藥用化合物的製作方法

2023-05-22 21:01:16

專利名稱：藥用化合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及N-[2-氨基-4-取代的-[[(吡咯或吡啶)並[2，3-d]嘧啶基]-烷基]苯甲醯基]-L-穀氨酸化合物、它們的某些還原形式、合成它們的中間體、含有這些化合物的藥物製劑，及其作為抗腫瘤藥的應用。
葉酸是一些酶促反應如核酸的生物合成、胺基酸和肽類代謝等中的輔酶。葉酸的衍生物葉酸輔助因子在核酸合成的兩條途徑-嘌呤合成和胸腺嘧啶核苷合成-中是必不可少的。葉酸在具有生物學活性前，一般經過兩步還原才轉變成有活力的輔酶形式。氨甲蝶呤等化合物能通過與所需的二氫葉酸還原酶的牢固的偶合而抑制二氫葉酸轉變成四氫葉酸的第二步還原。這些抑制劑正不斷地發展成抗腫瘤藥物，因為它們幹擾脫氧核糖核酸的合成，並阻止具有生物學活性的四氫葉酸鹽的再生而使細胞死亡。
葉酸和氨基蝶呤的各種衍生物已被合成並試作葉酸代謝抑制劑。包括一些用亞甲基或次甲基分別取代原來的亞氨基或次氨基的各種去氮化合物。這些衍生物有不同程度的代謝抑制劑的活性。一種四氫氨基蝶呤抗腫瘤劑5，10-二脫氮-5，6，7，8-四氫氨基蝶呤(DDATHF)抑制甘氨醯胺核糖核苷酸轉甲醯基酶，這是嘌呤生物合成開始階段所需的酶(參見J.Med.Chem.，28，914(1985))。
目前，抗腫瘤劑對哺乳動物的各種腫瘤還不是廣泛有效的治療藥。它們引起的發病率和死亡率是尋找新的抗腫瘤劑的重要動力。本發明滿足這種需要，並提供新的抗腫瘤劑，詳述如下。
本發明的一個方面涉及式Ⅰ的化合物及其藥學上可接受的鹽
式中R1是氫、氯、巰基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷氨基、或二(C1-C4)烷基氨基;
R2是C2-C3烷基。
本發明的另一方面是具式Ⅱ的化合物及其藥學上可接受的鹽
式中R1和R2的定義同上述式Ⅰ。
本發明的另一方面是具式Ⅲ的化合物及其藥學上可接受的鹽
式中R1是氫、氯、巰基、C1-C4烷硫基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷氨基、或二(C1-C4)烷基氨基;
R2是C2-C3烷基。
本發明還有一個方面是具式Ⅳ的化合物及其藥學上可接受的鹽
式中R1和R2的定義同上述式Ⅲ。
本發明還涉及用於製備式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ化合物的中間體，涉及利用這些化合物防治腫瘤生長的組合物和方法。
本發明涉及式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ化合物及用於合成它們的中間體。這些中間體是具有下列結構式的化合物及其藥學上可接受的鹽
式中Y1是氫或一個氨基保護基團;
Z是氫、溴或碘;
和具有下式結構式的化合物及其藥學上可接受的鹽
式中W是化學鍵或-CH2-;
Y1是氨基保護基團;
Y2是相同或不同相的羧基保護基團。
在式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ中L-穀氨酸殘基的構型已明確畫出。本文中所有化合物的穀氨酸殘基都是L型的。
本文中的術語「C2-C3烷基」意指具有所標明碳原子數的直鏈的二價烷基，如1，2-亞乙基及1，3-亞丙基。
「烷硫基」意指具有1至4個碳原子的直鏈、或支鏈烷基，並聯於硫上，成為甲硫基、乙硫基、丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、異丁硫基、仲丁硫基或叔丁硫基。
「烷氧基」意指具有1至4個碳原子的直鏈或支鏈烷基並與氧相連，形成甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧或叔丁氧基。
「烷氨基」意指有1至4個碳原子的烷基並聯於氨基上，成為甲氨基、乙氨基、丙氨基、異丙氨基或丁氨基。
「二烷基氨基」意指-NR3R4，其中R3和R4是相同或不相同的具有1至4個碳原子的烷基，如二甲基氨基、二乙基氨基、二丙基氨基、二異丙基氨基、二丁基氨基、或甲基乙基氨基。
說明書中所用的「氨基保護基」一詞意指在化合物的其他官能團的反應中，通常用來阻斷或保護氨基的取代基團。所述氨基保護基的實例包括甲醯基、三苯甲基、鄰苯二甲醯亞氨基、三氯乙醯基、氯乙醯基、溴乙醯基、碘乙醯基、苯甲醯甲基磺醯基、2-(硝基)-苯基亞磺醯基、二苯基氧膦基及類似的氨基保護基團。所用的氨基保護基團的種類是不重要的，只要被保護的氨基在隨後的中間體的其他部位的反應條件下是穩定的，並且在合適的階段可選擇性地被除去，而不破壞分子的其餘部分，(包括其他氨基保護基團在內)即可。優選的氨基保護基團有(C1-C4烷基)羰基及三甲基乙醯基，最優選三甲基乙醯基。上述定義的保護基的另一些實例參見下列文獻J.W.Barton，"Protective Groups in Organic Chemistry"，J.G.W.McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，N.Y.，1973，Chapter 2，and T.W.Greene，"Protective Groups in Organic Synthesis"，John Wiley and sons，New York，N.Y.，1981，Chapter 7.
本文所用的「羧基保護基團」意指當化合物的其他基團進行反應時，通常用來阻斷或保護羧基的羧酸酯衍生物之一，所述羧酸保護基的實例包括4-硝基苄基、4-甲氧基苄基、3，4-二甲氧基苄基、2，4-二甲氧基苄基、2，4，6-三甲氧基苄基、2，4，6-三甲基苄基、五甲基苄基、3，4-亞甲基二氧基苄基、二苯甲基、4，4′-二甲氧基二苯甲基、2，2′，4，4′-四甲氧基二苯甲基、甲基、乙基、丙基、異丙基、叔丁基、叔戊基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、4，4′-二甲氧基三苯甲基、4，4′，4″-三甲氧基三苯甲基、2-苯基丙-2-基、三甲基甲矽烷基、叔丁基二甲基甲矽烷基、苯甲醯基甲基、2，2，2-三氯乙基、β-(三甲基甲矽烷基)乙基、β-(二(正丁基)甲基甲矽烷基)乙基、對甲基苯磺醯基乙基、4-硝基苄基磺醯基乙基、烯丙基、肉桂基、1-(三甲基甲矽烷基甲基)-丙-1-烯-3-基等。羧基保護基團的種類並不重要，只要被保護的羧基在隨後的分子其他部位反應的條件下是穩定的，並能在適當的階段將其除去而不破壞分子的其餘部分。這些基團的另一些例子參見下列文獻E.Haslam，"Protective Groups in Organic Chemistry"，J.G.W.McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，N.Y.，1973，Chapter 5，and T.W.Greene，"Protective Groups in Organic Synthesis"，John Wiley and Sons，New York，N.Y.，1981，Chapter 5.
另一相關的術語「保護的羧基」指被上述羧基保護基團之一取代的羧基。優選的保護基是乙基和丙基。
如上所述，本發明包括上述結構式所定義的化合物的藥學上可接受的鹽。本發明的具體化合物具有一個足夠酸性的官能團、一個足夠鹼性的官能團、或這兩種官能團都存在，因而能與任何一種無毒的無機鹼及無毒的無機或有機酸形成藥學上可接受的鹽。通常用於形成酸加成鹽的酸是無機酸，例如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸等;有機酸，例如對甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、對-溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、檸檬酸、苯甲酸、乙酸等。所述藥學上可接受鹽的實例有硫酸鹽、焦硫酸鹽、酸性硫酸鹽、亞硫酸鹽、酸性亞硫酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物，碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、反式丁烯二酸鹽、順式丁烯二酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥苯甲酸鹽、甲氧苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯乙酸鹽、苯丙酸鹽、苯丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、丙磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、扁桃酸鹽等。優選的藥學上可接受的酸加成鹽是那些有與礦物酸(如鹽酸、氫溴酸)和有機酸(如順丁烯二酸及甲磺酸)形成的鹽。
鹼加成鹽包括那些與無毒的無機鹼(如銨、鹼金屬或鹼土金屬的氫氧化物)形成的鹽，以及碳酸鹽、碳酸氫鹽等。用以製備本發明鹽的鹼包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、碳酸鉀。鉀鹽和鈉鹽的形式是特別優選的。
製備本發明化合物的起始原料，優選2-氨基-4-氧代吡咯並[2，3-d]嘧啶(下列式Ⅴ)或2-(叔丁氧羰基)-氨基-4-氧代-6-乙炔基-吡啶並[2，3-d]嘧啶[下列式Ⅵ];這取決於所需產物是吡咯還是吡啶衍生物。
本發明的化合物及其前體，用普通專業人員熟悉的方法來製備。本發明的吡咯化合物，若市場上買不到(如2-氨基-4-氧代-吡咯立[2，3-d]嘧啶，Sigma化學公司名為7-鳥嘌呤)，可用買得到的試劑，用有機化學的傳統方法來製備。
2-(三甲基乙醯基)氨基-4-氧代-5-乙炔基吡啶並[2，3-d]嘧啶化合物，根據Taylor等的方法(J.Org.Chem.，54，3618-3624(1989))製取，該文獻作為參考文獻併入本文。
合成本發明吡咯化合物的第一步，是在有或無惰性或基本惰性的溶劑或混合溶劑的存在下，將式Ⅴ的化合物與一種氯化劑反應，此反應用反應式1表示反應式1
任何能釋放氯離子的化合物都是合適的氯化劑，優選的氯化劑是POCL3和PCL3。
雖然這個反應在有或無溶劑存在時都能進行，不用更好。
此反應中所用氯化劑的量是用足夠量的氯取代4-氧基即可。一般每當量的吡咯並嘧啶用等當量的或過量的氯化劑，最好過量。
此步驟的溫度，能使氯化完全即可，一般從室溫至約回流溫度，最好是回流溫度。
第一步反應的時間是能產生置換反應的任何時間都行，一般約需2至6小時。可根據傳統的反應進程監測方法，如薄層色譜法、高效液相色譜法或柱色譜法來確定最佳時間。
合成本發明吡咯化合物的第二步是在2-氨基上加一保護基團，第三步是將相應的保護的氨基化合物與N-碘(或溴)琥珀醯亞胺反應，反應順序見反應式2反應式2
式中Z是碘或溴;和Y1是氨基保護基團。
引入氨基保護基團的反應，在專業人員所熟悉的那些反應的標準條件下進行。
滷取代基是碘或溴，優選碘。將氨基保護的中間體與N-碘琥珀醯亞胺或N-溴琥珀醯亞胺在弱鹼的存在下於惰性或基本惰性的溶劑或混合溶劑中(或不用溶劑)反應，製得相應的5-滷代中間體。
此反應中合適的鹼包括叔胺，例如三乙胺和吡啶，優選無水吡啶。
合適的溶劑通常是高沸點的極性溶劑如二甲基甲醯胺(DMF)、甘醇二甲醚、四氫呋喃(THF)、和吡啶，優選溶劑是無水吡啶。
本反應中N-碘琥珀醯亞胺或N-溴琥珀醯亞胺的用量，一般以使氨基保護的化合物全部反應為準。通常採用等當量或稍過量的N-碘琥珀醯亞胺或N-溴琥珀醯亞胺。
所用溫度足夠使滷化完全即可，近於室溫最好。
第三步的反應時間是發生滷化反應所需的時間，約需10分鐘至4小時。可用傳統的監測反應進程的色譜技術如薄層層析確定最合適的反應時間。
合成本發明化合物的第四步是5-滷吡咯並嘧啶與苯甲酸衍生物的偶合。這過程需將下式的不飽和化合物
與5-溴或5-碘吡咯並嘧啶中間體在合適的溶劑、鈀催化劑、最好還有仲胺或叔胺的存在下反應;式中J1和J2都是氫或它們一起形成碳-碳鍵(即一個炔基)，Q是甲矽烷基保護基團，優選三甲基甲矽烷基。類似反應見Taylor等的美國專利4，818，819號，它作為參考文獻併入本文。
所用鈀催化劑，同以前用於芳基滷與烯丙醇反應中的催化劑，已有介紹，例如參見下列文獻
Melpoler et al.，J.Org.Chem.，41，265，(1976);265;Chalk et al.，J.Orq.Chem.，41，1206，(1976);Arai et al.，J.Heterocvclic Chem.，15，351(1978);Tamuru et al.，Tetrahedron Papers，10，919(1978);Tetrehedron，35，329(1979).
在偶合反應中，苯甲酸衍生物的羧基，要用羧基保護基團加以保護。
偶合反應最好在至少1克分子當量的仲胺或叔胺(例如三乙胺或二乙胺)用作酸受體的存在下進行。
本反應中用的合適的溶劑最好是無水的惰性極性溶劑如乙腈、N，N-二甲基甲醯胺、或N-甲基吡咯烷酮。
採用中等程度的升溫，優選約75℃至約125℃，更優選約85℃到100℃。
下述變異反應使用鈀催化劑，區別在於或者先使該不飽和化合物與吡咯並嘧啶反應，然後再和苯甲酸衍生物偶合;或者先將不飽和化合物與苯甲酸衍生物反應，然後再和吡咯並嘧啶偶合。所用不飽和化合物包括乙烯、乙炔、丙烯、或丙炔。
在第一種變異方法中，將吡咯並[2，3-d]嘧啶與不飽和化合物反應，產生的中間體用標準條件脫去甲矽烷基，然後將其用作下一步偶合反應的反應物。這一系列反應解釋於下面的反應式中
式中Y2是羧基保護基團;
Z是碘或溴;
J1的J2都是氫，或一起形成碳-碳鍵;
Q是甲矽烷基保護基團;和X是碘或溴。
在第二種變異方法中，將苯甲酸衍生物與不飽和化合物反應先生成相應的不飽和穀氨酸酯中間體，在標準條件下脫去該中間體的甲矽烷基，然後再與吡咯並嘧啶偶合。這一系列反應解釋於變異方法2中
式中Q是甲矽烷基保護基團。
製備相應的N-[2-三甲基乙醯氨基-4-取代的-[吡啶並[2，3-d]嘧啶-6-基]乙炔基]苯甲醯基]-L-穀氨酸酯，至少可用基本上與變異方法1中所述的製備吡咯並[2，3-d]嘧啶相同的方法，將上述2-(叔丁氧羰基氨基-4-氧代-5-乙炔基吡啶並[2，3-d]嘧啶化合物與上述苯甲酸衍生物偶合。
R2是1，3-亞丙基的本發明化合物按下法製備先用Meyers介紹的惡唑啉(Acc.Chem.Res.，14，375(1978))，此文獻作為參考文獻併入本文)合成具有對-丙烯-1-基的上述苯甲酸衍生物。然後酸水解(5NHCl，回流36小時)得4-烯丙基苯甲酸，將其先用亞硫醯氯(4.0當量，苯中回流4小時)處理，然後與L-穀氨酸二乙酯鹽酸鹽(2.1當量)、4-二甲氨基吡啶(0.01當量)及三乙胺反應18小時，被轉變成相應的L-穀氨酸二乙酯衍生物。至少可通過變異方法2，再與吡咯並或吡啶並[2，3-d]偶合，得R2中1，3-亞丙烯基的本發明化合物。
製備本發明化合物的第五步是在適當的溶劑中，在催化劑的參與下，氫化式Ⅸ化合物，生成相應的2-保護的氨基-4-氯-[吡咯並或吡啶並[2，3-d]嘧啶基]烷基]苯甲醯基]-保護的L-穀氨酸(式Ⅹ)，見反應式6
反應式6
式中Ar是吡咯並或吡啶並;
Y1是氨基保護基團;
J1和J2都是氫或一起形成碳-碳鍵;
W是一個鍵或CH2;
Y2是羧基保護基團。
第五步所用的溶劑是在氫化條件下不起反應的任何溶劑。合適的溶劑包括醇類如甲醇、乙醇1-丙醇、及2-丙醇，最優選的是乙醇。
氫化的催化劑可用含有貴金屬並能催化碳橋還原的任何物質。合適的催化劑實例包括載於炭上的貴金屬、貴金屬氧化物和以鹼土金屬碳酸鹽為載體的貴金屬。本文中「貴金屬」指金、銀、鉑、鈀、銥、銠、汞、釕、和鋨。優選的催化劑是鈀-炭、鉑-炭和氧化鉑，最優選鈀-炭。
本步驟用的溫度和壓力應足以使氫化反應完全。優選約30℃到約150℃，最優選為約30℃到約75℃。所用壓力為約1000psi至約1psi，優選約400psi到約2psi。
本發明包括4-位有不同原子或基團的化合物，選自氫、巰基、烷硫基、烷氧基、烷氨基、及二烷基氨基。氯的置換，除氫外，均可在第一步(反應式1)後、第三步(反應式2)後、或第四步(變異方法1及2的偶合反應)後進行，但必須在保護基團(Y1和Y2)去除以前。以氫置換氯可在第四步後或在保護基團去除之後(下述第六步)進行。
上述各步的最佳反應時間可用監測反應進程的傳統色譜技術(如薄層色譜、高效液相色譜、或柱色譜)、光譜技術(如紅外光譜、核磁共振譜、或質譜)、或兩種技術結合來確定。
本發明中各種4-位取代基的進一步描述如下4-氫置換4-氯得本發明4-氫化合物按下法進行在碳橋飽和之後繼續延長第五步氫化的時間。
4-巰基或4-烷硫基將本發明的第一、三、或五步的產物(式Ⅶ、Ⅷ或Ⅹ的化合物)，在合適溶劑的存在下，與硫脲或二烷基二硫化物反應，4-氯化合物即轉變成本發明的相應的巰基或烷硫基化合物。這類氯取代反應是專業人員熟悉的，例如參見
March，Advanced Organic ChemistryReactions，Mechanisms，and Structure，McGraw-Hill，lst ed.，p.500該文獻作為參考文獻併入本文。
此步驟中所用的溶劑是在反應條件下仍然惰性的任何溶劑，優選2-甲氧基乙醇。
4-烷氧基將本發明式Ⅶ、Ⅷ、或Ⅹ的化合物在合適的溶劑中，與能釋放醇鹽離子(R3O-)的親核試劑反應，可置換4-氯而得本發明的相應的烷氧基化合物。相應的C1-C2烷基醇與活潑金屬如鈉或鎂作用可得所需的醇鹽離子。例如R3OH+Na→R3O-Na+一旦釋放出醇鹽離子，即可應用包括以醇鹽離子取代4-氯的親核取代反應在內的William合成法。
在反應條件下惰性的任何溶劑可用作本步驟的溶劑，優選2-甲氧乙醇。
4-烷氨基或4-二烷基氨基在適當的溶劑中，將本發明第一、第三、第五步的產物，與相應的親核的烷胺或二烷胺反應，可將4-氯置換成本發明的烷氨基或二烷氨基化合物。類似的氯代反應有機化學專業人員是熟悉的，例如參見
March，Advanced Organic ChemistryReactions，Mechanisms，and Structure，McGraw-Hill，lst ed.，p.502;
該文獻作為參考文獻併入本文。
任何在反應條件下惰性的溶劑都可作本步驟的溶劑，優選2-甲氧乙醇。
本發明的第六步是將式Ⅹ的化合物經鹼水解除去保護基團Y1和Y2。此方法得到式Ⅰ或式Ⅲ的2-氨基-4-取代的-[[吡咯並或吡啶並(2，3-d)-嘧啶基]烷基]苯甲醯基]-L-穀氨酸。去除各種不同保護基團的方法前述標準文獻已有介紹，它們作為文獻併入本文。
本發明的任選的第七步是式Ⅰ或式Ⅲ化合物的催化氫化。氫化產物是式Ⅱ或式Ⅳ的吡咯並或吡啶並嘧啶化合物。
用來合成本發明化合物的起始原料是已知的。如市場上無法購到，很容易用本領域普通專業人員常用的方法合成。
本發明的藥學上可接受的鹽，通常以具有合適的酸性或鹼性官能團的化合物，與等分子的或過量的酸成鹼反應製取。反應物一般在互溶的溶劑中結合，例如，酸加成鹽在二乙醚或苯中，鹼加成鹽在水或醇中。生成的鹽能正常地在1小時至10天內以沉澱析出，並可用過濾或其他傳統方法分離。
另外，本發明的某些化合物能和水或常用有機溶劑形成溶劑化物。這些溶劑化物作為本發明化合物也包括在本發明範圍內。
本發明的化合物對以葉酸鹽，特別是以葉酸鹽的衍生物作底物的一種或幾種酶有抑制作用。例如，下列有代表性的化合物證明對成淋巴白血病細胞衍生的人的T細胞(CCRF-CEM)的生長有抑制作用實施例1，N-[2-氨基-4-氯-[[吡咯並[2，3-d]-嘧啶-5-基]-乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸;
實施例2，N-[2-氨基-4-巰基-[[吡咯並[2，3-d]-嘧啶-5-基]-乙基]苯甲醯基-L-穀氨酸;
實施例3，N-[2-氨基-[[吡咯並[2，3-d]-嘧啶-5-基]-乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸;
實施例4，N-[2-氨基[二氫吡咯並[2，3-d]-嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸;
實施例5，N-[2-氨基-4-甲氧基-[[吡咯並[2，3-d]-嘧啶-5-基]-乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸;
實施例6，N-[2-氨基-4-二乙氨基-[[吡咯並[2，3-d]-嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸;
實施例7，N-[2-氨基-[[四氫吡啶並[2，3-d]-嘧啶-6-基]乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸。
表Ⅰ是用人白血病細胞系CCRF-CEM細胞(Foley et al.，Cancer，18，522(1965))所作體外試驗的數據，這種細胞的生長已有報導(Grindey，et al.，J.Mol.Pharmacol.，16，601，(1979))，二者均作為參考文獻併入本文。為了確定50%生長抑制的濃度(IC50)作了各種化合物的劑量反應曲線。製備了雙份不同濃度(自100μg/ml到0.005μg/ml)的化合物的Cluster板。被試化合物先溶於二甲基亞碸(DMSO)中，再進一步稀釋到所需濃度。將加有10%透析的胎牛血清及16mM HEPES緩衝液和8mM MOPS緩衝液的Roswell ParK Memorial研究所1640培養基中的細胞加入小井中，使最後濃度為每井有4.8×104個細胞，總體積2.0ml。培養72小時(95%空氣，5%CO2)後，用ZBI庫爾特計數器計數細胞。培養結束時，對照組的細胞數通常為(4-6)×105個/井。
表Ⅰ化合物 IC50(μg/ml)1 202 0.0323 0.0194 0.0055 206 0.97 0.005本發明的化合物已被證明在體內有抗小鼠移植腫瘤的活性，是用帶有6C3HED淋巴肉瘤(也叫做Gardner淋巴肉瘤(GLS))的C3H小鼠來測試這些化合物的。6C3HED淋巴肉瘤由國家腫瘤研究所腫瘤治療系提供，保存在E.G.andG.Mason研究的腫瘤庫中(麻省，烏斯特)。第一傳代腫瘤用標準方法儲存在液氮中。移植的腫瘤每六個月或必要時重新從腫瘤庫取用，連續傳代，每周在C3H小白鼠身上進行二次。
試驗時自傳代的小鼠身上取出腫瘤，用無菌技術切成1至3mm的方形薄片，用抗菌介質1和心腦浸出液(密西根州底特律Difco公司)驗證確係無菌。接受移植的小鼠先剃毛，然後在腋下用套針將腫瘤薄片植入皮下。植入第二天按一定計劃開始藥物治療。被試化合物與2.5%(重量百分數)名為「Emulphor EL620」表面活性劑(GAF化學公司出品)的聚氧乙基化油混和(用生理鹽水1∶40稀釋)。所有動物在開始時及治療結束時都稱體重，自由攝食和飲水。藥物以0.5ml2.5%Emulphon溶液形式給藥。除另有註明者外，都是每天給藥一次，共給八天。治療結束後一天用與微機相連的數字電子測徑器測定腫瘤的長及寬(J.F.Worzalla，et al.，Investigational New Drugs，8，241-251(1990))。從測得的數字根據下式計算腫瘤重量腫瘤重(mg)＝(寬，mm)2×(長，mm)/2最少有一個同等鼠數並只用同體積2.5%Emulphor處理的對照組。1減去試驗組腫瘤大小的平均數與對照組腫瘤大小之比的差，再乘以100，得抑制百分數(%INH)。實施例4化合物的試驗結果列於表Ⅱ中。
表Ⅱ實施例4結果腫瘤系 劑量濃度 %INH 毒性/總數(mg/kg)6C3HED 50 TOX 10/10淋巴肉瘤 25 TOX 10/10(天x8) 12.5 100 8/106.25 100 6/104.00 100 1/102.00 97 0/101.00 36 0/100.50 1 0/100.25 0 0/10
6C3HED 16 100 0/10淋巴肉瘤 8 100 0/10(天數:1,3,5,7) 4 99 0/102 49 0/10
C3H 32 95 9/10乳腺瘤 16 92 6/10(天數1,3,5,7,9) 8 77 0/104 24 0/102 10 0/101 0 0/10本發明的化合物也被證明對離體的人二氫葉酸鹽還原酶(DHFR)有抑制作用。純化的人二氫葉酸鹽還原酶是根據Delcapm的方法(Delcamp，T.J.et al.，Biochemistry，22，633-639(1983)，作為參考文獻併入本文)自白血病患者的成淋巴細胞(WI-L2/M4細胞)得到的。抑制二氫葉酸鹽還原酶的評價根據Rosowsky的方法(Rosowsky，A.et al.，Biochem.Pharmacol.，35，3327-3333(1986)，作為參考文獻併入本文)進行，用劑量反應曲線確定各種化合物50%抑制酶活力的濃度(IC50)，結果見下列表Ⅲ。
表Ⅲ化合物 DHFR(5×10-8MIC50實施例4 9.6×10-8M實施例7 6.4×10-8M本發明的化合物是抗腫瘤劑。本發明還提供了治療哺乳類動物(特別是人)敏感的腫瘤的方法。本方法包括以一種藥用組合物形式施用化合物。本發明化合物能有效腫瘤的生長，它們包括絨毛膜癌、白血病、女性乳房腺癌、頭和頸的表皮腫瘤、鱗狀或小細胞肺癌及各種淋巴肉瘤。
這些速效的化合物常以藥用組合物形式單獨或合併地經口服或非腸道給藥，優選非腸道給藥。非腸道給藥包括肌肉內、鞘內、靜脈內和動脈內給藥。劑量必須根據腫瘤的種類、病人的狀況及反應來確定。一般每天約10至約100mg，持續5至10天，或單獨一次給藥250-500mg，定期重複(如每兩周)。口服劑型(包括片劑或膠囊)每單元劑量1-100mg藥物。非腸道給藥時用每ml.含1-100mg藥物的等滲鹽水溶液。
組合物根據製藥專業已知的方法製備，至少含一種活性化合物。因此，本發明也包括含有作為有效成分的一種式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ的化合物及至少一種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的組合物，本發明還包括以一種式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ的化合物為有效成分的組合物治療敏感的腫瘤的方法。
製備本發明的組合物以及含有其他式Ⅰ化合物的組合物時，通常有效成分與一種賦形劑混和，並用賦形劑稀釋，或包含在載體內，所述載體可以是膠囊、香囊、紙、或其他容器形式。用作稀釋劑的賦形劑可以是固體、半固體、或液體，用作有效成分的載體或介質。因此，本發明組合物的形式有片劑、丸劑、粉劑、酏劑、混懸液、乳化液、溶液、糖漿、軟或硬的明膠膠囊、栓劑、無菌注射液及無菌包裝的粉劑。
製備製劑時，在與其他成分混和前，有效成分需磨細到合適的顆粒程度。如有效成分基本上是不溶解的，常磨到200目或更細一些。如可溶，磨到能均勻分布即可，例如，約40目。
合適的賦形劑的一些實例有乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、阿拉伯膠、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿和甲基纖維素。製劑中還可包括潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油，溼潤劑，乳化劑和混懸劑，防腐劑如羥苯甲酸甲酯或丙酯，甜味劑或芳香劑。採用本專業熟知的方法，本發明的組合物可製劑成給藥後能快速、持續、或延緩地釋放有效成分的製劑。
組合物最好製成單位劑量的形式，每一劑量一般含有效成分約5mg到1g，經常是約25到800mg。「單位劑量形式」意指適合於人或其他哺乳類動物一次劑量的物理上獨立的單位。每單位含根據計算能產生所需療效的事前定好量的有效成分及合適的藥用賦形劑。
應該知道，確切的給藥量要由醫生根據有關情況來確定，如治療對象的狀況，所選化合物，給藥途徑，病人的年令、體重及個體反應和症狀的嚴重程序。所以上述劑量範圍並不限制本發明的範圍。
以下實施例意在進一步說明本發明，並不意味著限制本發明的範圍。
在下述實施例中，溶點、核磁共振譜、電子衝擊質譜、場解吸質譜、快速原子轟擊質譜、紅外光譜、紫外光譜、元素分析、比旋度、高效液相色譜和薄層色譜等術語，依次縮寫成m.p.，n.m.r.，m.s.，f.d.m.s.，f.a.b.m.s.，i.r.，U.V.，anal，o.r.，HPLC和TLC。紅外光譜中僅將有關的吸收峰列出，並不包括所有觀察到的吸收峰。
THF和DMF分別是四氫呋喃和二甲基甲醯胺的縮寫。
在核磁共振譜中，採用下列縮寫s代表單峰、d雙峰、dd雙雙峰、t三峰、q四峰、m多峰、dm雙多峰、br·s寬單蜂、br·d寬雙峰、br·t寬三峰、br·m寬多峰、J是用赫茲表示的偶合常數、DMSO-d6是用重氫置換了所有質子的二甲基亞碸。
核磁共振譜用Varian Associates EM-390 90MHz或T-60 60MHz儀器，或JeolFX-90Q90MHz，或Bruker Crop.270MHz儀器，或General Electric QE0300 300MHz儀器測得。化學位移用δ值表示(以四甲基矽烷為標準向低磁場移動的百萬分之幾)。場解吸質譜用有碳枝晶射頻振蕩器的Varian-MAT731儀器測得。電子衝擊質譜用Consolidated Electrodynamics公司的CEC21-110儀器測得。紅外光譜用Perkin-Elmer281儀器測得。紫外用Cary118儀器測定。比旋度用Perkin-ElmerQ-41儀器測得。薄層色譜用E.Merck矽膠板進行。熔點未校正。
實施例1A.2-氨基-4-氯-吡咯並[2，3-d]嘧啶的製備
在100ml圓底燒瓶中，將2.0g(13.3mmol)2-氨基-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶-4-酮懸浮於20ml三氯氧磷中，加熱回流2小時，45分鐘後形成黃色溶液。冷卻到室溫，真空去除溶劑，殘留物在冰浴中用30ml冰水處理，濾去不溶物。濾液加濃氨水調pH到2。濾出沉澱，用水及20ml乙醚洗滌，真空乾燥，得1.1g(49%)2-氨基-4-氯-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶，淺黃色固體。
Rf＝0.15(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝225-226℃(dec)質譜(FD)＝169IR(KBr，cm-1)＝700，741，812，887，920，1203，1272，1310，1385，1407，1428，1485，1512，1564，1616，1637，2822，2927，2965，3111，3190，3309，3414，3450UV(EtOH)1max＝317，255，232，201(e＝6032，4002，26867，11240)1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d 622(d，J＝3.3Hz，1H)6.46(s，2H)，7.06(d，J＝2.7Hz，1H)，11.43(s，1H)B.2-三甲乙醯氨基-4-氯-吡咯並[2，3-d]嘧啶的製備
在100ml圓底燒瓶中將4.0g(23.8mmol)2-氨基-4-氯-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶溶於50ml無水吡啶中。加10.2ml(83mmol)三甲基乙醯氯，幾分鐘後開始形成沉澱，在氮氣下室溫攪拌30分鐘。真空去除揮發物。殘渣溶於1L氯仿中，用0.1N HCl洗滌兩次，Na2SO4乾燥，真空去除溶劑。殘餘物在矽膠上閃層析，用100%CHCl3至2%MeOH/CHCl3梯度洗脫，收集所需部分，真空去除溶劑，得4.4g(73%)2-三甲乙醯氨基-4-氯-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶，略帶黃色的白色固體。
Rf＝0.67(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝217-220℃(dec)質譜(FD)＝378IR(KBr，cm-1)＝1371，1390，1421，1459，1493，1510，1573，1615，1694，2871，2963，3127，3163，3422UV(EtOH)1max＝278，241，201(e＝6553，24711，元素分析C11H13N4OClC，52.28;H，5.18;N，2217.測定值C，52.55;H，5.18;N，22.09.
1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d1.20(s，9H)，6.50(d，J＝3.3Hz，1H)，7.51(d，J＝3.2Hz，1H)，10.02(s，1H)，12.31(s，1H)C.2-三甲乙醯氨基-4-氯-5-碘-吡咯並[2，3-d]嘧啶的製備
在蓋在鋁箔的100ml圓底燒瓶中，溶1.5%(5.94mmol)2-三甲乙醯氨基-4-氯-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶於30ml無水THF中，加1.47g(6.5mmol)N-碘琥珀醯亞胺。此深棕色溶液在氮氣下室溫攪拌1小時。真空去除溶劑，殘餘物溶入氯仿，用水洗滌，Na2SO4乾燥，真空去除溶劑，殘餘物用矽膠閃層析，用100%CHCl3至2%MeOH/CHCl3梯度洗脫。收集所需部分，真空去除溶劑，得1.86g(83%)2-三甲乙醯氨基-4-氯-5-碘-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶，黃褐色固體。
Rf＝0.47(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝242-244℃(dec)質譜(FD)＝378IR(KBr，cm-1)＝759，780，803，916，936，965，1021，1161，1178，1227，1259，1287，1315，1368，1414，1453，1500，1565，1603，1708，2871，2967，3213，3425UV(EtOH)1max＝306，251，202(e＝4566，28829，16837)1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d1.20(s，9H)，7.74(s，1H)，10.09(s，1H)，12.67(s，1H)D.N-[2-三甲乙醯氨基-4-氯-[(吡咯並(2，3-d)嘧啶-5-基]乙炔基]-苯甲醯基]-L-穀氨酸二乙酯的製備
在有鋁箔蓋的100圓底燒瓶中，加入1.5g(3.96mmol)2-三甲乙醯氨基-4-氯-5-碘-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶、1.88g(4.16mmol)N-對-乙炔基苯甲醯基-L-穀氨酸二乙酯、0.16g(0.83mmol)碘化銅(Ⅰ)及溶於30ml無水DMF中的四(三苯膦)鈀(o)，再加1.16ml(8.3mmol)三乙胺。在氮氣下室溫攪拌此深棕色溶液4小時。真空去除揮發物，殘餘物用矽膠閃層析，用100%CHCl3至1%MeOH/CHCl3梯度洗脫，收集所需部分，真空去除溶劑，將固體在40ml2∶1己烷/乙醚中研磨，得1.35g化合物1，黃褐色固體。
Rf＝0.22(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝212-214℃(dec)質譜(FD)＝582IR(KBr，cm-1)＝785，851，926，1020，1099，1162，1300，1426，1497，1568，1612，1639，1737，2219，2978，3214UV(EtOH)1max＝315，257，203(e＝19105，20190，24301)元素分析C29H32N5O6ClC，59.84;H，5.54;N，12.03.測定值C，59.54;H，5.52;N，11.83.
1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d1.00-1.19(m，6H)，1.21(s，9H)，1.97-2.13(m，2H)，2.40-2.47(m，2H)，4.43(m，1H)，7.60(d，J＝8.2Hz，2H)，7.90(d，J＝8.2Hz，2H)，8.80(d，7.3Hz，1H)，10.14(s，1H)，12.80(s，1H)
E.N-[2-三甲乙醯氨基-4-氯-[[吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸二乙酯的製備
在50ml圓底燒瓶中，溶解化合物1 0.050g(0.086mmol)於1ml無水乙醇和1ml二氯甲烷中，再加0.04g10%Pd/C催化劑。加上氫氣球，攪拌4小時。濾去催化劑，充分洗滌催化劑，濾液真空去除溶劑，殘餘物用矽膠閃層析，用2%MeOH/CHCl3洗脫，收集所需部分，真空去除溶劑，得0.45g(95%)化合物2，黃色固體。
Rf＝0.47(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝86-88℃質譜(FAB)＝586IR(KBr，cm-1)＝759，922，1020，1098，1165，1374，1427，1469，1502，1540，1569，1613，1648，1737，2977，3244UV(EtOH)1max＝248，203(e＝40126，36298)1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d1.11-1.19(m，6H)，1.20(s，9H)，1.95-2.09(m，2H)，2.41(t，J＝7.4Hz，2H)，2.97-3.15(m，4H)，3.98-4.11(m，4H)，4.38(m，1H)，7.23(s，1H)，7.32(d，J＝8.1Hz，2H)，7.78(d，J＝8.0Hz，2H)，8.63(d，J＝8.0Hz，1H)，9.98(s，1H)，12.02(s，1H)。
F.N-[2-氨基-4-氯-[[吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基-L-穀氨酸的製備
在15ml圓底燒瓶中，將0.015g(0.026mmol)化合物1混懸於1ml2N NaOH中。室溫攪拌七天，再在50℃攪拌4小時。所得淺黃色溶液用5N HCl酸化，置冰浴中冷卻，濾出白色沉澱，用15ml水洗滌，70℃真空乾燥，得0.005g(49%)化合物2，黃褐色固體。
Rf＝0.05(50%MeOH/CHCl3)m.p.＝＞300℃(dec)質譜(FAB)＝446IR(KBr，cm-1)＝599，928，1020，1225，1435，1501，1555，1617，1714，3337UV(EtOH)1max＝322，239，202(e＝4085，38829，34937)1H NMR(300MHz，DMSOd6)d1.87-2.09(m，2H)，2.32(t，J＝7.3Hz，2H)，2.95(s，4H)，4.36(m，1H)，6.42(s，2H)，6.78(s，1H)，7.30(d，J＝7.7Hz，2H)，7.81(d，J＝7.6Hz，2H)，8.49(d，J＝7.2Hz，1H)，11.13(s，1H)，12.40(br s，2H).
實施例2A.N-[2-三甲乙醯氨基-4-巰基-[[吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸二乙酯的製備
在15ml圓底燒瓶中，溶解0.22g(0.37mmol)化合物1於4ml2-甲氧乙醇中，加0.20g(2.6mmol)硫脲。在氮氣下100℃加熱20分鐘。冷到室溫後真空去除溶劑，殘餘物溶於100ml氯仿中，用水洗滌，分出有機層，Na2SO4乾燥，真空去除溶劑，在矽膠上閃層析，用2%MeOH/CHCl3洗脫，收集所需部分，真空去除溶劑，得0.11g(50%)化合物2，黃色固體。
Rf＝0.39(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝185-187℃(dec)質譜(FD)＝583IR(KBr，cm-1)＝766，842，935，1023，1163，1360，1439，1564，1640，1735，2975，3195UV(EtOH)1max＝339，279，238，202(e＝16995，10601，34456，43227)元素分析C29H37N5O6SC，59.67;H，6.39;N，12.00.測定值C，59.44;H，6.33;N，11.91.
1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d1.11-1.24(m，15H)，1.90-2.10(m，2H)，2.41(t，J＝7.4Hz，2H)，2.98-3.03(m，2H)，3.14-3.22(m，2H)，3.99-4.11(m，4H)，4.38-4.40(m，1H)，6.88(s，1H)，7.33(d，J＝8.1Hz，2H)，7.77(d，J＝8.1Hz，2H)，8.62(d，J＝7.4Hz，1H)，11.05(s，1H)，11.62(s，1H)，13.14(s，1H).
B.N-[2-氨基-4-巰基[[吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸的製備
在15ml園底燒瓶中溶解化合物1 0.083g(0.14mmol)於6ml0.5N NaOH中，蓋上鋁箔，室溫攪拌5.5天，所得桔色溶液用1N HCl酸化，在冰浴中冷卻，濾出沉澱，用水洗滌，60℃真空乾燥，得0.037g(59%)化合物2，黃褐色固體。
Rf＝0.04(50% MeOH/CHCl3)m.p.＝240-242℃(dec)質譜(FAB)＝444IR(KBr，cm-1)＝767，817，968，1020，1098，1191，1343，1402，1446，1502，1568，1637，1710，2929，3333UV(EtOH)1max＝347，238，203(e＝9999，30880，40868)元素分析C20H21N5O5SC，54.17;H，4.77;N，15.79.測定值C，53.90;H，4.73;N，15.52.
1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d2.22-2.35(m，4H)，2.94-3.20(m，4H)，4.29-4.31(m，1H)，6.39(s，2H)，6.52(s，1H)，7.30(d，J＝7.9Hz，2H)，7.73(d，J＝7.9Hz，2H)，8.48(d，J＝7.5Hz，1H)，10.95(s，1H)實施例3A.N-[2-三甲乙醯氨基-[[吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸的製備
在-Parr氫化瓶中溶解0.01g(0.17mmol)化合物1於8ml無水乙醇和2ml二氯甲烷中，再加0.05ml(1.3mmol)濃氨水。加0.20g10%Pd/C催化劑，在50psi氫氣壓力下氫化20小時。濾去催化劑，充分洗滌，真空去塗溶劑，殘餘物在矽膠上閃層析，用100%CHCl3到2%MeOH/CHCl3梯度洗脫。收集所需部分，真空去除溶劑，得0.055g(59%)化合物2，淺黃色固體。
Rf＝0.33(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝148-149℃質譜(FD)＝551IR(KBr，cm-1)＝766，850，923，1021，1097，1165，1433，1477，1500，1545，1582，1613，1636，1701，1742，2978，3225，3363，3441UV(EtOH)1max＝246，203(e＝38574，36571)元素分析C29H37N5O6C，63.14;H，6.76;N，12.69.測定值C，63.02;H，6.75;N，12.39.
1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d1.11-1.20(m，15H)，1.90-2.10(m，2H)，2.41(t，J＝7.4Hz，2H)，3.01(s，4H)，3.99-4.12(m，4H)，4.38-4.41(m，1H)，7.14(s，1H)，7.32(d，J＝8.0Hz，2H)，7.76(d，J＝7.9Hz，2H)，8.60(d，J＝7.3Hz，1H)，9.69(s，1H)，11.57(s，1H)。
B.N-[2-氨基-[[吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基-L-穀氨酸的製備
在15ml圓底燒瓶中混懸0.045g(0.082mmol)化合物1於2ml1N NaOH中。室溫攪拌7天，所得黃色溶液用1N HCl酸化，在冰浴中冷卻，濾出沉澱，用水洗滌，70℃真空乾燥，得0.019g(57%)化合物2，淺黃色固體。
Rf＝0.05(50%MeOH/CHCl3)m.p.＝260-264℃(dec)質譜(FAB)＝412IR(KBr，cm-1)＝845，963，1020，1093，1209，1291，1333，1404，1451，1500，1538，1558，1614，1655，2813，2857，2947，3138，3353UV(EtOH)1max＝318，237，203(e＝2239，24103，25087)1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d1.87-2.09(m，2H)，2.30-2.34(m，2H)，2.90-3.01(m，4H)，4.32-4.39(m，1H)，6.01(s，2H)，6.70(s，1H)，7.30(d，J＝8.1Hz，2H)，7.76(d，J＝8.1Hz，2H)，8.41(s，1H)，8.50(d，J＝7.6Hz，1H)，10.76(s，1H)，12.40(br s，1H)。
實施例4A.N-[2-三甲乙醯氨基[[二氫吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸二乙酯的製備
在Parr氫化瓶中，溶解0.068g(0.17mmol)化合物1於6ml無水乙醇和1ml二氯甲烷中，再加0.2g 10%Pd/C催化劑。在50psi壓力下氫化18小時。過濾並充分洗滌催化劑，濾液在真空中去除溶劑，殘餘物在矽膠上閃層析，用2%MeOH/CHCl3洗脫。收集所需部分，真空去除溶劑，得0.022g(34%)化合物2，白色固體。
Rf＝0.23(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝90-92℃質譜(FD)＝554IR(KBr，cm-1)＝853，925，1022，1181，1398，1504，1591，1623，1735，2978，3308UV(EtOH)1max＝296，222，203(e＝7464，31504，35543)元素分析C29H39N5O6C，62.91;H，7.10;N，12.65.測定值C，62.61;H，7.40;N，12.53.
1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d1.04-1.20(m，15H)，1.75-1.85(m，1H)，1.93-2.09(m，4H)，2.41(t，J＝7.4Hz，2H)，2.69(t，J＝7.6Hz，3H)，3.65-3.69(m，1H)，4.00-4.11(m，4H)，4.39-4.42(m，1H)，7.34(d，J＝8.0Hz，2H)，7.40(s，1H)，7.78(d，J＝8.4Hz，2H)，7.81(s，1H)，8.62(d，J＝7.4Hz，1H)，9.29(br s，1H)。
B.N-[2-氨基-[[二氫吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸的製備
在15ml圓底燒瓶中，混懸0.075g(0.13mmol)化合物1於3ml1N NaOH中，蓋上鋁箔，室溫攪拌7.5天。所得黃色溶液用5N HCl酸化，冰浴冷卻，濾出黃色沉澱，用水洗滌，70℃真空乾燥。濾液在真空中去除揮發物，殘餘物用C-18反相色譜純化，用10%MeCN/89.5%H2O/0.5%AcOH洗脫。收集所需部分，在真空中濃縮至近幹，冰凍乾燥。所得沉澱和冰凍所得固體合併，共得0.027g(48%)化合物2，淺黃色固體。
Rf＝0.07(50%MeOH/CHCl3)m.p.＝＞300℃(dec)質譜(FAB)＝414IR(KBr，cm-1)＝660，1180，1295，1380，1500，1608，1630，1640，2920，3340UV(EtOH)1max＝238，203(e＝8086，15837)1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d1.89-1.99(m，1H)，2.10-2.20(m，4H)，2.26(t，J＝6.8Hz，3H)，2.61-2.66(m，2H)，4.30-4.40(m，1H)，5.76(br s，2H)，6.77(s，1H)，7.29(d，J＝7.9Hz，2H)，7.51(br s，1H)，7.72(d，J＝7.7Hz，2H)，8.10(br s，1H)。
實施例5
A.2-氨基-4-甲氧基-吡咯並[2，3-d]嘧啶的製備
在250ml圓底燒瓶中，溶解0.92g(40mmol)金屬鈉於80ml無水乙醇中，攪拌，在氮氣下加入20g(11.9mmol)2-氨基-4-氯-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶。所得黃色溶液加熱回流24小時，冷到室溫後用冰醋酸中和到pH6.0，真空去除揮發物。殘餘物用50ml水處理，濾去少量不溶物。濾液用100ml氯仿提取三次，合併有機層，Na2SO4乾燥，真空去除溶劑，殘餘物在矽膠上閃層析，用5%MeOH/CHCl3洗脫。收集所需部分，真空去除溶劑，得1.36g(70%)2-氨基-4-甲氧基-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶，米色固體。
Rf＝0.17(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝202-204℃(dec)質譜(FD)＝164IR(KBr，cm-1)＝711，740，793，823，902，1056，1093，1165，1194，1228，1321，1334，1390，1406，1440，1473，1490，1579，1610，1632，2828，3110，3370，3484UV(EtOH)λmax＝287，257，223(ε＝7287，7375，24330)元素分析C7H8N4OC，51.22;H，4.91;N，34.13.測定值C，51.02;H，4.95;N，34.23.
1H NMR(300 MHz，DMSOd6)δ3.88(s，3H)，5.96(s，2H)，6.15(d，J＝2.3Hz，1H)，6.78(d，J＝2.9Hz，1H)，10.99(s，1H)。
B.2-三甲乙醯氨基-4-甲氧基-吡咯並[2，3-d]嘧啶的製備
在50ml圓底燒瓶中，溶解0.90g(5.48mmol)2-氨基-4-甲氧基-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶於12ml無水吡啶中，加2.4ml(19.2mmol)三甲乙醯氯。在氮氣下加熱回流1.5小時。真空去除揮發物。殘渣溶於9ml甲醇中，冰浴冷卻。攪拌，加9ml10%氫氧化銨，濾出生成的沉澱，用水及10%氫氧化銨洗滌，乾燥，得11.09g(80%)2-三甲乙醯氨基-4-甲氧基-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶，白色固體。
Rf＝0.26(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝235-236℃質譜(FD)＝248IR(KBr，cm-1)＝709，720，738，789，844，881，901，934，969，1017，1049，1058，1100，1167，1209，1309，1358，1395，1460，1516，1588，1618，1693，2958，3130，3185，3430UV(EtOH)1max＝278，231，202(e＝12328，19978，18292)元素分析C12H16N4O2C，58.05;H，6.50;N，22.57.測定值C，57.75;H，6.48;N，22.62.
1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d1.20(s，9H)，6.38(d，J＝3.2Hz，1H)，7.20(d，J＝3.1Hz，1H)，9.49(s，1H)，11.77(s，1H)。
C.2-三甲乙醯氨基-4-甲氧-5-碘-吡咯並[2，3-d]嘧啶的製備
在有鋁箔蓋的15ml園底燒瓶中，溶解0.266g(1.07mmol)2-三甲乙醯氨基-4-甲氧基-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶於6ml無水THF中，加入0.260gN-碘琥珀醯亞胺，在氮氣下攪拌1.5小時。真空去除溶劑，殘渣溶於100ml氯仿中。用水洗滌，分出有機層，Na2SO4乾燥。經矽膠閃層析，用100%CHCl3到1%MeOH/CHCl3梯度洗脫。收集所需部分，真空去除溶劑，得0.33g(82%)2-三甲乙醯氨基-4-甲氧基-5-碘-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶，米色固體。
Rf＝0.50(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝243-244℃(dec)質譜(FD)＝374IR(KBr，cm-1)＝652，723，785，806，843，965，1010，1096，1175，1212，1253，1279，1328，1390，1426，1461，1532，1579，1620，1705，2955，3200，3435UV(EtOH)1max＝283，242，202(e＝10018，30658，19457)1H NMR(300，DMSOd6)d1.20(s，9H)，4.01(s，3H)，7.40(d，J＝2.0Hz，1H)，9.55(s，1H)，12.11(s，1H)D.N-[2-三甲乙醯氨基-4-甲氧基-[[吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙炔基]苯甲醯基]穀氨酸二乙酯的製備
在有鋁箔蓋的25ml圓底燒瓶中，加0.20g(0.53mmol)2-三甲乙醯氨基-4-甲氧基-5-碘-7H-吡啶並[2，3-d]嘧啶、0.19g(0.58mmol)N-對-乙炔基苯甲醯基-L-穀氨酸二乙酯、0.024g(0.13mmol)碘化銅(I)、及混懸於5ml無水DMF中的0.074g(0.06mmol)四(三苯膦)-鈀(o)，再加0.18ml(1.28mmol)三乙胺。所得暗棕色混合物在氮氣下於50℃攪拌0.5小時。真空去除揮發物，殘餘物在矽膠上閃層析，用100%CHCl3到1%MeOH/CHCl3梯度洗脫。收集所需部分，真空去除溶劑，得0.085g(28%)化合物1，黃褐色固體。
Rf＝0.48(2%MeOH/CHCl3)m.p.＝215-216℃(dec)質譜(FD)＝577IR(KBr，cm-1)＝792，852，1097，1165，1346，1430，1527，1607，1737，2216，2978，3210UV(EtOH)1max＝321，263，254，201(e＝22757，22713，23239，39466)1H NMR(300MHz，DMSOd6)d1.06-1.21(m，15H)，1.97-2.11(m，2H)，2.41-2.51(m，2H)，3.99-4.13(m，7H)，4.38-4.45(m，1H)，7.56(d，J＝8.2Hz，2H)，7.61(s，1H)，7.90(d，J＝8.1Hz，2H)，8.79(d，J＝7.3Hz，1H)，9.61(s，1H)，12.28(s，1H)。
E.N-[2-三甲乙醯氨基-4-甲氧基-[[吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基]穀氨酸二乙酯的製備
在50ml圓底燒瓶中，溶解0.075g(0.13mmol)化合物1於8ml無水乙醇和2ml二氯甲烷中，再加0.05gPd/C催化劑，充氫氣下攪拌6小時。濾去催化劑，充分洗滌，濾液在真空中去除溶劑，殘餘物在矽膠上閃層析，用3%MeOH/CHCl3洗脫，收集所需部分，真空去除溶劑，得0.062g(82%)化合物2，黃色固體。
Rf＝0.35(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝71-74℃(dec)質譜(FAB)＝582IR(KBr，cm-1)＝793，844，970，1020，1095，1168，1338，1587，1615，1648，1737，2979，3259UV(EtOH)1max＝277，238，202(e＝13505，35834，45830)1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d1.06-1.20(m，15H)，1.95-2.09(m，2H)，2.41-2.51(m，4H)，2.95(s，2H)，3.98-4.11(m，7H)，4.36-4.40(m，1H)，6.89(s，1H)，7.28(d，J＝8.1Hz，2H)，7.76(d，J＝8.0Hz，2H)，8.62(d，J＝7.4Hz，1H)，9.47(s，1H)，11.43(s，1H)。
F.N-[2-氨基-4-甲氧基-[[吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基]穀氨酸的製備
在15ml圓底燒瓶中，混懸0.07g(0.12mmol)化合物1於4ml0.5N NaOH中，室溫攪拌7天。所得淺黃色溶液用1N HCl酸化，冰浴中冷卻，濾出黃褐色沉澱，用水洗滌，70℃真空乾燥，得0.044g(83%)化合物2，黃褐色固體。
Rf＝0.08(50%MeOH/CHCl3)m.p.＝230℃(dec)質譜(FAB)＝442IR(KBr，cm-1)＝777，958，1020，1090，1153，1197，1250，1394，1441，1483，1538，1614，1660，2941，3336UV(EtOH)1max＝230，203(e＝35345，34328)1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d1.90-2.07(m，2H)，2.32(t，J＝7.3Hz，2H)，2.84-2.95(m，4H)，3.96(s，3H)，4.33-4.40(m，1H)，6.56(s，1H)，7.26(d，J＝8.0Hz，2H)，7.78(d，J＝8.1Hz，2H)，8.50(d，J＝7.6Hz，1H)，11.04(s，1H)，12.40(br s，2H)。
實施例6A.2-三甲乙醯氨基-4-氯-5-(三甲基甲矽烷基)乙炔基-吡咯並[2，3-d]嘧啶的製備
在蓋有鋁箔的100ml圓底燒瓶中，加入1.0g(2.6mmol)2-三甲乙醯氨基-4-氯-5-碘-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶、0.2g(1.04mmol)碘化銅(I)、1.8ml(13mmol)(三甲基甲矽烷基)乙炔及溶於15ml無水DMF中的0.30g(0.26mmol)四(三苯膦)鈀(o)，再加0.72ml(5.1mmol)三乙胺。所得暗棕色溶液在氮氣下室溫攪拌18小時。真空去除揮發物，殘餘物溶於1L氯仿中，用水洗滌，分出有機層，Na2SO4乾燥，真空去除溶劑。此粗製品在矽膠上閃層析，用100%CHCl3到1%MeOH/CHCl3梯度洗脫。收集所需部分，真空去除溶劑，得0.49g(54%)2-三甲乙醯氨基-4-氯-5-(三甲基甲矽烷基)乙炔基-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶，黃褐色固體。
Rf＝0.45(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝＞300℃質譜(FD)＝348IR(KBr，cm-1)＝626，758，785，860，926，1021，1166，1232，1260，1291，1432，1456，1498，1568，1610，1698，2161，2961，3154，3424UV(EtOH)1max＝261，256，201(e＝29006，29104，20753)1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d0.21(s，9H)，1.20(s，9H)，7.89(s，1H)，10.12(s，1H)，12.67(s，1H)。
B.2-三甲乙醯氨基-4-二乙氨基-5-(三甲基甲矽烷基)乙炔基-吡咯並[2，3-d]嘧啶的製備
在100ml圓底燒瓶中，於氮氣下，混懸0.49g(1.4mmol)2-三甲乙醯氨基-4-氯-5-(三甲基甲矽烷基)乙炔基-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶於15ml無水2-甲氧乙醇中，再加0.87ml(8.4mmol)二乙胺，100℃加熱1小時，真空去除揮發物，殘餘物經閃層析，用3%MeOH/CHCl3洗脫。收集所需部分，真空去除溶劑得0.43g(80%)2-三甲乙醯氨基-4-二乙氨基-5-(三甲基甲矽烷基)乙炔基-7H-吡咯並(2，3-d]嘧啶，黃褐色固體。
Rf＝0.43(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝191-194℃(dec)質譜(FD)＝385IR(KBr，cm-1)＝695，711，759，786，838，862，1040，1064，1095，1176，1209，1250，1304，1357，1427，1532，1573，1690，2144，2962，3108，3428UV(EtOH)1max＝367，296，237，207，203(e＝966，18048，28781，22099，21727)1H NMR(300，DMSOd6)d0.19(s，9H)，1.13-1.18(m，15H)，3.86(q，J＝6.8Hz，4H)，7.52(s，1H)，9.08(s，1H)，11.88(s，1H)。
C.2-三甲乙醯氨基-4-二乙氨基-5-乙炔基-吡咯並[2，3-d]嘧啶的製備
在15ml圓底燒瓶中，加入0.10g(0.26mmol)2-三甲乙醯氨基-4-二乙氨基-5-(三甲基甲矽烷基)乙炔基-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶、及溶於2ml無水THF的0.39ml(0.39mmol)氟化四丁銨。氮氣下室溫攪拌30分鐘。立刻倒入50ml氯仿中，用水洗滌，分出有機層，Na2SO4乾燥，真空去除溶劑。殘餘物閃層析，用2%MeOH/CHCl3洗脫。收集所需部分，真空去除溶劑，得0.079g(97%)2-三甲乙醯氨基-4-二乙氨基-5-乙炔基-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶，黃褐色固體。
Rf＝0.32(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝71-74℃(dec)質譜(FAB)＝314IR(KBr，cm-1)＝721，789，806，834，946，1033，1091，1162，1206，1279，1300，1358，1370，1428，1536，1571，1707，2102，2969，3195，3454UV(EtOH)1max＝295，237，206(e＝15267，26168，20274)1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d1.11-1.22(m，15H)，3.80(q，J＝6.8Hz，4H)，4.01(s，1H)，7.47(s，1H)，9.02(s，1H)，11.81(s，1H)。
D.N-[2-三甲乙醯氨基-4-二乙氨基-[[吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙炔基]苯甲醯基]穀氨酸二乙酯的製備
在有鋁箔蓋的25ml圓底燒瓶中，加入0.21g(0.67mmol)2-三甲乙醯氨基-4-二乙氨基-5-乙炔基-7H-吡咯並[2，3-d]嘧啶、0.32g(0.74mmol)對-碘-N-苯甲醯基-L-穀氨酸二乙酯、0.51g(0.83mmol)碘化銅(I)、及溶於4ml無水DMF中的四(三苯膦)鈀(o)。所得暗棕色溶液在氮氣下室溫攪拌1.5小時，真空除去揮發物，殘渣在矽膠上閃層析，用100%CHCl3到2%MeOH/CHCl3梯度洗脫。收集所需部分，真空去除溶劑，固體在15ml乙醚中研磨，得0.18g(45%)化合物1，米色固體。
Rf＝0.32(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝171-174℃(dec)質譜(FAB)＝619IR(KBr，cm-1)＝1092，1174，1213，1261，1303，1392，1426，1494，1534，1571，1604，1650，1669，1738，2202，2933，2977UV(EtOH)1max＝340，291，272，245，202(e＝18314，21270，247273，34009，38018)1H NMR(300MHz，DMSOd6)d1.12-1.21(m，21H)，1.96-2.10(m，2H)，2.40-2.43(m，2H)，3.90(q，J＝6.4Hz，4H)，3.96-4.12(m，4H)，4.40-4.45(m，1H)，7.54(d，J＝8.0Hz，2H)，7.66(s，1H)，7.78(d，J＝8.1Hz，2H)，8.78(d，J＝7.3Hz，1H)，9.12(s，1H)，12.01(s，1H)。
E.N-[2-三甲乙醯氨基-4-二乙氨基-吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸二乙酯的製備
在Parr氫化瓶中，加入溶於10ml無水乙醇和2ml二氯甲烷中的0.17g(0.27mmol)化合物1，再加0.25g10%Pd/C催化劑，於50psi壓力下氫化18小時。濾去催化劑，充分洗滌，濾液在真空中去除溶劑。殘餘物在矽膠上閃層析，用2%MeOH/CHCl3洗脫。收集所需部分，真空去除溶劑，得0.13g(76%)化合物2，米色固體。
Rf＝0.25(5%MeOH/CHCl3)m.p.＝68-71℃質譜(FAB)＝623IR(KBr，cm-1)＝763，792，1020，1083，1167，1191，1260，1299，1377，1421，1468，1506，1537，1574，1612，1648，1704，1737，2872，2935，2975，3292，3455UV(EtOH)1max＝296，243，203(e＝11472，43662，43729)元素分析C33H46N6O6C，63.65;H，7.44;N，13.49.測定值C，63.45;H，7.52;N，13.46.
1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d1.07-1.19(m，21H)，1.90-2.10(m，2H)，2.40(t，J＝7.5Hz，2H)，3.30(s，4H)，3.52(q，J＝6.8Hz，4H)，3.98-4.11(m，4H)，6.91(s，1H)，7.26(d，J＝8.2Hz，2H)，7.74(d，J＝8.1Hz，2H)，8.60(d，J＝7.4Hz，1H)，9.15(s，1H)，11.26(s，1H)。
F.N-[2-氨基-4-二乙氨基-[[吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基]穀氨酸的製備
在15ml圓底燒瓶中，混懸0.065g(0.10mmol)化合物1於3ml1N NaOH中，室溫攪拌7.5天。所得黃色溶液用1N HCl酸化，冰浴中冷卻，濾出沉澱，用水洗滌，70℃真空乾燥，得0.021g(42%)化合物2，淺黃色固體。
Rf＝0.09(50%MeOH/CHCl3)m.p.＝160-163℃(dec)質譜(FAB)＝483IR(KBr，cm-1)＝724，766，851，930，990，1020，1079，1098，1206，1298，1354，1401，1436，1503，1533，1567，1612，1656，2873，2935，2975，3209，3331UV(EtOH)1max＝306，235，202(e＝5778，25046，26120)1H NMR(300 MHz，DMSOd6)d0.94-1.12(m，6H)，1.90-2.07(m，2H)，2.30-2.34(m，2H)，3.16-3.49(m，8H)，4.35-4.36(m，1H)，5.59(s，2H)，6.56(s，1H)，7.24(d，J＝7.8Hz，2H)，7.76(d，J＝7.8Hz，2H)，8.48(d，J＝7.6Hz，1H)，10.58(s，1H)，12.15(br s，1H)。
實施例7A.2-三甲乙醯氨基-4-乙硫基-6-乙炔基-吡啶並[2，3-d]嘧啶的製備
將1.0g2-三甲乙醯氨基-4-氧代-6-乙炔基-吡啶並[2，3-d]嘧啶在氮氣下100℃與10ml三氯氧磷及1mlN，N-二乙基苯胺反應20分鐘。真空除去揮發物，殘渣溶於25ml二氯甲烷中，與1ml乙硫醇反應45分鐘，真空去除揮發物。殘餘物溶於二氯甲烷中，用水洗滌兩次，分出有機層，Na2SO4乾燥，真空去除溶劑。殘餘物在矽膠上閃層析，用25%EtoAl/MeCl2洗脫。收集所需部分，真空去除溶劑，兩步得0.262g(22%)黃色固體。
mp120-123℃UV(EtOH)-362，282，244，205質譜(FAB)＝314Rf＝0.48(11Etoac/MeCl2)1H NMR(300 MHz，CDCl3)d1.38(2，9H)，1.51(t，J＝7.4Hz，3H)，3.54(9，J＝7.4Hz，2H)8.28(s，1HO，8.44(d，J＝2.2Hz，1H)，9.09(d，J＝2.2H2，1H)IR(KBr，cm-1)＝666，763，812，847，893，923，978，1020，1137，1198，1224，1346，1376，1407，1551，1707，1743，2967，3236。
B.N-[2-三甲乙醯氨基-4-乙硫基[[吡啶並[2，3-d]嘧啶-6-基]乙炔基]苯甲醯基]-L-穀氨酸二乙酯的製備
將0.009gPdCl2、0.028g三苯膦及3ml乙腈反應30分鐘，然後加入0.30g化合物1、0.45g化合物2、0.005gCuI、7ml乙腈及0.31ml三乙胺，80℃加熱20分鐘。產物溶於過量的二氯甲烷中，用水洗滌，有機層用Na2SO4乾燥，真空去除溶劑。殘餘物在矽膠上閃層析，用25%EtOAc/MeCl2洗脫。收集所需部分，真空去除溶劑，得0.21g(36%)黃色固體。
Rf＝0.42(11EtOAc/MeCl2)UV(EtOH)＝373，326，306，252質譜(FAB)＝619mp＝97-100℃1H NMR(300，CDCl3)d1.26(t，J＝7.1Hz，3H)，1.34(t，J＝7.1Hz，3H)，1.50(s，9H)，1.57(t，J＝6.9Hz，3H)，2.16-2.20(m，1H)，2.23-2.36(M，1H)，2.48-2.59(m，2H)，3.70-3.77(m，2H)，4.14(9，J＝7.2Hz，2H)，4.28(9，J-8.2Hz，2H)，7.90(d，J＝8.2Hz，2HO，8.53(s，1H)，9.16(S，1H)
IR(KBr，Cm-1)＝662，769，792，856，905，979，1020，1132，1202，1261，1304，1332，1372，1400，1496，1552，1597，1660，1735，2976，3378。
C.N-[2-三甲乙醯氨基-[四氫吡啶並[2，3-d]嘧啶-6-基]乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸二乙酯的製備
溶解0.10g化合物1於3ml二氯乙烷中，用15ml乙醇稀釋，所得溶液在60psi壓力下用阮尼鎳氫化，室溫下反應2小時後於60℃三小時。真空去除溶劑。殘餘物閃層析，用5%MeOH/CHCl3洗脫。收集所需部分，真空去除溶劑，得0.025g(27%)黃色固體。
Rf＝0.27 15%MeOH/CHCl3)UV(EtOH)＝298，225，202質譜(FAB)＝619mp＝168-170℃1H NMR(300，CDCl3)d1.21(t，J＝3.4Hz，3H)，1.24-1.39(m，12H)，1.69-1.75(m，2H)，1.80-2.14(m，1H)，2.16-2.19(m，1H，2.30-2.50(m，4H)，2.74-2.82(m，2H)，3.10-3.25(m1H)，3.46-3.51(m，2H)，4.15(9，J＝6.9Hz，2H)，4.26(9，J＝7.0Hz，2HO，4.75-4.85(m，1HO，5.40(s，1H)，7.00(d，J＝7.1Hz，1HO，7.3old，J＝10.0H2，2HO，7.75(s，1HO，7.80(d，J+10.2Hz)IRCKBr，CM-1)＝542，613，785，857，927，1022，1097，1155，1207，1260，1300，1373，1421，1503，1542，1574，1613，1658，1736，2931，3338。
D.N-[2-氨基-[甲氫吡啶並[2，3-d]嘧啶-6-基]乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸的製備
將溶於1ml甲醇中的0.039g化合物1與1.5ml 1 N NaOH反應，攪拌3.5天。用5N HCl酸化到pH6。濾出生成的黃色沉澱，用水洗滌，60℃真空乾燥。
Rf＝0.05(50%MeOH/CHCl3)mp＝250-253℃質譜(FAB)＝428UV(EtOH)＝230，2021H NMR(300，DMsOd6)d1.57(t，J＝7.3，3H)，1.62-1.67(m，2H)，1.92-2.01(m，2H)，2.18-2.21(m，2H)，2.30(t，J＝7.0 Hz，2H)2.48-2.71(m，2H)，2.90-3.10(m，2H)，4.31-4.34(m，1H)6.31(s，2H)，7.29(d，J＝8.0Hz，2H)，7.36(d，J＝1.2Hz，1H)，7.41(d，J＝2.5Hz，1H)，7.77(d，J＝8.0Hz，2H)，8.39(d，J＝7.2Hz，1H)IR(KBr，cm-1)＝583，768，1100，1379，1451，1502，1537，1585，1662，2929，3333。
權利要求
1.具下式的化合物及其藥學上可接受的鹽；
式中Ar是二氫吡咯並、吡咯並、吡啶並、或四氫吡啶並；R1是氫、氯、C1-C4烷硫基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷氨基、或二(C1-C4)烷氨基；及R2是C2-C3烷基。
2.按權利要求1的化合物其中Ar是二氫吡咯並、四氫吡啶並、或吡咯並;R1是氫或氯;和R2是乙基;及其藥學上可接受的鹽。
3.N-[2-氨基-[[二氫吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸及其藥學上可接受的鹽。
4.N-[2-氨基-[[吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸及其藥學上可接受的鹽。
5.N-[2-氨基-[[四氫吡咯並[2，3-d]嘧啶-5-基]乙基]苯甲醯基]-L-穀氨酸及其藥學上可接受的鹽。
6.一種藥物製劑，它含有權利要求1至5中任一權項的化合物作為有效成份，並含有一種或多種藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
7.製備權利要求1至5中任一權項的化合物的方法，該方法包括(a)水解下式的中間體
式中Ar是吡咯並或吡啶並，R1是氫、氯、C1-C4烷硫基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷氨基、或二(C1-C4)烷氨基，R2是C2-C3烷基，Y1是氨基保護基團，和Y2是相同或不相同的羰基保護基團;(b)將步驟(a)產物任選地催化氫化;和(c)將步驟(a)或步驟(b)的產物任意地轉變成藥學上可接受的鹽。
8.按權利要求7的方法製備的具下式的化合物及其藥學上可接受的鹽
式中Ar是二氫吡咯並、吡咯並、吡啶並、或四氫吡啶並;R1是氫、氯、C1-C4烷硫基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷氨基、或二(C1-C4)烷氨基;和R2是C2-C3烷基。
9.具下式的化合物及其藥學上可接受的鹽
式中Y1是氫或氨基保護基團;Z是氫、溴、或碘。
10.具下式的化合物及其藥學上可接受的鹽
式中Ar是吡咯並或吡啶並;R2是C2-C3烷基;Y1是氨基保護基團;和Y2是相同或不相同的羧基保護基團。
全文摘要
本發明涉及N-[2-氨基-4-取代的-[[(吡咯並或吡啶並)[2，3-d]嘧啶基]烷基]苯甲醯基]-L-穀氨酸化合物、合成它們的中間體、含有這些化合物的藥物製劑，及其作為抗腫瘤劑的應用。
文檔編號C07D471/04GK1078235SQ9310320
公開日1993年11月10日 申請日期1993年3月23日 優先權日1992年3月24日
發明者L·S·戈塞特, 石全 申請人:伊萊利利公司