一種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑及其製備方法
2023-05-14 21:23:16 3
專利名稱：一種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種鹽酸小檗鹼，尤其是涉及一種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑及其製備方法。
背景技術：
小檗鹼是從毛蓖科黃連等植物根莖中提取的一種季胺類異喹啉生物鹼，英文名Berberine，又稱黃連素，臨床主要用於腸道感染，還可廣泛地應用於各種心血管疾病。近年國內外研究結果表明，小檗鹼對糖尿病有確切療效，是DB領域研究最熱的中藥單體， 但是至今未被廣泛應用於臨床。這主要是因為小檗鹼屬於季銨型生物鹼，易被胃腸道中的粘蛋白吸附而影響吸收，難以達到發揮藥理作用的有效濃度，其體內的血藥濃度水平很低，又不宜肌肉注射和靜脈給藥，否則易引起過敏性休克及藥疹等不良反應。國內外市場上主要是傳統劑型，如片劑或膠囊，這些劑型由於肝臟的首過效應和生物利用度低，病人用藥次數頻繁，耐受性差。因此目前改善小檗鹼的口服吸收是擴大臨床應用的瓶頸。固體脂質納米粒SLN (solid lipid nanoparticles, SLN)是近年正在發展的新一代亞微粒給藥系統，以固態的天然或合成的類脂(如卵磷脂、三醯甘油等)為載體，將藥物包裹於類脂核中製成粒徑約為50 IOOOnm的固體膠粒給藥體系。SLN與乳劑、脂質體相似，使用生理相容耐受性好、無生物毒性的脂質作為基質。同時，具備納米粒的物理穩定性高、促進吸收、提高生物利用度，節約資源，控釋以及良好的靶向性，運載藥物通過生物屏障，降低不良反應等優勢，又兼具了脂質體、乳劑的毒性低、能大規模生產的優點，是一種極有發展前景的新型給藥載體，尤其是在中藥領域，很多學者都在探討通過這一輸送系統，主要是使中藥活性成分能更好的吸收，使它們能夠跨過生物膜，進而增強生物利用度，使活性成分的量在作用部位(肝、腦、腎、心臟等)更多或用量減少，因而達到增效減毒的目的。固體脂質納米粒的製備方法有高壓乳勻法、乳化沉澱法、微乳法及溶劑擴散法。溶劑擴散法即將藥物與脂質、乳化劑溶於有機溶劑中構成油相，將表面活性劑溶於水中構成水相，加熱至同等溫度，在機械攪拌下將油相緩慢注入到水相中，繼續攪拌將有機溶劑蒸發，冷卻，過濾即得初分散體，加入凍幹保護劑後冷凍乾燥，即得固體脂質納米粒。此法簡便易行，可操作性強，易於工業化生產。與小梁喊相關的已有報導的納米化劑型有中國專利CN200810200546. 6公開一種超臨界二氧化碳法製備納米鹽酸小檗鹼脂質體的方法；中國專利CN200610104418. 2公開一種鹽酸黃連素納米乳劑及其製備方法；中國專利CN 01100295. 6公開一種納米複方黃連素製劑藥物及其製備方法；前兩者一個是脂質體，一個是乳劑，後者是複方，即多種藥物的混合體，而不是針對小檗鹼這一單一有效成分，針對性不強
發明內容
本發明的目的在於針對現有的小檗鹼固體脂質納米製劑存在吸收困難、體內生物利用度低等缺點，提供方法簡單、生產成本低、便於攜帶運輸、適於任何給藥途徑的一種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑。本發明的另一目的在於提供一種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑的製備方法。所述一種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑，按質量比的原材料組成為
鹽酸小檗鹼I
固體脂質、 I、
乳化劑5 15
表而活性劑I 3所述固體脂質可選自單硬脂酸甘油酯、雙硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、硬脂酸、三肉豆蘧酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、棕櫚酸棕櫚酯、山嵛酸甘油酯(C0MPRIT0L888)等中的至少一種；所述乳化劑可選自卵磷脂、蛋黃卵磷脂、吐溫-80、辛酸奎酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol)、三辛酸甘油酯、月桂酸聚乙二醇甘油酯(GELUCIRE44/14)等中的至少一種；所述表面活性劑可採用泊洛沙姆188等；所述一種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑的製備方法，包括以下步驟I)將固體脂質和乳化劑加入有機溶劑，待固體脂質完全溶解後加入鹽酸小檗鹼，溶解後得油相；2)將步驟I)所得的油相加入到含表面活性劑的水相中，攪拌至有機溶劑完全除去;3)將步驟2)所得的物料探頭超聲，冷卻後，採用微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混懸液；4)將步驟3)所得鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混懸液加入凍幹保護劑，冷凍乾燥即得鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑，呈納米粒凍乾粉。在步驟I)中，所述將固體脂質和乳化劑加入有機溶劑後，可在溫度80°C，轉速為300r/min恆溫磁力攪拌器攪拌；所述有機溶劑可選自丙酮、氯仿與無水乙醇的的混合溶劑。在步驟2)中，所述水相的溫度可為80°C ;所述含表面活性劑的水相中的水體積可為油相的2倍；所述攪拌的條件可為恆溫攪拌2h。在步驟3)中，所述微孔濾膜可採用0. 45 y m微孔濾膜。在步驟4)中，所述凍幹保護劑的加入量按質量百分比可為鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混懸液的10% 15% ;所述凍幹保護劑可選自甘露醇、海藻糖、葡萄糖等中的任一種。本發明所述鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒的基質為生理相容性的可生物降解的脂質材料，無毒、無刺激性，所加組分均為藥劑學上廣泛應用的輔料。藥物與固體脂質的比例通過實驗優化得到，鹽酸小檗鹼屬難溶性藥物，很難與水溶性或脂溶性的輔料相容，為了得到較滿意的結果，除了加入起到穩定粒子作用的卵磷脂外，還可加入具有增溶作用的乳化劑即吸收促進劑辛酸奎酸聚乙二醇甘油酯，可提高小檗鹼在油相中的溶解度，又使油相與水相有一定的互溶性，能夠在納米粒表面形成一層乳化膜，將小檗鹼包裹其中，延緩藥物的洩露，促進吸收。本發明採用表面活性劑吸附於脂質納米粒表面，以使脂質納米粒達到緩釋的目的。鹽酸小檗鹼固體脂質納米初分散體攪拌後，使用探頭超聲措施，有效減小納米粒粒徑，使其分散均勻。凍幹法是一條可在較長時間內增加SLN化學和物理穩定性的可行途徑，凍幹保護劑的加入可以降低水的滲透活性、結晶作用，對於SLN的聚集和獲得產品乾燥後更好的再分散性是十分必要的，凍幹後的固體狀態的納米粒可適用於任何給藥途徑，也可進一步用任意比例的水分稀釋成穩定的任意濃度的納米初分散體，並製成各種相應劑型，如丸劑、片劑或膠囊等。本發明提供一種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑及其製備方法，經文獻檢索，用溶劑擴散法將小檗鹼製成固體脂質納米粒並通過體內藥物代謝動力學來闡明其體內行為尚
未見報導，製成的小檗鹼固體脂質納米粒可促進吸收，提高生物利用度，增強藥效。中國專利CN200810200546. 6、CN200610104418. 2前者是脂質體，後者是乳劑；中國專利CN 01100295. 6是複方，即多種藥物的混合體，而不是針對小檗鹼這一單一有效成分，針對性不強。另外，處方組成、製備方法及給藥途徑與本發明有顯著差異。
圖I為鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒凍乾粉。圖2為鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒透射電鏡照片。在圖2中，標尺為50mm。圖3為鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒粒徑測定結果。在圖3中，橫坐標為粒徑Size(d, nm),縱坐標為數量百分比Number (%)。圖4為鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒電位測定結果。在圖4中，橫坐標為電壓ZetaPotential (mV),縱坐標為總計數。圖5為X衍射結果。在圖5中，橫坐標為衍射角0 (degree)，縱坐標為衍射強度Intensity (a. u),曲線 a 為 KB,曲線 b 為 BBR,曲線 c 為 BBR-SLN0圖6為H1NMR結果。在圖6中，橫坐標為化學位移(ppm)，縱坐標為峰強度(rel)；上曲線為BBR，中曲線為KB，下曲線為SLN。圖I為鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒體內血藥濃度-時間曲線。在圖I中，橫坐標為時間Time (h)，縱坐標為濃度C (ng/mL);標記 為BBR，標記■為BBR-SLN。
具體實施例方式將鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒通過下列實施例進一步說明本發明的技術方案，但本發明的保護範圍，不局限於此。實施例I鹽酸小檗鹼IOmg
單硬脂酸甘油酯60mg
卵鱗脂60mg
泊洛沙姆20mg
按上述處方稱取鹽酸小檗鹼、單硬脂酸甘油酯加入丙酮10mL，於80°C加熱溶解；卵磷脂加入乙醇lmL，超聲IOmin溶解；將上述兩種溶液混勻作為有機相；另取泊洛沙姆溶於20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恆溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混懸液。實施例2
鹽酸小檗鹼IOmg
三棕櫚酸甘油酯60mg
卵磷脂60mg
泊洛沙姆20mg按上述處方稱取鹽酸小檗鹼、三棕櫚酸甘油酯、卵磷脂加入IOmL按I : I配比的丙酮和乙醇混合溶液中，於80°C加熱溶解；將上述兩種溶液混勻作為有機相；另取泊洛沙姆溶於20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恆溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混懸液。實施例3
鹽酸小檗鹼IOmg
山嵛酸酸討油酯90mg
卵磷脂60mg
泊洛沙姆20mg按上述處方稱取鹽酸小檗鹼、單硬脂酸甘油酯、卵磷脂加入IOmL按I : I配比的丙酮和乙醇混合溶液中，於80°C加熱溶解作為有機相；另取泊洛沙姆溶於20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恆溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混懸液。實施例4鹽酸小檗鹼IOmg
二棕櫚酸甘油酯60mg
卵磷脂60mg
LabrasolI OOiaL
泊洛沙姆20mg按上述處方稱取鹽酸小檗鹼、三棕櫚酸甘油酯、卵磷脂、Labrasol加入IOmL按I I配比的氯仿和乙醇混合溶液中於80°C加熱溶解作為有機相；另取泊洛沙姆溶於20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恆溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混懸液。·
實施例5
鹽酸小檗鹼IOmg
單硬酯酸甘油酯90mg
LabrasolI OOpL
卵磷脂60mg
泊洛沙姆20mg按上述處方稱取鹽酸小檗鹼、單硬脂酸甘油酯、卵磷脂、Labrasol加入IOmL按I I配比的氯仿和乙醇混合溶液中；將上述兩種溶液混勻作為有機相；另取泊洛沙姆溶於20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恆溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混懸液。實施例6
鹽酸小檗鹼IOmg
山i#酸貨油酯IOOmg
卵磷脂50mg
吐溫80100叫
泊洛沙姆20mg按上述處方稱取鹽酸小檗鹼、山嵛酸甘油酯、卵磷脂、Labrasol加入IOmL按I : I配比的氯仿和乙醇混合溶液中；將上述兩種溶液混勻作為有機相；另取泊洛沙姆溶於20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恆溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混懸液。實施例7鹽酸小檗鹼IOmg
單硬酯酸y-油酯60mg
山箭酸甘油酯60mg
卵磷脂50mg
泊洛沙姆30mg按上述處方稱取鹽酸小檗鹼、單硬脂酸甘油酯、山嵛酸甘油酯、卵磷脂加入IOmL按I : I配比的氯仿和乙醇混合溶液中；將上述兩種溶液混勻作為有機相；另取泊洛沙姆溶於20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恆溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混 懸液。實施例8
鹽酸小檗鹼IOmg
三棕櫚酸甘油酯90mg
GELUCIRE44/1450 mg
卵磷脂50mg
泊洛沙姆20mg按上述處方稱取鹽酸小檗鹼、三棕櫚酸甘油酯、GELUCIRE44/14、卵磷脂加入IOmL按I : I配比的氯仿和乙醇混合溶液中；將上述兩種溶液混勻作為有機相；另取泊洛沙姆溶於20mL水中作為水相，攪拌條件下將有機相用針頭注入80°C水相中，恆溫攪拌2h，揮盡有機溶劑，探頭超聲，自然冷卻，0. 45um微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混懸液。取上述製得的任一混懸液適量，按I份加入10份甘露醇的比例，溶解後凍幹，即可製得鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒凍乾粉。本發明製得的鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒初分散體外觀呈淡黃色液體，凍幹後為淡黃色粉末(圖1)，為評價其質量特徵，採用投射電鏡觀察納米粒形態；納米雷射粒度儀測其粒徑、電位；HPLC測定包封率及載藥量；X衍射檢測納米顆粒狀態；核磁共振氫譜(1HNMR)進行結構確證。研究發現，電鏡下觀察鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒呈類圓形，形態規整，大小均一(圖2)，粒徑在50 150nm之間(圖3)，電位7. 87mV (圖4)，包封率為58%，載藥量
4.2%，經X衍射檢查，納米粒中小檗鹼的晶體衍射峰完全消失，表明小檗鹼是以非晶態結構(無定形)分散在納米粒中，這能夠更好地促進藥物的溶解與吸收(圖5)。H1NMR譜表明，小檗鹼固體脂質納米粒譜圖中包含空白脂質及藥物特徵譜，且在相同化學位移處有疊加現象，說明藥物已被包裹進脂質(圖6 )。固體脂質納米粒凍乾粉放置半年後復溶後，平均粒徑比原來分散體大I. 5倍，電位無變化，說明納米粒穩定，可長期保存。大鼠體內藥物代謝動力學試驗雄性SD大鼠16隻，隨機分2組，每組8隻，禁食不禁水12h後分別灌胃給予小檗鹼原藥(50mg/kg)和小檗鹼固體脂質納米粒(50mg/kg)，在給藥前及給藥後 0. 083，0. 17，0. 25，0. 5，0. 75，I, 2，3，4，6，8，10，12，24h 眼眶取血 0. 5mL,置肝素鈉抗凝管中，3500r/min，離心IOmin分離血漿，乙腈去蛋白，LC/MS/MS測其血藥濃度，分別繪製血藥濃度-時間曲線(圖7)，DAS2. 0計算藥動學參數(表I)。結果表明，與小檗鹼原藥組相比，小檗鹼固體脂質納米粒組血藥濃度Cmax和曲線下面積AUC顯著增加，平均駐留時VRT(O-t)延長，並具有顯著差異(P<0. 05)。說明小檗鹼固體脂質納米粒可促進小檗鹼吸收，提高其生物利用度。表I小檗鹼固體脂質納米粒單次口服給藥藥代動力學參數
權利要求
1.一種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑，其特徵在於按質量比的原材料組成為 鹽酸小檗鹼 I; 固體脂質 5 15 ; 乳化劑5 15 ; 表面活性劑 I 3。
2.如權利要求I所述的ー種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑，其特徵在於所述固體脂質選自單硬脂酸甘油酷、雙硬脂酸甘油酷、三硬脂酸甘油酷、三月桂酸甘油酷、硬脂酸、三肉豆蓮酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酷、棕櫚酸棕櫚酯、山嵛酸甘油酯中的至少ー種。
3.如權利要求I所述的ー種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑，其特徵在於所述乳化劑選自卵磷脂、蛋黃卵磷脂、吐溫-80、辛酸奎酸聚こニ醇甘油酷、三辛酸甘油酷、月桂酸聚こニ醇甘油酯中的至少ー種。
4.如權利要求I所述的ー種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑，其特徵在於所述表面活性劑採用泊洛沙姆188。
5.如權利要求I所述的ー種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑的製備方法，其特徵在於包括以下步驟 1)將固體脂質和乳化劑加入有機溶劑，待固體脂質完全溶解後加入鹽酸小檗鹼，溶解後得油相； 2)將步驟I)所得的油相加入到含表面活性劑的水相中，攪拌至有機溶劑完全除去； 3)將步驟2)所得的物料探頭超聲，冷卻後，採用微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混懸液； 4)將步驟3)所得鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混懸液加入凍幹保護劑，冷凍乾燥即得鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑，呈納米粒凍乾粉。
6.如權利要求5所述的ー種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑的製備方法，其特徵在於在步驟I)中，所述將固體脂質和乳化劑加入有機溶劑後，在溫度80°C，轉速為300r/min恆溫磁力攪拌器攪拌。
7.如權利要求5所述的ー種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑的製備方法，其特徵在於在步驟I)中，所述有機溶劑選自丙酮、氯仿與無水こ醇的的混合溶剤。
8.如權利要求5所述的ー種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑的製備方法，其特徵在於在步驟2)中，所述水相的溫度為80°C;所述含表面活性劑的水相中的水體積可為油相的2倍；所述攪拌的條件可為恆溫攪拌2h。
9.如權利要求5所述的ー種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑的製備方法，其特徵在於在步驟3)中，所述微孔濾膜採用0. 45 y m微孔濾膜。
10.如權利要求5所述的ー種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑的製備方法，其特徵在於在步驟4)中，所述凍幹保護劑的加入量按質量百分比為鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混懸液的10% 15% ;所述凍幹保護劑可選自甘露醇、海藻糖、葡萄糖中的任ー種。
全文摘要
一種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑及其製備方法，涉及一種鹽酸小檗鹼。提供方法簡單、生產成本低、便於攜帶運輸、適於任何給藥途徑的一種鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑及其製備方法。按質量比的原材料組成為鹽酸小檗鹼1；固體脂質5～15；乳化劑5～15；表面活性劑1～3。將固體脂質和乳化劑加入有機溶劑，待固體脂質完全溶解後加入鹽酸小檗鹼，溶解後得油相；所得的油相加入到含表面活性劑的水相中，攪拌至有機溶劑完全除去；所得的物料探頭超聲，冷卻後，採用微孔濾膜過濾，即得鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混懸液；所得鹽酸小檗鹼固體脂質納米粒混懸液加入凍幹保護劑，冷凍乾燥即得鹽酸小檗鹼固體脂質納米製劑，呈納米粒凍乾粉。
文檔編號A61P31/00GK102949375SQ20121049567
公開日2013年3月6日 申請日期2012年11月28日 優先權日2012年11月28日
發明者楊叔禹, 薛梅, 李學軍 申請人:廈門大學附屬第一醫院