用於治療視網膜外層疾病的具有5－ht的製作方法

2023-05-12 08:00:01

專利名稱：用於治療視網膜外層疾病的具有5－ht的製作方法
技術領域：
本發明涉及用於治療因急性或慢性眼部變性情況或疾病導致的視網膜外層疾病的具有5-HT1A興奮劑活性的化合物。
背景技術：
與年齡相關的黃斑變性(AMD)是中年以上失明的主要原因，其中發生率從65歲成年人中的約20％增加到75歲或75歲以上個體的37％。非滲出性AMD的特徵在於視網膜外層、視網膜色素上皮(RPE)、布魯赫膜和脈絡膜血管層中脈絡膜小疣累積和視杆和視錐光感受器萎縮；而滲出性AMD導致脈絡膜新血管形成(Green和Enger，《眼科學》(Ophthalmol)，1001519-35，1993；Green等，《眼科學》(Ophthalmol)，92615-27，1985；Green和Key，《美國眼科學協會學報》(Trans Am Ophthal Soc)，75180-254，1977；Bressler等，《視網膜》(Retina)，14130-42，1994；Schneider等，《視網膜》(Retina)，18242-50，1998；Green和Kuchle(1997)Yannuzzi，L.A.，Flower，R.W.，Slakter，J.S.(編輯)《靛青綠血管成形術》(Indocyanine green angiography.)St.LouisMosby，151-6頁)。色素性視網膜炎(RP)代表一組遺傳性營養不良，其特徵在於視杆變性導致繼發性視錐光感受器萎縮和位於色素上皮的下面(Pruett，《美國眼科學協會學報》(Trans Am Ophthalmol Soc)，81693-735，1983；Heckenlively，《美國眼科學協會學報》(Trans Am Ophthalmol Soc)，85438-470，1987；Pagon，《眼科手術》(Sur Ophthal)，33137-177，1988；Berson，《眼科視覺科學研究》(Invest Ophthalmol Vis Sci)，341659-1676，1993；Nickells和Zack，《眼科遺傳學》(OphthalmicGenet)，17145-65，1996)。諸如AMD和RP這樣的視網膜變性疾病的發病機制是多方面的且可以由正常個體或那些有遺傳傾向的個體中的環境因素所引起。迄今為止已經對100種以上可能與各種視網膜外層變性有關的基因進行了作圖或克隆。
接觸光是鑑定為諸如AMD這樣的視網膜變性疾病發展的構成因素的環境因素(Young，《眼科手術》(Sur Ophthal)，32252-269，1988；Taylor等，《眼科構造》(Arch Ophthal)，11099-104，1992；Cruickshank等，《眼科構造》(Arch Ophthal)，111514-518，1993)。已經證實導致對視網膜細胞光損害的光氧化性應激反應是用於研究因下列原因導致的視網膜變性疾病的有用的模型主要對視網膜外層的光感受器和視網膜色素上皮(RPE)導致損害，這與遺傳性變性疾病所影響的細胞相同(Noell等，《眼科視覺科學研究》(Invest OphthalVisSci)，5，450-472，1966；Bressler等，《眼科手術》(SurOphthal)，32，375-413，1988；Curcio等，《眼科視覺科學研究》(InvestOphthal Vis Sci)，37，1236-1249，1996)；編程性細胞死亡是細胞死亡機制，通過該機制以及在光氧化性誘發的細胞損傷之後光感受器和RPE細胞在AMD和RP中損耗(Ge-Zhi等，《美國眼科學協會學報》(TransAm Ophthal Soc)，94，411-430，1996；Abler等，《分子病理藥理學研究通訊》(Res Commun Mol Pathol Pharmacol)，92，177-189，1996；Nickells和Zack，《眼科遺傳學》(OphthalmicGenet)，17145-65，1996)；已經將光推斷為AMD和RP發展的環境危害因素(Taylor等，《眼科構造》(ArchOphthalmol)，110，99-104，1992；Naash等，《眼科視覺科學研究》(Invest Ophthalmol Vis Sci)，37，775-782，1996)；且還證實抑制光氧化性損傷的治療幹預在遺傳性變性視網膜疾病動物模型中是有效的(LaVail等，《美國國家科學院學報》(Proc Nat Acad Sci)，89，11249-11253，1992；Fakforovich等，《自然》(Nature)，347，83-86，1990；Frasson等，《天然藥物》(Nat.Med.)5，1183-1187，1990)。
已經在各種動物模型中鑑定了將視網膜的光氧化性損傷減小到最低限度的許多不同化合物類型。它們包括抗氧化劑，諸如抗壞血酸鹽(Organisciak等，《眼科視覺科學研究》(Invest Ophthal Vis Sci)，261589-1598，1985)、二甲基硫脲(Organisciak等，《眼科視覺科學研究》(Invest Ophthalmol Vis Sci)，331599-1609，1992；Lam等，《眼科構造》(Arch Ophthalmol)，1081751-1752，1990)、α-生育酚(Kozaki等，Nippon Ganka Gakkai Zasshi，98948-954，1994)和β-胡蘿蔔素(Rapp等，《最新眼科研究》(Cur Eye Res)，15219-232，1995)；鈣拮抗劑，諸如氟桂嗪(Li等，《眼科實驗研究》《Exp Eye Res》，5671-78，1993；Edward等，《眼科構造》(Arch Opht halmol)，109，554-622，1992；Collier等，《眼科視覺科學研究》(Invest OphthalmolVisSci)，36S516)；生長因子，諸如鹼性成纖維細胞生長因子、腦衍生神經因子、睫狀神經營養因子和白細胞介素-1-β(LaVail等，《國家科學院學報》(Proc Nat Acad Sci)，89，11249-11253，1992)；糖皮質激素，諸如甲潑尼龍(Lam等，Graefes Arch Clin ExpOphthal，231，729-736，1993)和地塞米松(Fu等，《眼科實驗研究》《ExpEye Res》，54，583-594，1992)；鐵螯合劑，諸如去鐵胺(Li等，《最新眼科研究》(CurEyeRes)，2，133-144，1991)；NMDA-拮抗劑，諸如依利羅地和MK-801(Collier等，《眼科視覺科學研究》(InvestOphthalmol Vis Sci)，40S159，1999)。
已經註冊了5-羥色胺能5-HT1A興奮劑(即丁螺環酮、齊培瑞西酮(ziprasidone)、烏拉地爾)或開始將其用於治療焦慮、高血壓、精神分裂症、精神病或兩極抑鬱症。此外，已經證實5-HT1A興奮劑在各種動物模型中具有神經保護作用且在臨床上正在評估將它用於治療大腦局部缺血、頭部創傷、阿爾茨海默病、多發性硬化和肌萎縮性側索硬化。經證實5-HT1A興奮劑8-OH-DPAT(8-羥基-2-(二正丙氨基)四氫化萘)和依沙匹隆可預防大鼠顱底前庭細胞外側核中NMDA誘發的興奮性毒性神經元損害(Oosterink等，《歐洲藥理學雜誌》(Eur JPharmacol)，358147-52，1998)，使用Bay-x3702給藥顯著減少了大鼠急性真皮下血腫模型中的局部缺血損害(Alessandri等，《大腦研究》(Brain Res)，845232-5，1999)，而8-OH-DPAT、Bay-x3702烏拉地爾、吉哌隆和CM57493顯著減小了大腦中動脈閉合後大鼠(Bielenberg和Burkhardt，《中風》(Stroke)，21(Suppl)IV161-3；Semkova等，《歐洲藥理學雜誌》(Eur J Pharmacol)，359251-60，1998；Peruche等，J Neural Transm-Park Dis DementSect，873-83，1994)和小鼠(Prehn等，《歐洲藥理學雜誌》(Eur JPharmacol)，203213-22，1991；Prehn等，《大腦研究》(BrainRes)，63010-20，1993)皮層梗塞的體積。此外，已經證實使用有效的5-HT1A興奮劑SR57746A治療大鼠對4-血管短暫普遍局部缺血、硫酸長春新鹼誘發的隔海馬損害、丙烯醯胺誘發的外周神經病變和坐骨神經粉碎後具有神經保護作用(Fournier等，《神經科學》(Neurosci)，55629-41，1993)且已經證實該方法可延緩pmn小鼠體內運動神經元變性的發展(Fournier等，《英國藥理學雜誌》(Br JPharmacol)，124811-7，1998)。
已經公開了這種類型的化合物可用於治療青光眼(減輕和控制眼內壓(IOP))，例如，參見WO98/18458(DeSantis等)和EP0771563A2(Mano等)。Osborne等(《眼科學》(Ophthalmologica)，第210卷308-314，1996)教導了8-羥基二丙氨基四氫化萘(8-OH-DPAT)(一種5-HT1A興奮劑)可降低家兔的IOP。Wang等(《最新眼科研究》(Current Eye Research)，第16卷(8)769-775，1997年8月和IVOS，第39卷(4)，S488，1998年3月)公開了一種α1A拮抗劑和5-HT1A興奮劑5-甲基烏拉地爾可降低猴子的IOP，不過，這是由於其α1A受體活性所導致的。此外，將5-HT1A拮抗劑公開為用於治療青光眼(升高的IOP)(例如WO92/0338，McLees)。此外，DeSai等(WO97/35579)和Macor等(US5,578,612)公開了5-HT1和5-HT1樣興奮劑在治療青光眼(升高的IOP)中的用途。這些抗偏頭痛的化合物是例如舒馬普坦和那拉曲坦這樣的5-HT1B、D、E、、F興奮劑和相關化合物。
附圖簡述附

圖1A和1B表示對使用8-OH-DPAT全身給藥並接觸嚴重光氧化性損害的大鼠ERGa-和b-波功能的保護作用。
附圖2表示對使用8-OH-DPAT全身給藥並接觸嚴重光氧化性損害的大鼠的視網膜形態(光感受器和RPE)的保護作用。
附圖3表示對使用丁螺環酮全身給藥並接觸嚴重光氧化性損害的大鼠的視網膜DNA、視網膜細胞數測定值(A)的保護作用和對視網膜形態(光感受器)的完全保護作用。
附圖4A和4B表示對使用SR-57746A全身給藥並接觸嚴重光氧化性損害的大鼠ERGa-和b-波功能的保護作用。
發明概括本發明涉及已經發現用於治療視網膜外層疾病的5-HT1A興奮劑，所述的視網膜外層病特別是AMD、RP和其它形式的遺傳性變性視網膜疾病；視網膜脫離和撕裂；黃斑起皺(macular pucker)；影響視網膜外層的局部缺血；糖尿病性視網膜病；與包括光動療法(PDT)在內的雷射療法(濾線柵(grid)、焦點(focal)和全視網膜)相關的損害；創傷；手術(視網膜易位、視網膜下手術或玻璃體切割術)或光誘發的醫源性視網膜病；和視網膜移植物的保護。
優選實施方案的描述已經證實5-羥色胺能5-HT1A興奮劑是對中樞神經系統的不同損害後的有效神經保護劑。我們已經令人意外地證實8-OH-DPAT(8-羥基-2-(二正丙氨基)四氫化萘)、丁螺環酮和SR-57746A在視網膜中表現出有效的神經保護活性並預防對光感受器和RPE細胞的光誘發的編程性細胞死亡。我們已經發現用丁螺環酮治療可以完全預防光氧化性誘發的視網膜病並顯著減少了視網膜DNA的損耗和ONL變薄。這些化合物中某些的安全優點使得它們特別適合於急性和慢性療法。這類活性劑具有治療各種視網膜外層變性疾病的用途。
在我們的光損害的實例中，抗氧化劑是無效的(α-生育酚)或在高劑量下在-定程度上有效(抗壞血酸鹽、維生素E類似物)。類似地，某些鈣拮抗劑(氟桂利嗪、尼卡地平)基因適當程度的療效，而其它鈣拮抗劑(硝苯地平、尼莫地平、維拉帕米)在預防光誘發的功能或形態改變方面無效。然而，已經發現5-HT1A興奮劑在這些光損害實例中的功效在100倍以上且由此用於治療視網膜外層疾病。
本發明關注任意藥物上可接受的5-HT1A興奮劑、包括藥物上可接受的鹽在治療視網膜外層疾病中的用途(化合物)。藥物上可接受的指的是可以安全地用於治療視網膜外層疾病的化合物。本文所用的視網膜外層包括RPE、光感受器、苗勒細胞(在其隆起部分延伸入視網膜外層的範圍內)和外叢狀層。配製這些化合物以用於全身或局部眼部給藥。視網膜外層疾病包括急性和慢性環境誘發的(創傷、局部缺血、光氧化性應激反應)正常或遺傳傾向個體中光感受器和RPE細胞變性情況。這種情況包括、但不限於AMD、RP和其它形式的遺傳性變性視網膜疾病；視網膜脫離和撕裂；黃斑起皺(macular pucker)；影響視網膜外層的局部缺血；糖尿病性視網膜病；與包括光動療法(PDT)在內的雷射療法(濾線柵(grid)、焦點(focal)和全視網膜)相關的損害；熱或冷凍療法，創傷；手術(視網膜易位、視網膜下手術或玻璃體切割術)或光誘發的醫源性視網膜病；和視網膜移植物的保護。
本發明的化合物對具有範圍約達500nM(優選低於100nM)的IC50值的5-HT1A受體具有有效的親合性。這些化合物也是具有範圍約達1μM(優選低於500nM)的IC50值的完全或部分興奮劑。用於本發明的有代表性的5-HT1A興奮劑包括、但不限於坦度螺酮、烏拉地爾、齊培瑞西酮、鹽酸瑞吡諾坦(repinotan hydrochloride)、鹽酸扎利普羅登(xaliproden hydrochloride)(SR-57746A)、丁螺環酮、氟辛克生、EMD-68843、DU127090、吉哌隆、阿奈螺酮、PNU-9566、AP-521、氟利苯噻侖(flibanserin)、MKC-242、來索吡瓊、鹽酸沙立唑坦(sarizotan hydrochloride)、Org-13011、Org-12966、E-5842、SUN-N4057和8-OH-DPAT。
可以使用下列方法測定本發明的受體結合和興奮劑活性。
方法15-HT1A受體結合試驗使用在中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中表達的人克隆受體、將(3H)8-OHDPAT用作配體來進行5-HT1A結合研究。在約40個體積的50mMTris pH7.4中將來自表達克隆的5-HT1A受體(由Biosignal，Inc.，Montreal，Canada為NEN生產的)的中國倉鼠卵巢細胞(CHO)的膜勻化5秒。使用Beckman Biomek 2000自動機(BeckmanInstruments，Fullerton，CA)製備藥物稀釋液。在27℃下將膜製備物、測試化合物和[3H]8-OH-DPAT(NEN，Boston，MA)在相同緩衝液中溫育1小時。通過在預浸入0.3％聚乙烯亞胺的Whatman GF/B玻璃纖維濾膜上的快速真空過濾來終止試驗。使用液體閃爍光譜法測定結合的放射性。使用非線性曲線固定程序分析數據(Sharif等，《藥物藥理學雜誌》(J Pharmac Pharmacol)，51685-694，1999)。
還使用來自牛和大鼠腦(局部來源)和人皮層膜的膜製備物進行了配體結合研究。切割出特定的大腦區域、在10個體積的0.32M蔗糖中勻化並以700xg離心10分鐘。以43,500xg將所得上清液離心10分鐘並使用10秒polytron處理將沉澱重新懸浮於50mMTris-HCl(pH7.7，25℃)中。將等分部分保存在-140℃下。為了除去內源性5-羥色胺，在37℃下將所述製備物溫育10分鐘，此後進行該實驗。通過在WhatmanGF/C濾膜上快速過濾、使用Brandel細胞收集器來終止試驗保溫過程。使用Cheng-Prusoff等式計算Ki值(DeVry等，《藥物實驗療法雜誌》(J Pharm Exper Ther)，2841082-1094，1998。)方法25-HT1A功能試驗可以使用各種方法測定本發明化合物的功能以便評價5-HT1A興奮劑的功能活性。一種這類的試驗使用來自雄性Sprague-Dawley大鼠的海馬切片來進行，從而測定了對毛喉素刺激的(-stimated)腺苷酸環化酶的抑制作用(《藥化雜誌》(J Med Chem)，4236，1999；《神經化學雜誌》(J Neurochem)，561114，1991；《藥物實驗療法雜誌》(J PharmExper Ther)，2841082，1998)。在25℃下將大鼠海馬膜在25個體積的含有1mM EGTA、5mM EDTA、5mM二硫蘇糖醇和20mM Tris-HCI、pH7.4的0.3M蔗糖中勻化。以1,000xg將該勻化物離心10分鐘。隨後以39,000xg將上清液離心10分鐘。以約1mg/ml的蛋白質濃度將所得沉澱重新懸浮於勻化緩衝液中並將等分部分保存在-140℃下。在應用前，將該膜在Potter-Elvehjem勻化器上再次勻化。將50μl的膜混懸液(50μg蛋白質)加入到含有100mM NaCl、2mM乙酸鎂、0.2mM ATP、1mMcAMP、0.01mM GTP、0.01mM毛喉素、80mM Tris-HCl、5mM磷酸肌酸、0.8U/μl肌酸磷酸激酶、0.1mM IBMX、1-2μCiα-[32P]ATP的保溫緩衝液中。通過向該保溫混合物(30℃下預溫熱5分鐘)中添加膜溶液來啟動與測試化合物的保溫過程(30℃下10分鐘)。按照Salomon的方法測定[32P]cAMP(《環核苷酸研究進展》(Adv Cyclic Nucleotide Res)，1035-55，1979)。使用Bradford(《生化分析》(Anal Biochem)，72248-254，1976)試驗測定蛋白質。
另外可以按照Schoeffter等的方法測定重組人受體中的功能活性(《神經藥物學》(Neuropharm)，36429-437，1997)。使用重組人5-HT1A受體轉染的海拉細胞在24孔平板上生長至融合。將該細胞用1mlHepes-緩衝鹽水(按mM計)(NaCl 130，KCl 5.4，CaCl21.8，MgSO40.8，NaH2PO40.9，葡萄糖25，Hepes 20，pH7.4)和酚紅5mg/l衝洗。在37℃下將細胞在0.5ml鹽水中用6μCi/ml的[3H]腺嘌呤(23Ci/mmol，Amersham，Rahn AG，Zurich，Switzerland)標記2小時。隨後用1ml含有1mM異丁基甲基黃嘌呤的緩衝鹽水將平板衝洗2次。在有或沒有10μM毛喉素和測試化合物存在的情況下將細胞在1ml的該溶液中保溫15分鐘(37℃)。然後除去緩衝液並加入含有0.1mM cAMP和0.1mM ATP的1ml 5％三氟乙酸(TCA)以便提取樣品。在4℃下30分鐘後，使TCA提取物在Dowex AG50W-X4和氧化鋁柱上進行層析分離(Salomon，《酶學方法》(Meth Enzymol)，19522-28，1991)。將產生的環AMP計算為[3H]cAMP/([3H]cAMP+[3H]ATP)之比。將方法1和2中所述的上述步驟用於生成下列數據。
表1.5-HT1受體結合和功能試驗數據
一般對變性疾病而言，通過口服方式給予本發明的5-HT1A興奮劑，其中這些化合物的每日劑量範圍約為0.001-約500毫克。優選的總每日劑量範圍約為1-約100毫克。諸如玻璃體內、外用眼部、經皮貼劑、真皮下、非腸道、眼內、結膜下或眼球後或腱下(subtenon’s)注射、經鞏膜(包括離子電滲透法)或緩釋可生物降解聚合物或脂質體這樣的非口服給藥可能還要求調節提供治療有效量的所述化合物所必不可少的總每日劑量。還可以以眼部灌洗溶液的形式給予5-HT1A興奮劑。濃度應在約0.001μM-約100μM、優選約0.01μM-約5μM的範圍。
可以將5-HT1A興奮劑混入各種類型的用於輸送至眼部的眼用製劑(例如通過局部、隔室內(intracamerally)或通過植入物的方式)。可以將它們與眼科可接受的防腐劑、表面活性劑、粘度增強劑、膠凝劑、滲透促進劑、緩衝劑、氯化鈉和水混合而製成無菌的眼用含水混懸劑或溶液或特性凝膠或在原位形成凝膠。可以通過將所述化合物溶於生理上可接受的等滲含水緩衝液來製備眼用溶液製劑。此外，所述的眼用溶液可以包括眼科可接受的表面活性劑以便有助於溶解所述的化合物。該眼用溶液可以含有諸如羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等這樣的粘度增強劑以便改善所述製劑在結膜囊中的保留程度。為了製備無菌眼用軟膏製劑，將活性組分與諸如礦物油、液體羊毛脂或白凡士林這樣的適宜載體中的防腐劑混合。可以按照用於類似眼用製劑的公開配製方法通過將所述的活性組分懸浮於由例如卡波姆-940等這樣組合製備的親水性基質來製備無菌眼用凝膠製劑；可以混入防腐劑和張度劑。
如果經局部給藥，那麼優選將5-HT1A興奮劑配製成pH約為4-8的局部用眼用混懸劑或溶液。5-HT1A興奮劑在這些製劑中的含有量通常在.001％-5％(重量)、而優選.01％-2％(重量)的範圍。因此，就局部給藥而言，根據有技能的臨床醫師的考慮，可以給眼部表面滴1-2滴這些製劑，每天1-4次。
根據有技能的臨床醫師的考慮，按照本發明每天給予1-4次下列局部用眼用製劑是有用的。
實施例1
實施例2
實施例3
實施例4
實施例5
實施例6
方法3大鼠光氧化性誘發的視網膜病模型中的神經保護作用在我們的光氧化性誘發視網膜病實例中評價這些5-HT1A興奮劑的保護作用。
光化學損害的誘導.通過對在黑暗中適應的大鼠(24小時)暴露於(220fc)藍光(半振幅帶通＝435-475nm)6小時而誘發光化學損害。使動物在黑暗中恢復5天，此後以電診斷方式評價視網膜功能。在這種光暴露過程中使大鼠單獨寄居在潔淨的聚碳酸酯籠中。
電診斷評價.在24小時黑暗適應期後記錄來自麻醉大鼠的視網膜電圖(ERG)。通過腹膜內注射鹽酸氯胺酮(75mg/Kg)和賽拉嗪(6mg/Kg)使大鼠麻醉。通過觀測ganzfeld而導出從位於角膜上的鉑-銥電線圈電極中記錄的閃爍ERGs。將對一系列強度增加的光閃爍的電反應數位化以便分析暫時波形特徵和反應電壓-log強度(VlogI)的關係。ERGa-波的改變與光感受器和視網膜色素上皮損害有關，而對視網膜內層的損害反映在ERG b-波的改變中。
視網膜形態的評價.眼組織獲自對照和藥物或載體給藥的大鼠且通過將它們浸入2％低聚甲醛和2％戊二醛的混合物而固定。使固定的眼球在濃度遞增的乙醇系列中脫水、將它們包埋在JB-4塑料樹脂內並使用與顯微鏡連接的定量計算機影象分析系統分析1-1.5-微米厚的切片。測定視網膜層厚度(視網膜色素上皮，RPE；外核層厚度，ONL；內核層厚度，INL；和光感受器內層和外層片段的長度，IS+OS)。
DNA改變的評價.通過CO2吸入對白化體大鼠實施安樂死並將各視網膜冷凍在單獨的管中。已經將各視網膜在0.8ml(2.0M NaCl，50mMNaPO4，pH7.4，2mM EDTA)中進行了超聲處理而產生了均勻的勻化物並將其冷凍保存。用含有1.1μg/ml二苯並咪唑(Hoechst33258)的2.0MNaCl、50mM NaPO4、pH7.4、2mM EDTA將各樣品的等分部分(0.1ml)稀釋10倍。使用溶於相同緩衝液的0-25μg/ml牛胸腺DNA構建標準曲線。將一式三份的0.2ml各視網膜樣品的等分部分和標準品吸移入96孔平板以用於在Cytofluor II中進行螢光測定。激發波長為360nm，而發射波長為460nm。
受試者和給藥.將雄性Sprague Dawley大鼠隨機分成藥物和載體實驗組。使對照大鼠在正常循環的光接觸條件下寄居在其籠中。在6小時藍光接觸前48、24和0小時對全部大鼠給藥。給藥方案如下1.)8-OH-DPAT(8-羥基-2-(二正丙氨基)四氫化萘)在光接觸前給大鼠皮下(SC)注射三次載體(N＝10)或8-OH-DPAT(0.5mg/kg[N＝5]或1.0mg/kg[N＝10])。將5隻大鼠用作對照。通過分析ERG反應並測量視網膜形態的改變來評價視網膜的保護作用。
2.)丁螺環酮為了進行DNA定量，在光接觸前給6隻大鼠/治療組腹膜內給予載體或丁螺環酮(0.5和1mg/kg)。將來自7隻正常大鼠的視網膜用作對照。為了評價視網膜形態的改變，對大鼠腹膜內給予載體(N＝8)或丁螺環酮(1.0mg/kg[N＝9])。將6隻大鼠用作對照。通過對視網膜DNA改變進行定量並測量視網膜形態的改變來評價視網膜的保護作用。
3.)SR-57746A對大鼠腹膜內給予載體(N＝15)或SR-57746A(0.5mg/kg[N＝5]或1mg/kg[N＝15])。將11隻大鼠用作對照。在5天恢復期後分析ERG以便評價視網膜的保護作用。
8-OH-DPAT評價結果.5天恢復期後測定的藍光接觸6小時使得ERG反應振幅比在正常時顯著減小(ANOVA，p＜0.001；Bonferroni t-檢驗，p＜0.05)(附圖1A和B)。藍光接觸使得載體給藥的大鼠比對照組在最大a-和b-波振幅上減小了75％。此外，閾值反應較低且在較亮的閃爍強度下產生。
給予8-OH-DPAT的大鼠表現出對這種光氧化性誘發的視網膜病的視網膜內外層功能的劑量依賴性保護作用(附圖1A和B)。給予8-OH-DPAT(0.5mg/kg)的大鼠在最大a-和b-波反應振幅方面與載體給藥的大鼠沒有差異且約為對照振幅的27％。然而，來自8-OH-DPAT(1.0mg/kg)給藥大鼠的最大a-和b-波反應振幅分別約為正常值的53％和61％且顯著高於在載體給藥大鼠中測定的反應(附圖1A和1B)。
與這些ERG改變一致，3周恢復期後對這些視網膜的形態分析證實光感受器細胞顯著(ANOVA，p＜0.01)消耗，從而縮短了光感受器內層+外層片段長度並使載體給藥的動物RPE平整。沒有檢測到INL厚度的顯著改變。與對照組相比，ONL厚度減少了73％，內層+外層片段長度減少了82％，且RPE厚度減少了59％(附圖2)。在給予了8-OH-DPAT(0.5mg/kg)的大鼠中觀察到的光損害與載體給藥的大鼠中測定的損害沒有顯著差別。儘管ERGs約減少了63％，但是ONL厚度減少到53％，光感受器片段長度減少了60％，且RPE厚度減少了34％。然而，在給予了8-OH-DPAT(1.0mg/kg)的大鼠中觀察到的光損害顯著不同於在載體給藥大鼠中的觀察結果。儘管ERG反應振幅大於正常值的50％，但是與載體給藥的大鼠相比，ONL厚度為2.4倍厚度、光感受器片段長度為2.9倍且RPE厚度為1.9倍。
丁螺環酮評價結果.正如在附圖3A中所觀察到的，載體給藥的視網膜DNA水平顯著低於對照水平約30％(ANOVA，p＝0.017)。在給予載體或0.1mg/kg丁螺環酮的組之間沒有測定出顯著差異。在給予丁螺環酮(1mg/kg)的大鼠中測定了視網膜的保護作用。視網膜DNA水平顯著高於載體給藥大鼠中測定的視網膜DNA水平，但與對照組相比沒有顯著性差異。
藍光接觸6小時使得光感受器數量顯著減少(ANOVA，p＜0.05)。在4周恢復期後對這些視網膜的形態分析證實載體給藥的大鼠中外核層比對照組薄54％(附圖3B)。然而，在正常與丁螺環酮治療的大鼠之間測定的ONL厚度方面沒有顯著性差異。在給予丁螺環酮(1mg/kg)的大鼠中，與正常大鼠的30.4μ相比，ONL厚度為28.3μ。
SR-57746A評價結果.在光接觸的給予了SR-57746A(0.5和1.0mg/kg)的大鼠中測定了對視網膜功能的顯著保護作用。載體給藥大鼠與對照組相比，最大a-和b-波反應振幅減少到50％(附圖4A和B)。在給予了SR-57746A(0.5mg/kg)的大鼠中的最大反應為對照組的82％而在給予了1mg/kg的大鼠中為正常值的70％。
結論.這些5-HT1A興奮劑(8-OH-DPAT、丁螺環酮和SR-57746A)在這種視網膜變性疾病的氧化性模型中表現出良好的功效和效能。在連續3天給予低至1mg/kg劑量的大鼠中獲得了功能和結構保護作用。
權利要求
1.一種用於治療視網膜外層疾病的方法，該方法包括給予藥物有效量的具有5-HT1A興奮劑活性的化合物的步驟。
2.權利要求1所述的方法，其中所述的化合物選自坦度螺酮、烏拉地爾、齊培瑞西酮、鹽酸瑞吡諾坦、鹽酸扎利普羅登(SR-57746A)、丁螺環酮、氟辛克生、EMD-68843、DU127090、吉哌隆、阿奈螺酮、PNU-95666、AP-521、氟利苯噻侖、MKC-242、來索吡瓊、鹽酸沙立唑坦、E-5842、SUN-N4057、Org-13011、Org-12966和8-OH-DPAT組成的組。
3.權利要求1所述的方法，其中所述的疾病選自下列疾病組成的組AMD、RP和其它形式的遺傳性變性視網膜疾病；視網膜脫離和撕裂；黃斑起皺；影響視網膜外層的局部缺血；糖尿病性視網膜病；與包括光動療法(PDT)在內的雷射療法(濾線柵、焦點和全視網膜)相關的損害；創傷；手術(視網膜易位、視網膜下手術或玻璃體切割術)或光誘發的醫原性視網膜病；和視網膜移植物的保護。
4.權利要求3所述的方法，其中所述的疾病是AMD。
5.權利要求3所述的方法，其中所述的化合物選自坦度螺酮、烏拉地爾、齊培瑞西酮、鹽酸瑞吡諾坦、鹽酸扎利普羅登(SR-57746A)、丁螺環酮、氟辛克生、EMD-68843、DU127090、吉哌隆、阿奈螺酮、PNU-95666、AP-521、氟利苯噻侖、MKC-242、來索吡瓊、鹽酸沙立唑坦、E-5842、SUN-N4057、Org-13011、Org-12966和8-OH-DPAT組成的組。
6.權利要求5所述的方法，其中所述的疾病選自AMD、RP和糖尿病性視網膜病組成的組。
全文摘要
本發明公開了用具有5－HT
文檔編號A61P25/02GK1418121SQ01806764
公開日2003年5月14日 申請日期2001年2月23日 優先權日2000年3月17日
發明者R·J·小考裡爾, M·A·卡賓, M·R·海爾伯格, T·R·迪安 申請人:愛爾康公司