酶性止血劑拮抗水蛭素出血作用的用途的製作方法
2023-05-23 03:01:36 2
專利名稱：酶性止血劑拮抗水蛭素出血作用的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種抗出血的凝血藥物，尤其是能拮抗水蛭素類引起的副作用，即出血傾向。
背景技術：
血管栓塞性疾病是常見病，也是重要的致殘、致死性疾病。凝血酶在血栓形成中起重要的核心作用。因此，凝血酶抑制劑成為近些年來抗凝藥研究的主要內容，並取得了迅速的進展。肝素是依賴抗凝血酶III(ATIII)的凝血酶抑制劑，在臨床沿用已50多年，為常用抗凝藥，其出血副作用可用魚精蛋白中和。但肝素在應用中存在一定的局限性，例如應用肝素可導致血小板減少，導致過敏反應。其後發展的水蛭素類為不依賴ATIII的凝血酶直接抑制劑，可以通過與凝血酶及纖維蛋白複合物的結合，而起到特異的抗凝作用，其已成為有作用特點的新一代抗凝血藥，但在某些情況下存在出血的副作用，並且至今為止還未發現拮抗水蛭素類的解救藥物，因此很影響它的推廣應用。雖然凝血酶可以中和水蛭素，但注射後又可引發血管內瀰漫性凝血(DIC)，故無實際應用價值。為此提供人體切實可用的對抗水蛭素類引起的出血副作用的藥物極為重要。
發明內容
本發明的發明人經研究發現，從巴西腹蛇蛇毒中提取出的酶性止血製劑能夠拮抗水蛭素類藥物的副作用，即出血傾向，因此降低水蛭素類抗凝藥的出血傾向。
本發明所稱的酶性止血製劑含有兩種酶一種具有凝血酶樣作用，稱為「類凝血酶」。類凝血酶在出血部位的作用與人體凝血酶相似，能促進出血部位的血小板聚集，形成白色栓子，產生止血效應，從而對抗水蛭素的出血副反應。類凝血酶在血管內只產生纖維蛋白A單體，同時只促進出血部位血小板聚集，而對正常血管系統內無血小板聚集作用，不會引起DIC，故可以在人體中注射應用。
另一種具有凝血激酶樣作用，稱為「類凝血激酶」。該酶性止血劑包括Reptilase、Batroxobin及其類似物，主要組成成分是蝮蛇血凝酶，是從巴西蝮蛇蛇毒中分離、純化而成。
出血部位的血小板聚集，釋放血小板第3因子並積聚，從而激發了此酶性止血劑中的「類凝血激酶」和凝血激酶的活性，使出血部位的凝血酶形成，從而中和水蛭素，降低水蛭素引起的出血傾向。
以巴曲停為例
該酶性止血劑在拮抗水蛭素出血方面的作用。
圖1為犬滴注水蛭素不同時間，活化部分凝血活酶時間(APTT)的變化百分數。
圖2為犬滴注水蛭素不同時間，凝血酶時間(TT)的變化百分數。(注各點的值均為平均百分數，各時間點的百分數是與30min的凝血指標值相比較。)本發明的有益效果是，拮抗水蛭素類藥物引起的不良反應，防治水蛭素用藥引起的出血傾向，擴大水蛭素類藥物臨床應用範圍。
下面將以巴曲停為例詳細說明本發明一、體外實驗證實巴曲停拮抗水蛭素作用1.材料與方法1.1材料纖維蛋白原，批號(SigmaF-8630)，凝血酶，批號(SigmaT-4648)，水蛭素，批號(021129)，軍事醫學科學院放射醫學研究所研製；巴曲停，批號(010541)，山東北大高科華泰製藥有限公司生產。
1.2方法取一系列試管，每一試管加入不同滴度的水蛭素10μl(15mg/ml)，再加入凝血酶20μl(8u/ml)，纖維蛋白原50μl(5mg/ml)，以及不同量的巴曲停(1u/ml)。10min後觀察凝集情況。
2.結果巴曲停對不同滴度的水蛭素的拮抗作用1∶321∶641∶1281∶2561∶5121∶10241∶20481∶40960--- - - - + +巴曲停 1--+ + + +(μl)3 + + + +9 + + + +9 - - - ±凝血酶 30 - - + +(μl)90 + + + +(注「-」為不發生凝集反應，「+」為發生凝集反應，「±」為可疑)由上表可見，在加入水蛭素的實驗管內加入巴曲停後又可發生凝集反應，從而表明了巴曲停有拮抗水蛭素的作用。
二、在體外實驗基礎上我們又進行了體內實驗。
1.材料方法1.1材料
1.1.1藥品與動物巴曲停，批號(Sigma F-8630)，水蛭素，批號(021129)，軍事醫學科學院放射醫學研究所研製。
成年健康雜種犬，體重12～15kg，雌雄兼備，由軍事醫學科學院動物中心提供。
1.1.2儀器與試劑凝血儀，北京世帝公司生產；凝血酶時間(TT)，批號(TT25003)，活化部分凝血活酶時間(APTT)，批號(BT009)，試劑盒由上海太陽生物技術公司提供。
1.2方法上述健康成年雜種犬，隨機分為兩組對照組，單給水蛭素；實驗組，給予水蛭素和巴曲停，每組三隻。犬靜脈注射10％異戊巴比妥鈉麻醉(100mg/kg)，股靜脈插管以備採血。水蛭素按1.5mg/kg給藥量，2/3藥量靜脈推注，1/3藥量靜脈滴注1h。實驗組於水蛭素滴注30min後靜脈推注巴曲停(0.05u/kg)。於水蛭素滴注前、滴注後30min、1h、2h、3h、4h、5h測定凝血功能以及測定出血時間。
2.結果2.1犬注射巴曲停後凝血功能改變(見說明書附圖)由上述兩圖可見，犬給予巴曲停後TT、APTT降低程度明顯高於單給水蛭素組，從而表明巴曲停有拮抗水蛭素的作用。
2.2犬給予巴曲停後出血時間改變0min 30min 1h 2h 3h 4h 5h對照組 101±9193±34285±29 252±43224±41222±35208±40實驗組 96±16169±22186±25*140±37*149±22*156±42221±218(注*為P＜0.05)由上表可見，犬給予巴曲停後出血時間明顯降低，出血時間在滴注水蛭素後1h、2h、3h明顯短於對照組(P＜0.05)，說明巴曲停有拮抗水蛭素出血傾向的作用。
權利要求
1.酶性止血劑在製備抗水蛭素出血的藥物中的應用。
2.權利要求1中的酶性止血劑，是從巴西蝮蛇蛇毒中提取出的，包括Reptilase、Batroxobin及其類似物。
3.權利要求1中的水蛭素類藥物包括水蛭素、水蛭素的緩釋製劑、水蛭素長效製劑、水蛭素的融合蛋白等。
全文摘要
本發明涉及一種酶性止血劑的用途，具體而言是該酶性止血劑能夠拮抗水蛭素類藥物引起的出血傾向，從而擴大了水蛭素類抗凝藥的臨床應用前景。
文檔編號A61K38/58GK1548153SQ0312510
公開日2004年11月24日 申請日期2003年5月9日 優先權日2003年5月9日
發明者劉玉英, 袁麗珍, 唐仲雄, 吳祖澤 申請人:天津天士力製藥股份有限公司