基質金屬蛋白酶-10(mmp-10)用於血栓溶解治療的用途的製作方法

2023-05-14 12:08:36 1

專利名稱：：基質金屬蛋白酶-10(mmp-10)用於血栓溶解治療的用途的製作方法基質金屬蛋白酶-10(MMP-10)用於血栓溶解治療的用途發明領域本發明涉及包含基質金屬蛋白酶-10(MMP10)且更具體地為MMP-10及纖溶酶原激活劑組合的藥物組合物及其用於血栓溶解療法和治療的用途。現有技術止血系統是負責維持循環流並防止因血管發病而出血的系統。生理止血同時受促進凝血和纖維蛋白形成以及促成其降解或纖維蛋白溶解兩種機制控制。凝血的過分激活或纖維蛋白溶解的缺陷引起阻塞血管的血塊形成(血管內血栓形成)，導致缺血和壞死。然而，纖溶亢進的總體情形將促成出血。具有動脈血栓形成性質的心血管病是當今病死的主要原因。在該組疾病範圍內，血栓形成過程是發生主要臨床重大急性心血管事件例如急性心肌梗死(MI)或腦血管意外(中風)的主要機制。因此，一般來說，用於治療腦血管意外和血栓性事件的所有策略必須促使受血塊阻塞的動脈通道重新通暢(reroute),從而恢復血流流向組織，由此防止任何更大的損傷。這通常稱為血栓溶解治療。已知纖維蛋白溶解是血栓溶解的基本生化過程，血栓溶解治療首先尋求促進將血塊網羅在一起的纖維蛋白網的降解。已知纖維蛋白溶酶是催化纖維蛋白溶解和降解的酶，完成快速溶解血塊的第一目標就是使纖維蛋白溶酶產生最大化。為此目的，在1980年就提出了能夠激活纖維蛋白溶酶原(無活性的酶原)轉化為活性纖維蛋白溶酶的如下纖溶酶原激活劑的用途組織纖溶酶原激活劑(tPA)、尿激酶纖溶酶原激活劑(uPA)或其它相似激活劑。Baker[Clin.Appl.Thrombosis/Hemostasis,2002;8:291-314]對血栓溶解治療現有技術和溶血栓劑的使用或進展、其臨床應用以及優缺點進行了綜述。Baker還在該文中列出理想的溶血栓劑應該具有的特點l)快速起作用的血栓溶解，以快速恢復動脈或靜脈血流；2)纖維蛋白特異性，以便纖維蛋白溶解僅局限於系統纖維蛋白溶解下降的急性血栓區域；3)作用時間持久；4)血塊特異性，以防止對纖維蛋白原、涉及凝血的其它蛋白產生影響，且不改變初期止血(primaryhemostasis);5)無副4乍用；和6)4氐成本。在急性心肌梗死和急性腦血管缺血(中風)情況下，血栓溶解治療的成功使得患者存活率提高，並使得缺血組織功能更好地恢復[WhiteHD等；N.Engl.J.Med"1987;317:850-855];[SuwanwelaN和KoroshetzWJ;Annu.Rev.Med.,2007;58:89-106]。不幸的是，纖維蛋白溶解治療並未取得成功而且有副作用。幾乎40%的急性心肌梗死患者不響應纖維蛋白溶解治療，因而其不能實現最佳地使血栓阻塞的動脈重新通暢[ArmstrongPW和CollenD;Circulation,2001;103:2862-2866]。為了解決該問題，目前用初期經皮血管成形術(primarypercutaneousangi叩lasty)來代替藥物血栓溶解，因為就降低死亡率、再梗塞和出血而言，再灌注治療比血栓溶解治療更有效。然而，在很多情況下不可能使用血管成形術(沒有可用的血液動力學實驗室或地理距離太遠)，那麼就要進行血栓溶解治療。因此，期望開發使改進血栓溶解療效成為可能的新的治療策略，例如，入院前的纖維蛋白溶解治療、新的溶血栓劑(替奈普酶(tenecteplase))或新的藥物組合(即將纖溶劑降低到一半劑量並增加GPnb/IIIa血小板受體阻滯劑[BrouwerMA等，Heart,2004;90:581-588])。由於出血併發症(尤其是中樞神經系統出血和大出血(majorhemorrhage))，因而還存在與纖維蛋白溶解治療有關的相當高的死亡率，死亡率為2%-14%。在急性腦血管缺血情況下，在症狀發作後的頭3個小時內用重組tPA進行血栓溶解治療是唯一經證明其本身有一定效果的方案。不幸的是，在25%-30%病例中該治療不成功，血塊不能溶解，被阻塞的動脈不能通透。另外，tPA治療具有很高的出血併發症百分率(高達5%會引起症狀性出血)，很多醫生都擔心這種併發症。由於該原因，大部分原本能受益於該治療的患者不能接受該治療。與給予tPA有關的另一問題潛在地比出血風險更嚴重，那就是對中樞神經系統的毒性，這多次成為治療失敗的原因[ChengT.等，Nat.Med.，2006;12:1278、1285]。因此，降低給予tPA的出血風險能改變對該藥安全性的理解並增加其用途。因此，仍有必要繼續選擇有可能通過降低治療中風所需劑量來直接或間接降低tPA毒性的治療劑和組合。已知存在可直接降解纖維蛋白原和纖維蛋白的不同於纖維蛋白溶酶的酶，還對它們用於血栓溶解治療的潛在用途進行了研究。這些酶包括白細胞內源性蛋白酶(彈性蛋白酶和組織蛋白酶G)、蛇毒蛋白酶或水蛭蛋白酶或來自某些細菌的蛋白酶。在EP1060747中，闡述了纖溶性基質金屬蛋白酶的用途，該酶對於蛋白水解性裂解和降解纖維蛋白和纖維蛋白原表現出顯著活性。這些纖溶性金屬蛋白酶包括MMP-2(明膠酶A)、MMP-3(溶基質蛋白酶l(stromelysinl))、MMP-7(溶基質蛋白(matrilysin))、MMP-9和非常獨特的膜型基質金屬蛋白酶MMP-MT1。幾個月後，Bini等彙編並進一步闡述了這些相同的發現[Biochemistry，1999;38:13928-13936]。然而，在這些和以後的其它著述中都沒有提供有關這些纖溶性基質金屬蛋白酶在溶解和降解形成血栓的纖維蛋白方面的有效性的資料，所述有效性是指用於更快速地溶解血塊，或甚至用於對降解涉及系統纖維蛋白原的血塊中的纖維蛋白提供更大的選擇性。本發明目的是提供用於血栓溶解治療的備選治療組合物和組合，它們藉助於選擇性降解纖維蛋白來促進血塊溶解，並有助於使與其它血栓溶解治療有關的副作用(出血、毒性等)最小化。附圖筒述圖l.以405nm處的吸光率值與以分鐘記的實驗持續時間比較來給出復鈣血漿(recalifiedplasma)濁度試驗。A:曲線圖顯示單獨血漿(對照)血塊形成(最大吸光率)或在MMP-10(200nM)或MMP-3(200nM)存在下血塊形成的差異。B:曲線圖描繪復鈣血漿在以下情況下纖維蛋白血塊的形成和溶解存在單獨的或與MMP-10(200nM)聯合的tPA纖溶酶原激活劑(30U/ml)和uPA(135U/ml),還有存在與tPA(30U/ml)聯合的等劑量MMP-3(200nM)。圖2.顯示由tPA(1U/ml)和MMP-10(200nM)單獨或彼此加在一起聯合產生的溶解面積的聚合纖維蛋白平板。圖3.顯示在不同tPA劑量(20、25和30U/ml)下，纖維蛋白血塊溶解時間的差別的濁度試驗。與單獨激活劑比較，MMP-10(200nM)和tPA(20U/ml)的組合縮短了溶解時間。圖4.用溶基質蛋白酶螢光底物^r測MMP-10(100nM)血漿活性。(MAb)的濃度。IgG同種型對照抗體用作對照。圖5.在存在或不存在抑制MMP-10活性的單克隆抗體(MAb)和同種型對照抗體(IgG)下，用MMP-10(200nM)進行血漿復鈣濁度試驗。圖6.闡明在存在或不存在抑制MMP-10活性的單克隆抗體(MAb)和同種型對照抗體(IgG)下，由tPA(1U/ml)和MMP-10(200nM)產生的溶解面積差異的纖維蛋白平板。發明詳述本發明首先涉及基質金屬蛋白酶-10(MMP-10)在製備用於血栓溶解療法和治療的藥物中的用途或應用。MMP-10或溶基質蛋白酶-2位於第11號染色體上，由諸如內皮細胞、單核細胞和成纖維細胞等不同細胞類型表達[MadlenerM和WernerS;Gene,1997;202:75-81]。已知它可被纖維蛋白溶酶、激肽釋放酶、類胰蛋白酶、彈性蛋白酶和組織蛋白酶G激活，並可降解範圍廣泛的胞外基質底物，例如聚集蛋白聚糖、彈性蛋白、纖連蛋白、明膠、層粘連蛋白、生腱蛋白C(tenascin-C)、玻連蛋白(vitronectin)和II、III、IV、IX、X和XI型膠原。另外，MMP-10可激活其它基質金屬蛋白酶，例如proMMP-l、-3、-7、-8和-9[NakamumH等，Eur.J.Biochem"1998;253:67-75]。同樣已知MMP-10參與不同生理過程，例如骨生長或傷口癒合。還發現它在糖尿病性視網膜病變患者的角膜中過表達，並與某些類型的癌症以及淋巴瘤有關。不同的體外研究顯示，在角質形成細胞的培養物中，可由生長因子(角質形成細胞的表皮生長因子或TGF-(3)以及由促炎細胞因子(TNF-a,IL-lp)兩者同時誘導MMP-10的表達[RechardtO等，J.Invest.Dermatol"2000;115:778-787];[LideQ等；Invest.Ophthalmol.Vis.Sci,2003;44:2928-2936]。在本發明先前的出版物中，還闡述了MMP-10的以下方面-可能是血管風險的炎性生物標誌[MonteroI等；J.Am.Coll.Cardiol"2006;47:1369-1378][OrbeJ等；J.Thromb.Haemost.;2007;5:91-97];-可在於三維膠原蛋白凝膠中形成毛細血管的內皮細胞中誘導產生，通過激活MMP-1使其參與毛細血管形成的退行[SaundersWB等；J.Cell.Sci"2005;118:2325-2340];和-其對於維持細胞內聯結(intracellularbond)起主要作用，這種聯結使得在血管發生和重建過程中保持血管的完整性[ChangS等；Cell,2006;126:321-334]。在本發明中，業已試驗了MMP-10和MMP-3對人血漿血塊的形成和溶解的作用以及對聚合的纖維蛋白降解的其它體外模型的作用。發明人已能證實MMP-10沒有任何直接溶血栓活性，且其本身不能降解纖維蛋白原或纖維蛋白。預料不到的是，發明人證實了在血栓溶解激活劑尤其是纖溶酶原激活劑存在下，MMP-10促進纖維蛋白血塊的溶解並縮短溶解時間。因此，MMP-10作為其它血栓溶解激活劑的溶血栓作用促進劑或輔助劑起作用。與此相反，纖溶性基質金屬蛋白酶例如MMP-3，對纖維蛋白和纖維蛋白原具有直接的蛋白水解活性，其本身不能縮短由血栓溶解激活劑提供的血塊溶解時間。在本發明上下文中，"血栓溶解治療，，應理解為在血栓性起因的缺血的臨床狀況中，為再灌注或藉助裂解或快速溶解阻塞循環並危害器官功能的血塊來恢復血流所尋求的治療。具體而言，這些臨床狀況包括急性心肌梗死、腦血栓(更具體的是急性腦梗死或中風)以及其它靜脈血栓栓塞(即肺栓塞或深度靜脈血栓)和外周動脈血栓形成的血栓溶解治療。更具體地說，本發明涉及MMP-10和纖溶酶原激活劑在製備用於通過同時、分開或序貫給藥來進行的血栓溶解治療及療法的藥物或藥物組合物中的用途或應用。在本發明上下文中，纖溶酶原激活劑是通過切割纖維蛋白溶酶原的Arg560和Val1561之間的肽鍵來激活無活性的纖維蛋白溶酶原轉化為纖維蛋白溶酶的化合物。具體而言，這些纖溶酶原激活劑包括尿激酶(uPA)、組織纖溶酶原激活劑(tPA)、鏈激酶和葡萄球菌激酶。在本發明一個具體實施方案中，所述纖溶酶原激活劑為tPA。在另一具體實施方案中，所述纖溶酶原激活劑為uPA。在再一具體實施方案中，前述纖溶酶原激活劑的衍生物或片段可作為纖溶酶原激活劑使用，它們保留其裂解和激活纖維蛋白溶酶原的能力，由此有效促進MMP-10的作用。本領域技術人員自己可容易地了解該作用，即例如通過體外血塊形成和溶解試驗，例如本發明實施例i_4中所述的那些試驗來了解該作用。Longstaff和Thelwell[FEBSLetters,2005;579:3303-3309]綜述了某些纖溶酶原激活劑當前的用途或進展，技術人員可從中選擇將它們與本發明MMP-10聯合使用。有利的情況是，由於不與循環中的纖維蛋白原/纖維蛋白起作用和能夠促進纖溶酶原激活劑的作用，因而MMP-10可以通過保持溶解血塊的功效但不引起系統纖維蛋白溶解，來減少溶血栓劑的劑量，原來的溶血栓劑的劑量將引起很高几率的與出血有關的併發症。同樣地，這可以降低因用藥物例如tPA進行血栓溶解治療而產生的毒性。本發明另一方面還涉及藥物組合，其包含與可藥用賦形劑或溶媒單獨混合或混合在同一個組合物中的MMP-10和纖溶酶原激活劑。所述組合中的纖溶酶原激活劑可為上文提及的那些中的任何一種。前述組合在任何上文所述的前述臨床狀況中用於哺乳動物尤其是人類的血栓溶解療法和治療。所述藥物組合中的MMP-10和纖溶酶原激活劑的來源不是本發明的關鍵方面。活性成分可通過藉助重組或基因工程改造方法或任何其它常規技術從生物流體或組織提取並純化來獲得。可同時、分開或序貫給予所述藥物組合中的活性成分，-現情況(藉助常規藥理學檢測和臨床檢測來確定)而定。根據本發明一個實施方案，活性成分(MMP-10和纖溶酶原激活劑)可包含在一個某種藥物組合物中。在其它情況下，所述活性成分可包含在分開的藥物組合物中，其中的每一種活性成分在其自己的容器中與可藥用賦形劑或溶媒混合。含活性成分的藥物組合物，不管是含一種還是多種活性成分，可調配為固體形式(即在小瓶中呈凍幹形式，隨後在合適的溶液中再配製)，或也可為液體形式。在一個具體實施方案中，這些含活性成分的組合物組成用於血栓溶解療法或治療的藥盒，其可任選裝有其它組分，例如具有用於再配製活性成分的溶液的容器、插管(cannulas)、具有用於靜脈內施用的生理血清的點滴袋(dripbag)和使用說明書等。含活性成分的藥物組合物可按任何合適途徑給予，例如口服、胃腸外、直腸或局部，為此其將包含調配所需給藥形式所需要的可藥用賦形劑和溶媒。在一個具體實施方案中，給藥為例如通過靜脈內注射胃腸外給予，或通過用於在血塊附近的原位給藥的導管插入術來局部給予。當分開給予藥物組合時，兩種活性成分也可同時包含在適於通過不同途徑給予的藥物組合物中。可存在於本發明提供的藥物組合的組合物中的MMP-10和纖溶酶原激活劑的量可在寬廣的範圍內變化，但總是在治療有效量範圍內。用於每一血栓溶解治療方案的本發明藥物組合的組合物的劑量將視多種因素而定，包括患者年齡、狀況、待治療的臨床病症的嚴重程度、給藥途徑及頻率和在各個病例中將要給予的纖溶酶原激活劑的種類。在一個典型實施方案中，纖溶酶原激活劑的量和劑量將比當MMP-10不包括在治療組合中時所用的同樣的纖溶酶原激活劑的量和劑量更低。在另一方面，MMP-10的量將根據人們希望達到的效果來調整通過保持纖溶酶原激活劑的劑量來得到更好的溶解血栓效果；或降低纖溶酶原激活劑的劑量保持溶解血栓的效果。本發明另一方面涉及已經闡述的用於血栓溶解治療的本發明藥物組合或藥盒。本發明另外方面還涉及療法和血栓溶解治療的方法，其由給予患者治療有效量的MMP-10組成。在一個具體實施方案中，所述方法還由通過同時、分開或序貫給藥來給予纖溶酶原激活劑組成。任何前述藥物組合物及組合可用於該方法中。以下實施例闡明本發明，不應該理解為對其範圍的限制。發明實施例本實施例闡明了MMP-10和MMP-3基質金屬蛋白酶直接或與如下某些纖溶酶原激活劑(尿激酶(uPA)和組織纖溶酶原激活劑(tPA))聯合對纖維蛋白溶解活性和血栓溶解活性的作用。以下物質用於實施例-重組MMP-IO，作為含20%-30%成熟的48kDa酶的58kDa酶獲4尋(R&DSystems,910-MP，Abingdon，UK),用TCNB緩沖液再配製(50mMTris-HCl、pH7.5、10nMCaCl2、150mMNaCl、0.05%Brij35)。-重組MMP-3,作為52kDa的酶獲得(R&DSystems,513-MP,Abingdon，UK)，在含12.5nMTris、5nMCaCl2、0.025%Brij35和50%甘油的溶液中提供。-尿激酶(uPA)(VedimPharmaSA;628602,Barcelona,Spain)。-重組纖溶酶原組織激活劑(tPA)(BoerhingerIngelheim;985937Actilyse,Ingelheim,Germany)。為了評估溶血栓活性，按照vondernBorne等先前所述方案[Blood:1995;86:3035-3042]用濁度法來監測血漿樣品中纖維蛋白血塊的形成和溶解。另一方面，為了評估纖維蛋白溶解活性，按照Edward所述方法[J.Clin.Path.,1972;25:335-337]在纖維蛋白板上進行檢測。實施例1:MMP-10和MMP-3對血塊形成和溶解的作用如上文中先前所述，藉助vondarnBorne等所述方法，評估了MMP-0和MMP-3對止血系統的作用。在該方法中，評估血塊形成和溶解期間濁度/吸光率的變化，作為這兩個過程時間長短的指示。在血塊形成和溶解階段，用光度讀數器讀取405nm處的吸光率來測定濁度，我們所用的光度讀數器是ELISA讀數器(FluostarOptima,BMGLabtech)。濁度/吸光率增加表示纖維蛋白血塊形成，同時該參數減小表示血塊溶解。為了形成血塊，使75pl檸檬酸鹽血漿、75|ilHEPES緩衝液(25mMHEPES、137mMNaCl、3.5mMKC1、6mMCaCl2、1.2mMMgCI2和0.1%BSA、pH:7.5)和10piCaCl2150mM在微孔板中混合。讓該板孵育到37。C,每30秒在405nM處測量吸光率，測2小時。為了研究MMP-10對血塊形成的作用，將激活的MMP-10(50、100和200nM)加入到原始血漿和HEPES緩衝液的混合物中。在將MMP-10用於實驗之前，通過在37。C熱處理1小時來使其激活。在平行試驗中，也分析MMP-3(200nM)對血塊形成的作用。在該情況下,先用1mM乙酸對氨基苯汞(p-aminophenylmercuryacetate)(APMA,164610,EMDBiosciences,Lajolla，USA)在37。C作用24小時來激活MMP-3。如圖1A所示，MMP-10在血塊形成速度或在用任何所用劑量達到的最大濁度方面不引起任何變化(表1)。然而，MMP-3使得所形成的血塊的最大吸光率/法度下降50%,很可能是由於其對纖維蛋白原的直接蛋白水解作用。這些結果顯示，與對MMP-3所闡述的不同，MMP-10不改變血塊形成速率，對於纖維蛋白原未表現出任何纖維蛋白溶解活性。然後，進行了纖維蛋白血塊溶解速率的研究，最後，如同上文中剛剛所述部分，使用存於HEPES緩衝液中的復鈣血漿，向其同時加入MMP-10(或根據具體情況可為MMP-3)、纖溶酶原激活劑，以便在濁度測定開始時選擇30U/ml的組織纖溶酶原激活劑(tPA)或135U/ml尿激酶(uPA)。在劑量-響應研究之前測定待使用的tPA和uPA的濃度，其中所選擇的劑量為在2小時(2h)期間內完全溶解纖維蛋白血塊的劑量。如圖1B和表1所示，MMP-10在缺乏tPA和uPA時不引起纖維蛋白血塊的溶解，而在tPA或uPA激活劑存在下，其導致纖維蛋白血塊溶解速率顯著提高。用所試驗的最大MMP-10劑量(200nM),在tPA存在下溶解時間(一半血塊溶解的時間)縮短15分鐘(52.9分鐘對68.3分鐘，pO.Ol)，在uPA存在下縮短5分鐘(42分鐘對47.5分鐘，p<0.05)。在tPA存在下，這種溶解時間的減少為縮短20。/Q,用uPA則縮短10%。與此相反，MMP-3在tPA存在下不改變血塊溶解速率。這些發現表明，與MMP-3所不同的是，MMP-10不能消化纖維蛋白但能提高纖溶酶原激活劑的纖維蛋白溶解作用和纖維蛋白溶解(tPA或uPA)。由於不具有作用於內源纖維蛋白溶解的能力，MMP-10將防止或減弱出血發作，這使它成為用作血栓溶解治療輔助劑的良好候選者。表1.在纖溶酶原激活劑(tPA或uPA)存在下纖維蛋白血塊溶解時間(以分4中表示)tableseeoriginaldocumentpage14實施例2:MMP-10對纖維蛋白降解的作用根據前述Edward的方法，通過測量聚合纖維蛋白板上產生的暈圈面積或溶解面積來進行纖維蛋白溶解作用的研究。用於37。C存於巴比妥緩衝液(BioWhittaker,12-624E，Cambrex，MD，USA)的6mg/ml人纖維蛋白原溶液(Sigma,F3879,SaintLouis,MO，USA)製備纖維蛋白板，將該溶液過濾，並向其加入等體積CaCl2(50mM)。將該溶液(6ml)與1個國際單位(NIH單位)凝血酶(EnzymeResearchLab;HT1200a，Swansea,UK)混合，使其聚合6小時。為了評估其對纖維蛋白溶解的能力，將tPA(1U/ml)、MMP-10(200nM)或二者組合加入到不同的纖維蛋白板中。如圖2所示，MMP-10單獨不引起聚合纖維蛋白溶解，同時tPA產生明顯的暈圏。然而，tPA和MMP-10組合顯著增加聚合纖維蛋白溶解面積(188.6%)，這一事實確證與作為纖溶劑的纖溶酶原激活劑聯用的MMP-10具有促進纖維蛋白溶解的作用。實施例3:聯合給予MMP-10和溶血栓劑(tPA或uPA)對血塊溶解的作用基於MMP-10對涉及tPA的溶解作用有影響，提出了這樣的問題確定MMP-10是否能降低tPA(其引起出血和神經毒性相關問題)劑量，以及確定是否能將MMP-10用作輔助劑以達到同樣的溶血栓效果。在按照上文實施例1所述的方法進行的濁度試驗中，我們發現，與tPA聯合的MMP-10(200nM)的存在，可使tPA劑量降低33%(從30到20U/ml)，而達到同樣的血塊溶解時間(圖3,表1)。該結果表明，在需要血栓溶解治療的受試者中，MMP-10通過同時降低tPA劑量來提供增加纖維蛋白溶解和血塊溶解的方法，因此，使得由tPA引起的出血和毒性相關問題最小化。實施例4:用抗MMP-10抗體抑制由tPA引起的血塊纖維蛋白溶解和血塊溶解才艮據實施例1和2的結果，通過在有(1:2比率)和沒有封阻MMP-10活性的單克隆抗體(R&Dsystems,MAB9101，Abingdon,UK)存在下，或在以與所述抗體同樣濃度的IgG2B鼠同種型對照抗體(eBioscience,16-4732，美國加利福尼亞州的聖地牙哥)存在下，同時加入不同劑量的活性MMP-IO，來進行MMP-IO對由tPA引起的血塊纖維蛋白溶解的影響的特異性的分析。預先在用抗MMP-10抗體(R&DSystems,Clonl10343)覆蓋的微盤(microdish)上，使用溶基質蛋白酶螢光底物(MCA-Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nval-Trp-Arg-Lys-[DNP]-NH2)(RES002,Abingdon,UK)進行MMP-10活性測試，分析了封阻酶活性的酶:抗體比率[Lombard等；Biochimie,2005;87:265-272)。在分光螢光計(SpectraMAXGeminiXS,MolecularDevices,美國加利福尼亞州)上測量螢光(320nm激發光和405nM發射光)1小時，發現1:2比率完全抑制活性酶濃度(圖4)。由於在抗MMP-10抗體存在下效果相反，該結果顯示MMP-10對纖維蛋白溶解的輔助作用是特異性的。當加入所述抗體封阻血漿MMP-10內源活性(endogenousactivity)時，這種效果非常顯著(圖5)。結果顯示當血漿中不存在MMP-10時，即使在tPA或uPA存在下，也將防止纖維蛋白血塊溶解(表1)。這些結果進一步證實了聚合纖維蛋白板試驗。如圖6所示，在抗MMP-10抗體存在下，由tPA:MMP-10組合引起的溶解面積減少了(91.2%對188:6%),而對照抗體沒有這種作用(184.6%)。該數據證實了用MMP-10抑制劑抗體封阻纖維蛋白血塊的藥理學溶解。權利要求1.基質金屬蛋白酶-10即MMP-10在製備用於血栓溶解治療的藥物中的用途。2.權利要求1的用途，其特徵在於所述藥物還包含纖溶酶原激活劑。3.權利要求2的用途，其特徵在於所述藥物組分被同時、分開或序貫給予。4.權利要求2的用途，其特徵在於所述纖溶酶原激活劑選自tPA組織纖溶酶原激活劑、uPA尿激酶激活劑、鏈激酶、葡萄球菌激酶和保留其激活纖維蛋白溶酶原能力的所述纖溶酶原激活劑的衍生物或片段。5.權利要求4的用途，其特徵在於所述纖溶酶原激活劑選自tPA或保留其激活纖維蛋白溶酶原能力的tPA衍生物或片段。6.權利要求5的用途，其特徵在於所述纖溶酶原激活劑為tPA。7.權利要求4的用途，其特徵在於所述纖溶酶原激活劑選自uPA或保留其激活纖維蛋白溶酶原能力的uPA衍生物或片段。8.權利要求7的用途，其特徵在於所述纖溶酶原激活劑為uPA。9.同時、分開或序貫給予的聯合藥物，其特徵在於所述聯合藥物包括與可藥用賦形劑或溶媒混合的基質金屬蛋白酶-10即MMP-10和纖溶酶原激活劑。10.權利要求9的聯合藥物，其特徵在於所述基質金屬蛋白酶-10即MMP-10與所述纖溶酶原激活劑分開或處於同一組合物中。11.權利要求9或10的聯合藥物，其特徵在於所述纖溶酶原激活劑選自tPA組織纖溶酶原激活劑、uPA尿激酶、鏈激酶、葡萄球菌激酶或保留其激活纖維蛋白溶酶原能力的所述纖溶酶原激活劑的衍生物或片段。12.權利要求11的聯合藥物，其特徵在於所述纖溶酶原激活劑選自tPA或保留其激活纖維蛋白溶酶原能力的tPA衍生物或片段。13.權利要求12的聯合藥物，其特徵在於所述纖溶酶原激活劑為tPA。14.權利要求11的聯合藥物，其特徵在於所述纖溶酶原激活劑選自uPA或保留其激活纖維蛋白溶酶原能力的uPA衍生物或片段。15.權利要求14的聯合藥物，其特徵在於所述纖溶酶原激活劑為uPA。16.—種藥盒，其特徵在於所述藥盒包含所述基質金屬蛋白酶-10即MMP-10和纖溶酶原激活劑，所述基質金屬蛋白酶-10和纖溶酶原激活劑作為聯合藥物以同時、分開或序貫給藥用於血栓溶解治療。17.權利要求16的藥盒，其特徵在於所述基質金屬蛋白酶-10即MMP-10與所述纖溶酶原激活劑分開或處於同一個組合物中。18.權利要求16的藥盒，其特徵在於所述纖溶酶原激活劑選自tPA組織纖溶酶原激活劑、uPA尿激酶激活劑、鏈激酶、葡萄球菌激酶和保留其激活纖維蛋白溶酶原能力的所述纖溶酶原激活劑的衍生物或片段。19.權利要求18的藥盒，其特徵在於所述纖溶酶原激活劑選自tPA或保留其激活纖維蛋白溶酶原能力的tPA衍生物或片段。20.權利要求19的藥盒，其特徵在於所述纖溶酶原激活劑為tPA。21.權利要求18的藥盒，其特徵在於所述纖溶酶原激活劑選自uPA或保留其激活纖維蛋白溶酶原能力的uPA衍生物或片段。22.權利要求21的藥盒，其特徵在於所述纖溶酶原激活劑為uPA。23.用於血栓溶解治療的權利要求9-15中任一項的聯合藥物或權利要求16-22中任一項的藥盒。全文摘要本發明涉及基質金屬蛋白酶(MMP-10)在製備用於血栓溶解治療的藥物組合物中的用途，對於所述組合物還可能含有纖溶酶原激活劑。另外，本發明涉及所述藥物組合物用於血栓性疾病的治療。文檔編號A61K38/48GK101678089SQ200880013936公開日2010年3月24日申請日期2008年2月11日優先權日2007年2月26日發明者J·A·帕拉莫弗南德茨,J·A·羅德裡古茨加西亞,J·奧貝洛帕特圭,R·瑟拉諾瓦加斯申請人:西馬生物醫學計劃公司