一種氧化石墨烯混合材料的基質固相分散劑及其應用的製作方法
2023-05-12 03:41:01
一種氧化石墨烯混合材料的基質固相分散劑及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種基質固相分散劑及其應用，尤其是一種以氧化石墨烯的混合材料作為基質固相分散劑及其應用，屬於化學【技術領域】。本發明利用一種氧化石墨烯和弗羅裡矽土的混合材料作為基質固相分散劑，以HPLC-MS/MS法的正離子模式MRM的檢測方式測定小麥粉樣品中的18種真菌毒素，其優點是提高真菌毒素檢測方法的回收率和增強了方法的通用性，使不具正負離子切換模式的質譜也可實現檢測要求，並且靈敏度和檢出限能滿足各項標準的要求。
【專利說明】一種氧化石墨烯混合材料的基質固相分散劑及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種基質固相分散劑及其應用，尤其是一種以氧化石墨烯的混合材料 作為基質固相分散劑及其應用，屬於化學【技術領域】。
【背景技術】
[0002] 真菌毒素（mycotoxin)是真菌在生長繁殖過程中產生的次生有毒代謝產物。目前 常見的真菌毒素有：黃麴黴毒素類（AFs)、赭麴黴毒素類（OTs)、伏馬毒素類（FBs)和脫氧雪 腐鐮刀菌烯醇（DON)等毒素。真菌毒素廣泛汙染農作物、食品及飼料等植物源性食品，研究 證實，部分真菌毒素可引起人類和動物急性或慢性中毒，損害機體的肝臟、腎臟、神經組織、 造血組織及皮膚組織等，因而國內外對真菌毒素有嚴格的限量規定。
[0003] 由於食品中真菌毒素含量較低，樣品基質複雜，因而目標分析物的分離富集方法 成為制約檢測時間和回收率的瓶頸技術。目前，常見的樣品前處理技術有免疫親和柱、固 相萃取（SPE)、QuEChERS、液液萃取和基質固相分散法（MSPD)等。其中，免疫親和柱採用特 異性免疫反應作為分離手段，但由於各種毒素的分子結構和性質差異很大，免疫親和柱只 能針對某種或某類結構的毒素，而不適用於多種真菌毒素的分離富集。QuEChERS有操作簡 單、快速和經濟的優勢，但對於基質中含有較多澱粉、蛋白和脂肪的樣品的淨化效果不是非 常理想。液液萃取是利用化合物在兩種互不相溶（或微溶）的溶劑中溶解度或的不同，使 化合物從一種溶劑轉到另一種溶劑。例如 申請人:檢索到的一篇公開的中國發明專利申請就 採用了液液萃取，申請號為201410005346. 0,名稱為"一種同時檢測多種真菌毒素的方法"， 公開了利用高效液相色譜-串聯三重四級杆法達到同時檢測33種真菌毒素的方法。該專 利先用水萃取，再用相同體積的酸性乙腈萃取，以無水氯化鈉和硫酸鎂進行鹽析，取上層的 乙腈層。由於伏馬毒素 Bl、B2等毒素在水和乙腈中的溶解度都比較大，僅收集乙腈層會造 成這些毒素的大量損失。研究表明，提取大多數真菌毒素時，採用體積比為80?90%的乙 腈和20?10%的水，提取效率均達到較高水平，1 :1的乙腈水對大多數真菌毒素並不適合。 因而，採用該液液提取方法，沒有進行淨化，直接進樣，樣品基質效應明顯，容易造成回收率 低，出現假陰性的結果。
[0004] 由此可見，目前真菌毒素的提取方法雖然較多，存在提取方法通用性不強，樣品 的基質效應影響較大，結果回收率較低，存在假陰性問題，採用了納米材料作吸附劑的Msro 技術有助於顯著改善樣品的萃取效率，非常適合固體小麥粉中真菌毒素的快檢和確證工 作。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是針對現有真菌毒素提取技術存在的缺陷，提出一種以氧化石墨烯 和弗羅裡矽土作為基質固相分散劑，快速準確檢測小麥粉中真菌毒素的方法。
[0006] 本發明通過以下技術方案解決技術問題：一種氧化石墨烯混合材料的基質固相分 散劑，由氧化石墨烯和弗羅裡矽土組成，所述弗羅裡矽土的質量為氧化石墨烯的8-40倍。
[0007] 氧化石墨烯混合材料的基質固相分散劑的應用，包括以下步驟：
[0008] 步驟一、製備樣品，將氧化石墨烯混合材料的基質固相分散劑和小麥粉按比例用 漩渦混勻器混合3-5min，其中小麥粉的質量為氧化石墨烯的2-10倍；混合物轉移於研缽 中，研磨5-10min ;
[0009] 步驟二、小麥粉樣品的提取淨化，混合物用甲醇溶液淋洗樣品，再用含1% -3%濃 鹽酸的甲醇溶液洗脫目標分析物，收集洗脫液，30°C -50°C下氮氣吹近幹，加入乙腈，過濾 後待測；
[0010] 步驟三、以高效液相色譜-串聯三重四級杆法的正離子模式測定小麥粉樣品中的 18種真菌毒素。
[0011] 18種真菌毒素分別為青黴酸、黃麴黴毒素 B1、黃麴黴毒素 B2、黃麴黴毒素 G1、黃曲 黴毒素 G2、雜色麴黴毒素、伏馬毒素 B1、伏馬毒素 B2、二乙醯鑣草鐮刀菌烯醇、桔青黴毒素、 赭麴黴毒素、煙麴黴素、玉米赤黴烯酮、3-乙醯脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、15-乙醯脫氧雪腐鐮 刀菌烯醇、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、雪腐鐮刀菌烯醇和展青黴毒素。
[0012] 色譜條件：色譜柱：美國 Thermo 公司 Hypersil ODS C18 柱（150mmX 2. 1mm， 3. 5 μ m);柱溫25°C;進樣量1 μ L ;流速0. 3mL/min ;流動相：採用梯度洗脫程序：A :10mmol/ L醋酸銨+0. 1%甲酸水溶液，B甲醇作流動相進行梯度洗脫：0-3min，90% B ;3-6min， 60-55% B ；6-12min,55-5% B ；12-14min,5% B ；14-15min,90% B〇
[0013] 質譜條件：離子源：電噴霧離子源；電離方式：ESI+;檢測方式：多反應監測 (MRM);毛細管電壓：3. 5kV;霧化氣壓力：40psi ;乾燥氣流速：10L/min ;乾燥氣溫度： 350°C。MRM參數見表1。
[0014] 表1 18種真菌毒素的串聯質譜檢測參數
[0015]
【權利要求】
1. 一種氧化石墨烯混合材料的基質固相分散劑，由氧化石墨烯和弗羅裡矽土組成，所 述弗羅裡矽土的質量為氧化石墨烯的8-40倍。
2. 根據權利要求1所述氧化石墨烯混合材料的基質固相分散劑的應用，包括以下步 驟： 步驟一、製備樣品，將氧化石墨烯混合材料的基質固相分散劑和小麥粉按比例用漩渦 混勻器混合3-5min，其中小麥粉的質量為氧化石墨烯的2-10倍；混合物轉移於研缽中，研 磨 5-lOmin ; 步驟二、小麥粉樣品的提取淨化，混合物用甲醇溶液淋洗樣品，再用含1% -3%濃鹽酸 的甲醇溶液洗脫目標分析物，收集洗脫液，30°C -50°C下氮氣吹近幹，加入乙腈，過濾後待 測； 步驟三、用高效液相色譜-串聯三重四級杆法，以正離子模式的MRM方法測定小麥 粉樣品中的真菌毒素，色譜條件如下，色譜柱是美國Thermo公司Hypersil ODS C18柱 150mmX2. 1mm，3. 5 μ m ;柱溫25 °C ;進樣量1 μ L ;流速0· 3mL/min ;梯度洗脫程序是A : 10mm〇l/L醋酸銨+0. 1%甲酸水溶液，B :甲醇作流動相進行梯度洗脫，0-3min，90% B ; 3-6min，60-55% B ;6-12min，55-5% B ;12-14min，5% B ;14-15min，90% B ;質譜條件如下， 離子源是電噴霧離子源；電離方式是ESI+;檢測方式是多反應監測（MRM);毛細管電壓是 3. 5kV ;霧化氣壓力是40psi ;乾燥氣流速是10L/min ;乾燥氣溫度是350°C ; 步驟四、繪製標準曲線，計算樣品中各種真菌毒素的含量，計算公式為，
式中，Xi-樣品中各真菌毒素的含量，單位μ g/kg; (^一從標準工作曲線上得到被測組分溶液濃度，單位納克每毫升ng/mL ; V一樣品定容體積，單位毫升mL ; m一樣品的質量，單位克g。
3. 根據權利要求1所述氧化石墨烯混合材料的基質固相分散劑的應用，其特徵在於： 所述步驟一中，稱取0. 5g小麥粉、0. lg氧化石墨烯和2g弗羅裡娃土於150mL三角瓶中，混 合物用漩渦混勻器混合3-5min，混勻後轉移於研缽中，研磨5min，在5ml玻璃注射器的底層 放置一塊篩板，將研磨後的混合物轉移到注射器中，樣品上方再放置一篩板，壓實。
4. 根據權利要求1所述氧化石墨烯混合材料的基質固相分散劑的應用，其特徵在於： 所述步驟二中，甲醇溶液用量為5ml，淋洗的流速為lml/min，棄去淋洗液，再用含2%鹽酸 的甲醇溶液洗脫目標分析物，收集洗脫液；乙腈的加入量為200 μ L，過濾用0. 22 μ m的四氟 乙烯濾膜。
【文檔編號】G01N30/06GK104090057SQ201410329163
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年7月10日 優先權日:2014年7月10日
【發明者】王峰, 張徵, 張紅娟, 倉義鵬 申請人:江蘇省產品質量監督檢驗研究院