一種用於治療或預防治療老年痴呆的藥物組合物及其製劑的製作方法

2023-05-15 03:33:16 2

一種用於治療或預防治療老年痴呆的藥物組合物及其製劑的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種用於治療或預防治療老年痴呆的藥物組合物及其製劑，該組合物包含以下重量百分比的組分：DHA?10-40份，蜜蜂唾液酶1.1-2.0份，還包括人脂肪幹細胞作為藥物組合物的載體，所述的藥物組合物可以根據需要加入一種或多種藥學上可以接受的載體，按照藥學領域的常規方法，製備成片劑、膠囊劑、糖漿劑或口服劑，相比傳統的靶向方法具有更強的主動性和靶向性，能夠使原藥的功效顯著增強。
【專利說明】一種用於治療或預防治療老年痴呆的藥物組合物及其製劑
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種治療或預防治療老年痴呆的藥物組合物，具體涉及一種DHA和蜜蜂唾液酶混合，用人脂肪幹細胞作為載體的藥物組合物及其製劑。
【背景技術】
[0002]DHA即二十二碳六烯酸，是一種對人體非常重要的多不飽和脂肪酸，屬於Omega-3不飽和脂肪酸家族中的重要成員。DHA是神經系統細胞生長及維持的一種主要元素，是大腦和視網膜的重要構成成分，在人體大腦皮層中含量高達20%，在眼睛視網膜中所佔比例最大，約佔50%。人的記憶、思維能力取決於控制信息傳遞的腦細胞、突觸等神經組織的功能，即信息在神經系統內的傳遞範圍、方向和作用。DHA在神經組織中約佔其脂肪含量的25%，突觸是控制信息傳遞的關鍵部位，是由突觸膜和間隙組成，DHA有助於其結構完整、功能發揮。DHA具有影響胎兒大腦發育、促進視網膜光感細胞成熟、增進大腦細胞發育等作用，還可以用於癌症、心血管病以及炎症、老人痴呆等病症的治療。
[0003]蜜蜂唾液酶是源於蜜蜂唾液中的多種酶類的總稱，除了蜜蜂的胃以外，主要存在於蜂蜜和蜂膠中。蜜蜂唾液酶的主要作用主要體現在蜜蜂採蜜釀蜜的過程中，工蜂利用巢脾內的唾液酶，將花蜜、植物分泌物進行轉化、脫水、貯存至成熟，從而得到各種蜂蜜。正因為蜂蜜中含有酶，才使各種口味和類型的蜂蜜具有藥食兩用的特殊功能。這些酶是蜜蜂在釀蜜過程中添加進去的，來源於蜜蜂唾液，主要是蔗糖酶，這種酶能把花蜜中的蔗糖轉化成葡萄糖和果糖；另外還有澱粉酶、葡萄糖氧酶、還原酶、轉化酶、磷酸酶、類蛋白酶等。蜜蜂可以根據採集的花蜜不同而分泌出不同作用的唾液酶，從而使得釀造出的蜂蜜及蜂膠等產物含有不同的營養物質和藥用成分。
[0004]本發明是在前期試驗基礎上將人脂肪幹細胞作為藥物組合物的載體，具有靶向運輸車的作用，使藥物成分像子彈一樣追蹤並殺死目標物，相比傳統的靶向方法具有更強的主動性和靶向性，能夠使原藥的功效顯著增強。

【發明內容】

[0005]本發明的目的在於提供一種用人脂肪幹細胞作為載體的藥物組合物用途治療或預防治療老年痴呆。將人脂肪幹細胞作為藥物組合物的載體使藥物成分像子彈一樣追蹤並殺死目標物，相比傳統的靶向方法具有更強的主動性和靶向性，能夠使原藥的功效顯著增強。
[0006]本發明的另一目的是提供了該藥物組合物的製劑。
[0007]本發明的藥物組合物及其製劑是通過以下技術方案來實現的:
[0008]該組合物包含以下重量百分比的組分:DHA10-40份，蜜蜂唾液酶1.1_2.0份，還包括人脂肪幹細胞，作為藥物組合物的載體。
[0009]更進一步的，包含以下重量百分比的組分:DHA為25份，蜜蜂唾液酶為1.6份。
[0010]蜜蜂唾液酶是將重量比的原料:夜寧糖漿20-60份、DHA5-15份、水35_75份，混合攪拌製成蜜蜂採食蜜，餵食蜜蜂后收集得到。
[0011]本發明治療或預防治療老年痴呆的藥物組合物，製備方法包括以下步驟:
[0012](I)藥物混合溶液的製備:首先收集蜜蜂唾液酶，和DHA按處方比例混合，溶於藥學上可接受的介質中，充分混合；
[0013](2)人脂肪幹細胞的分離培養:採用分離、純化、培養的方法獲得人脂肪幹細胞，並將其重懸在藥學上可接受的介質中；
[0014](3)藥物製劑的製備:將上述藥物混合溶液與人脂肪幹細胞重懸液混合，即得發明產物。
[0015]更進一步的，步驟(I)中的蜜蜂唾液酶的收集具體步驟為用夜寧糖漿、DHA和水混合攪拌製成蜜蜂採食蜜，餵食蜜蜂后收集得到的蜜蜂唾液酶。
[0016]更進一步的，步驟(I)、(2)中的藥學上可接受的介質選自緩衝液、生理鹽水、平衡鹽溶液或其組合；步驟(2)中採用質量與體積比為0.1-0.3%的混合膠原酶對脂肪組織進行消化，用含有10-15%胎牛血清、103-105U/mlLIF的MCDB-201培養液對提取分離後的幹細胞進行培養；步驟(3)中藥物混合溶液與人脂肪幹細胞培養液的比例為1:1~3。
[0017]更進一步的，步驟(2)中的混合膠原酶由I型膠原酶和IV型膠原酶組成，所述混合膠原酶的質量與體積比為1%的母液配製方法為=IOOmlD-Hanks平衡鹽溶液中加入0.7g I型膠原酶、0.3g IV型膠原酶。
[0018]更進一步的，製備方法包括以下步驟:
[0019](I)取處方量DHA、 蜜蜂唾液酶溶於磷酸鹽緩衝液中，製備成濃度為5_15mg/ml的混合溶液；
[0020](2)取採集的脂肪組織，剔除肉眼可見的血管和纖維部分，剪碎，用pH值為7.2-7.4的D-Hanks平衡鹽液洗滌多次，去除殘留的血液，加入與脂肪組織等體積的0.2-0.4% (m/v)混合膠原酶，均勻震蕩消化40-80分鐘，再置於離心機中離心4_10分鐘，去除表層脂肪，將底層細胞用PH值為7.2-7.4的D-Hanks平衡鹽液反覆清洗，經100目篩網過濾，濾液離心5-10分鐘，棄去上清液，將獲得的幹細胞按照2-3 X IOVcm2的密度接種於培養瓶，加入IOmL含有10-15%胎牛血清、103_105U/mlLIF的MCDB-201培養液中進行培養，每隔1-2天更換新鮮的培養液，待細胞生成達到80%融合，在培養瓶中加0.25%胰酶-EDTA進行消化，按1:3傳代，獲得傳代培養後的人脂肪幹細胞；將2 X IO5個脂肪幹細胞重懸在200 μ I等滲磷酸鹽緩衝液中，得到濃度為1.0XlOfVml的幹細胞懸液；
[0021](3)將上述藥物混合溶液和人脂肪幹細胞懸液按照1:1~5的比例混合，即得發明產物。
[0022]本發明的藥物組合物可以根據需要加入一種或多種藥學上可以接受的載體，按照藥學領域的常規方法，製備成片劑、膠囊劑、糖漿劑或口服液。
[0023]更進一步的，口服劑型為片劑、膠囊劑、糖漿劑或口服液。
[0024]本發明所述益神健腦的藥物中，DHA具有增進大腦細胞發育以及癌症、心血管病、炎症、老人痴呆等病症的治療作用；蜜蜂唾液酶中含有蔗糖酶、澱粉酶、葡萄糖氧酶、還原酶、轉化酶、磷酸酶、類蛋白酶等多種酶。本發明研究人員在研究的過程中，發現在用夜寧糖漿和DHA混合餵食蜜蜂后獲得的蜜蜂唾液酶，比普通的蜜蜂唾液酶中含有對人體有益的酶更多，並增強了原夜寧糖漿的治療作用；這些酶與DHA混合製備成藥劑後，作用協同相加，增強了其在提高免疫力、延緩衰老、養心安神的功效，對失眠、多夢、神經衰弱、健忘等症狀具有良好的治療效果。[0025]本發明的有益效果是:可提高人體免疫力、延緩衰老、促進腦部發育、改善睡眠等作用，對改善發育不良、食慾降低、失眠、多夢、神經衰弱、健忘等症狀具有良好的效果，相比之前申請專利的藥物組合物，具有更好的治療效果。[0026]以下採用效果實驗來進一步闡述本發明所述藥物及其製劑的有益效果:[0027]試驗例對老年痴呆模型(AD)大鼠記憶的影響[0028]1、材料和方法建議增加不採用脂肪幹細胞作為載體的對比藥物，表明增加載體有明顯效果[0029]1.1實驗動物雄性SD大鼠，體重250_350g，6月大，貴陽醫學院實驗動物中心提供。[0030]1.2藥物A -M DHA5g、蜜蜂唾液酶0.8g，按照實施例6的方法製成口服液；藥物B:取DHA45g、蜜蜂唾液酶2.5g，按照實施例6的方法製成口服液；藥物C:採用藥物A的配方，不採用脂肪幹細胞作為載體的對比藥物；藥物D:健腦膠囊，江西廣信藥業有限公司生產，每粒裝0.3g，批號110801。[0031]1.3主要實驗儀器Morris水迷宮(貴陽醫學院藥理實驗室)、電子天平、數顯恆溫水槽、低速離心機等。[0032]2、實驗方法[0033]2.1動物分組選取60隻SD大鼠給予標準飼料，自由飲水，適應性餵養7天後，隨機分為6組:正常對照組、模型組、藥物A、B、C和D組，每組10隻，分籠飼養。[0034]2.2動物模型製備除正常對照組外，其餘各組採用每天腹腔注射0.5%D-半乳糖50mg/kg，一日I次，連續6周。[0035]2.3給藥方法造模20天後開始給藥，藥物A、B、C組每日均給藥13.3ml/kg (相當於臨床用量10倍)灌胃一次；D組每日給予健腦膠囊0.3g/kg (相當於臨床用量10倍)灌胃一次；連續給藥28d。[0036]3、觀察指標[0037]3.1跳臺試驗:自製跳臺實驗箱，箱底鋪有銅柵作為刺激電極，箱內右後側放置一個橡皮墊作為大鼠逃避電擊的安全區。先放入大鼠適應5min，隨後通入70V，0.5A~0.7A電流，大鼠遭到電擊後正常反應是跳上平臺以躲避傷害性刺激。記錄大鼠從開始通電到完全上臺所用的時間。24h後重測驗一次以測記憶能力。[0038]3.2Morris水迷宮試驗:在水迷宮的圓形水池邊緣上等距離設置東西南北4個標記，將水池等分。水池中加入奶粉使水渾濁，不見低於水面的平臺，每天將大鼠從4個不同分隔固定入水中各I次，直至找到並站在平臺上為止，遊泳超過60s後人為將大鼠放至平臺上IOs進行訓練。6天後正式試驗，將平臺位置轉移到對面，記錄爬上平臺潛伏期的時間。[0039]4、統計學處理:所有數據以(I土s)表示，以P〈0.05為差異有統計學意義。[0040]5、結果[0041]5.1各組大鼠跳臺實驗及迷宮實驗學習、記憶能力的檢測結果見表1、表2。[0042]表1跳臺實驗學習記憶能力的比較(5 土s)
【權利要求】
1.一種用於治療或預防治療老年痴呆的藥物組合物，其特徵在於:該組合物包含以下重量百分比的組分:DHA10-40份，蜜蜂唾液酶1.1-2.0份，還包括人脂肪幹細胞作為藥物組合物的載體。
2.如權利要求1所述的用於治療或預防治療老年痴呆的藥物組合物，其特徵在於:包含以下重量百分比的組分:DHA為25份，蜜蜂唾液酶為1.6份。
3.根據權利要求1或2所述的用於治療或預防治療老年痴呆的藥物組合物，其特徵在於:蜜蜂唾液酶是將重量比的原料:夜寧糖漿20-60份、DHA5-15份、水35-75份，混合攪拌製成蜜蜂採食蜜，餵食蜜蜂后收集得到。
4.如權利要求1所述的用於治療或預防治療老年痴呆的藥物組合物，其特徵在於:製備方法包括以下步驟: (O藥物混合溶液的製備:首先收集蜜蜂唾液酶，和DHA按處方比例混合，溶於藥學上可接受的介質中，充分混合； (2)人脂肪幹細胞的分離培養:採用分離、純化、培養的方法獲得人脂肪幹細胞，並將其重懸在藥學上可接受的介質中； (3)藥物製劑的製備:將上述藥物 混合溶液與人脂肪幹細胞重懸液混合，即得發明產物。
5.根據權利要求4所述的用於治療或預防治療老年痴呆的藥物組合物，其特徵在於:步驟(I)中的蜜蜂唾液酶的收集具體步驟為用夜寧糖漿、DHA和水混合攪拌製成蜜蜂採食蜜，餵食蜜蜂后收集得到的蜜蜂唾液酶。
6.如權利要求4所述的用於治療或預防治療老年痴呆的藥物組合物，其特徵在於:步驟(1)、(2)中的藥學上可接受的介質選自緩衝液、生理鹽水、平衡鹽溶液或其組合；步驟(2)中採用質量與體積比為0.1-0.3%的混合膠原酶對脂肪組織進行消化，用含有10-15%胎牛血清、103-105U/mlLIF的MCDB-201培養液對提取分離後的幹細胞進行培養；步驟(3)中藥物混合溶液與人脂肪幹細胞培養液的比例為1:1~3。
7.如權利要求6所述的用於治療或預防治療老年痴呆的藥物組合物，其特徵在於:步驟(2)中的混合膠原酶由I型膠原酶和IV型膠原酶組成，所述混合膠原酶的質量與體積比為1%的母液配製方法為:IOOmlD-Hanks平衡鹽溶液中加入0.7g I型膠原酶、0.3g IV型膠原酶。
8.如權利要求4-7任一所述的用於治療或預防治療老年痴呆的藥物組合物，其特徵在於:製備方法包括以下步驟: (1)取處方量DHA、蜜蜂唾液酶溶於磷酸鹽緩衝液中，製備成濃度為5-15mg/ml的混合溶液； (2)取採集的脂肪組織，剔除肉眼可見的血管和纖維部分，剪碎，用pH值為7.2-7.4的D-Hanks平衡鹽液洗滌多次，去除殘留的血液，加入與脂肪組織等體積的0.2-0.4% (m/v)混合膠原酶，均勻震蕩消化40-80分鐘，再置於離心機中離心4-10分鐘，去除表層脂肪，將底層細胞用PH值為7.2-7.4的D-Hanks平衡鹽液反覆清洗，經100目篩網過濾，濾液離心5-10分鐘，棄去上清液，將獲得的幹細胞按照2-3 X IOVcm2的密度接種於培養瓶，加入IOmL含有10-15%胎牛血清、103-105U/mlLIF的MCDB-201培養液中進行培養，每隔1_2天更換新鮮的培養液，待細胞生成達到80%融合，在培養瓶中加0.25%胰酶-EDTA進行消化，按1:3傳代，獲得傳代培養後的人脂肪幹細胞；將2 X IO5個脂肪幹細胞重懸在200 μ I等滲磷酸鹽緩衝液中，得到濃度為1.0X 106/ml的幹細胞懸液； (3)將上述藥物混合溶液和人脂肪幹細胞懸液按照1:1~5的比例混合，即得發明產物。
9.如權利要求1所述的用於治療或預防治療老年痴呆的藥物組合物的製劑，其特徵在於:所述的藥物組合物可以根據需要加入一種或多種藥學上可以接受的載體，按照藥學領域的常規方法，製備成 片劑、膠囊劑、糖漿劑或口服液。
【文檔編號】A61K31/202GK103463628SQ201310338270
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年8月5日 優先權日:2013年8月5日
【發明者】張芝庭, 張濤濤 申請人:貴州神奇藥物研究院