ser Glu50 55 60Glu Val Tyr Gly Phe Val Ser Thr Val Pro Val Phe Val Ser Arg Thr65 70 75 80Ala Gly Ala Ile Trp Leu Met Gln Thr Val Gln Gly Ala Ser Thr Ile85 90 95Ser Leu Gly Ile Gln Arg Tyr Leu His Asn Glu Glu Val Pro Thr Val100 105 110Asn Arg Asn Met Ala Leu Ile Pro Trp Arg Asp Pro Ala Leu Leu Asp115 120 125Ile Tyr Phe Pro Gly Val Asn Gln Phe Ala His Ala Leu Asn Val Val130 135 140His Asp Trp Gly His Gly Leu Leu His Ser Val Gly Arg Tyr Val Trp145 150 155 160Gln Met Val Val Gln Glu Thr Gln His Arg Leu Glu Gly Ala Val Arg165 170 175Glu Leu Thr Val Arg Gln Thr His Thr Phe Leu Asp Gly Leu Ala Arg180 185 190Leu Leu Glu Asn Thr Arg Trp Val Val Ser Asn Ala Pro Gln Ser Ala195 200 205Ile Asp Ala Ile Asn Arg Gly Ala Ser Ser Ala Ser Ser Gly Tyr Ser210 215 220Ser Leu Ser Asp Tyr Tyr Arg Gln Leu Gly Leu Asn Pro Pro Gln Arg225 230 235 240Arg Ala Leu Phe Asn Arg Ile Glu Gly Ser Met Gly Asn Gly Gly Pro245 250 255Thr Pro Ala Ala His Ile Gln Asp Glu Ser Gly Glu Val Ile Lys Phe260 265 270Tyr Gln Ala Gln Val Val Ser His Gln Arg Val Thr Pro Asp Trp Met275 280 285Leu Pro Leu Ile Leu Gly Leu Tyr Gly Asp Ile Thr Pro Thr Trp Ala290 295 300Thr Val Ile Glu Glu Asp Gly Pro Gln Lys Lys Lys Arg Arg Leu305 310 315序列5110november AG120合成胺基酸分子130活性物質1 RT/HIV部分序列1401411601170PatentIn Ver.2.1210121121212PRT213人工序列220223人工序列說明HIV-1 RT位置1-20(入藏號AJ006287)和附加C-末端Cys4001Leu Ala Glu Asn Arg Glu Ile Leu Lys Glu Pro Val His Gly Val Tyr1 5 10 15Tyr Asp Pro Ser Cys20序列6110november AG120合成胺基酸分子130活性物質2 GAG/HIV部分序列1401411601170PatentIn Ver.2.1210121117212PRT213人免疫缺損病毒1型220223HIV-1 GAG部分序列(入藏號AJ006287)4001Gly Ser Glu Glu Leu Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Val Ala Thr Leu Tyr1 5 10 15Cys
權利要求
1.一種合成的生物活性分子，其中衍生自多瘤病毒病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)C末端的胺基酸序列(A1)與一種活性物質連接。
2.權利要求1的合成生物活性分子，其中胺基酸序列(A1)包括10到55個，優選28到38個胺基酸。
3.前述任一權利要求的合成生物活性分子，其中胺基酸序列(A1)至少在某些區段相應於以下VP2序列胺基酸250到319，優選胺基酸260到300，特別優選胺基酸287到297。
4.前述任一權利要求的合成生物活性分子，其中胺基酸序列(A1)具有以下胺基酸序列Trp Met Leu Pro Leu Ile Leu Gly Leu Tyr Gly15 10
5.前述任一權利要求的合成生物活性分子，其中活性物質通過接頭與胺基酸序列(A1)結合。
6.前述任一權利要求的合成生物活性分子，其中活性物質選自核酸、寡核苷酸、蛋白、肽、肽類物質、PNA、所述物質的修飾形式和低分子量藥物活性物質。
7.前述任一權利要求的合成生物活性分子，偶聯於衍生自多瘤病毒VP1的一種胺基酸序列。
8.具有前述任一權利要求的合成生物活性分子的藥物。
9.製備前述任一權利要求的合成生物活性分子的方法，具有以下步驟a)提供衍生自多瘤病毒病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)C末端的胺基酸序列(A1)，該胺基酸序列(A1)具有偶聯劑，並且b)將活性物質與胺基酸序列(A1)通過偶聯劑結合。
10.權利要求9的方法，其中偶聯工具中的胺基酸是甘氨酸、半胱氨酸或通過賴氨酸結合的甘氨酸。
11.權利要求9或10的方法，其中偶聯工具是另一種，優選結合於胺基酸序列(A1)N或C末端的合成胺基酸序列(A2)。
12.權利要求9到11任一項的方法，其中合成的生物活性分子至少部分是通過遺傳工程製備的。
13.權利要求9到12任一項的方法，其中另一種胺基酸序列(A2)具有甘氨酸和/或具有功能側鏈基團的胺基酸。
14.權利要求13的方法，其中功能側鏈基團選自氨基、巰基、羧基、羥基、胍、苯基、吲哚和咪唑基。
15.權利要求9到14任一項的方法，其中偶聯工具是通過一種胺基酸優選甘氨酸、半胱氨酸或通過賴氨酸結合的甘氨酸結合到胺基酸序列(A1)C或N-末端的活性基團。
16.權利要求15的方法，其中活性基團具有以下成分之一具有單溴乙醯基的胺基酸，具有單氯乙醯基的胺基酸，具有3-硝基-2-吡啶次磺基(Npys)的胺基酸。
17.權利要求9到16任一項的方法，其中活性物質通過硫醚或二硫鍵與胺基酸序列(A1)或另一種胺基酸序列(A2)結合。
18.權利要求9到17任一項的方法，其中活性物質通過接頭與胺基酸序列(A1)或另一種胺基酸序列(A2)結合。
19.製備權利要求1的合成生物活性分子的方法，具有以下步驟aa)合成衍生自多瘤病毒病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)C末端的胺基酸序列(A1)，和bb)合成活性物質即一種肽並偶聯至胺基酸序列(A1)，其中步驟aa和bb通過肽合成或遺傳工程方法進行。
20.權利要求9到19任一項的方法，其中胺基酸序列包括10到55，優選28到38個胺基酸。
21.權利要求9到20任一項的方法，其中胺基酸序列(A1)至少某些區段相應於以下VP2序列胺基酸250到319，優選胺基酸260到300，特別優選胺基酸287到297。
22.權利要求9到21任一項的方法，其中胺基酸序列(A1)具有以下胺基酸序列Trp Met Leu Pro Leu Ile Leu Gly Leu Tyr Gly15 10
23.權利要求9到18和20到22任一項的方法，其中活性物質選自核酸、寡核苷酸、蛋白、肽、PNA、肽類物質、所述物質的修飾形式。
24.權利要求9到23任一項的方法，其中合成的生物活性分子偶聯於衍生自多瘤病毒VP1的一種胺基酸序列。
全文摘要
本發明涉及一種合成的生物活性分子,用於將一種活性成分固定到多瘤病毒的病毒蛋白1(VP1)。根據本發明,衍生自多瘤病毒的病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)的胺基酸序列A1被結合至活性成分的一個末端。
文檔編號A61K35/76GK1346366SQ00806109
公開日2002年4月24日 申請日期2000年4月3日 優先權日1999年4月10日
發明者W·貝特林, C·雷澤爾, J·瓦爾特 申請人:諾凡貝爾分子醫學股份公司