一種抑制胰島移植中經血液介導的炎症反應的寡核苷酸的製作方法

2023-05-24 15:48:11

專利名稱：一種抑制胰島移植中經血液介導的炎症反應的寡核苷酸的製作方法
技術領域：
本發明涉及一類在胰島移植中抑制經血液介導的炎症反應的寡核苷酸，具體涉及 一類抑制組織因子TF表達的反義寡核苷酸在胰島移植過程中的應用。
背景技術：
糖尿病是全球性、發病率逐漸增高的嚴重代謝性疾病，外源性胰島素治療不能穩 定控制血糖，不能制止糖尿病併發症的發生和進展。建立內源性胰島素分泌系統是人們 一直在研究的熱點，胰島移植給1型糖尿病病人帶來治癒的希望[Ridgway DM, White SA, Nicholson ML. Pancreatic islet cell transplantation progress in the clinical setting treatments in endocrinology. 2003,2(3) 173-189 ；White SA，James RF,Swift SM. Human islet cell transplantation-future prospects Diabetic Medicine. 2001， 18(2) :78-103]o大量的研究表明，胰島移植後的初期常伴有大量胰島的丟失[Ricordi C. Human islet cell transplantation :new perspectives for an old challenge. Diabetes Review，1996，4:356-369.]，其中新植入的胰島與血流接觸的瞬間所引發的反應被稱為立 艮口經血液介導的炎症反應(Instant blood-mediated inflammatory reaction,以下簡 禾爾 IBMIR)[Ozmen L, Ekdahl KN, Elgue G, et al. Inhibition of thrombin abrogates the instant blood-mediated inflammatory reaction triggered by isolated human islets :possible application of the thrombin inhibitor melagatran in clinical islet transplantation. Diabetes, 2002, 51 :1779-1784.]，是胰島植入後的最早損傷， IBMIR的特徵是移植物導致受體凝血系統和補體系統的激活，這些瀑布式級聯反應導 致70%的移植物在移植後的幾分鐘內死亡。IBMIR體外模型的研究已經證明，當胰島移 植物與血液接觸時，IBMIR反應啟動的關鍵因素是凝血系統激活。已有報導表明胰島 移植物與受體血液接觸後幾分鐘內，釋放的組織因子(TF)就激活了受體血液的VII因 子，導致了外源性凝血途徑的激活[Walsh PN, Sinha D, Koshy A, et al. Functional characterization of platelet-bound factor XI a :retention of factor XIa activity on the platelet surface. Blood，1986，68 :225_230.]，這種外源性的激活在 IBMIR 反 應中發揮重要作用，同時移植物暴露的膠原等又激活因子XI，從而激活內源性凝血途徑 [Walsh PN,Sinha D，Koshy A,et al. Functional characterization of platelet-bound factorXIa-retention of factor XIa activity on the platelet surface· Blood，1986， 68 :225-230.]。在體內，生理性止血與血栓形成的凝血過程幾乎都是通過組織因子(TF)與 FVIIa形成複合物而啟動的。因此，如何抑制移植物TF的表達，以防止IBMIR對胰島移植物 的損傷，已成移植醫學研究的熱點。反義技術是根據核酸雜交原理設計針對特定靶序列的反義寡核苷酸，經人工合成 或人工表達載體表達反義寡核苷酸，通過鹼基互補原理與靶序列(RNA或DNA)結合，封閉或 抑制特定基因的表達，從而對細胞的功能產生影響。反義寡核苷酸包括反義RNA、反義DNA及核酶(Ribozyme)或脫氧核酶(DNAzyme)。 反義技術具有明顯的優點(1)反義寡核苷酸是針對特定的靶mRNA (或DNA)的 序列設計合成，具有極高的特異性；(2)反義寡核苷酸是針對已知序列的靶基因設計合成 的，由於靶基因序列已知，反義寡核苷酸通常僅有15-30個鹼基，結構簡單，容易設計和體 外大量合成；(3)反義寡核苷酸進入細胞內與細胞周期無關，既可進入增殖期細胞又可進 入非增殖期細胞；(4)反義寡核苷酸不含病毒序列，不會產生免疫反應，也不會整合入宿主 染色體內。特別是反義RNA技術具有重大的理論與現實意義，可以作為基因治療的一種 有效手段而發揮重要作用，目前在多領域研究中均有應用[Chang-Mei Liu, Zhuo Yang, Chao-Wu Liu, Rongffang, Po Tien, Roderick Dale and L-Q Sun (2007). Effeet of RNA oligonucleotide targeting Foxo-I on muscle growth in normal and cancer cachexia mice. Cancer Gene Therapy, 1—8 ;Chang-Mei Liu,Zhuo Yang,Chao-ffu Liu,Rong Wang,Po Tien, Rod Dale, L-Q Sun(2007)Myostatin Antisense RNA-mediated Muscle Growth in Normal and Cancer Cachexia Mice. GeneTherapy,1-6.]。

發明內容
本發明的目的是提供一類有效的特異性靶向TF基因的反義寡核苷酸，抑制胰島 移植中IBMIR的發生。IBMIR是胰島植入後由組織因子(TF)介導的的最早損傷，導致移植物在移植後的 幾分鐘內死亡。本發明通過對TF基因表達的調節，達到防治胰島移植物損傷的目的。本發明所提供的抑制胰島移植中IBMIR反應的寡核苷酸，具有如下特徵(1)含有7 75個核苷酸；(2)至少含有3個連續的非手性5'到3'磷酸核苷間鍵；(3)互補於TF基因的5'端非翻譯區、翻譯起始區、3'端非翻譯區和/或翻譯終 止區；(4)在1毫摩爾濃度下具有75°C 115°C的熔解溫度(Tm)。當本發明所述寡核苷酸用作抑制胰島移植中IBMIR反應時，可使用一種，也可使 用二種或更多種。當使用多種寡核苷酸時，這幾種寡核苷酸將各自與靶基因的5'端非翻 譯區、翻譯起始區、3'端非翻譯區和/或翻譯終止區的不同區域互補。所述靶基因是TF基 因。優選地，上述寡核苷酸由10 26個核苷酸組成，在1微微摩爾濃度下具有40°C 85 °C的熔解溫度。為了有效地在體內應用寡核苷酸，對其進行化學修飾可顯著地增加寡核苷酸抗酸 和抗酶降解的穩定性。對本發明所提供的寡核苷酸可以是在天然核酸分子結構的基礎上進 行一處或多處化學修飾，獲得具有特定的結構和物理化學特性的修飾性寡核苷酸。所述化 學修飾包括對鹼基、糖基及核苷酸之間的磷酸酯鍵的修飾，末端保護，質子化處理等。寡核苷酸可以通過對其5'端和/或3'端修飾而獲得抗核酸外切酶降解的特性。 這些末端修飾包括末端反向連接鹼基；末端核苷酸為雙脫氧核苷酸；在3'端和/或5' 端帶有保護基團；3'末端封閉和/或5'末端封閉。核糖基和單核苷酸之間的連接鍵稱為核酸的主幹結構。對主幹結構的修飾包括連接鍵以及其它可以增強穩定性和親和性的修飾，例如對糖基結構進行修飾，具體的例子有 在鹼基相對於天然右旋異構體糖為反向時，可使用左旋(L-)異構體脫氧核糖；在2'位或 3'位取代的核糖核酸或脫氧核糖核酸。常見的如在糖基2'位上帶有取代基團的修飾性寡 核苷酸，所述取代基團包括但不限於氧、甲氧基、丙氧基、甲氧_乙氧基、氟、氯、溴、碘。本發明優選寡核苷酸的核苷酸之間的連接鍵(磷酸核苷間鍵)是非手性的 (achiral)，含至少3個連續的非手性連接鍵，優選含有7 12個連續的非手性連接鍵，最 為優選的是全部的連接鍵為非手性的。在某些情況下，非手性連接鍵和手性連接性可以相 間存在，例如，三個連續的非手性鍵接一個手性連接鍵，或四個連續的非手性連接鍵跟二個 手性連接鍵等。非手性連接鍵包括但不限於磷酸二酯鍵、硫代磷酸二酯鍵。本發明寡核苷酸中的磷酸核苷間鍵可以是5'至3' ,5'至2'或5'至5'或以 上方式的組合。這種連接鍵的修飾可以是分子內的(單一或重複)，也可以是在RNA或DNA 的末端。本發明所述的寡核苷酸包括核糖寡核苷酸和脫氧核糖寡核苷酸。所述寡核苷酸序 列優選自序列表中SEQ ID NO :1 3。本發明所述的寡核苷酸可以是反義寡核苷酸，包括靶向人或動物(例如豬)TF基 因的反義寡核苷酸序列。代表性的反義寡核苷酸的序列見表1。用本發明所述的寡核苷酸作為活性物質可以製備多種抗IBMIR的藥物組合物，適 用於動物和人。所述的動物包括豬、牛、羊、猴等。所述藥物組合物中可以含有各種藥學上 可接受的賦形劑、輔劑。所述藥物組合物中，可以含有一種或幾種所述寡核苷酸，比如，可含 二種、三種、四種、五種或五種以上的修飾性寡核苷酸。本發明所提供的寡核苷酸可通過ex vivo (活體外)方式在胰島細胞移植前對移 植物進行體外處理。本發明提供的寡核苷酸對於動物或人的給藥劑量為每公斤體重0. 01 lOOmg。本發明首次將反義寡核苷酸引入IBMIR基因治療中，以TF為靶標，應用反義技術 手段，通過下調胰島細胞TF的表達，抑制IBMIR的發生。


圖1是將靶向TF的各反義RNA轉染進入胰島細胞，提取總RNA，用RT-PCR從mRNA 水平檢測TF反義RNA抑制TF表達的結果。圖2是反義RNATF1006轉染胰島細胞後不同時間RT-PCR檢測TF表達情況的結果。圖3是靶向TF的反義RNA轉染進入胰島細胞後第四天提取總蛋白，用Western blotting從蛋白水平檢測TF表達的結果。圖4顯示了靶向TF的反義RNA轉染胰島細胞體外IBMIR反應後形成的血凝塊。
具體實施例方式以下通過實施例進一步詳細描述本發明，但不以任何方式對發明的內容加以限 制，如表1中所列的反義寡核苷酸序列為代表性的分子，任何其它可以抑制TF表達的反義 寡核苷酸，均可用於本發明的藥物組合物中。一、TF反義寡核苷酸的設計、合成和修飾
設計反義寡核苷酸的方法包括(1)選擇一個與靶區域鄰近或重迭的寡核苷酸， ⑵測定與靶基因結合的Gibbs自由能水平，(3)分析雜交熔解溫度(Tm)，(4)進行序列庫 分析，以確定其靶位點所處區域，例如，5』端非翻譯區，翻譯起始區，3』端非翻譯區和翻譯終 止區。優選的反義寡核苷酸一般鄰近於翻譯起始區或至少有一個核苷酸與翻譯起始點重 迭。在有些實例中這種重迭不少於三個核苷酸。基於RNA的二級和高級結構特徵進行反義RNA或DNA的設計，一般可選在5』端區 域。在有些情況下，可選在3』端區域，或在RNA拼接點周圍。本發明的反義寡核苷酸可通過Gibbs自由能分析來確定其與靶RNA的結合強 度。這一分析可通過計算機稈序講行，常用的稈序可在ftD://rna. chem. rochester. edu 網站找到，並可參考 Matthews 等人的文章(J. Mol. Biol, 1999，288，911-940 ；RNA, 1999，5， 1458-1469)。寡核苷酸與靶RNA雜交分子的Gibbs自由能一般< -20kcal (37°C )。優選 為《_25kcal，對於一個12-14個單位的寡核苷酸，其自由能為< -15kcal ；15-17單位的 寡核苷酸的雜交自由能為<-20kcal ； 18-20單位的寡核苷酸的雜交自由能為< _25kcal ； 21-23單位的寡核苷酸的雜交自由能為< _30kcal ；24-26個單位的寡核苷酸的雜交自由能 為《_35kcal0篩選到的靶向Genbank中GeneID 396677的TF基因的反義RNA序列如表1所示。表1.代表性靶向TF基因的的反義RNA序列 化學修飾本實施例中對上述反義RNA採用核糖基2』 -0-甲基修飾和3』末端磷 酸-ο-丙基修飾。二、選擇合適的轉染試劑及轉染條件選擇過程採用 7 TMP(tetra(4-methyridyl)porphyrine)禾口 Oligofectamine 兩 種轉染試劑。將胰島細胞分TMP轉染組及Oligofectamine轉染組，每組分三孔，每孔試劑 總量為1ml，加入胰島細胞1000IEQ (胰島當量)及濃度為IOOOmM的FITC-Antisense RNA 8μ 1 ；TMP轉染組又分為低濃度組、中濃度組和高濃度組低濃度組加入TMP 19. 2 μ 1 ；中濃度組加入TMP 38. 4 μ 1 ；高濃度組加入TMP 76. 8 μ 1。Oligofectamine轉染組亦分為低濃度組、中濃度組和高濃度組低濃度組加入Oligofectamine 4μ 1 ；中濃度組力口入 Oligofectamine 8μ 1 ；
高濃度組加入 Oligofectamine 16 μ L·轉染後4小時加入小牛血清至終末濃度為10% (體積百分含量)，放置CO2培養箱 培養12小時於螢光顯微鏡下觀察。以上試驗重複3次，螢光顯微鏡下觀察，確定最佳轉染試 劑及濃度。螢光顯微鏡下，用波長488nm紫外光激發，可見用TMP轉染低中高組的胰島細胞 只有少量被螢光標記；Oligofectamine轉染低中高組的有一定數量胰島細胞被螢光標記， 以高濃度組中被螢光標記的細胞數量最多。結果顯示高濃度的轉染試劑Oligofectamine 更有利於胰島細胞轉染。三、篩選有效的靶向TF的反義RNA將設計合成的三條靶向TF的反義RNA按照摸索出的最佳條件以Oligofectamine 為轉染試劑，將TF的反義RNA轉染入胰島細胞中，提取總RNA，通過RT-PCR檢測TF在RNA 水平的表達情況，檢測靶向TF的反義RNA的抑制活性。
引物設計如下 TF基因引物序列
正向引物5 『 -GGAGCCTCTGTATGAGAACT-3 『 反向引物5 『 -CGGAGGCTTAGGAAAGTGTT-3 『 內參基因(18S RNA)引物序列 正向引物5 『 -CCGAGAAGTTTCAGCACATCC-3 『 反向引物5 『 -TGGCAGTGATAGCGAAGGCT-3 『 RT-PCR擴增程序 將三條反義RNA轉染進入胰島細胞後第2天提取總RNA，定量RT-PCR的檢測結果 如圖1所示，其中TF1006、TF1009和TF114是靶向TF的反義RNA，未進行任何處理組作為 對照，另設置Control RNA(不針對任何基因的無意義RNA)轉染組作為平行對照，可以看出 TF1006的抑制效果最好，TF1009和TFl 14也能部分抑制TF的表達。圖2是TF1006轉染後 八天內對TF表達的抑制情況，從圖2可以看出，轉染後第二天TF1006能明顯抑制TF表達， 抑制效果持續到第八天，在第四天抑制最為明顯。反義RNA轉染進入胰島細胞後第四天提取總蛋白，用Western blotting從蛋白水 平檢測TF表達的結果如圖3所示，靶向TF的反義RNA在蛋白水平抑制TF表達。四、建立體外IBMIR模型體外模擬血管內血液循環的管道(Tubing Loops)由矽膠管(Medtronic. Inc，
7USA)製成，長度50cm，內徑6. 3mm。共3組矽膠管，於每組矽膠管內分別加入不同濃度的肝 素鹽水0. 7ml，每根管內加入非抗凝的健康人新鮮全血劑量為7ml，使管內新鮮血液中肝素 的最終濃度分別為0. 001mg/ml,0. 01mg/ml,0. 02mg/ml，各組管內血液在實驗前取樣檢測， 對各組管均用搖擺模擬血液流動60分鐘後取樣檢測，檢測指標為血常規、凝血指標和補體 系統實驗指標，以確定對管內最好的肝素化劑量。矽膠管固定於37°C搖床內，行弧形鐘擺式搖擺，調節搖床速度為100次/分鐘，搖 擺幅度約為30°，使管中血液達到最大搖擺振幅，模擬快速流動的血液，以上各組重複實驗 6次。研究樣本分組實驗前組健康人新鮮全血抽出後不放入體外循環管道中，立即作相關檢測；對照組健康人新鮮全血7ml添加100 μ 1培養液，放入體外循環管道中搖擺60分 鍾；實驗組健康人新鮮全血7ml添加包含不同數量(分別為500IEQ、1000IEQ)胰島 的100 μ 1培養液，具體如下500IEQ (胰島當量)實驗組、1000IEQ實驗組，各實驗組放入體 外循環管道中，根據搖擺時間再分為5、10、60分鐘3個小組。以上各組重複實驗6次，確定IBMRI體外模型添加胰島數量。實驗中對體外循環管道內表面肝素化，根據前述實驗確定的最佳劑量肝素化。檢測項目各小組血液經70 μ m過濾網(BD公司，USA)過濾，將血液中供體血栓和非血栓 的液體部分分開。固體血栓行HE染色病理學檢測[Xu B Y，Yu Y, Al-Abdullah I H， et al.Long-term survival and function of intraportal porcine and human islet xenografts in nondiabetic nude mice. [J]. Transplant Proc,2008,40(2)]。 血液非血栓部分檢測血常規(包括血小板、白細胞等)、出凝血時間(PT、APTT) ；ELISA 法檢測TAT (凝血酶抗凝血酶複合物凝血系統激活的指標)[Berman D M，Cabrera 0， Kenyon N Μ, et al. Interference with tissue factor prolongs intrahepatic islet allograft survival in a nonhuman primate marginal mass model. [J]· Transplantation,2007,84(3) 308-315 ；Cabric S, Sanchez J, Lundgren T，et al. Islet surface heparinization prevents the instant blood-mediated inflammatory reaction in islet transplantation. [J]. Diabetes,2007,56(8) :2008_2015· ] ；ELISA 法檢測補體C3a (人補體片段)、C5b-9(人末端補體複合物)含量[Rood P P，Bottino R， Balamurugan A N, et al. Reduction of early graft loss after intraportal porcine islet transplantation in monkeys. [J]. Transplantation, 2007, 83 (2) -.202-210.]； 化學發光法測定血液內豬胰島素含量[Goldman H C Ε. Human pancreatic islets in culture :effects of supplementing the medium with homologous and heterologous serum[J]. Science,1976(192) 1014-1016 ；Tjernberg J, Ekdahl K N, Lambris J D, et al. Acute antibody-mediated complement activation mediates lysis of pancreatic islets cells and may causetissue loss in clinical islet transplantation. [J]. Transplantation,2008,85(8) : 1193—1199.]。含三種不同濃度肝素的管道加入新鮮血液搖擺60分鐘後與實驗前組(即新鮮抽出的標本立即作檢測)對比，當肝素濃度為0. 001mg/ml時，對血液凝血功能影響最小，可以 長時間模擬體內血液並維持其正常生理功能不變；濃度為0. 01mg/ml,0. 02mg/ml時，雖然 也能很好的維持血液的流動性，保持血液中各種血細胞數量的穩定，但出凝血時間指標均 明顯延長，不能保持血液的正常出凝血功能。因此，在後續進行的體外IBMIR實驗中，肝素 化劑量均為0. OOlmg/mL·表2.不同濃度肝素的新鮮全血生化及出凝血時間檢測結果 注*與實驗前組相比，差異有統計學意義；/發生凝血，相關指標未能測得；*/APTT時間過長，超出儀器測量範圍，未能測出。從表3，4，5可以看出，搖擺60分鐘含有不同胰島細胞數量的實驗組，血小板 (PLT)、中性粒細胞(Neutrophils)、單核細胞(Monocytes)、淋巴細胞(Lymphocytes)明顯 消耗，同時凝血系統、補體系統顯著激活；而對照組沒有血栓形成，其較明顯的改變是60分 鍾後血小板消耗了 15%。且當加入1000IEQ胰島細胞時，能形成比較明顯的血栓，並且提示 凝血系統及補體系統激活的各指標較500IEQ胰島細胞組具有顯著性差異，因此在後面繼 續進行的體外IBMIR實驗中，我們將採用1000IEQ胰島細胞進行實驗。表3.搖擺60分鐘後各組的血液血細胞檢測結果 注*與對照組相比，差異有統計學意義；#500IEQ與1000IEQ組相比，差異有統計學意義。表4.搖擺60分鐘後各組的血液補體及胰島素結果 注*與對照組相比，差異有統計學意義；#500IEQ與1000IEQ組相比，差異有統計學意義。表5.各組不同時間點的血栓重量(g) 五、TF反義RNA轉染豬胰島細胞體外IBMIR試驗按上述實驗結果確定體外IBMIR實驗條件，選用轉染效率較高的TF1006，TF1009 和TFl 14組的豬胰島細胞進行體外IBMIR實驗。研究分組空白對照組未處理過的豬胰島細胞；空白轉染對照組加轉染試劑oligofetctmine後培養的豬胰島細胞；TF 反義 RNA-Oligofectamine 轉染實驗組將 Tubing Loops 模型分為 TF1006 組、TF1009組和TFl 14組，分別將TF1006轉染後的豬胰島細胞，TH1009轉染後的豬胰島細胞和 THl 14轉染後的豬胰島細胞分別置入相應組別的Tubing Loops模型。以上各組加入體外IBMIR模型中37°C恆溫搖擺30分鐘，重複實驗6次。檢測項目各小組血液經70 μ m過濾網(BD公司，USA)過濾，固體血栓稱重。血液非血栓部分 檢測血常規(包括血小板、白細胞等)；ELISA法檢測TAT (凝血酶抗凝血酶複合物凝血系 統激活的指標)；ELISA法檢測補體C3a (人補體片段)、C5b-9(人末端補體複合物)含量。結果如表6所示，TF1006、TF1009、TF114組的血細胞數值較對照組高，經統計學處 理數據，即表示淋巴細胞、單核細胞消耗量較小，淋巴細胞系統及非特異性免疫系統激活程 度小；血小板的數值較對照組高，提示血小板活化程度較對照組低，凝血系統激活程度亦較 對照組低。將TF1006、TF1009、TF114與對照組的補體C3a、C5a_9含量進行比較，值較低，提 示血漿中C3a、C5b-9較對照組少，那麼C3a、C5a進一步激活粒細胞、單核細胞數量將減少， 白細胞向胰島移植物聚集這一反應程度將減輕，形成血栓程度減輕。根據血凝塊的大小可評價IBMIR的發生程度，實驗中反義RNA沉默的各組過濾出 血凝塊的重量值與對照組比較均較輕，且有統計意義，提示IBMIR發生的強度較低。根據以上所有分析顯示，TF1006、TF1009、TFl 14能沉默胰島細胞TF的表達，有效 減低凝血系統活化程度，從而減輕IBMIR的發生程度，在這三條反義RNA中，TF1006沉默TF 效果最佳。表6. IBMRI反應前後各組血常規、血栓和補體檢測結果 注*表示與空白轉染對照組相比，P < 0. 05差異有統計學意義
靶向TF反義RNA轉染胰島細胞體外IBMIR反應後形成血凝塊如圖3所示，從左到 右依次是TF1006轉染組、TF1009轉染組、TFl 14轉染組、空白轉染對照組和空白對照組，各 反義RNA轉染組過濾出的血凝塊的重量值與對照組比較均較輕。表7. TF反義RNA對血栓形成抑制的重量評價 注*表示與空白轉染對照組相比，P < 0. 05差異有統計學意義
權利要求
一種抑制胰島移植中經血液介導的炎症反應的寡核苷酸，具有如下特徵1)含有7～75個核苷酸；2)至少含有3個連續的非手性5′到3′磷酸核苷間鍵；3)互補於TF基因的5′端非翻譯區、翻譯起始區、3′端非翻譯區和/或翻譯終止區；4)在1毫摩爾濃度下具有75℃～115℃的熔解溫度。
2.如權利要求1所述的寡核苷酸，其特徵在於，該寡核苷酸由10 26個核苷酸組成， 在1微微摩爾濃度下具有40°C 85°C的熔解溫度。
3.如權利要求1所述的寡核苷酸，其特徵在於，該寡核苷酸是經化學修飾的修飾性寡 核苷酸。
4.如權利要求3所述的寡核苷酸，其特徵在於，所述修飾性寡核苷酸在3'端和/或 5'端帶有保護基團。
5.如權利要求3所述的寡核苷酸，其特徵在於，所述修飾性寡核苷酸是3'末端封閉和 /或5'末端封閉的。
6.如權利要求3所述的寡核苷酸，其特徵在於，所述修飾性寡核苷酸是在糖基2'位上 帶有取代基團，所述取代基團為氧、甲氧基、丙氧基、甲氧-乙氧基、氟、氯、溴或碘。
7.如權利要求1所述的寡核苷酸，其特徵在於，該寡核苷酸是靶向人或動物TF基因的 反義寡核苷酸。
8.如權利要求7所述的寡核苷酸，其特徵在於，所述反義寡核苷酸的序列選自SEQID NO :1 SEQ ID NO :3。
9.權利要求1-8中任一所述的寡核苷酸用於製備抗胰島移植中經血液介導的炎症反 應的藥物組合物的用途。
10.如權利要求9所述的用途，其特徵在於，所述藥物組合物中含有一種或多種所述寡 核苷酸，當含有多種寡核苷酸時，這多種寡核苷酸分別與TF基因的5'端非翻譯區、翻譯起 始區、3'端非翻譯區和/或翻譯終止區的不同區域互補。
全文摘要
本發明公開了一種抑制胰島移植中經血液介導的炎症反應的寡核苷酸。該寡核苷酸含有7～75個核苷酸；至少含有3個連續的非手性5′到3′磷酸核苷間鍵；互補於TF基因的5′端非翻譯區、翻譯起始區、3′端非翻譯區和/或翻譯終止區；在1毫摩爾濃度下具有75℃～115℃的熔解溫度。該寡核苷酸可以是核糖寡核苷酸或脫氧核糖寡核苷酸，並可經化學修飾，可用於製備抗胰島移植中經血液介導的炎症反應的藥物組合物。
文檔編號A61K48/00GK101886076SQ20101021917
公開日2010年11月17日 申請日期2010年6月25日 優先權日2010年6月25日
發明者孫侖泉, 易受南, 王維 申請人:王維;易受南;孫侖泉