農藥侵害菸葉的還原糖含量的測定方法與流程
2023-05-22 10:45:06
本發明涉及化學分析檢測領域，特別是指農藥侵害菸葉的還原糖含量的測定方法。
背景技術：
二氯喹啉酸是防除稻田稗草的特效選擇性除草劑，屬激素型喹啉羧酸類除草劑，雜草中毒症狀與生長素類作用相似，主要用於防治稗草且適用期很長，1-7葉期均有效。水稻安全性好。
有關研究表明二氯喹啉酸作為激素類除草劑，能夠刺激乙烯在植物體內積累。二氯喹啉酸的靶標位點位於細胞壁的生物合成中，在禾本科植物中起到細胞壁合成抑制劑的作用，不同禾本科植物作用位點對二氯喹啉酸的敏感性。乙烯可抑制細胞壁合成酶的活性從而減少細胞壁的合成，乙烯含量的提高引起了ABA的積累，ABA在調節植物生長、葉片衰老、氣孔開放起重要的作用。
二氯喹啉酸在土壤中有積累作用，對菸草生產會產生明顯的藥害。我國部分煙田曾因氯喹啉酸出現大面積菸草畸形生長現象，症狀為新葉先出現不正常生長,葉緣下卷，葉片向背皺縮,致使葉片狹長，嚴重者呈線狀，嚴重影響菸草的產量和質量。
由於菸草這一作物的特殊性，對於其受到氯喹啉酸的影響將直接影響菸農的收成，以及菸葉的質量，因此，對於氯喹啉酸對菸草的影響，需要進行多方面的，準確的，可靠的分析，目前，對於農藥侵害植物的分析雖然有報導以及一般性的分析方法，但針對氯喹啉酸對菸草侵害的研究分析還相對較少，尤其是對菸葉的還原糖侵害的變化影響，造成在氯喹啉酸對菸草的侵害的程度，影響等少有深入的了解，並的分析的結果上還存在較大的準確度差異。
技術實現要素：
本發明提出一種農藥侵害菸葉的還原糖含量的測定方法，解決了現有技術中菸葉受到氯喹啉酸侵害後還原糖影響與變化測定準確度不夠的問題。
本發明的技術方案是這樣實現的：受農藥侵害菸葉的還原糖含量的測定方法，包括以下步驟：
(1)配製試劑，包括配製1mg/mL葡萄糖標準液和3.5－二硝基水楊酸試劑；
(2)製作還原糖標準曲線的；
(3)提取還原糖：剪取菸葉，共三份，加水研磨，定容10mL蒸餾水，50℃溫水浴20min，使還原糖浸出，離心過濾，作為還原糖測定液；
(4)還原糖的測定：
取3支25mL刻度試管，編號，分別加入還原糖待測液1mL，3.5－二硝基水楊酸試劑1.5mL，測定各管的消光值；分別在標準曲線上查出相應還原糖毫克數，按下試計算還原糖百分含量：
式中C——標準曲線方程求得的還原糖量；
V——提取液體積；
a——顯色時吸取樣品液體積；
W——樣品重；
(5)在菸草5～6片真葉期移入二氯喹啉酸添加濃度為1.04×10-3mg/kg、2.08×10-3mg/kg、4.17×10-3mg/kg、8.33×10-3mg/kg、1.67×10-2mg/kg藥土中，分別在7d、14d、21d、28d、35d採用步驟(1)～(4)測量菸葉的還原糖總量。
進一步，步驟(1)中，試劑的配製採用以下配比和參數：
1mg/mL葡萄糖標準液：準確稱取100mg分析純葡萄糖，置於小燒杯中，用少量蒸餾水溶解後，定量轉移到100mL的容量瓶中，以蒸餾水定容至刻度，搖勻，置冰箱中保存備用；
3.5－二硝基水楊酸試劑：3.5－二硝基水楊酸0.63g，2mol/L的NaOH溶液26.2mL，加到50mL含有18.5g酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加0.5g苯酚和0.5g亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻後加蒸餾水定容至100mL，現配現用。
進一步，步驟(3)中，剪取第四片展開鮮菸葉0.3g。
本發明的所述農藥侵害菸葉的還原糖含量的測量方法，針對菸草的特性，結合對氯喹啉酸的侵害機理研究，對農藥侵害過程中還原糖含量的變化，試劑的選配，操作環境、參數等進行了較為嚴格的調整與控制，使得到的氯喹啉酸侵害菸葉的還原糖的含量的測量更加準確，可靠，為合理使用氯喹啉酸以及消除影響，提供科學的依據。
附圖說明
圖1為還原糖標準曲線；
圖2為二氯喹啉酸對菸草葉片還原糖含量的動態分析。
具體實施方式
下面將結合本發明的實施例，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。
實施例
菸草種子採用品種為K326。溫室播種，育苗，於五至六片真葉期移栽，進行農藥侵害菸葉的還原糖含量的測定
①、試劑配製
1mg/mL葡萄糖標準液：準確稱取100mg分析純葡萄糖(預先在80℃烘至恆重)，置於小燒杯中，用少量蒸餾水溶解後，定量轉移到100mL的容量瓶中，以蒸餾水定容至刻度，搖勻，置冰箱中保存備用。
3.5－二硝基水楊酸試劑：3.5－二硝基水楊酸0.63g，2mol/L的NaOH溶液26.2mL，加到50mL含有18.5g酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加0.5g苯酚和0.5g亞硫酸鈉，攪拌溶解。冷卻後加蒸餾水定容至100mL，現配現用。
②、標準曲線的製作
取7支具有25mL刻度的血糖管或刻度試管，編號，按表3-3所示的量，精確加入濃度為1mg/mL的葡萄糖標準液和3.5－二硝基水楊酸試劑。
表5-3還原糖標準曲線
將各管搖勻，在沸水中加熱5min，取出後立即放入有冷水的燒杯中冷卻至室溫，再以蒸餾水定容至25mL刻度處，用橡皮塞塞住管口，顛倒混勻(如用大試管，則向每管加入21.5mL蒸餾水，混勻)。在540nm波長下，用0號管調零，分別讀取1～6號管的消光值。以消光值為縱坐標，繪製標準曲線，求得直線方程，以葡萄糖含量為橫坐標，以540nm處的吸光密度值為縱坐標，得到葡萄糖的標準曲線如圖1所示。
③、還原糖的提取
剪取第四片展開鮮菸葉0.3g，共三份，加少量的水研磨，定容10mL蒸餾水，50℃溫水浴20min，使還原糖浸出，離心過濾，作為還原糖測定液。
④、還原糖的測定
取3支25mL刻度試管，編號，分別加入還原糖待測液1mL，3.5－二硝基水楊酸試劑1.5mL，其餘操作均與製作標準曲線相同，測定各管的消光值。分別在標準曲線上查出相應還原糖毫克數，按下試計算還原糖百分含量：
式中C——標準曲線方程求得的還原糖量(mg)；
V——提取液體積(mL)；
a——顯色時吸取樣品液體積(mL)；
W——樣品重(g)。
(5)在菸草5～6片真葉期移入二氯喹啉酸添加濃度為1.04×10-3mg/kg、2.08×10-3mg/kg、4.17×10-3mg/kg、8.33×10-3mg/kg、1.67×10-2mg/kg藥土中，分別在7d、14d、21d、28d、35d採用步驟(1)～(4)測量菸葉的還原糖含量。
根據上述方法測定氯喹啉酸對菸草葉片還原糖含量的影響，測定結果如圖2所示，可以看出，經二氯喹啉酸處理，煙株葉片內還原糖含量從7d到28d均高於對照。移植後7d，二氯喹啉酸濃度為1.04×10-3mg/kg、2.08×10-3mg/kg、4.17×10-3mg/kg、8.33×10-3mg/kg、1.67×10-2mg/kg處理菸草葉片中還原糖含量分別為5.06％、5.06％、5.97％、6.85％、7.99％，處理較對照提高87.72％、87.60％、121.33％、154.11％、196.31％。移植後35d，二氯喹啉酸濃度為4.17×10-3mg/kg、8.33×10-3mg/kg、1.67×10-2mg/kg，菸草葉片中還原糖含量較移植後28d測定降低。可能是菸草已經產生明顯的畸形，使單位鮮重還原糖含量降低。
以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，並不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。