一種含有靈芝多糖製劑的檢測方法
2023-04-25 03:29:26 1
一種含有靈芝多糖製劑的檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種含有靈芝多糖製劑的檢測方法，其特徵是通過對製劑的粗多糖進行醇沉提取，再用鹼性硫酸銅純化後以苯酚硫酸顯色，照紫外-可見分光光度法的比色法測定製劑的靈芝多糖。本發明的優點是：採用特定的試劑，對製劑中的靈芝多糖進行選擇性的沉澱，從而將其與糊精中所含多糖進行分離，排除輔料幹擾，達到對靈芝多糖的含量進行準確檢測的目的。該方法簡單、準確、試劑易得，並且檢測成本低，可用於含有靈芝多糖製劑的檢測。
【專利說明】一種含有靈芝多糖製劑的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於中藥製劑領域，涉及一種含有靈芝多糖製劑的檢測方法。
【背景技術】
[0002]靈芝為多孔菌科赤芝Ganoderma lucidum ( Leyss.ex Fr.) Karst.或紫芝 G.sinense Zhao, Xu et Zhang的乾燥子實體,具有補氣安神、止咳平喘的功效。靈芝多糖是藥用真菌靈芝中的主要藥效成分之一，現代藥理研究表明，靈芝多糖具有顯著的提高免疫力和抗腫瘤、清除自由基、抗衰老等活性。目前已分離得到的靈芝多糖有200多種，其中大部分為葡聚糖，少數為α -葡聚糖，多糖鏈由三股單糖鏈構成，是一種螺旋狀立體構形物。靈芝多糖大多為雜多糖，即除含有葡萄糖外，大多還含有少量阿拉伯糖、木糖、巖藻糖、鼠李糖、半乳糖等其他單糖。含有靈芝多糖的藥物製劑在製備工藝中，加入了糊精等藥用輔料，而糊精的主要成分為由葡萄糖組成的多糖，與靈芝多糖的組成單元相似。目前常使用的硫酸苯酚法或者硫酸蒽醌法檢測含靈芝多糖製劑中靈芝多糖的含量，由於受輔料糊精的幹擾，這些方法都會在檢測靈芝多糖的同時，將糊精中所含多糖一併檢測出，從而導致含量檢測數據比實際高，檢測結果不準確。目前，國內總多糖含量測定主要採取紫外分光光度法進行，經典的顯色體系有苯酹-硫酸法(λ max=490nm)和蒽酮-硫酸法(Xmax= 630nm),均選擇無水葡萄糖為對照品。也有採用滴定法測定總多糖含量的，常用有斐林氏滴定法和間接碘量滴定法。在國外對多糖的質量控制多採用高效凝膠色譜法測定多糖分子量及其分布，這也是對多糖產品質控手段之一，其對純度較高的多糖產品質量控制較好，能有效的評價該產品的真偽，但對於主要含多糖類成分的靈芝多糖製劑的質量控制方法較少，由於它們所含的有效多糖是一大類，很難對其多糖含量、分子量分布範圍來評價藥材及其製劑質量的真偽和優劣，該評價方式不能反映它們整體的內在質量變化，存在一定的不合理性和不科學性，且專屬性也較差。
[0003]因此，如何採用低成本的顯色法檢測靈芝多糖，而排除糊精等含有葡萄糖結構單元的物質的幹擾，建立準確、穩定的含靈芝多糖製劑的檢測方法顯得尤為重要。
【發明內容】
[0004]本發明提供了一種含有靈芝多糖製劑靈芝多糖含量的準確測定方法，本發明的檢測方法能夠排除糊精等含有葡萄糖結構單元物質產生的幹擾，檢測出的靈芝多糖含量準確、穩定，並且容易操作，檢測成本低。
[0005]本發明的方法是對顯色法的一種改進，其原理是首先對藥物製劑中的粗多糖進行醇沉提取，把糊精等低分子量的含有葡萄糖結構單元物質與高分子量的靈芝多糖分離，再用鹼性硫酸銅純化後以苯酚硫酸顯色，照紫外-可見分光光度法中的比色法測定製劑中的靈芝多糖。
[0006]含有靈芝多糖製劑的檢測方法，包括如下步驟:
(I)稱取樣品2.5±0.5g，置於錐形瓶中，加水100ml，加熱回流提取35分鐘，靜置冷卻，離心，精密吸取IOml濾液置於離心管中，緩慢加入4倍體積的無水乙醇，混勻，在5000r/min下離心25分鐘，棄去上清液，殘渣加水溶解，移至25ml量瓶中，加水定容至刻度，即得粗多糖溶液；
(2)精密吸取上述粗多糖溶液10ml，置於50ml離心管中，加入10%氫氧化鈉和銅試劑溶液混合溶液40ml，離心管置於90°C水浴40分鐘，取出放置10~15分鐘，在5000r/min轉速下離心30分鐘，棄去上清液，殘渣用10%硫酸轉移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，即樣品測試液；
所述的10%氫氧化鈉和銅試劑溶液混合溶液是將10%的氫氧化鈉20ml加入銅試劑溶液20ml中，混勻；
(3)準確吸取樣品測試液2.0ml，置於25ml比色管中，加入5%苯酚試液Iml，混勻，加入濃硫酸5ml，比色管置於90°C水浴中15分鐘，取出，放置15分鐘，分光光度計490nm處以空白試劑為參比，Icm比色皿測定其吸光度為A，以標準曲線計算靈芝多糖含量；
計算公式為:
【權利要求】
1.一種含有靈芝多糖製劑的檢測方法，其特徵在於，靈芝多糖的檢測方法包括如下步驟: (1)稱取樣品2.5±0.5g，置於錐形瓶中，加水100ml，加熱回流提取35分鐘，靜置冷卻，離心，精密吸取IOml濾液置於離心管中，緩慢加入4倍體積的無水乙醇，混勻，在5000r/min下離心25分鐘，棄去上清液，殘渣加水溶解，移至25ml量瓶中，加水定容至刻度，即得粗多糖溶液； (2)精密吸取上述粗多糖溶液10ml，置於50ml離心管中，加入10%的氫氧化鈉和銅試劑溶液混合溶液40ml，離心管置於90°C水浴40分鐘，取出放置10?15分鐘，在5000r/min轉速下離心30分鐘，棄去上清液，殘渣用10%硫酸轉移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，即樣品測試液； 所述的10%氫氧化鈉和銅試劑溶液混合溶液是將10%的氫氧化鈉20ml加入銅試劑溶液20ml中，混勻； (3)準確吸取樣品測試液2.0ml，置於25ml比色管中，加入5%苯酚試液Iml，混勻，加入濃硫酸5ml，比色管置於90°C水浴中15分鐘，取出，放置15分鐘，分光光度計490nm處以空白試劑為參比，Icm比色皿測定其吸光度為A，以標準曲線計算靈芝多糖含量。
2.如權利要求1所述的含有靈芝多糖製劑的檢測方法，其特徵在於，所述的銅試劑溶液的配製方法為:稱取1.5g五水合硫酸銅，IOg枸櫞酸鈉，加水溶解至330ml，混勻，製得銅試劑儲備液；取銅試劑儲備液100ml，加入固體無水硫酸鈉12g使其溶解，混勻，即得銅試劑溶液。
3.如權利要求1所述的含有靈芝多糖製劑的檢測方法，其特徵在於，所述的標準曲線繪製方法是:精確吸取0、0.2,0.4,0.8、1.0、1.5ml葡聚糖標準品溶液，重量含量為0.25mg/ml,分別置於25ml比色管中，精確補充水至2.0ml, 5%苯酹溶液Iml,混勻，加入濃硫酸5ml，混勻，比色管置於90°C水浴中15分鐘，取出於室溫下冷卻15分鐘，用分光光度計於490nm處以空白試劑為參比，Icm比色皿測定吸光度值；以葡聚糖濃度單位C,mg/ml為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪製標準曲線C=KA+B。
4.如權利要求1所述的含有靈芝多糖製劑的檢測方法，其特徵在於，所述的空白試劑配製方法為:準確吸取2.0ml水,加入5%的苯酹溶液Iml,混勻,加入濃硫酸5ml,混勻，比色管置於90°C水浴中15分鐘，取出於室溫下冷卻15分鐘，即得。
5.如權利要求1、3、4任一項所述的含有靈芝多糖製劑的檢測方法，其特徵在於，所述的濃硫酸的重量含量為90-98%。
【文檔編號】G01N21/33GK103616339SQ201310547868
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月7日 優先權日:2013年11月7日
【發明者】林廣 , 黃志權, 王德芳, 周永強, 倪夕科 申請人:培力(南寧)藥業有限公司