一種毛細管內蛋白—量子點相互作用的檢測方法
2023-05-14 15:52:01 2
一種毛細管內蛋白—量子點相互作用的檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種毛細管內蛋白—量子點相互作用的檢測方法，屬於納米生物【技術領域】。其特徵在於將蛋白與量子點在毛細管內偶聯，通過螢光檢測。它比毛細管外偶聯更加靈敏、清晰。該方法快速準確、操作簡單，拓寬了毛細管電泳在生物分析中的應用，並為量子點生物探針的進一步應用提供了參考。
【專利說明】一種毛細管內蛋白一量子點相互作用的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及納米生物【技術領域】，具體涉及一種毛細管內蛋白一量子點相互作用的檢測方法。
【背景技術】
[0002]量子點(QDs)作為一種新型螢光材料，具有激發光譜寬、發射光譜窄而對稱、顏色可調、抗光漂白和螢光壽命長等優點。這些優越的性能使QDs廣泛用於細胞成像和生物標記，逐漸成為細胞成像研究中非常重要的一種探針工具。
[0003]目前，在生物標記中應用最廣泛的是金屬有機溶劑法合成的脂溶性CdSe/ZnS量子點。因此，可通過親水性配體交換、兩親性配體封裝、矽烷塗層等方法將脂溶性量子點轉換為水溶性量子點。水溶性量子點可與蛋白通過共價偶聯或靜電吸附的方法製備量子點螢光探針。
[0004]另一方面，毛細管電泳作為一種高分辨、高靈敏、高速度、高通量及低樣品消耗的微分離技術，在生物分析領域具有廣闊的應用前景。它對於檢測QDs與蛋白偶聯是一種強有力的、高解析度的方法(Jianhao Wang, et al.J Nanopart Res, 2013，15，1914)。毛細管電泳可很好地分離QDs與生物偶聯物。目前，毛細管電泳的檢測方法主要有紫外檢測、電化學檢測、化學發光檢測、質譜檢測和螢光檢測。其中，螢光檢測法的檢出限比紫外檢測小3個數量級左右，對QDs與蛋白相互作用的研究十分靈敏。因而，我們用螢光毛細管電泳來研究蛋白一量子點在毛細管內的相互作用。蛋白與QDs在毛細管中進行相互作用，分離，檢測，實現了相互作用檢測的快速化、自動化、微型化。
【發明內容】
[0005]本發明要解決的技術問題是:為了研究蛋白與QDs更細微的動力學變化的問題，提高其在生物領域中的應用。為解決上述技術問題，本發明提供一種毛細管內蛋白一量子點相互作用的檢測方法，該方法比毛細管外偶聯後檢測更靈敏，變化更清晰，可以更精確的觀察出蛋白與QDs結合的微小變化。
[0006]本發明解決其技術問題所採用的技術方案是:一種毛細管內蛋白一量子點相互作用的檢測方法，其特徵在於:將蛋白與QDs在毛細管內偶聯、分離並通過螢光檢測其變化。
[0007]本發明所述的蛋白與量子點進樣順序應先進電泳速度慢的樣品，再進電泳速度快的樣品，進樣的時間差應控制在兩個樣品能在有效長度內相互作用，且兩者的進樣時間與進樣量一致。
[0008]本發明中所述量子點包括但不限於含有Cd的量子點，如CdSe、CdTe、CdS或CdSe/ZnS。
[0009]本發明中所述的蛋白包括但不限於用還原劑NaBH4變性的蛋白，如變性牛血清蛋白(dBSA)、變性卵清蛋白或變性轉鐵蛋白。
[0010]採用上述的技術方案後，本發明取得的有益效果是，本發明提供的毛細管內蛋白一量子點相互作用的檢測方法，操作簡單，可重複性高，可精確的觀察出蛋白與QDs相互作用，比毛細管外偶聯後檢測更準確，更靈敏，更清晰，進一步拓展了量子點作為納米螢光探針在生物標記領域中的應用。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0011]下面結合附圖和實施例對本發明進一步說明。
[0012]圖1是dBSA與QDs (摩爾比為32:1)在毛細管內相互作用的電泳圖:進樣間隔時間分別為(a) Os (b) 1s (c) 20s (d) 30s (e) 40s (f) 50s (g) 60s。
[0013]圖2是毛細管內相互作用SQDs/St(rtal比值隨進樣間隔時間的變化。Sais是QDs電泳峰的積分面積，Stotal是QDs及複合物的電泳峰積分面積。
[0014]圖3是卵清蛋白與QDs (摩爾比為32:1)在毛細管內相互作用的電泳圖:進樣間隔時間分別為(a) Os (b) 1s (c) 20s (d) 40s。
【具體實施方式】
[0015]實施例
[0016]本發明將就以下實施例作進一步說明，但應了解的是，這些實施例僅為例示說明之用，而不應被解釋為本發明實施的限制。
[0017]實施例1
[0018]dBSA與QDs (摩爾比為32:1)毛細管內相互作用檢測
[0019]1、脂溶性QDs經GSH轉換為水溶性QDs
[0020]將18mg GSH, 5mg KOH, 250 μ L甲醇混勻，取40 μ L混合溶液加入200 μ L脂溶性量子點中，振蕩30min。振蕩結束後，加入200 μ L I mM NaOH，脂溶性量子點即轉移到水相中。取出上層量子點，加入ImL甲醇與30 μ L NaCl溶液(30mg/mL)沉澱，溶於pH 7.4硼酸緩衝液中。反覆沉澱兩次，最後溶於200 μ L pH 7.4硼酸緩衝液中。轉換後QDs的濃度不變。
[0021]2、dBSA溶液的製備
[0022]dBSA溶液通過NaBH4與BSA反應製得。主要的步驟如下:0.33g BSA溶於10mLPH 7.4硼酸緩衝液中，然後邊攪拌邊加入0.008g NaBH4,室溫下攪拌lh，然後升至70°C直至沒氣體(H2)產生。最後dBSA溶液的濃度為5X10—5mol/L。
[0023]3、螢光毛細管電泳分析檢測
[0024]在毛細管內檢測時，先進樣QDs(高度10cm，進樣1s)，間隔不同時間後再進樣dBSA(高度1cm,進樣10s)，dBSA與QDs的摩爾比為32:10
[0025]我們在毛細管內檢測時，QDs與dBSA進樣間隔時間分別為Os、10s、20s、30s、40s、50s、60s，發現在毛細管內檢測時QDs的電泳峰迅速的減小(圖LP1)，複合物的電泳峰增大(圖1，P2)，在間隔30s時幾乎已看不到QDs的電泳峰(圖1)。根據SWs/Sttal的比值與進樣間隔時間的關係，得到圖2中的曲線，我們發現在進樣間隔時間大於40s時，反應已經完全，QDs完全參與反應。
[0026]實施例2
[0027]卵清蛋白與QDs (摩爾比為32:1)毛細管內相互作用檢測
[0028]卵清蛋白經NaBH4變性，其餘步驟同實施例1。我們在毛細管內檢測時，QDs與dBSA進樣間隔時間分別為0s、10s、20s、40s，發現在毛細管內檢測時QDs的電泳峰迅速的減小，複合物的電泳峰增大，在間隔40s時已完全看不到QDs的電泳峰(圖3)。
[0029]以上述依據本發明的理想實施例為啟示，通過上述的說明內容，相關工作人員完全可以在不偏離本項發明技術思想的範圍內，進行多樣的變更以及修改。本項發明的技術性範圍並不局限於說明書上的內容，必須要根據權利要求範圍來確定其技術性範圍。
【權利要求】
1.一種毛細管內蛋白一量子點相互作用的檢測方法，其特徵在於，將蛋白與量子點在毛細管內偶聯、分離並通過螢光檢測。
2.根據權利要求1所述的一種毛細管內蛋白一量子點相互作用的檢測方法，其特徵在於所述的蛋白與量子點進樣順序應先進電泳速度慢的樣品，再進電泳速度快的樣品；蛋白與量子點進樣的時間差應保證兩者能在有效長度內相互作用。
3.根據權利要求1或2所述的一種毛細管內蛋白一量子點相互作用的檢測方法，其特徵在於所述的蛋白與量子點進樣的時間與進樣量一致。
4.根據權利要求3所述的一種毛細管內蛋白一量子點相互作用的檢測方法，其特徵在於所述的量子點為含有CM的量子點。
5.根據權利要求4所述的一種毛細管內蛋白一量子點相互作用的檢測方法，其特徵在於所述含有Cd的量子點是CdSe、CdTe, CdS或CdSe/ZnS。
6.根據權利要求3所述的一種毛細管內蛋白一量子點相互作用的檢測方法，其特徵在於所述的蛋白為用還原劑NaBH4變性的蛋白。
7.根據權利要求6所述的一種毛細管內蛋白一量子點相互作用的檢測方法，其特徵在於所述用還原劑NaBH4變性的蛋白是變性牛血清蛋白、變性卵清蛋白或變性轉鐵蛋白。
【文檔編號】G01N21/64GK104237181SQ201410444544
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年9月2日 優先權日:2014年9月2日
【發明者】王建浩, 蔣鵬舉, 邱琳, 李靜燕, 滕一萬, 王車禮, 秦玉琴, 李進晨 申請人:常州大學