金錢草總黃酮及金錢草總黃酮和總多糖的製備方法
2023-05-12 23:10:06
金錢草總黃酮及金錢草總黃酮和總多糖的製備方法
【專利摘要】本發明提供了金錢草總黃酮，所述總黃酮中，黃酮含量以蘆丁計為50%～60%w/w，槲皮素和山奈素總含量為4%～5%w/w。本發明還提供了從金錢草中同時提取總黃酮和總多糖的方法。本發明還提供了金錢草總黃酮和總多糖的用途。本發明通過對提取、純化方法的考察，成功地從同一批藥材中同時提取分離得到金錢草總黃酮和總多糖，有效利用了藥材資源，節省了生產成本，更適於工業化生產。同時，本發明還發現，金錢草總黃酮和總多糖具有良好的利尿、排石、利膽作用，為臨床用藥提供了指導。
【專利說明】金錢草總黃酮及金錢草總黃酮和總多糖的製備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及金錢草總黃酮；還涉及金錢草總黃酮和總多糖的製備方法和用途，屬於醫藥領域。
【背景技術】
[0002]金錢草來源於報春花科珍珠菜屬植物過路黃lysimachia christinae Hance.全草，又名四川金錢草，為野生品種，主產於四川，江西、湖北、浙江、江蘇、上海、廣東等省亦有分布，其鑑別要點為:草本，葉對生，且為腎圓形，全緣，花放射狀，黃色，蒴果，葉在莖頂端蓮座狀著生，花通常2-8對著生於莖端，葉及花瓣具黑色腺條；莖橫切面輪廓圓形，根莖葉組織中有多數色素細胞，維管束成環狀，無非腺毛，有小腺毛，莖皮層中有分泌道。金錢草能夠治療泌尿結石、膽結石，具有抗炎、鎮痛、抑菌等作用。
[0003]研究發現，金錢草中含有黃酮、揮髮油、多糖、三萜皂苷等多種化學成分。其有效部位還有待進一步研究。同時，目前對黃酮、多糖的提取、純化工藝有報導，但多是將兩種成分分開提取，不利於藥材的利用。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在於提供一種金錢草總黃酮。本發明的另一目的在於提供同時從金錢草中分離製備總黃酮和總多糖的方法，以及金錢草總黃酮和總多糖的新用途。
[0005]本發明提供 了金錢草總黃酮，所述總黃酮中，黃酮含量以蘆丁計為50%?60%w/w，槲皮素和山奈素總含量為4%?5%w/w。
[0006]本發明還提供了同時製備金錢草總黃酮和總多糖的方法，它包括如下操作步驟:
[0007](I)取金錢草，粉碎，加入70%-90%v/v乙醇提取，過濾，藥渣和醇提液備用；
[0008](2)取步驟(I)所得醇提液，濃縮後，上極性大孔吸附樹脂柱，依次用0-70%v/v乙醇洗脫，收集70%v/v乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，乾燥即得金錢草總黃酮；
[0009](3)取步驟(I)所得藥渣，加水提取，合併水提液，濃縮後，加入乙醇至含醇量為70-90%v/v，醇沉，取沉澱，乾燥，即得金錢草總多糖。
[0010]進一步地，步驟(I)中所述乙醇濃度為80%v/v ;步驟(2)中，所述極性大孔吸附樹脂為NKA-9，徑高比為1:(3-15)，依次用水、10%v/v乙醇、70%v/v乙醇洗脫;步驟(3)中，所述含醇量為80%-90%v/v。
[0011]更進一步地，步驟(2)中，洗脫的具體操作如下:
[0012]先用水洗至不發生Molish反應，再依次用4倍柱體積的10%v/v乙醇和4倍柱體積的70v/v乙醇洗脫，收集70v/v乙醇洗脫液。
[0013]更進一步地，所述極性大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:(9-15);優選為1: (9-12)。
[0014]更進一步地，步驟(I)中，加入80%v/v乙醇提取2次，每次1.5h，每次乙醇體積用量為金錢草重量的12倍；
[0015]步驟(3)中，加水煎煮提取2次，每次2h，每次加水量為金錢草重量的10倍。[0016]更進一步地,步驟(2)中，醇提液濃縮至濃度為0.5?0.7g原藥材/ml ;步驟(3)中，水提液濃縮至濃度為0.5?Ig原藥材/ml。
[0017]本發明還提供了上述方法製備的金錢草總黃酮或總多糖。
[0018]本發明還提供了金錢草總黃酮或總多糖在製備治療利尿排石、利膽的藥物中的用途。
[0019]進一步地，所述藥物是治療腎結石的藥物。
[0020]本發明通過對提取、純化方法的考察，成功地從同一批藥材中同時提取分離得到金錢草總黃酮和總多糖，有效利用了藥材資源，節省了生產成本，更適於工業化生產。同時，本發明還發現，金錢草總黃酮和總多糖具有良好的利尿、排石、利膽作用，為臨床用藥提供了指導。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0021]圖1對照品溶液譜圖
[0022]圖2供試品溶液譜圖
[0023]圖3空白溶液譜圖
[0024]圖4大孔樹脂型號考察結果
[0025]圖5槲皮素、山 奈素動態吸附曲線
[0026]圖6總黃酮動態吸附曲線
【具體實施方式】
[0027]實施例1金錢草總黃酮和總多糖的製備
[0028](I)取金錢草，粉碎，加入金錢草重量12倍體積的80%v/v乙醇回流提取2次，每次
1.5h，過濾，藥渣和醇提液備用；
[0029](2)取步驟(I)所得醇提液，濃縮至0.5g原藥材/ml後，上NKA-9大孔吸附樹脂，依次用3-4BV水(Molish反應陰性)、4BV10%乙醇、4BV70%乙醇，洗脫，收集70%v/v乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，乾燥即得金錢草總黃酮；其中，槲皮素、山奈素總含量為4.61%，黃酮含量以蘆丁計為51.39%，出膏率為1.94%.[0030](3)取步驟(I)所得藥渣，加IO倍量水煎煮2次，每次2h，合併水提液，濃縮至0.5g原藥材/ml，加入乙醇至含醇量為80%，室溫(25°C)條件下靜置12h，取沉澱，乾燥，即得金錢草總多糖。多糖的純度為50.79%，出膏率為7.09%。
[0031]實施例2總黃酮製備工藝的研究
[0032]I材料和儀器
[0033]1.1實驗材料
[0034]金錢草藥材(購自四川新荷花中藥飲片股份有限公司，批號1204046);蘆丁對照品(批號:MUST-11040302)、槲皮素對照品(批號:MUST_12020101 )，均購於成都曼斯特生物科技有限公司，山奈素對照品(批號:0773-9910，購於中國藥品生物製品檢定所)；其它試劑均為分析純。
[0035]其中金錢草藥材按照《藥典》2010年版「金錢草」項下相關規定進行全檢，均符合規定；總黃酮含量測定方法自擬，暫定金錢草總黃酮含量不低於1.30%。[0036]1.2 儀器
[0037]UV-1700紫外分光光度計(購買於日本島津公司)；BP211D型電子分析天平(購買於德國Sartorius公司);KQ_400DB型數控超聲波清洗器(購買於崑山市超聲儀器有限公司)。
[0038]2指標部位和成分含量測定方法的建立
[0039]2.1金錢草總黃酮含量測定方法的建立
[0040]2.1.1測定波長的選擇
[0041]分別取空白樣品溶液、對照品溶液、供試品溶液進行全波長掃描，確定測定波長。
[0042]對照品溶液、供試品溶液均在500nm處有較大吸收，而空白在此位置上沒有幹擾，選500nm為測定波長。
[0043]2.1.2對照品溶液配製
[0044]精密稱取12.770mg蘆丁對照品，用乙醇定容至25ml容量瓶中，完全溶解後，取IOml加水定容至25ml容量瓶中，搖勻，即得對照品溶液(0.204mg/ml)。
[0045]2.1.3供試品溶液配製
[0046]取金錢草乙醇提取液2ml(藥液濃度0.5g生藥/ml )，水浴揮幹溶劑，加乙醇約50ml超聲溶解，轉移置IOOml容量瓶中，用乙醇定容至刻度，搖勻，即得。
[0047]2.1.4線性關係考察
[0048]精密吸取對照品溶lml、2mL、3mL、4mL、5mL、6ml，分別編號為1、2、3、4、5、6，分別置於25mL量瓶中，加水至6mL，加5%的亞硝酸鈉溶液lmL，搖勻，放置6分鐘後加10%的硝酸鋁溶液lmL，搖勻，放置6分鐘後再加入氫氧化鈉試液10mL，加水至刻度，搖勻，放置30分鐘後，於500nm處測定吸光度。以對照品濃度(C)為橫坐標，吸收度(A)為縱坐標，繪製標準曲線，進行線性回歸。
[0049]表I對照品不同濃度的吸收值
[0050]
【權利要求】
1.金錢草總黃酮，其特徵在於:所述總黃酮中，黃酮含量以蘆丁計為50%?60%w/w，槲皮素和山奈素總含量為4%?5%w/w。
2.同時製備金錢草總黃酮和總多糖的方法，其特徵在於:它包括如下操作步驟: (1)取金錢草，粉碎，加入70%-90%v/v乙醇提取，過濾，藥渣和醇提液備用； (2)取步驟(I)所得醇提液，濃縮後，上極性大孔吸附樹脂柱，依次用0-70%v/v乙醇洗脫，收集70%v/v乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，乾燥即得金錢草總黃酮； (3)取步驟(I)所得藥渣，加水提取，合併水提液，濃縮後，加入乙醇至含醇量為70-90%v/v，醇沉，取沉澱，乾燥，即得金錢草總多糖。
3.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於:步驟(I)中所述乙醇濃度為80%v/v;步驟(2)中，所述極性大孔吸附樹脂為NKA-9，徑高比為1: (3-15)，依次用水、10%v/v乙醇、70%v/V乙醇洗脫；步驟(3)中，所述含醇量為80%-90%v/v。
4.根據權利要求3所述的方法，其特徵在於:步驟(2)中，洗脫的具體操作如下: 先用水洗至不發生Molish反應，再依次用4倍柱體積的10%v/v乙醇和4倍柱體積的70v/v乙醇洗脫，收集70v/v乙醇洗脫液。·
5.根據權利要求3所述的方法，其特徵在於:所述極性大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:(9-15);優選為 1:(9-12)。
6.根據權利要求2或3所述的方法，其特徵在於:步驟(I)中，加入80%v/v乙醇提取2次，每次1.5h，每次乙醇體積用量為金錢草重量的12倍； 步驟(3)中，加水煎煮提取2次，每次2h，每次加水量為金錢草重量的10倍。
7.根據權利要求2或3所述的方法，其特徵在於:步驟(2)中，醇提液濃縮至濃度為0.5?0.7g原藥材/ml ;步驟(3)中，水提液濃縮至濃度為0.5?Ig原藥材/ml。
8.權利要求2?7任意一項所述方法製備的金錢草總黃酮或總多糖。
9.權利要求8所述金錢草總黃酮或總多糖在製備治療利尿排石、利膽、治療腎結石的藥物中的用途。
【文檔編號】A61P13/12GK103432196SQ201310359013
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月16日 優先權日:2012年12月6日
【發明者】周在富, 劉睿斌, 劉俊敏, 蘇其果, 吳華 申請人:重慶科瑞製藥(集團)有限公司