適用於大量生產分枝桿菌的一種培養基配方及配製方法
2023-05-12 03:05:11
專利名稱：適用於大量生產分枝桿菌的一種培養基配方及配製方法
技術領域：
本發明涉及一種菌苗的培養基配方及配製方法。確切說，本案涉及一種大量生產分枝桿菌的培養基配方及配製方法(不包括麻風分枝桿菌)。
背景技術：
分枝桿菌為放線菌分枝桿菌屬，主要有結核分枝桿菌複合群、非結核分枝桿菌和麻風分枝桿菌。與人類健康關係最密切的要屬結核分枝桿菌和牛分枝桿菌。20世紀初法國科學家Calmette和Guerin將一株從牛乳房分離出的牛型結核菌在甘油馬鈴薯培養基上傳代，經過13年230代將強毒牛型結核菌變成無毒菌株。也就是現在世界上應用最廣泛的預防結核病的卡介苗。
卡介苗除用於預防結核病外，從20世紀60年代在國內外還廣泛的應用於其它疾病的治療。如1976年Moralcs首次報告應用卡介苗膀胱灌注治療表淺膀胱癌，卡介苗作為一種有效的免疫佐劑已經在防治膀胱腫瘤方面取得了良好效果。國內卡介苗在防治上呼吸道感染、哮喘、過敏性鼻炎、腎炎、等疾病中也取得了明顯療效。隨著近年對分枝桿菌(主要是卡介菌和母牛結核菌)防治疾病機理研究的進展，證實了卡介菌和母牛結核菌不僅是一種良好的免疫增強劑，而且是一種良好的免疫調節劑，最新的研究成果顯示，卡介菌及其成份提取物在過敏性疾病的防治上有非常廣闊的應用前景。
目前卡介菌和母牛結核菌培養基和培養方法大多還採用傳統的蘇通液體培養基培養，產量受到一定的限制，很難滿足醫藥市場上對卡介菌及其提取物和母牛結核菌的需求，國內只有很少幾個廠家生產少量的卡介菌提取物和母牛結核菌製品供應市場。
蘇通液體培養基成分磷酸二氫鉀 0.5g硫酸鎂 0.5g檸檬酸 2.0g檸檬酸鐵銨 0.05g穀氨酸鈉 4.0g甘油 30.0ml蒸餾水 970.0ml膽鹽瓊脂培養基成分膽鹽 1.5g蛋白腖 20.0g氟化鈉 5.0g乳糖 10.0g蒸餾水 1000.0ml瓊脂 20.0g結晶紫 0.001g中性紅 0.03g
改良蘇通液體培養基成分L-天門冬素 2.0g磷酸鉀 1.6g硫酸鎂(7·H2O) 0.25g甘油 20.0ml檸檬酸鈉(2·H2O)1.25g蒸餾水 加至 950.0ml檸檬酸鐵銨 0.05g小牛血清 50.0ml磷酸氫二鈉 3.4g蘇通馬鈴薯培養基成分同改良蘇通液體培養基，將其中L-天門冬素改用味精代替，每1000ml液體培養基中加味精16.0g。加熱溶解後分裝於卡介菌專用培養管中，每管30.0ml，然後再加入經處理的馬鈴薯斜面一塊，121℃高壓滅菌30分鐘，取出放冷後備用。
馬鈴薯斜面製備過程繁瑣也使卡介菌培養基大批量生產受到限制，在該過程，用一個2.6cm直徑的不鏽鋼管在洗淨去皮的馬鈴薯打孔使之成圓柱形，然後對角切成兩個斜面，放入1％碳酸鈉溶液中浸泡2～3小時，用自來水衝洗2～3小時，取出馬鈴薯斜面放入蒸餾水中泡30分鐘。
液體培養基雖可採用自動化灌裝大批量生產，但用瓶培養時佔用培養箱面積大，而且必須將卡介菌接種於液體表面，一旦接種的卡介菌沉入培養液中則不能生長繁殖，故接種操作難度大，而且必須輕輕放入培養箱中。
蘇通馬鈴薯培養基是用接種鏟將卡介菌均勻塗抹接種於馬鈴薯斜面上，斜放在架子上。使其中蘇通液體培養基浸泡在馬鈴薯斜面的周圍而又不能浸泡著接種的卡介菌。輕輕放入培養箱中。操作繁瑣，技術要求高。
長期以來人們一直期望有一種易於大批量製作，配製方法簡便、所有分枝桿菌(麻風分枝桿菌除外)都能生長良好的、並為接種、收穫等後續操作提供便利的培養基配方及配製方法。
本發明提供的分枝桿菌培養基配方和配製方法，可用於所有分枝桿菌的大批量生產(麻風分枝桿菌除外)。
發明內容
本發明提供的培養基配方和配製方法，適用於大批量生產分枝桿菌，其中術語「馬鈴薯」意指土豆洗淨去皮後切碎。和現有技術相比，本發明的優點在於提供的培養基配方和配製方法，成本低，PH穩定，配製簡便易行，可實現機械化灌裝，培養效果好，適用於大批量生產分枝桿菌。培養基最優選方案每管可產卡介菌2.5～3.5克，較為優選的方案每管可產卡介菌2.0～2.5克；優選方案每管可產1.5克。目前最多採用的蘇通液體培養基，每瓶可產卡介菌4.0克，但培養技術繁瑣、培養室面積大，人力物力投入多，成本高於本發明提供方法的數倍。
具體實施例方式本發明的培養基配方如下
成分(1)麩氨酸鈉(或天門冬素) 10～15g(2)K2HPO42.8～3.5g(3)KH2PO40.8～1.2g(4)ZnSO40.004～0.001g(5)CuSO40.004～0.001g(6)MgSO40.3～0.9g(7)Na3C6H5O7.2H2O 1.4～2.0g(8)Fe(NH4)3(C6H5O7)20.02-0.10克(9)丙三醇70～100.0ml(10)馬鈴薯(或馬鈴薯粉) 200～300g(11)瓊脂粉 9.0～3.0g(12)蒸餾水 1000.0ml大量生產分枝桿菌的一種培養基優選配方如下成分(1)麩氨酸鈉(或天門冬素) 12～14g(2)K2HPO42.9～3.3g(3)KH2PO40.9～1.1g(4)ZnSO40.003～0.002g(5)CuSO40.003～0.002g(6)MgSO40.4～0.7g(7)Na3C6H5O7.2H2O1.6～1.9g
(8)Fe(NH4)3(C6H5O7)20.04-0.08克(9)丙三醇80～90.0ml(10)馬鈴薯(或馬鈴薯粉) 240～280g(11)瓊脂粉 8.0～4.0g(12)蒸餾水 1000.0ml大量生產分枝桿菌的一種培養基的最優選配方如下成分(1)麩氨酸鈉(或天門冬素) 9.0～11g(2)K2HPO43.0～3.1g(3)KH2PO40.9～1.0g(4)ZnSO40.002～0.001g(5)CuSO40.002～0.001g(6)MgSO40.5～0.6g(7)Na3C6H5O7.2H2O 1.7～1.8g(8)Fe(NH4)3(C6H5O7)20.02-0.06克(9)丙三醇80～90.0ml(10)馬鈴薯(或馬鈴薯粉) 250～270g(11)瓊脂粉 6.0～4.0g(12)蒸餾水 1000.0ml本發明提供的大量生產分枝桿菌培養基配製方法為，將上述成分(1)(2)(3)(9)(10)(12)混勻加熱煮沸後，再加入配方中其他成份用攪拌機充分混勻後定量灌裝於培養管內，加塞後高壓15磅30分鐘滅菌，冷卻後即可用於分枝桿菌培養用。
本發明提供的大量生產分枝桿菌培養基配方及配製方法，不僅使培養基的製作降低了成本，而且為分枝桿菌大量生產的後續操作(如接種操作、收穫操作)提供了極大的方便。較傳統方法所使用的人力減少一半以上，而且還可使分枝桿菌的產量提高5倍。本發明對緩解醫藥市場分枝桿菌及其提取物製劑的供需矛盾起到重要作用。
本領域的科技人員觀看該說明書內容後，可對培養基配方進行各種修改和變動，但任何修改或變動都在申請待批的權利要求書的保護範圍之內。
權利要求
1.適用於大量生產分枝桿菌的一種培養基，其特徵在於成分(1)麩氨酸鈉(或天門冬素) 10～15g(2)K2HPO42.8～3.5g(3)KH2PO40.8～1.2g(4)ZnSO40.004～0.001g(5)CuSO40.004～0.001g(6)MgSO40.3～0.9g(7)Na3C6H5O7.2H2O 1.4～2.0g(8)Fe(NH4)3(C6H5O7)220.02-0.10克(9)丙三醇 70～100.0ml(10)馬鈴薯(或馬鈴薯粉) 200～300g(11)瓊脂粉 9.0～3.0g(12)蒸餾水 1000.0ml
2.根據權利要求1所述的適用於大量生產分枝桿菌的一種培養基，其特徵在於成分(1)麩氨酸鈉(或天門冬素)12～14g(2)K2HPO42.9～3.3g(3)KH2PO40.9～1.1g(4)ZnSO40.003～0.002g(5)CuSO40.003～0.002g(6)MgSO40.4～0.7g(7)Na3C6H5O7.2H2O 1.6～1.9g(8)Fe(NH4)3(C6H5O7)220.04-0.08克(9)丙三醇 80～90.0ml(10)馬鈴薯(或馬鈴薯粉) 240～280g(11)瓊脂粉 8.0～4.0g(12)蒸餾水 1000.0ml
3.根據權利要求1所述的適用於大量生產分枝桿菌的一種培養基，其特徵在於成分(1)麩氨酸鈉(或天門冬素) 9.0～11g(2)K2HPO43.0～3.1g(3)KH2PO40.9～1.0g(4)ZnSO40.002～0.001g(5)CuSO40.002～0.001g(6)MgSO40.5～0.6g(7)Na3C6H5O7.2H2O1.7～1.8g(8)Fe(NH4)3(C6H5O7)20.02-0.06克(9)丙三醇 80～90.0ml(10)馬鈴薯(或馬鈴薯粉) 250～270g(11)瓊脂粉 6.0～4.0g(12)蒸餾水 1000.0ml
全文摘要
本發明提供一種生產分枝桿菌的培養基配方及配製方法，該培養基的配方如下，成分(1)麩氨酸鈉(或天門冬素)9.0～11g；(2)K
文檔編號C12N1/20GK1737115SQ20041005814
公開日2006年2月22日 申請日期2004年8月17日 優先權日2004年8月17日
發明者李麗平 申請人:李麗平