檢測人血清中補體Clq濃度的試劑盒及其方法
2023-05-24 17:53:11 1
專利名稱：檢測人血清中補體Clq濃度的試劑盒及其方法
技術領域：
本發明屬於生物工程領域，尤其涉及一種檢測試劑盒，特別是一種採用免疫透射比濁法和免疫散射比濁法檢測人血清中和關節腔液中補體Clq濃度的試劑盒及其方法。
背景技術：
補體Clq是補體系統Cl的第一組成成份，是一個巨分子量糖蛋白，一個Clq分子由18個多肽鏈成，化學組成為膠原性蛋白分子量410KD。現有技術中採用免疫擴散法和ELISA雙抗體夾心技術測定補體Clq濃度，但是其步驟複雜，準確性不高。
發明內容
本發明的目的在於提供一種檢測人血清中補體Clq濃度的試劑盒及其方法，所述的這種檢測人血清中補體Clq濃度的試劑盒及其方法要解決現有技術中採用免疫擴散法和ELISA雙抗體夾心技術測定補體Clq濃度過程複雜，準確性不高的技術問題。本發明提供了一種檢測人血清中補體Clq濃度的試劑盒，包括兩種試劑，I試劑由磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、PEG6000、EDTA-NA2和TX-100組成，在所述的I試劑中，所述的磷酸氫二鈉的質量濃度為28. 6g/L，所述的磷酸二氫鉀的質量濃度為2. 7g/L，所述的PEG6000的質量濃度為50g/L，所述的EDTA-NA2的質量濃度為lg/L，所述的TX-100的體積濃度為0. 2ml/L，II試劑由磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、PEG6000、EDTA-NA2, TX-100和補體Clq抗血清或者補體Clq單克隆抗體組成，在所述的II試劑中，所述的磷酸氫二鈉的質量濃度為28. 6g/L，所述的磷酸二氫鉀的質量濃度為2. 7g/L，所述的PEG6000的質量濃度為50g/L，所述的EDTA-NA2的質量濃度為lg/L，所述的TX-100的體積濃度為0. 2ml/L，所述的補體Clq抗血清或者補體Clq單克隆抗體的體積濃度為300ml/L。進一步的，所述的補體Clq抗血清為羊抗人補體Clq抗血清、或鼠抗人補體Clq抗血清，所述的補體Clq單克隆抗體為鼠抗人補體Clq單克隆抗體。進一步的，所述的TX-100的純度為100%。進一步的，所述的兔抗人補體Clq抗血清的效價為I : 64。本發明還提供了一種檢測人血清中補體Clq濃度的方法，採用上述的試劑盒，包括一個將樣本採用生化分析儀測定的步驟，在所述的一個將樣本採用生化分析儀測定的步驟中，將樣品加入I試劑Rl後，37°C孵育5min，讀測第I點樣本Al，加入II試劑R2，37°C 孵育5min，讀測第2點樣本A2，樣本A =樣本A2-樣本Al ;還包括一個將校準品採用生化分析儀測定的步驟，在所述的一個將校準採用生化分析儀測定的步驟中，將校準加入I試劑Rl後，37°C孵育5min，讀測第I點校準Al，加入II試劑R2，37°C孵育5min，讀測第2點校準A2，校準A =校準A2-校準Al ；樣本A2-樣本Al
補體Clq濃度(mg/L) =_X校準品濃度(mg/L)
校準A2-校準Al上述測定的參數為溫度37°C，主波長340nm、546nm、600nm，副波長700nm，樣本或校準品3-4 u I, R1 :240 iil，R2 :60 yl，反應時間為10分鐘。本發明的羊抗人補體Clq抗血清、鼠抗人補體Clq抗血清、鼠抗人補體Clq單克隆抗體可以在市場購買，也可以通過常規的免疫方法製備。本發明的試劑盒和方法是採用免疫透射比濁法和免疫散射比濁法的測定原理，SP利用補體Clq抗原和兔抗人補體Clq抗血清、羊抗人補體Clq抗血清、鼠抗人補體Clq抗血清、鼠抗人補體Clq單克隆抗體相結合，形成不溶性免疫複合物，使反應液產生渾濁，其濁度高低，即透光度減少、吸光度增加反映人血清樣本中補體Clq的濃度，補體Clq的濃度可由校準品所作的劑量反應曲線算出。採用本發明的試劑盒和方法測得的Clq的濃度可以作為科研和教學使用。本發明和已有技術相比，其技術進步是顯著的。本發明的試劑盒和方法用於測定補體Clq濃度的過程簡單方便，準確性高。
圖I是由校準品所作的補體Clq濃度和吸光度的劑量反應曲線圖。
具體實施例方式實施例I免疫透射比濁法當一束入射光照射液相中的IC時，一部分光被IC粒子吸收，一部分光透過，還有一部分光被IC粒子散射。利用比濁儀在光源的光路方向上測量透射光強度與入射光強度的比值或吸光值，來判斷待測抗原的量，此法稱為透射比濁法。I. I適用儀器半自動、全自動生化分析儀。I. 2分析方法免疫透射比濁法。I. 3性能要求I. 3. I試劑外觀Rl :無色澄清透明液體；R2 :淡黃色澄清液體。
、
1.3.2試劑空白吸光度(A)吸光度(A): + ( 0. 04A(在溫度 37 °C ;主波長 340nm(副波長 700nm))。I. 3. 3 精密度I. 3. 3. I批內精密度CVS 10%。I. 3. 4批間精密度
相對極差≤10%。1. 3. 5 準確度不準確度±10%的範圍以內。1.3.6分析靈敏度吸光度⑷> 0. 04A。1. 3. 7 線性在50mg/L_400mg/L 範圍內，相關係數(Y)≥0. "00。1. 3. 8 穩定性試劑在2°C -8°C避光貯存至有效期末前後兩個月，進行檢測，其質量符合上項的規定。2. I檢測條件2. I. I生化分析儀(以下簡稱儀器)日立7060自動生化分析儀。2. I. 2工作環境溫度室溫15-32 °C。室內溼度45-85% RH。2. I. 3主要測定參數及操作步驟溫度370C ;主波長340nm(副波長700nm)，樣本或校準品3-4 u I :240 u I ；R2 60iU，反應時間10分鐘。方法類型二點終點法。樣本或校準品加試劑Rl後，37°C孵育5min，讀測第I點(Al)，加入試劑R2，37°C孵育5min，讀測第2點(A2)，樣本A = A2-A1。結果計算
樣本A2-樣本Al
補體Clq濃度(mg/L) =_X校準品濃度(mg/L)
校準A2-校準Al2. I. 4 校準品本標準中所用校準品為浙江省玉環縣南方試劑廠生產的標準品。2. 2試劑外觀光下目測試劑盒，Rl :無色澄清透明液體；R2 :淡黃色澄清液體。2. 3試劑空白吸光度值取^240 u 1，加蒸懼水 I,置 37°C孵育 5min 後,加入 R260 u l,g 37°C孵育 5min後，在7060自動生化分析儀上，用340nm波長，測定其吸光度值應符合實施例I中I. 3. 2項的規定。2. 4精密度2. 4. I批內精密度試驗方法在儀器正常工作條件下，用同一批試劑，連續測試(約200mg/L)樣本20次，計算其測量值的平均值(X )和標準差(SD)，再按以下公式計算變異係數(CV%)的值，其結果應符合實施例I中I. 3. 3. I項的規定。n SD = { E (Xi-X)2/(N-I)}1/2I = ICV= SD/XX100%式中SD-標準偏差；CV-變異係數；X -n次測定值的均值；Xi-第i次的測定值；n_測量次數。2. 4. 2批間精密度試驗方法在儀器正常工作條件下，取三個批號試劑，每個批號取一套。分別測定(約200mg/L)樣本各3次。然後計算每批測定結果的均值h、x2, UP三批試劑測定結果的總均值(Xt )。按照下列公式求出三個批號試劑的測定均值的相對極差(％)，其結果應符合實施例I中I. 3. 4項的規定。
相對極差(%) = (Xmax-Xmin) /Xt X 100%式中J(Inax)Sx^ X2> x3中最大值，又(min)為x X2> X3中最小值。2. 5準確度在儀器正常工作條件下，試劑用浙江玉環南方試劑廠生產的標準品經定標後，測定已知濃度的樣本，重複測定10次，其測量結果的均值的相對偏差應符合實施例I中I. 3. 5項的規定。RE %=絕對偏差/TVX 100%絕對偏差=檢測結果均值-標準品靶值式中TV-測定標準品的靶值2. 6分析靈敏度R1 試劑 240iil，加入 50mg/L 樣本 4iil，置 37°C 孵育 5min 後，加入 R260 iil，置 37°C孵育5min後，在7060自動生化分析儀上，用340nm主波長(副波長700nm)，測吸光度，其結果應符合實施例I中I. 3. 6項的規定。2. 7線性試驗樣本或校準品選用按實施例3配製的1#、2#、3#、4#、和5#各測試濃度樣本或校準品。測定步驟在儀器正常工作條件下，經定標後，用試劑測定以上五個濃度樣本或校準品，每一濃度樣本或校準品分別測定3次，取均值為實測值Yi。計算按以下公式計算相關係數Y，其結果應符合實施例I中I. 3. 7項的規定。
權利要求
1.一種檢測人血清中補體Clq濃度的試劑盒，包括兩種試劑，其特徵在於I試劑由磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、PEG6000、EDTA-NA2和TX-IOO組成，在所述的I試劑中，所述的磷酸氫二鈉的質量濃度為28. 6g/L，所述的磷酸二氫鉀的質量濃度為2. 7g/L，所述的PEG6000的質量濃度為50g/L，所述的EDTA-NA2的質量濃度為lg/L，所述的TX-100的體積濃度為0.2ml/L，II試劑由磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、PEG6000、EDTA-NA2、TX-100和補體Clq抗血清或者補體Clq單克隆抗體組成，在所述的II試劑中，所述的磷酸氫二鈉的質量濃度為28. 6g/L，所述的磷酸二氫鉀的質量濃度為2. 7g/L，所述的PEG6000的質量濃度為50g/L，所述的EDTA-NA2的質量濃度為lg/L，所述的TX-100的體積濃度為0. 2ml/L，所述的補體Clq抗血清或者補體Clq單克隆抗體的體積濃度為300ml/L。
2.如權利要求I所述的一種檢測人血清中補體Clq濃度的試劑盒，其特徵在於所述的補體Clq抗血清為羊抗人補體Clq抗血清、或鼠抗人補體Clq抗血清，所述的補體Clq單克隆抗體為鼠抗人補體Clq單克隆抗體。
3.如權利要求I所述的一種檢測人血清中補體Clq濃度的試劑盒，其特徵在於所述的TX-100的純度為100%。
4.如權利要求I所述的一種檢測人血清中補體Clq濃度的試劑盒，其特徵在於所述的兔抗人補體Clq抗血清的效價為1:64。
5.一種檢測人血清中補體Clq濃度的方法，其特徵在於採用權利要求I所述的試劑盒，包括一個將樣本採用生化分析儀測定的步驟，在所述的一個將樣本採用生化分析儀測定的步驟中，將樣品加入I試劑Rl後，37°C孵育5min，讀測第I點樣本Al，加入II試劑R2，37°C孵育5min，讀測第2點樣本A2，樣本A=樣本A2-樣本Al ;還包括一個將校準品採用生化分析儀測定的步驟，在所述的一個將校準採用生化分析儀測定的步驟中，將校準加入I試劑Rl後，37°C孵育5min，讀測第I點校準Al，加入II試劑R2，37°C孵育5min，讀測第2點校準A2，校準A=校準A2-校準Al ； 樣本A2-樣本Al 補體Clq濃度(mg/L)=_X校準品濃度(mg/L) 校準A2-校準Al 上述測定的參數為溫度37°C，主波長340nm、546nm、600nm，副波長700nm，樣本或校準品3-4 u !,R1 240u !,R2 :60 yl，反應時間為10分鐘。
全文摘要
本發明屬於生物工程領域，提供了一種檢測血清中補體Clq濃度的試劑盒，解決了現有技術中採用免疫擴散法和ELISA雙抗體夾心技術測定補體C1q濃度步驟複雜，準確性不高、重複性差的技術問題。包括兩種試劑，Ⅰ試劑由磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、PEG6000、EDTA-NA2和TX-100組成，Ⅱ試劑由磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、PEG6000、EDTA-NA2、TX-100、補體C1q抗血清或補體C1q單克隆抗體組成。本發明還提供了採用上述的試劑盒檢測人血清中補體Clq濃度的方法，本發明的試劑盒和方法用於測定補體C1q濃度的步驟簡單方便，準確度高、重複性好，用於自動化分析儀。
文檔編號G01N33/68GK102636654SQ201210133619
公開日2012年8月15日 申請日期2012年4月28日 優先權日2012年4月28日
發明者劉穎冰, 劉穎成, 張瑞鎬, 朱慧琳, 王泉龍 申請人:上海北加生化試劑有限公司