丹參酸甲酯磺酸鈉的製備方法和應用的製作方法
2023-05-13 01:05:16
丹參酸甲酯磺酸鈉的製備方法和應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了丹參酸甲酯磺酸鈉的製備方法和應用。該製備方法包括下述步驟：採用高效液相反相色譜法分離丹參酮類磺化液，高效液相反相色譜法的條件如下：流動相A為0.1%三乙胺-水、流動相B為0.1%三乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1%二乙胺-水、流動相B為0.1%二乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1%氨水、流動相B為甲醇；檢測波長為271nm，保留時間為35～50min。本發明的製備方法製備能力強、製備量大、周期短、效率高，工藝操作連續性強易於進行質量控制和生產。本發明還可將丹參酸甲酯磺酸鈉作為標準品，對丹參酮IIA磺酸鈉原料藥中的丹參酸甲酯磺酸鈉的含量進行檢測和控制。
【專利說明】丹參酸甲酯磺酸鈉的製備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及藥物領域，具體涉及丹參酸甲酯磺酸鈉的製備方法和應用。
【背景技術】
[0002]丹參,又名血參、赤根、紅根、血生根,為唇形科植物(Salvia miltiorrhza)的根莖，其入藥始載於《神農本草經》。中醫認為，其味苦微寒，具有活血痛經、祛瘀止痛、清心除煩、涼血消癰的功效，適用於治療月經不調、痛經、經閉、崩漏、帶下、冠心病、動脈粥樣硬化、高血脂、心絞痛、跌打淤血、失眠、神經衰弱、B肝等疾病，為婦科、內科及外傷科證屬血瘀兼熱者常用。
[0003]現代藥學研究表明，丹參中化學成分複雜，主要為水溶性丹參酚酸類和脂溶性二萜醌類丹參酮類化合物。其中，丹參酮類化合物主要包括丹參酮1、丹參酮II A、丹參酮
IIB、異丹參酮1、異丹參酮II A、隱丹參酮、異隱丹參酮、甲基丹參酮、羥基丹參酮等。
[0004]丹參酮II A是重要的丹參有效成分。丹參酮II A磺酸鈉(Sodium Tanshinone II ASulfonate，STS)，則是丹參酮II A經磺化後得到的水溶性磺酸鹽。由於磺酸基的引入，在治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞等疾病方面，丹參酮II A磺酸鈉相比丹參酮IIA具有更多的優越性，從而成為主要的心血管類丹參提取物中藥。
[0005]丹參酮IIA是製備丹參酮IIA磺酸鈉的原料，從丹參藥材飲片提取，故難免混有少量、或極低含量其他結構較為相似的組分，如丹參酮II B、丹參酮1、隱丹參酮、紫丹參甲素等。若要製備高純度丹參酮IIA磺酸鈉，則獲得這些極低含量相關組分標準品、以及這些標準品在丹參酮IIA磺酸鈉原`料相關成分含量控制中的應用，具有重要意義。
[0006]但是，由於該類化合物結構複雜，化學全合成難度大，要獲得高純度對照品成為挑戰。有研究報導從丹參酮II A磺酸鈉原料藥中提取相關物質，由於其含量極低，HPLC純度通常不到百分之一，採用高效液相法分離提取，工作量大、難度高。因此，丹參提取物中極低含量組分的高純度標準品規模化製備，及其在丹參酮IIA磺酸鈉原料藥相關物質含量監控中的應用成為本領域長期以來難以解決的技術難題。
[0007]丹參酸甲酯也是丹參脂溶性二萜醌類化合物有效成分之一，並且尚未有技術大量製備丹參酸甲酯磺酸鈉的報導。現有技術中專利CN200610039234.2「一組從丹參中提取的二萜醌類化合物的磺化物在醫藥中的應用」表明丹參酸甲酯磺酸鈉可以應用於治療冠心病(包括心絞痛，心肌梗死，心律失常，心肌血供應不足)和抗菌消炎等。因此，定量控制丹參酸甲酯磺酸鈉，對丹參酮II A磺酸鈉原料的質量保證具有重要意義。
【發明內容】
[0008]本發明所要解決的技術問題在於為了克服現有技術中丹參酸甲酯磺酸鈉提純困難、效率低、提取量低的缺陷，提供了丹參酸甲酯磺酸鈉的製備方法和應用。本發明的製備方法的製備能力強、製備量大、周期短、純度高、效率高，並且減少了有機溶劑的使用，工藝操作連續性強易於進行質量控制和生產。[0009]本發明通過以下技術方案解決上述技術問題。
[0010]本發明的丹參酸甲酯磺酸鈉的結構如下式所示:
[0011]
【權利要求】
1.一種丹參酸甲酯磺酸鈉的製備方法，其包括下述步驟:採用高效液相反相色譜法分離丹參酮類磺化液，即可； 其中，高效液相反相色譜法的條件如下: 流動相A為0.1%三乙胺-水、流動相B為0.1%三乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1% 二乙胺-水、流動相B為0.1% 二乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1%氨水、流動相B為甲醇；百分比為組分佔流動相的體積百分比；檢測波長為271nm，保留時間為35~50min。
2.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，所述的高效液相反相色譜法包括富集純化、中間純化和精製純化，其中，所述的富集純化的條件如下: 流動相A為0.1%三乙胺-水、流動相B為0.1%三乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1% 二乙胺-水、流動相B為0.1% 二乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1%氨水、流動相B為甲醇；流速為80~120mL/min，檢測波長為271nm ； 將丹參酮類磺化液與流動相A按體積比為1:4的混合物上樣25min，80%流動相A+20%流動相B平衡lmin，以流動相A和流動相B按照下述體積比進行線性梯度洗脫40min:80%A+20%B — 40%A+60%B，再以100%流動相B再生lOmin，收集保留時間為42~50min的洗脫液得到富集純化樣品溶液； 所述的中間純化的條件如下: 流動相A為0.1%三乙胺-水、流動相B為0.1%三乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1% 二乙胺-水、流動相B為0.1% 二乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1%氨水、流動相B為甲醇；流速為80~120mL/m in，檢測波長為271nm ； 將所述的富集純化樣品溶液與水按體積比為1:1的混合物上樣10min，80%流動相A+20%流動相B平衡lOmin，以流動相A和流動相B按照下述體積比進行線性梯度洗脫40min:80%A+20%B — 40%A+60%B,再以100%流動相B再生lOmin，收集保留時間為36~44min的洗脫液得到中間純化樣品溶液； 所述的精製純化的條件如下: 流動相A為0.1%三乙胺-水、流動相B為0.1%三乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1% 二乙胺-水、流動相B為0.1% 二乙胺-甲醇；或，流動相A為0.1%氨水、流動相B為甲醇；流速為20~30mL/min，檢測波長為271nm ； 將所述的中間純化樣品溶液與水按體積比為1:1的混合物上樣10min，80%流動相A+20%流動相B平衡lOmin，以流動相A和流動相B按照下述體積比進行線性梯度洗脫30min:80%A+20%B — 50%A+50%B,再以100%流動相B再生lOmin，收集保留時間為45~50min的洗脫液得到精製純化樣品溶液。
3.如權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，所述的富集純化採用的裝置如下:採用PrepStar SD-1製備系統和L&L4002色譜柱，裝PLRP-S反相C18聚合物填料160.0g,動態軸向壓縮系統裝填至壓力650psi，靜態鎖緊至柱床高度25cm ;柱溫為10~30°C ； 和/或，所述的中間純化採用的裝置如下:採用Pr印Star SD-1製備系統和L&L4002色譜柱，裝PLRP-S反相C18聚合物填料160.0g，動態軸向壓縮系統裝填至壓力650psi，靜態鎖緊至柱床高度25cm ;柱溫為10~30°C ; 和/或，所述的精製純化採用的裝置如下:採用PrepStar SD-1製備系統和L&L4001色譜柱，裝反相C18矽膠填料100.0g,動態軸向壓縮系統裝填至壓力650psi，靜態鎖緊至柱床高度25cm ;柱溫為10~30°C。
4.如權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，所述的富集純化中，所述的流速為，10OmT ,/mi η ； 和/或，所述的中間純化中，所述的流速為100mL/min ； 和/或，所述的精製純化中，所述的流速為25mL/min。
5.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，所述的丹參酮類磺化液通過下述步驟製得: (1)將丹參提取物溶解於冰醋酸-乙酸酐的混合溶液中，再加入濃硫酸-冰醋酸的混合溶液，進行反應得到反應液； (2)將石油醚、二氯甲烷和水的混合溶液加入步驟(1)的反應液，再加入氯化鈉溶液，抽濾，得到濾餅； (3)用石油醚-二氯甲烷的混合溶液浸泡步驟(2)的濾餅，抽濾乾燥得粗品； (4)用甲醇溶解步驟(3)的粗品，活性炭過濾，濾液濃縮，冷卻結晶過濾，濾液即為丹參酮類磺化液； 其中，所述的冰醋酸-乙酸酐的混合溶液與所述的丹參提取物的體積質量比為7~，9ml/g ； 所述的冰醋酸-乙酸酐的 混合溶液為冰醋酸與乙酸酐體積比為1:(2~3)的混合溶液； 所述的濃硫酸-冰醋酸的混合溶液為濃硫酸與冰醋酸體積比為1:1的混合溶液；所述的石油醚、二氯甲烷和水的混合溶液為石油醚、二氯甲烷和水的體積比為1:2:(2~2.5)的混合溶液； 所述的石油醚-二氯甲烷的混合溶液為石油醚與二氯甲烷體積比為1:3的混合溶液； 所述的丹參提取物通過下述步驟製得:將丹參用乙醇提取，過濾，濾液濃縮，乾燥，即得。
6.如權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，所述的精緻純化結束後還包括凍幹過程；所述的凍幹過程包括如下步驟:將所述的精製純化樣品溶液濃縮，冷凍乾燥，即可；所述的濃縮的壓力為-0.08MPa~-0.1MPa，所述的濃縮的溫度為30~40°C。
7.丹參酸甲酯磺酸鈉作為標準品在檢測丹參酮IIA磺酸鈉原料藥中丹參酸甲酯磺酸鈉含量的應用。
8.如權利要求7所述的應用，其特徵在於，所述的應用包括下述步驟:將丹參酮IIA磺酸鈉原料藥溶液和丹參酸甲酯磺酸鈉標準品溶液分別進行高效液相色譜檢測，根據丹參酸甲酯磺酸鈉標準品色譜圖的保留時間確定丹參酮IIA磺酸鈉原料藥色譜圖中相關物質的峰，並根據峰面積計算丹參酮IIA磺酸鈉原料藥中丹參酸甲酯磺酸鈉的含量。
9.如權利要求8所述的應用，其特徵在於，所述的高效液相色譜的條件如下:流動相為甲醇:20mmol/L磷酸氫二鈉溶液=65:35，pH為6.0，柱溫為25°C，檢測波長為271nm，流速為，1.0mL/min，進樣量20 μ L，丹參酮IIA磺酸鈉原料藥溶液的濃度為0.2mg/mL，丹參酸甲酯磺酸鈉標準品溶液的濃度為0.2mg/mL ;記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍；控制丹參酮IIA磺酸鈉原料藥溶液中丹參酸甲酯磺酸鈉單個最大雜質峰面積不得大於丹參酸甲酯磺酸鈉標準品溶液峰面積3倍，總雜質峰面積之和不得大於丹參酸甲酯磺酸鈉標準品溶液峰面積8倍。
10.如權利要求9所述的應用，其特徵在於，所述的丹參酸甲酯磺酸鈉標準品溶液為丹參酸甲酯磺酸鈉與流動相混合所形成的溶液； 和/或，所述的丹參酮IIA磺酸鈉原料藥溶液為丹參酮IIA磺酸鈉原料藥與流動相混合所形成的溶液。`
【文檔編號】C07J73/00GK103819533SQ201410093547
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年3月14日 優先權日:2014年3月14日
【發明者】洪勇, 袁永雷, 黃臻輝 申請人:上海第一生化藥業有限公司