十五味乳鵬製劑的檢測方法
2023-04-24 17:55:26
專利名稱：十五味乳鵬製劑的檢測方法
技術領域：
本發明屬於中藥技術領域，具體涉及一種中藥製劑的檢測方法。
背景技術：
十五味乳鵬丸是藏醫傳統驗方，處方由貝噶、寬筋藤、決明子、渣馴膏、黃葵子、藏菖蒲、巴夏嘎、兒茶、訶子(去核)、安息香、毛訶子、鐵棒錘(制)、木香、餘甘子、麝香十五味藥材組成。可消炎止痛，幹黃水，用於關節紅腫疼痛，發癢，痛風，黃水積聚。目前使用的十五味乳鵬丸記載於《中華人民共和國衛生部藥品標準1995年版藏
藥第一冊藏藥名畢瓊久埃日布拼音名Shiwuwei Rupeng Wan書頁號C1_199標準編號WS3-BC-0196-9處方貝噶150g、寬筋藤150g、決明子120g、渣馴膏75g、黃葵子120g、藏菖蒲 120g、巴夏嘎110g、兒茶75g、訶子150g、安息香60g、毛訶子150g、鐵棒錘75g、木香150g、麝香1.5g、餘甘子150g。製法以上十五味，除渣馴膏、麝香外，其餘粉碎成細粉，過篩，加入人工麝香細粉，混勻，用渣馴膏加適量水泛丸，陰乾即得。性狀本品為棕褐色水丸；氣微香，味苦。檢查應符合丸劑項下有關的各項規定(附錄8頁)。功能與主治消炎止痛，幹黃水。用於關節紅腫疼痛，發癢，痛風，黃水積聚。用法與用量一次2 4丸，一日2次。規格每10丸重3g。貯藏密閉，置陰涼乾燥處目前尚未有十五味乳鵬製劑的檢測方法，也沒有對方中的毒性成分進行含量檢測的方法。
發明內容
本發明的目的在於提供一種十五味乳鵬製劑的檢測方法，所述檢測方法具有專屬性強、重現性好、操作簡便等優點。為實現上述目的，本發明的技術方案為一種十五味乳鵬製劑的檢測方法，該製劑原料藥組成為乳香150g、寬筋藤150g、 決明子120g、渣馴膏75g、黃葵子120g、藏菖蒲120g、巴夏嘎110g、兒茶75g、去核的訶子 150g、安息香/苦奎那布60g、毛訶子150g、鐵棒錘(制)75g、木香/川木香150g、麝香/人工麝香1. 5g、餘甘子150g ；該方法包括下述鑑別和/或檢查方法的一種或幾種過薄層層析對製劑中的川木香、決明子、藏菖蒲進行定性鑑別，以及檢查製劑中烏頭鹼含量。具體地，川木香的定性鑑別包括
la)製備川木香供試品溶液、川木香對照藥材溶液、不含川木香的陰性樣品溶液；2a)按照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗，分別吸取步驟la)所獲得的供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液並點樣於同一矽膠G薄層板上；3a)以環己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯為展開劑，將步驟2a)所獲得的薄層板放置在展開缸中飽和、展開、取出、晾乾，噴以香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，薄層色譜中，在與川木香對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的斑點；決明子的定性鑑別包括lb)製備決明子供試品溶液、決明子對照藥材溶液、不含決明子的陰性樣品溶液；2b)按照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗，分別吸取步驟lb)所獲得的供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液並點樣於同一矽膠G薄層板上；3b)以石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層液為展開劑，將步驟2b)所獲得的薄層板放置在展開缸中飽和、展開、取出、晾乾，紫外光燈下檢視，薄層色譜中，在與決明子對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的螢光斑點；藏菖蒲的定性鑑別包括Ic)製備藏菖蒲供試品溶液、藏菖蒲對照藥材溶液、不含藏菖蒲的陰性樣品溶液；2c)按照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗，分別吸取驟Ic)所獲得的供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液並點樣於同一矽膠GF254薄層板上；3c)以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，將步驟2c)所獲得的薄層板放置在展開缸中飽和、展開、取出、晾乾，紫外光燈下檢視；薄層色譜中，在與藏菖蒲對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的暗斑點；烏頭鹼含量檢查包括Id)製備烏頭鹼供試品溶液、烏頭鹼對照品溶液；2d)按照薄層色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄VI B試驗，分別吸取步驟Id) 所獲得的供試品溶液，烏頭鹼對照品溶液並點樣於同一矽膠G薄層板上；3d)以環己烷-乙酸乙酯-二乙胺為展開劑，將步驟2d)所獲得的薄層板放置在展開缸中飽和、展開、取出、晾乾，噴以稀碘化鉍鉀試液，薄層色譜中，供試品色譜在與對照品色譜相應的位置上出現的斑點應小於對照品的斑點或不出現斑點。所述川木香、決明子、藏菖蒲以及烏頭鹼的供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液的製備方法包括(1)川木香取所述十五味乳鵬製劑，研細，加丙酮，超聲處理，濾過，濾液濃縮，作為川木香的供試品溶液；另取川木香對照藥材，同法製成川木香對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含川木香的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含川木香的陰性樣品溶液；(2)決明子取所述十五味乳鵬製劑，研細，加甲醇，加熱回流，濾過，濾液蒸乾，殘渣加2. 5mol/ L硫酸溶液，超聲處理，再加三氯甲烷，加熱回流，冷卻，移置分液漏鬥中，分取三氯甲烷層， 酸液用三氯甲烷提取，加無水硫酸鈉適量脫水，濾過，濾液揮幹，殘渣加甲醇使溶解，作為決明子的供試品溶液；另取決明子對照藥材，同法製成決明子對照藥材溶液；按處方比例及
7製備工藝，配置不含決明子的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含決明子的陰性樣品溶液；(3)藏菖蒲取所述十五味乳鵬製劑，加甲醇，超聲，濾過，濾液濃縮，作為藏菖蒲的供試品溶液；另取藏菖蒲對照藥材，同法製成藏菖蒲對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含藏菖蒲的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含藏菖蒲的陰性樣品溶液；(4)烏頭鹼取所述十五味乳鵬製劑，研細，加氨試液，攪勻，放置，加乙醚，振搖，放置，濾過，濾液蒸乾，殘渣加無水乙醇使溶解，作為烏頭鹼含量檢測的供試品溶液；另取烏頭鹼對照品適量，加無水乙醇製成溶液，作為烏頭鹼對照品溶液。優選地，所述方法包括以下步驟a)川木香的定性鑑別取所述十五味乳鵬製劑1 3重量份，研細，加丙酮10 30體積份，超聲處理 10 30分鐘，濾過，濾液濃縮約1 3體積份，作為川木香的供試品溶液；另取川木香對照藥材0. 1 0. 8重量份，同法製成川木香對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含川木香的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含川木香的陰性樣品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VIB試驗，吸取上述三種溶液各0. 003 0. 007體積份，分別點樣於同一矽膠G薄層板上，以體積比為10 20 2 8 0.5 2的環己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯為展開劑，薄層板置展開缸中飽和0 40min，展開，取出，晾乾，噴以5%香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；薄層色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的斑點；b)決明子的定性鑑別取所述十五味乳鵬製劑1 3重量份，研細，加甲醇10 30體積份，加熱回流 20 45分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加2. 5mol/L硫酸溶液10 30體積份，超聲處理3 8 分鐘，再加三氯甲烷10 30體積份，加熱回流20 45分鐘，冷卻，移置分液漏鬥中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取1 3次，每次5 15體積份，合併三氯甲烷液，加無水硫酸鈉適量脫水，濾過，濾液揮幹，殘渣加甲醇1 3體積份使溶解，作為決明子的供試品溶液；另取決明子對照藥材0. 1 0. Sg,同法製成決明子對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含決明子的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含決明子的陰性樣品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗，吸取供試品溶液0.005 0. 02體積份、對照藥材溶液0. 003 0. 007體積份和陰性樣品溶液0. 005 0. 02體積份， 分別點樣於同一矽膠G薄層板上，以體積比10 20 2 8 0. 5 2，沸點為60°C 90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層液為展開劑，薄層板置展開缸中飽和0 40min，展開， 取出，晾乾，置365nm紫外光燈下檢視；薄層色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的螢光斑點；c)藏菖蒲的定性鑑別取所述十五味乳鵬製劑1 3重量份，加甲醇10 30體積份，超聲10 30分鐘， 濾過，濾液濃縮至約1 3體積份，作為藏菖蒲的供試品溶液；另取藏菖蒲對照藥材0. 1 0. 8重量份，同法製成藏菖蒲對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含藏菖蒲的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含藏菖蒲的陰性樣品溶液；照薄層色譜法 《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗，吸取供試品溶液0. 005 0. 02體積份、對照藥材溶液0. 003 0. 007體積份和陰性樣品溶液0. 005 0. 02體積份，分別點樣於同一矽膠 GF254薄層板上，以體積比為5 15 0.5 4，沸點為60°C 90°C石油醚-乙酸乙酯為展開劑，薄層板置展開缸中飽和0 40min，展開，取出，晾乾，置254nm紫外光燈下檢視；薄層色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的暗斑點；d)烏頭鹼含量檢查取所述十五味乳鵬製劑3 8重量份，研細，加氨試液0. 5 2體積份，攪勻，放置 1 3小時，加乙醚10 20體積份，振搖0. 5 2小時，放置18 30小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加無水乙醇1 3體積份使溶解，作為烏頭鹼的供試品溶液；另取烏頭鹼對照品適量，加無水乙醇製成每體積份含0. 0005 0. 002重量份的溶液，作為烏頭鹼對照品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄VI B試驗，吸取供試品溶液0. 005 0. 03體積份，烏頭鹼對照品溶液0. 0015 0. 015體積份，分別點樣於同一矽膠G薄層板上，以體積比為2 8 1 3 0.5 2的環己烷-乙酸乙酯-二乙胺為展開劑，薄層板置展開缸中飽和0 40min，展開，取出，晾乾，噴以稀碘化鉍鉀試液；薄層供試品色譜中，供試品色譜在與對照品色譜相應的位置上出現的斑點應小於對照品的斑點或不出現斑點。更優選地，所述方法包括以下步驟i)川木香的定性鑑別取所述十五味乳鵬製劑2g，研細，加丙酮20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮約anl，作為川木香的供試品溶液；另取川木香對照藥材0. 5g，同法製成川木香對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含川木香的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含川木香的陰性樣品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗， 吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點樣於同一矽膠G薄層板上，以體積比為15 5 1的環己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯為展開劑，薄層板置展開缸中飽和20min，展開，取出，晾乾，噴以5%香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；薄層色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的斑點；ii)決明子的定性鑑別取所述十五味乳鵬製劑2g，研細，加甲醇20ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸乾， 殘渣加2. 5mol/L硫酸溶液20ml，超聲處理5分鐘，再加三氯甲烷20ml，加熱回流30分鐘， 冷卻，移置分液漏鬥中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取2次，每次IOml，合併三氯甲烷液，加無水硫酸鈉適量脫水，濾過，濾液揮幹，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為決明子的供試品溶液；另取決明子對照藥材0. 5g，同法製成決明子對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含決明子的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含決明子的陰性樣品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗，吸取供試品溶液10 μ 1、 對照藥材溶液5μ 1和陰性樣品溶液10μ 1，分別點樣於同一矽膠G薄層板上，以體積比 15 5 1，沸點為60°C 90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層液為展開劑，薄層板置展開缸中飽和20min，展開，取出，晾乾，置365nm紫外光燈下檢視；薄層色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的螢光斑點；iii)藏菖蒲的定性鑑別
9
取所述十五味乳鵬製劑2g，加甲醇20ml，超聲20分鐘，濾過，濾液濃縮至約^iil, 作為藏菖蒲的供試品溶液；另取藏菖蒲對照藥材0. 5g，同法製成藏菖蒲對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含藏菖蒲的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含藏菖蒲的陰性樣品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗，吸取供試品溶液5 10 μ 1、對照藥材溶液5 μ 1和陰性樣品溶液5 10 μ 1，分別點樣於同一矽膠GF254薄層板上，以體積比為10 2，沸點為60°C 90°C石油醚-乙酸乙酯為展開劑，薄層板置展開缸中飽和20min，展開，取出，晾乾，置254nm紫外光燈下檢視；薄層色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的暗斑點；iv)烏頭鹼含量檢查取所述十五味乳鵬製劑5g，研細，加氨試液1ml，攪勻，放置2小時，加乙醚15ml， 振搖1小時，放置M小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加無水乙醇2ml使溶解，作為烏頭鹼的供試品溶液；另取烏頭鹼對照品適量，加無水乙醇製成每Iml含Img的溶液，作為烏頭鹼對照品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄VI B試驗，吸取供試品溶液20 μ 1、 10 μ 1，烏頭鹼對照品溶液10 μ 1、5 μ 1、2. 5 μ 1，分別點樣於同一矽膠G薄層板上，以體積比為5 2 1的環己烷-乙酸乙酯-二乙胺為展開劑，薄層板置展開缸中飽和20min，展開， 取出，晾乾，噴以稀碘化鉍鉀試液；薄層色譜中，供試品色譜在與對照品色譜相應的位置上出現的斑點應小於對照品的斑點或不出現斑點。上述十五味乳鵬製劑的劑型可以是片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑或散劑。製備方法為取所述十五味乳鵬製劑，粉碎成細粉，過篩，混勻，加適量水制丸，陰乾即得；或取所述十五味乳鵬製劑，粉碎成細粉，過篩，混勻，混勻，按藥劑學常規方法，加入常規輔料，製成臨床上接受的口服製劑。本發明針對十五味乳鵬製劑的組成成分，對指標性成分川木香、決明子、藏菖蒲的存在進行檢測，並檢測製劑中的毒性成分烏頭鹼的含量，以達到對製劑的質量進行控制的目的。本發明的檢測方法根據實際檢測需要，對現有的檢測方法的檢測條件進行了篩選，確定了較佳的十五味乳鵬製劑的檢測方法，該檢測方法具有靈敏、重現性好和專屬性強的特
點ο
圖1是十五味乳鵬製劑中川木香薄層層析檢測圖；其中，從左到右樣品順序為川木香的供試品溶液1、川木香的供試品溶液2、川木香的供試品溶液3、川木香的供試品溶液4、川木香對照藥材溶液、不含川木香的陰性樣品溶液；其中，展開劑為環己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯(15 5 1)，顯色劑為5%香草醛硫酸。圖2是十五味乳鵬製劑中決明子薄層層析檢測圖；其中，從左到右樣品順序為決明子的供試品溶液1、決明子的供試品溶液2、決明子的供試品溶液3、決明子的供試品溶液4、決明子對照藥材溶液、決明子對照藥材溶液、不含決明子的陰性樣品溶液；其中，展開劑為石油醚(60°C 90°C)_甲酸乙酯-甲酸(15 5 1)的上層液，紫外光燈(365nm)下檢視。圖3是十五味乳鵬製劑中藏菖蒲薄層層析檢測圖；其中從左到右樣品順序為藏菖蒲的供試品溶液1、藏菖蒲的供試品溶液2、藏菖蒲的供試品溶液3、藏菖蒲的供試品溶液4、藏菖蒲對照藥材溶液、藏菖蒲對照藥材溶液、不含藏菖蒲的陰性對照液；其中，展開劑為石油醚(60°C 90°C)_乙酸乙酯(10 2)，紫外光燈QMnm)下檢視。圖4是十五味乳鵬製劑中烏頭鹼含量檢測圖；其中從左到右樣品順序為烏頭鹼含量檢測的供試品溶液1(點樣量10μ 1)、 烏頭鹼含量檢測的供試品溶液2(點樣量10 μ 1)、烏頭鹼含量檢測的供試品溶液3(點樣量10 μ 1)、烏頭鹼對照品溶液1(點樣量5 μ 1)、烏頭鹼對照品溶液2 (點樣量10μ 1)、烏頭鹼含量檢測的供試品溶液4(點樣量20 μ 1)、烏頭鹼含量檢測的供試品溶液5(點樣量20 μ 1)、烏頭鹼含量檢測的供試品溶液6 (點樣量20 μ 1)、烏頭鹼對照品溶液(點樣量 2. 5 μ 1)、烏頭鹼對照品溶液(點樣量2. 5 μ 1)；其中，展開劑為環己烷-乙酸乙酯-二乙胺(5 2 1)，顯色劑為稀碘化鉍試液； 日光下檢視。
具體實施例方式下述用於各成分檢測的製劑在各檢測方法下均簡稱為「供試品」，應理解為其指按照各檢測方法要求製備的供試品，例如在川木香方法中所述的供試品為「川木香的供試
π 」
ΡΠ O實施例1十五味乳鵬製劑的製備將乳香150g、寬筋藤150g、決明子120g、渣馴膏75g、黃葵子120g、藏菖蒲120g、 巴夏嘎110g、兒茶75g、去核的訶子150g、安息香/苦奎那布60g、毛訶子150g、鐵棒錘 (制)75g、木香/川木香150g、麝香/人工麝香1. 5g、餘甘子150g，除渣馴膏、麝香或人工麝香外，其餘粉碎成細粉，過篩，加入麝香或人工麝香細粉，混勻，用渣馴膏加適量水制丸，陰乾即得。或以上十五味，除麝香或人工麝香外，其餘粉碎成細粉，過篩，加入麝香或人工麝香細粉，混勻，按藥劑學常規方法，加入常規輔料，製成臨床上接受的口服製劑顆粒劑、丸劑、 膠囊劑、片劑或散劑。用法與用量日服用量為1. 2-2. 4g生藥量，一日2次。實施例2十五味乳鵬製劑中川木香的薄層層析條件的篩選實驗⑴儀器乳缽、電子秤、具塞錐形瓶、移液管、超聲波提取儀、漏鬥、濾紙、蒸發皿、點樣器、矽膠G板、層析缸、噴霧瓶、電吹風。(2)對照藥材川木香對照藥材(批號1091-200001)，購自中國藥品生物製品檢定所。(3)試劑乙醚、環己烷、丙酮、石油醚(60°C 90°C )、甲酸乙酯、甲酸、乙酸乙酯、二氯甲烷、 5%香草醛硫酸。
11
(4)檢驗方法提取溶劑的選擇分別採用乙醚和丙酮為提取溶劑；提取方法的選擇分別採用超聲處理和加熱回流；展開劑的選擇分別以環己烷-丙酮(10 3)、石油醚(60°C 90°C )-甲酸乙酯-甲酸(15 5 0. 5)、石油醚(60°C 90°C )_乙酸乙酯(9 1)、環己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯(15 5 1)為展開劑。(5)分別選擇以上不同提取溶劑、提取方法和展開劑進行試驗，結果如下
權利要求
1.一種十五味乳鵬製劑的檢測方法，該製劑原料藥組成為乳香150重量份、寬筋藤 150重量份、決明子120重量份、渣馴膏75重量份、黃葵子120重量份、藏菖蒲120重量份、 巴夏嘎110重量份、兒茶75重量份、去核的訶子150重量份、安息香/苦奎那布60重量份、 毛訶子150重量份、鐵棒錘(制)75重量份、木香/川木香150重量份、麝香/人工麝香1. 5 重量份、餘甘子150重量份；該方法包括下述鑑別和/或檢查方法的一種或幾種通過薄層層析對製劑中的川木香、決明子、藏菖蒲進行定性鑑別，以及檢查製劑中烏頭鹼含量。
2.如權利要求1所述的檢測方法，其中，川木香的定性鑑別包括la)製備川木香供試品溶液、川木香對照藥材溶液、不含川木香的陰性樣品溶液； 2a)按照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗，分別吸取步驟la)所獲得的供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液，並點樣於同一矽膠G薄層板上；3a)以環己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯為展開劑，將步驟2a)所獲得的薄層板放置在展開缸中飽和、展開、取出、晾乾，噴以香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，薄層色譜中，在與川木香對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的斑點； 決明子的定性鑑別包括lb)製備決明子供試品溶液、決明子對照藥材溶液、不含決明子的陰性樣品溶液； 2b)按照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗，分別吸取步驟lb)所獲得的供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液，並點樣於同一矽膠G薄層板上；3b)以石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層液為展開劑，將步驟2b)所獲得的薄層板放置在展開缸中飽和、展開、取出、晾乾，紫外光燈下檢視，薄層色譜中，在與決明子對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的螢光斑點； 藏菖蒲的定性鑑別包括Ic)製備藏菖蒲供試品溶液、藏菖蒲對照藥材溶液、不含藏菖蒲的陰性樣品溶液； 2c)按照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗，分別吸取驟(Ic)所獲得的供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液，並點樣於同一矽膠GF254薄層板上；3c)以石油醚-乙酸乙酯為展開劑，將步驟2c)所獲得的薄層板放置在展開缸中飽和、 展開、取出、晾乾，紫外光燈下檢視；薄層色譜中，在與藏菖蒲對照藥材色譜相應的位置上， 供試品色譜顯相同顏色的暗斑點； 烏頭鹼含量檢查包括Id)製備烏頭鹼供試品溶液、烏頭鹼對照品溶液；2d)按照薄層色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄VI B試驗，分別吸取步驟Id)所獲得的供試品溶液，烏頭鹼對照品溶液，並點樣於同一矽膠G薄層板上；3d)以環己烷-乙酸乙酯-二乙胺為展開劑，將步驟2d)所獲得的薄層板放置在展開缸中飽和、展開、取出、晾乾，噴以稀碘化鉍鉀試液，薄層色譜中，供試品色譜在與對照品色譜相應的位置上出現的斑點應小於對照品的斑點或不出現斑點。
3.如權利要求2所述的檢測方法，其中所述川木香、決明子、藏菖蒲以及烏頭鹼的供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液的製備方法包括(1)川木香的供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液取所述十五味乳鵬製劑，研細，加丙酮，超聲處理，濾過，濾液濃縮，作為川木香的供試品溶液；另取川木香對照藥材，同法製成川木香對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含川木香的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含川木香的陰性樣品溶液；(2)決明子的供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液取所述十五味乳鵬製劑，研細，加甲醇，加熱回流，濾過，濾液蒸乾，殘渣加2. 5mol/L硫酸溶液，超聲處理，再加三氯甲烷，加熱回流，冷卻，移置分液漏鬥中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取，加無水硫酸鈉適量脫水，濾過，濾液揮幹，殘渣加甲醇使溶解，作為決明子的供試品溶液；另取決明子對照藥材，同法製成決明子對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含決明子的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含決明子的陰性樣品溶液；(3)藏菖蒲的供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液取所述十五味乳鵬製劑，加甲醇，超聲，濾過，濾液濃縮，作為藏菖蒲的供試品溶液；另取藏菖蒲對照藥材，同法製成藏菖蒲對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含藏菖蒲的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含藏菖蒲的陰性樣品溶液；(4)烏頭鹼的供試品溶液、對照藥品溶液取所述十五味乳鵬製劑，研細，加氨試液，攪勻，放置，加乙醚，振搖，放置，濾過，濾液蒸乾，殘渣加無水乙醇使溶解，作為烏頭鹼含量檢測的供試品溶液；另取烏頭鹼對照品適量， 加無水乙醇製成溶液，作為烏頭鹼對照品溶液。
4.如權利要求1至3任一項所述的檢測方法，包括以下步驟a)川木香的定性鑑別取所述十五味乳鵬製劑1 3重量份，研細，加丙酮10 30體積份，超聲處理10 30分鐘，濾過，濾液濃縮約1 3體積份，作為川木香的供試品溶液；另取川木香對照藥材 0. 1 0. 8重量份，同法製成川木香對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含川木香的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含川木香的陰性樣品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VIB試驗，吸取上述三種溶液各0. 003 0. 007體積份， 分別點樣於同一矽膠G薄層板上，以體積比為10 20 2 8 0.5 2的環己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯為展開劑，薄層板置展開缸中飽和0 40min，展開，取出，晾乾，噴以5% 香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；薄層色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上， 供試品色譜顯相同顏色的斑點；b)決明子的定性鑑別取所述十五味乳鵬製劑1 3重量份，研細，加甲醇10 30體積份，加熱回流20 45分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加2. 5mol/L硫酸溶液10 30體積份，超聲處理3 8分鐘， 再加三氯甲烷10 30體積份，加熱回流20 45分鐘，冷卻，移置分液漏鬥中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取1 3次，每次5 15體積份，合併三氯甲烷液，加無水硫酸鈉適量脫水，濾過，濾液揮幹，殘渣加甲醇1 3體積份使溶解，作為決明子的供試品溶液；另取決明子對照藥材0. 1 0. Sg,同法製成決明子對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含決明子的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含決明子的陰性樣品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗，吸取供試品溶液0. 005 0. 02體積份、對照藥材溶液0. 003 0. 007體積份和陰性樣品溶液0. 005 0. 02體積份，分別點樣於同一矽膠G薄層板上，以體積比10 20 2 8 0. 5 2，沸點為60°C 90°C 石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層液為展開劑，薄層板置展開缸中飽和0 40min，展開，取出，晾乾，置365nm紫外光燈下檢視；薄層色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的螢光斑點；c)藏菖蒲的定性鑑別取所述十五味乳鵬製劑1 3重量份，加甲醇10 30體積份，超聲10 30分鐘，濾過，濾液濃縮至約1 3體積份，作為藏菖蒲的供試品溶液；另取藏菖蒲對照藥材0. 1 0.8 重量份，同法製成藏菖蒲對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含藏菖蒲的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含藏菖蒲的陰性樣品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗，吸取供試品溶液0. 005 0. 02體積份、對照藥材溶液 0. 003 0. 007體積份和陰性樣品溶液0. 005 0. 02體積份，分別點樣於同一矽膠GF254薄層板上，以體積比為5 15 0.5 4，沸點為60°C 90°C石油醚-乙酸乙酯為展開劑，薄層板置展開缸中飽和0 40min，展開，取出，晾乾，置254nm紫外光燈下檢視；薄層色譜中， 在與對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的暗斑點；d)烏頭鹼含量檢查取所述十五味乳鵬製劑3 8重量份，研細，加氨試液0. 5 2體積份，攪勻，放置1 3小時，加乙醚10 20體積份，振搖0. 5 2小時，放置18 30小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加無水乙醇1 3體積份使溶解，作為烏頭鹼的供試品溶液；另取烏頭鹼對照品適量，力口無水乙醇製成每體積份含0. 0005 0. 002重量份的溶液，作為烏頭鹼對照品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄VI B試驗，吸取供試品溶液0. 005 0. 03體積份， 烏頭鹼對照品溶液0. 0015 0. 015體積份，分別點樣於同一矽膠G薄層板上，以體積比為 2 8 1 3 0.5 2的環己烷-乙酸乙酯-二乙胺為展開劑，薄層板置展開缸中飽和 0 40min，展開，取出，晾乾，噴以稀碘化鉍鉀試液；薄層供試品色譜中，供試品色譜在與對照品色譜相應的位置上出現的斑點應小於對照品的斑點或不出現斑點。
5.如權利要求4所述的檢測方法，包括以下步驟i)川木香的定性鑑別取所述十五味乳鵬製劑2g，研細，加丙酮20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮約 anl，作為川木香的供試品溶液；另取川木香對照藥材0. 5g，同法製成川木香對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含川木香的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含川木香的陰性樣品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗， 吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點樣於同一矽膠G薄層板上，以體積比為15 5 1的環己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯為展開劑，薄層板置展開缸中飽和20min，展開，取出，晾乾，噴以5%香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；薄層色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的斑點； )決明子的定性鑑別取所述十五味乳鵬製劑2g，研細，加甲醇20ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加2. 5mol/L硫酸溶液20ml，超聲處理5分鐘，再加三氯甲烷20ml，加熱回流30分鐘，冷卻， 移置分液漏鬥中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取2次，每次IOml，合併三氯甲烷液，加無水硫酸鈉適量脫水，濾過，濾液揮幹，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為決明子的供試品溶液；另取決明子對照藥材0. 5g，同法製成決明子對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含決明子的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含決明子的陰性樣品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗，吸取供試品溶液10 μ 1、對照藥材溶液5μ1和陰性樣品溶液10μ1，分別點樣於同一矽膠G薄層板上，以體積比15 5 1， 沸點為60°C 90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上層液為展開劑，薄層板置展開缸中飽和 20min，展開，取出，晾乾，置365nm紫外光燈下檢視；薄層色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的螢光斑點；iii)藏菖蒲的定性鑑別取所述十五味乳鵬製劑2g，加甲醇20ml，超聲20分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為藏菖蒲的供試品溶液；另取藏菖蒲對照藥材0. 5g，同法製成藏菖蒲對照藥材溶液；按處方比例及製備工藝，配置不含藏菖蒲的陰性樣品，並按所述供試品溶液的製備方法製成不含藏菖蒲的陰性樣品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010版一部附錄VI B試驗，吸取供試品溶液5 10 μ 1、對照藥材溶液5 μ 1和陰性樣品溶液5 10 μ 1，分別點樣於同一矽膠GF254 薄層板上，以體積比為10 2，沸點為60°C 90°C石油醚-乙酸乙酯為展開劑，薄層板置展開缸中飽和20min，展開，取出，晾乾，置254nm紫外光燈下檢視；薄層色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，供試品色譜顯相同顏色的暗斑點；iv)烏頭鹼含量檢查取所述十五味乳鵬製劑5g，研細，加氨試液1ml，攪勻，放置2小時，加乙醚15ml，振搖 1小時，放置M小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加無水乙醇2ml使溶解，作為烏頭鹼的供試品溶液；另取烏頭鹼對照品適量，加無水乙醇製成每Iml含Img的溶液，作為烏頭鹼對照品溶液；照薄層色譜法《中國藥典》2010年版一部附錄VI B試驗，吸取供試品溶液20 μ 1、 10 μ 1，烏頭鹼對照品溶液10 μ 1、5 μ 1、2. 5 μ 1，分別點樣於同一矽膠G薄層板上，以體積比為5 2 1的環己烷-乙酸乙酯-二乙胺為展開劑，薄層板置展開缸中飽和20min，展開， 取出，晾乾，噴以稀碘化鉍鉀試液；薄層色譜中，供試品色譜在與對照品色譜相應的位置上出現的斑點應小於對照品的斑點或不出現斑點。
6.如權利要求1至5中任一項所述的檢測方法，其特徵在於，所述十五味乳鵬製劑的劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑或散劑。
7.如權利要求1至6任一項所述的檢測方法，其特徵在於，取所述重量份的原料藥，粉碎成細粉，過篩，混勻，加適量水制丸，陰乾即得；或取所述重量份的原料藥，粉碎成細粉，過篩，混勻，混勻，按藥劑學常規方法，加入常規輔料，製成臨床上接受的口服製劑。
全文摘要
本發明涉及十五味乳鵬製劑的檢測方法，包括下述檢測方法的一種或幾種通過薄層層析檢測製劑中川木香、決明子、藏菖蒲，以及檢測製劑中烏頭鹼含量。
文檔編號G01N30/90GK102520113SQ20111042729
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月16日 優先權日2011年12月16日
發明者張國霞, 李波, 陳麗娟 申請人:西藏奇正藏藥股份有限公司