一種具有抗腫瘤生理活性的尖葉唐松草阿原鹼及其提取方法
2023-04-25 04:55:26
專利名稱：一種具有抗腫瘤生理活性的尖葉唐松草阿原鹼及其提取方法
技術領域：
本發明涉及一種新穎的具有抗腫瘤生理活性的鹼及其提取方法。
唐松草屬(Thalictrum)植物民間常常用作清熱解毒、抗菌消炎等藥，Boustie J.等人在J.Nat.Prod.，61(4)，1998，馬竹卿等人在《中草藥》，11(5)，1980，發明人等在《中草藥》，19(1)，1988中報導其中的一些生物鹼成分具有明顯的抗癌、抗菌消炎、抗病毒、降壓等生理活性，其化學結構具有一定的新穎性。發明人曾從採自廣西大容山的尖葉唐松草(Thalictrumacutifolium(Hand.-Mazz.)Boivin)根分離鑑定了8種成分尖葉唐松草啶鹼、木防己寧鹼、氧化小櫱鹼、棕櫚酸甲酯、亞油酸甲酯、β-谷甾醇、正二十九烷和正三十五烷。其中尖葉唐松草啶鹼和木防己寧鹼具有阿樸菲生物鹼骨架；氧化小櫱鹼具有原小櫱鹼骨架。
本發明的目的在於提供一種新的具有抗腫瘤生理活性的尖葉唐松草阿原鹼。
本發明的另一目的在於提供一種提取具有抗腫瘤生理活性的尖葉唐松草阿原鹼的方法。
本發明新的具有抗腫瘤生理活性的尖葉唐松草阿原鹼，其結構式為 該化合物是由尖葉唐松草中提取而得到的，該提取方法依次包括以下步驟(1)取尖葉唐松草根切碎後，用甲醇或乙醇回流提取，提取液減壓濃縮得甲醇或乙醇浸膏；(2)浸膏用稀鹽酸溶液萃取，得到的稀酸萃取液再用氯仿萃取；(3)氯仿層濃縮後再經氧化鋁柱層析、甲醇-氯仿洗脫，得到一無定型粉末；(4)將該無定型粉末加入稀鹼溶液中，過濾，洗滌，乾燥即得所需的產物。其中，甲醇或乙醇濃度為75％～95％，稀鹽酸溶液的濃度為5％～15％，加入的稀鹼溶液使溶液的PH值為9～12時止，其中的鹼為氫氧化鈉、碳酸氫鈉或碳酸鈉。
本發明的化合物為淺黃色無定型粉末，將其製成鹽酸鹽後再經甲醇-乙醚重結晶得到一淺黃色片狀結晶。
發明人發現本發明的化合物具有抑制人腫瘤細胞生長，誘導人腫瘤細胞凋亡的生理活性。
圖1為本發明化合物的裂解途徑；圖2本發明化合物遠程碳氫偶合(HMBC)示意圖。
下面的實施例可以使本專業技術人員更全面地理解本發明，但不以任何方式限制本發明。
實施例1尖葉唐松草阿原鹼的提取(1)取尖葉唐松草根切碎後，用95％乙醇回流提取，提取液減壓濃縮得乙醇浸膏；(2)乙醇浸膏用5％稀鹽酸溶液萃取，得到的稀酸萃取液再用氯仿萃取；(3)氯仿層濃縮後再經氧化鋁柱層析、甲醇-氯仿洗脫，得到一無定型粉末；(4)將該無定型粉末加入稀氫氧化鈉溶液中，使溶液的PH值為10，過濾，洗滌，乾燥即得所需的產物。
實施例2尖葉唐松草阿原鹼的提取(1)取尖葉唐松草根切碎後，用85％甲醇回流提取，提取液減壓濃縮得甲醇浸膏；(2)甲醇浸膏用10％稀鹽酸溶液萃取，得到的稀酸萃取液再用氯仿萃取；(3)氯仿層濃縮後再經氧化鋁柱層析、甲醇-氯仿洗脫，得到一無定型粉末；(4)將該無定型粉末加入稀碳酸氫鈉溶液中，使溶液的PH值為11，過濾，洗滌，乾燥即得所需的產物。
實施例3尖葉唐松草阿原鹼的提取(1)取尖葉唐松草根切碎後，用75％乙醇回流提取，提取液減壓濃縮得乙醇浸膏；(2)乙醇浸膏用15％稀鹽酸溶液萃取，得到的稀酸萃取液再用氯仿萃取；(3)氯仿層濃縮後再經氧化鋁柱層析、甲醇-氯仿洗脫，得到一無定型粉末；(4)將該無定型粉末加入稀碳酸鈉溶液中，使溶液的PH值為12，過濾，洗滌，乾燥即得所需的產物。
實施例1、2和3中得到的產物為淺黃色無定型粉末，其鹽酸鹽的熔點m.p.183.5-184℃。(甲醇-乙醚重結晶)，[α]24D-14.2°(CH3OH，C=3.14)。
本發明化合物鹽酸鹽的紅外光譜(IR)和質譜(MS)數據見表1；質子間交叉弛豫的二維核磁共振相關譜(NOESY)數據見表2；1H-核磁共振譜(1H-NMR)、13C-核磁共振譜(13C-NMR)和遠程碳氫偶合(HMBC)數據見表3。
表1本發明化合物鹽酸鹽IR and MS數據
表2本發明化合物鹽酸鹽NOESY數據
本發明化合物由高分辨質譜測得M+=724.33211，結合13C-核磁共振的無畸變激化轉移增益實驗(13C-NMR(DEPT))確定化合物的分子式為C42H48N2O9，不飽和度為20。IR顯示有＞NH+(2750～2200(br)cm-1)，＞NCH3(2800，1370cm-1)和醚鍵(1340，1260，1024(強)cm-1)吸收。13C-NMR有24個芳香碳信號(見表3)，確定分子中有4個苯環存在。IR顯示芳核-OCH3(2850cm-1)吸收，並在13C-NMR有8個連氧芳季碳，結合1H-NMR中8個連氧的甲基共振信號和13C-1HCOSY可分別確定8個芳核-OCH3的存在。此外，由13C-1H二維核磁共振相關譜(13C-1H COSY)還發現一個連於電負性原子上的-CH3(δC 41.8，δH3.16(3H，br，s))，由碳化學位移可確定此甲基連於氮原子上。
分析本發明化合物的分子式，它是一個雙生物鹼。發明人曾從同一生物體中分離到具有阿樸菲骨架的尖葉唐松草啶鹼和具有原小櫱鹼骨架的氧化小櫱鹼和木防己寧鹼。從生源來看，本發明化合物是這兩類生物鹼的醚鏈雙鹼。從1H-1H二維核磁共振相關譜(1H-1H COSY)可以看到本發明化合物有下列幾個片段。
-CH2--CH2- -CH2--CH2- -CH--CH2--CH--CH2--CH==CH- -CH2-3.43 3.05 3.58 3.13 4.16 2.80 4.79 3.00 7.38 7.19 4.473.80 3.13 3.87 3.303.46 4.06 4.69本發明化合物的MS裂解碎片進一步確定分子內同時存在阿樸菲和原小櫱鹼骨架，其裂解途徑如圖1所示。
本發明化合物有9個氧原子，卻有10個與氧相連的芳香季碳原子。除8個為-OCH3外，第9個氧原子以醚的形式同時與兩個芳香季碳相連形成雙生物鹼。至於分子中的8個-OCH3、5個芳香族質子和氧橋的位置，可通過1H-NMR結合NOESY和HMBC確定下來。阿樸菲部分從生源來看，所有的天然生物鹼均在C1、C2上有取代結合圖1的骨架推斷C1、C2上應各有一個-OCH3取代基，而C3上應有一個芳氫。並且這表3本發明化合物鹽酸鹽NMR數據
些判斷也與HMBC的信息相符合(見圖2)。由於1H-NMR在δ8.0左右無吸收信號，表明C11上無芳氫，因此C11應為-OCH3或氧橋取代。這樣，分子中的兩個鄰位氫應處於C8、C9或C9、C10上。HMBC表明C11為-OCH3取代，C8為氧橋取代，兩個鄰位氫則處於C9、C10上，見圖2所示。原小櫱鹼部分以上己確定了3個芳氫的位置，根據1H-NMR和NOESY，剩下的兩個芳氫應為各有一個鄰位-OCH3取代基的獨處芳氫。結合圖1的骨架推斷，這兩個芳氫應處於C1』和C4』上，C2』和C3』上分別為-OCH3取代。並且這些判斷也與HMBC的信息相符合(見圖2)。另外氧橋只有處於C9』才符合全部的核磁共振數據。由此確定本發明化合物的結構為圖1所示。這種由阿樸菲和原小櫱鹼的氧橋相連的新型雙生物鹼，尚屬首次報導。根據1H-1H COSY、13C-1H COSY和HMBC可確定其碳氫歸屬(見表3)。實施例4本發明化合物的抗腫瘤作用高倍光學和螢光顯微鏡形態學觀察本發明化合物對體外培養的人腫瘤細胞系的作用，發現12小時後，腫瘤細胞生長受到抑制，並有凋亡現象出現；48小時後，腫瘤細胞全部死亡，出現許多細胞凋亡小體。運用酶聯免疫檢測其對腫瘤細胞半數生長抑制濃度(IC50)的結果為胃癌細胞(Mgc)65μg/ml，肝癌細胞(Lcc)60μg/ml，宮頸癌細胞(Hela)37μg/ml，肺癌(Nsclc)82μg/ml；運用流式細胞術檢測其誘導肺癌細胞凋亡率大於60％。
權利要求
1.一種具有抗腫瘤生理活性的尖葉唐松草阿原鹼，其結構式為
2.一種提取權利要求1所述的尖葉唐松草阿原鹼的方法，依次由以下步驟組成(1)取尖葉唐松草根切碎後，用甲醇或乙醇回流提取，提取液減壓濃縮得甲醇或乙醇浸膏；(2)浸膏用稀鹽酸溶液萃取，得到的稀酸萃取液再用氯仿萃取；(3)氯仿層濃縮後再經氧化鋁柱層析、甲醇-氯仿洗脫，得到一無定型粉末；(4)將該無定型粉末加入稀鹼溶液中，過濾，洗滌，乾燥即得所需的產物。
3.按照權利要求2所述的提取方法，其特徵在於其中的甲醇或乙醇濃度為75％～95％。
4.按照權利要求2所述的提取方法，其特徵在於其中的稀鹽酸溶液的濃度為5％～15％。
5.按照權利要求2所述的提取方法，其特徵在於加入稀鹼溶液使溶液的PH值為9～12時止。
6.按照權利要求2所述的提取方法，其特徵在於其中的鹼為氫氧化鈉、碳酸氫鈉或碳酸鈉。
全文摘要
本發明公開了一種新穎的結構式為(Ⅰ)的具有抗腫瘤生理活性的尖葉唐松草阿原鹼,本發明還公開了該化合物的提取方法。本發明的化合物具有抑制人腫瘤細胞生長,誘導人腫瘤細胞凋亡的生理活性。
文檔編號C07D455/00GK1285354SQ9911703
公開日2001年2月28日 申請日期1999年8月19日 優先權日1999年8月19日
發明者林翠悟, 彭文烈, 陳琪, 蘇鏡娛, 徐安龍 申請人:廣州市海科生物技術有限公司, 徐安龍