製造光活性劑的組合物和方法
2023-05-12 08:05:31
專利名稱：：製造光活性劑的組合物和方法
技術領域：
：本公開內容總體上涉及生物影響和身體治療組合物的領域，更具體地說，總體上涉及可用於檢測、預防和/或治療例如，癌變組織的光活性化合物、組合物和方法。相關技術描述單畫L-天冬氨醯基二氬吟酚e6(Mono-L-aspartylchlorine6)四鈉鹽通常稱為他拉泊芬鈉(TalaporfinSodium),並且已知是光活性化學物質或藥物。例如，美國專利No.RE37,180涉及單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6的使用方法，該方法廣泛地包括將該藥物為病人靜脈內給藥並將合適波長的光施加到包含該藥物的組織上，以將該藥物光活化。一旦活化，該藥物使新的血管閉塞。因此，該藥物可用於治療其中血管閉塞預期具有積極效果的疾病。他拉泊芬鈉通常由植物原材料製備。在該同時包括萃取和反應步驟的過程期間，產生副產物。這些副產物之一是二-L-天冬氨醯基二氫外酚e6(di-L-aspartylchlorine6)。雖然二天冬氨醯基二氬吟酚e6以較低含量(在良好控制的過程中，通常約5%)作為反應副產物存在，但是需要嚴格的去除加工以將該他拉泊芬鈉產物純化成可接受的標準樣品。例如，純化粗他拉泊芬鈉反應產物和/或除去各種雜質(例如，二天冬氨醯基二氫卟酚e6)通常要求使反應產物經歷多個HPLC(高效液相色譜)步驟以達到可接受的他拉泊芬鈉純度水平。這種純化程序是昂貴和耗時的，並且還可能導致他拉泊芬鈉(與除去的雜質一起)的相當大的損失，高達約50%。因此，開發沒有昂貴的重複提純步驟或具有更少加工步驟的製備他拉泊芬鈉產物的方法是合乎需要的。此外，在不損失大部分他拉泊芬鈉的情況下純化反應產物，和/或維持或提高他拉泊芬鈉產物相對於每一質量原材料輸入的產率是合乎需要的。他拉泊芬鈉的商業接受性取決於各種因素，例如製造成本、保存限期、儲存期間的穩定性、製造的容易性、功效、生物利用度、藥代動力學性能等。因此，具有顯著降低製造成本的製造他拉泊芬鈉的新途徑是合乎需要的。具有產生更純的他拉泊芬鈉劑型的新組合物也是合乎需要的。本公開內容旨在克服上面所述缺點中一種或多種，並且進一步提供相關的優點。概要在一個方面中，本公開內容涉及二氫卟酚e6和碳二亞胺的化學反應產物。在一些實施方案中，該化學反應產物包含以下形式的二氫卟酚e6酸酐formulaseeoriginaldocumentpage14和二天冬氨醯基二氳卟酚e6的前體。在一些實施方案中，該二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體佔不到約5mol%，基於該化學反應產物內存在的二氫卟酚物質的總量。在另一個方面，本公開內容涉及組合物，其以基本上純的形式包含下式I的化合物或其藥學上可接受的鹽式I。在另一個方面，本公開內容涉及二氫卟酚e6酸酐或其藥學上可接受的鹽的製備方法。該方法包括將二氫卟酚e6與羧基活化劑結合以獲得包含具有下式的二氫卟酚e6酸酐或其鹽的混合物該方法還可以包括將該二氫卟酚e6酸酐或其鹽純化。在另一個方面，本公開內容涉及中間體的製備方法。該方法包括用羧基活化劑活化二氫卟酚e6以獲得包括中間體的混合物，當使用15質子核磁共振("H-NMR)波譜在500MHz下使用包含(16-丙酮和(16-二曱亞碸的溶劑分析時，該中間體顯示的譜圖包括在約1.63(t，3H)，1.72/2.05(m，2H)，1.78(d，3H)，2.50/2.65(m，2H)，3.14(s，3H)，3.42(s，3H)，3.68(br.q，2H)，3.69(s，3H)，4.63(br.q,1H)，4.67(br.d，1H),5.59/5.56(d，2H)，6.37/6.16(d，1H)，8.07(dd，1H)，8.86(s，1H)，9.35(s，1H)和9.67(s，lH)的以ppm為單位的化學位移。該方法還包括離析該中間體。在另一個方面，本公開內容涉及他拉泊芬鈉或其藥學上可接受的鹽的製備方法。該方法包括將pH值為約10-約12的天冬氨酸鹽組合物與根據權利要求i的化學反應產物在有機溶劑存在下結合而形成反應混合物。該方法還可以包括"使該反應混合物呈鹼性。該方法還可以包括使他拉泊芬或其藥學上可接受的鹽從該鹼性反應混合物中沉澱。在另一個方面，本公開內容涉及他拉泊芬鈉的製備方法。該方法包括在反應中使用純化的中間體反應混合物來製備他拉泊芬鈉，該純化的中間體反應混合物是從包含二氫卟酚e6、二氫卟酚e6酸酐和二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體的粗反應混合物獲得的，該粗反應混合物中已經除去了顯著比例的二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體。在另一個方面，本公開內容涉及包含第一反應體積和第二反應體積之間的偶合反應產物的反應產物，該第一反應體積包含下式的二氫吟酚e6酸酐和小於約5mol。/o二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體，基於該反應產物內的總二氫卟酚物質；該第二反應體積包含L-天冬氨酸或其酯。在一些實施方案中，該反應產物包含單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6或其藥學上可接受的鹽，和二天冬氨醯基二氫卟酚e6。二氫卟酚物質的實例包括二氬卟酚e6、二氫卟酚e6酸酐和二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體等，以及包含二氫卟酚發色團的化合物。在另一個方面，本公開內容涉及單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6或其藥學上可接受的鹽的製備方法，該方法包括將二氫卟酚ee與羧基活化劑結合以獲得包含式I中間體或其鹽的混合物該方法還包括離析該式I中間體或其鹽。在一些實施方案中，該方法還包括將該經離析的式I中間體或其鹽與含胺的試劑結合以形成他拉泊芬鈉或其藥學上可接受的鹽。在另一個方面，本公開內容涉及光活性劑或其藥學上可接受的鹽的製備方法。該方法包括將包含下式化合物或其藥學上可接受的鹽，有機溶劑和一種或多種二天冬氨醯基二氬卟酚e6前體的組合物與鹼性含水天冬氨酸鈉組合物結合以形成粗單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6反應混合物。在一些實施方案中，該粗反應混合物包含小於約2mol。/。二天冬氨醯基二氫P卜酚e6，基於該粗反應混合物內存在的二氬吟酚物質的總量。該方法還包括使該反應混合物呈鹼性。在一些實施方案中，方法還包括使相當大量的該單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6從該反應混合物中沉澱。在另一個方面，本公開內容涉及二氫卟酚e6和脫水劑的化學反應產物，該化學反應產物包含以下形式的二氫卟酚e6酸酐和二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體。在一些實施方案中，該二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體佔不到約5mol%，基於該化學反應產物內存在的二氫叫、酚物質的總量。在另一個方面，本公開內容涉及包括二氫吟酚e6的反應產物的混合物。該混合物包括此前未知的二氬H、酚e6酸酐，和/或它的衍生物。該二氫吟酚e6酸酐具有下式該混合物含有顯著降低濃度的二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體及其它不需要的物質，基於存在的總二氫卟酚物質，通常小於5%。該混合物可以是二氫卟酚e6與碳二亞胺的活化反應的純化反應產物。該碳二亞胺可以是N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)或N,N'-二環己基-碳二亞胺(DCC)。在一些實施方案中，上式的二氫卟酚e6酸酐可以在含至多約5%二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體的混合物中，基於該反應混合物中的總二氫卟酚物質。在另一個實施方案中，該二氫外酚ee酸酐可能在包含至多3。/。二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體的混合物中，基於該反應混合物中的總二氬外酚物質。在另一個方面，本公開內容涉及他拉泊芬鈉的製備方法，該方法包括以下步驟製備包括二氫卟酚e。它的酸酐和二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體的中間體反應混合物；通過從該混合物中除去顯著比例的二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體將該混合物純化；和在反應中使用該經純化的混合物以製備他拉泊芬鈉。在一些實施方案中，該中間體反應混合物可以包括二曱亞碸。在一些實施方案中，該中間體反應混合物可以包括(EDC)和二曱基甲醯胺(DMF)。該純化步驟可以包括濾過活性二氧化矽的床。該純化步驟還可以包括添加設計用來抑制前體形成為二-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6和形成其它不需要的物質的試劑。該純化步驟可20以包括將二天冬氨醯基二氫卟酚e6前體除去到小於約5%或小於約3%的濃度，基於該中間體反應混合物中存在的總二氫卟酚物質。該使用步驟可以包括在二甲亞碸中在高pH值下與L-天冬氨酸或其衍生物或酯偶合。該使用還可以包括在鹼性水溶液中與L-天冬氨酸或其衍生物或酯偶合。在另一個方面，本公開內容涉及反應產物，它包括第一反應體積和第二反應體積間的偶合反應產物，該第一反應體積包舍小於約5%(基於存在的總二氫卟酚物質)二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體，該第一反應體積包含下式的二氫卟酚e6酸酐和該第二反應物包含L-天冬氨酸，或其衍生物或酯。該反應產物可以包括至多約1。/。二天冬氨醯基二氬吟酚e6，基於存在的總二氫卟酚物質。該第一反應體積可以包括二曱亞碸。該第一反應體積可以通過適合的分離過程，例如濾過活性二氧化矽的床等被純化而除去二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體及其它不需要的反應產物。在又一個方面中，本公開內容涉及經純化的二氫卟酚e6酸酐作為中間體在化合物的製備中的用途，該化合物包含經由肽鍵與其它化學結構部分連接的二氫卟酚e6。附圖簡述當與附圖協同考慮時，通過參照詳細描述和權利要求可以更完全21地了解本公開內容，在附圖中，同樣的參考數字在整個附圖中是指類似的元素。圖1是根據一個說明性實施方案從二氫卟酚e6合成他拉泊芬鈉的兩階段方法(活化接著偶合)的示意圖。圖2A是根據一個說明性實施方案的純化二氫卟酚e6酸酐組合物的相對強度對質荷比(m/z)質譜分析圖。圖2B是根據一個說明性實施方案的二氫吟酚e6酸酐組合物的在410nm的吸光率(AU)對時間(min)HPLC(高壓液相色語)圖。標記為596.8和578.8的峰分別是二氫卟酚e6和二氫卟酚e6酸酐。圖3是根據一個說明性實施方案的二-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6的一種異構體的結構式的示意圖。圖4是根據一個說明性實施方案的經離析的二氫p卜酚&酸酐轉化成他拉泊芬鈉的示意圖。圖5是根據一個說明性實施方案由活化反應產生的反應混合物在用活性二氧化矽處理之後的相對強度對質荷比(m/z)質譜分析圖，說明該混合物中的主要物質是二氫卟酚e6酸酐。圖6是根據一個說明性實施方案使用UV檢測的在410nm處的吸光率(AU)對時間(min)HPLC圖，指示純化反應產物中存在的二氫p卜酚物質的相對百分率。圖7是根據一個說明性實施方案在500MHz下取得的二氫外酚e6酸酐在(16-丙酮/(16-二曱亞碸中的質子核磁共振('H-NMR)波譜。圖8是根據一個說明性實施方案在500MHz下取得的二氬外酚&酸酐在(16-丙酮/(16-二甲亞碸中的^-NMR波謙的選取區域和二氬卟酚e6在d6-丙酮/(16-二曱亞碸中的1H-NMR波*的選取區域的對比。詳細描述在以下描述中，某些特定細節經包括提供對各種公開的實施方案的全面了解。然而，相關領域技術人員將認識到可以在不採用這些特定細節中的一個或多個的情況下，或採用其它方法、組分、材料等實踐實施方案。在其它情況下，與萃取、分離、色語和/或純化系統有關的熟知結構(包括但不限於分離柱、過濾床等)沒有詳細地顯示或描述以避免不必要地使所述實施方案的描述模糊。除非上下文另有要求，在整個說明書和隨後的權利要求中，單詞"包含(comprise)"和其變型，例如"包含(comprises)"和"包含(comprising)"應按開放、涵蓋性意義解釋，即解釋為"包括但不限於"。在整個說明書中，所謂的"一個(one)實施方案"或"一個(an)實施方案，，或"在另一個實施方案中，，或"在一些實施方案中"是指連同所述實施方案描述的具體指示特徵、結構或特性包括在至少一個實施方案中。因此，在整個說明書中的各種地方出現的句子"在一個(one)實施方案中"或"在一個(an)實施方案中，，或"在另一個實施方案中，，或"在一些實施方案中"不一定都涉及同一個實施方案。另夕卜，具體的特徵、結構或特性可以在一個或多個實施方案中按任何適合的方式結合。應當指出，當用於本說明書和所附權利要求書時，單數形式"a"、"an"和"the"包括複數指示，除非內容另有清楚地指示。因此，例如，所謂的二氫吟酚e6酸酐中間體與含胺的試劑的化學反應包括單一含胺的試劑，或兩種或更多種含胺的試劑。還應當指出，術語"或"通常以其包括"和/或"的意義釆用，除非內容另有清楚地規定。以下詳細描述性質上僅是說明性的並且沒有打算限制本公開內容或本公開內容的應用和用途。另外，不希望受上述
技術領域：
、背景、當在此和權利要求中使用時，術語"脫水劑"或"羧基活化劑，，泛指在親核進攻方面能夠活化羧酸的化合物、分子或物質。在一些實施方案中，當進攻性親核試劑是胺或醇時，脫水劑或羧基活化劑能夠活化羧酸，導致醯胺或酯的形成。此類脫水劑的非限制性實例包括碳二亞胺(例如，N，N'-二環己基碳二亞胺(DCC)、N，N'-二異丙基碳二亞胺、l-乙基-3-(3-二曱基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽等)、氨腈。脫水劑的其它實例包括氯甲酸烷基酯(參見例如，Kim，Lee，KimJ.Org.Chem.1985，50，560),它們通常與叔胺如三乙基胺一起使用，與三苯基膦一起的偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)(參見例如Camp;JenkinsJ*Org.Chem.1989，54,3045，3049(theMitsunobuReaction))、各種氯珪烷(參見例如，Nakao;Oka;FukumotoBull.Chem.Soc.Jpn.1981，54，1267;還參見例如Brook;Chan，Synthesis1983,201)、氯代磺醯基異氰酸酯(參見例如，Dhar,MurthySynthesis1988，437-450)和N，N'-羰基二咪唑(參見例如，Morton，Mangroo，GerberCan.J.Chem.1988，66，1701)。在一些實施方案中，該脫水劑是碳二亞胺。在一些實施方案中，該碳二亞胺是N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽或N,N，-二環己基-碳二亞胺。在一些實施方案中，反應物的脫水可以包括羧酸與胺的反應，不管它們是否屬於胺基酸。在一些實施方案中，可以採用為反應物脫水的更常規方法以獲得所需的偶合反應(參見例如，Beckwith，smonograph,pp.73-185，TheChemistryofAmides)。例如，一種常規方法是胺與醯氯的反應。在一些實施方案中，用氯曱酸酯與伯胺一起處理反應物，因為如果該胺為一些目的需要，則這可以稍後逆轉(參見例如，Zabicky，A.A.,Ed,;Wiley:NewYork,1970;Raucher;JonesSynth,Commun.1985，15，1025)。當在此和在權利要求中使用時，術語"含胺的試劑"泛指包含伯或仲胺基團的化合物、分子或物質，或氨。此類含胺的試劑的非限制性實例包括胺基酸(例如，L-天冬氨酸)、天冬氨酸等，或它們的酯或衍生物。他拉泊芬鈉一般稱為單-L-天冬氨醯基-二氬外酚e6、NPe6、MACE、Taporfin、ME2906、Ace6、AC6和LS11。其化學文摘服務登記號是220201-34-3並且其化學名稱是(+)-四鈉(2S，3S)-18-羧合畫20-[N-(S)-l,2-二羧合乙基-氨基曱醯基曱基-13-乙基-3,7，12，17-四甲基-8-乙烯基二氫外酚-2-丙酸鹽。他拉泊芬鈉是通常用於光活化藥物療法中的光敏劑。在光活化之24後，他拉泊芬鈉形成擴展的高能量電子態，這種電子態促進單重態氧的形成，而導致單重態氧介導的細胞死亡。在一些實施方案中，當與癌細胞相互作用和感光時，他拉泊芬鈉可以殺死或破壞癌細胞。如圖1所示，從二氫卟酚e6製備他拉泊芬或其藥學上可接受的鹽通常要求兩階段過程。在一些實施方案中，在第一階段中，通過脫水劑活化二氬吟酚e6，在第二階段中，活化混合物與含胺的試劑反應而形成他拉泊芬鈉。此前，活化步驟的反應產物認為是不穩定、高能量、短壽命的物質，因此不能加以離析或純化。然而，申請人已經鑑定這一反應的重要組分為二氫卟酚e6酸酐並且出人意料地發現這一中間體是穩定物質。在一些實施方案中，當離析或純化時，該中間體與L-天冬氨酸反應而形成比沒有進行二氬卟酚e6酸酐的離析或純化的情況更純的他拉泊芬鈉。在一些實施方案中，他拉泊芬或其藥學上可接受的鹽的製備方法可以包括將二氫卟酚e6與羧基活化劑結合而包含式I中間體或其鹽的活化反應混合物該方法還可以包括使用一種或多種分離從反應混合物中離析式I中間體或其鹽。從該混合物中萃取、離析、分離和/或純化式I中間體或其鹽的適合的技術和/或方法包括萃取、分離、色譜和/或純化技術例如液相色i脊(例如HPLC)、柱色譜、薄層色譜、平面色譜等。在一些實施方案中，可以讓該混合物通過活性二氧化矽床，並通過質譜分析所得的二氧化矽處理的反應產物。圖5示出了二氫卟酚e6在通過脫水劑的活化反應之後二氧化矽處理過的反應產物的質譜。在Agilent1100序列LC/MSD上記錄該i普線，該儀器使用電噴霧電離並且具有在正性上的極性設置。如圖5所示，二氫葉酚e6酸酐的峰此刻與反應副產物的那些相比成比例地高得多。最強峰是二氫卟酚e6酸酐的峰。當允許二氧化矽處理或純化的活化反應產物(此刻包含更高濃度的二氬卟酚e6酸酐)與L-天冬氨酸在鹼性水溶液(使用氫氧化鈉來產生鹼性條件)中反應時，與現有技術相比，產生含純得多的他拉泊芬鈉的反應產物。偶合反應產物的HPLC分析在圖6中示出。它顯示約95%偶合反應產物(基於存在的總二氫外酚物質)是他拉泊芬鈉，僅含約5%其它反應產物。與具有低得多比例的他拉泊芬鈉的現有技術中的反應產物相比，將進一步這一偶合反應產物純化成96%他拉泊芬鈉簡單得多且沒有那麼昂貴。在一些實施方案中，所得的他拉泊芬鈉具有約90%-約99%或更高的純度。偶合反應產物的純化要求一系列用HPLC的處理以除去雜質。因此，在一些實施方案中，用具有更高他拉泊芬鈉濃度(和降低濃度的其它(不需要的)活化反應產物，例如二天冬氨醯基二氬吟酚&的前體)的反應產物開始純化過程還提供消除對HPLC純化過程的需要的可能性。因此，一些實施方案提供更高他拉泊芬鈉產率，以及更高他拉泊芬鈉純度的可能性。在一些實施方案中，首先將由活化反應產生的活化反應混合物純化以產生經純化的活化反應混合物，它具有提高濃度的二氫卟酚e6酸酐和降低濃度的其它(不需要的)活化反應產物，例如二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體(二天冬氨醯基二氫卟酚e6的一種異構體的繪圖在圖3中示出)。二-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6通常佔總產物混合物的3-4%。通常，通過反相HPLC步驟的多個串聯階段除去二天冬氨醯基二氫卟酚e6。然而，採用的HPLC方法既昂貴又耗時。此外，多階段HPLC分離導致他拉泊芬鈉產物損失，從而降低產物產率多達50%。現已發現，活化混合物中存在以前未為人知的"活化中間體"，具有下式I結構這一式I二氫卟酚e6酸酐可以稱為"二氫卟酚e6環狀酸酐"或"酸酐"。當允許這一從活化混合物提純的二氫卟酚e6酸酐在偶合反應中與L-天冬氨醯基二氫卟酚e6反應時，如圖4所示，顯著地減少二天冬氨醯基二氫卟酚e6的產生。在一些實施方案中，該方法還可以包括將該經離析的式I中間體或其鹽與含胺的試劑結合以形成他拉泊芬鈉或其藥學上可接受的鹽。在一些實施方案中，將二氫卟酚e6與羧基活化劑結合包括使二氬卟酚e6與碳二亞胺反應。在一些實施方案中，該碳二亞胺是DCC或EDC。在一些實施方案中，將該二氫卟酚e6與羧基活化劑結合包括使該二氫卟酚e6與碳二亞胺在二曱亞碸或二曱基甲醯胺存在下結合。在一些實施方案中，將該二氫卟酚e6與羧基活化劑結合包括將該二氬卟酚e6與EDC或DCC結合。在一些實施方案中，離析式I中間體或其鹽包括通過使用活性二氧化矽從該混合物中分離式I中間體或其鹽以產生基本上純的式I中間體或其鹽。27在一些實施方案中，將該經離析的式I中間體或其鹽與含胺的試劑結合包括將該經離析的式I中間體或其鹽與天冬氨酸鈉結合以形成他拉泊芬鈉。在一些實施方案中，將該經離析的式I中間體或其鹽與含胺的試劑結合包括將該經離析的式I中間體或其鹽與L-天冬氨酸或其酯在二曱亞碸存在下結合以形成他拉泊芬鈉。在一些實施方案中，將該經離析的式I中間體或其鹽與含胺的試劑結合包括在鹼性水溶液中將該二氫卟酚e6酸酐與L-天冬氨酸或其酯偶合以形成單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6的四-鈉鹽。本公開內容的某些實施方案涉及二氫卟酚e6酸酐或其藥學上可接受的鹽的製備方法。該方法包括將二氫卟酚e6與羧基活化劑結合以獲得包含具有下式的二氫卟酚e6酸酐或其鹽的混合物在一些實施方案中，羧基活化劑是DCC或EDC。該方法還可以包括將該二氬吟酚e6酸酐或其鹽純化。在一些實施方案中，將該二氫卟酚e6酸酐或其鹽純化包括使用一種或多種萃取、分離、色譜和/或純化4支術從該混合物中離析該二氫卟酚e6酸酐或其鹽。圖7示出了根據一個說明性實施方案的二氫卟酚e6酸酐在丙酮d6中的JHNMR波鐠。參照表l，如下式I二氫卟酚e6酸酐所示根據28相應的原子將位置指認編號。表l:^NMR峰指認tableseeoriginaldocumentpage29圖8示出了圖7中的NMR波謙的4-6ppm的放大部分，以及在相似條件下取得的二氫卟酚e6的NMR波譜的4-6ppm的放大部分。繪圖證明二氫卟酚e6和該酸酐之間的一些結構差異。本公開內容的某些實施方案涉及中間體的製備方法。該方法包括用羧基活化劑活化二氫卟酚e6以獲得包括中間體的混合物，當使用質子核磁共振('H-NMR)波譜在500MHz下使用d『丙酮/(16-二甲亞碸作為溶劑分析時，該中間體的譜圖包括在約1.63(t，3H),1.72/2.05(m，2H)，1.78(d,3H)，2.50/2.65(m，2H)，3.14(s，3H)，3.42(s，3H)，3.68(br.q，2H)，3.69(s,3H),4.63(br.q，1H)，4'67(br.d，1H)，5.59/5.56(d，2H)，6.37/6.16(d，1H)，8.07(dd，1H)，8.86(s，1H)，9.35(s，1H)和9.67(s，1H)處的化學位移(ppm)。該方法還包括離析該中間體。在一些實施方案中，離析該中間體包括使用一種或多種萃取、分離、色鐠和/或純化技術從該混合物中分離該中間體。在一些實施方案中，該一種或多種萃取、分離、色譜和/或純化技術包括使該混合物與活性二氧化矽接觸。該方法還可以包括在真空存在下乾燥經離析的中間體。本公開內容的某些實施方案涉及他拉泊芬，或其鹽的製備方法。該方法包括將中間體(通過二氬吟酚e6與羧基活化劑結合以獲得包含具有下式的二氫卟酚e6酸酐或其鹽的混合物formulaseeoriginaldocumentpage30並純化該二氫卟酚e6酸酐或其鹽而製備)與含胺的試劑結合以形成單胺基酸二氫卟酚e6或其藥學上可接受的鹽。在一些實施方案中，該含胺的試劑是L-天冬氨酸或其酯。本公開內容的某些實施方案涉及反應產物。該反應包括第一反應體積和第二反應體積之間的偶合反應產物的產物，該笫一反應體積包含下式的二氫吟酚e6酸酐和小於約5mol。/。二天冬氨醯基二氫P卜酚e6的前體，基於該第一反應體積中存在的總二氫卟酚物質；該第二反應體積包含L-天冬氨酸或其酯。在一些實施方案中，單位molo/。和。/。AUC(在曲線下的面積)可互換地使用。％AUC定義為曲線下的百分率面積並且通過HPLC-UV吸收分析測定，該分析使用波長為約400nm或約410nm的檢測信號。%AUC如下計算用所考慮的峰的曲線下的面積除以色i普中所有峰的曲線下的面積。在一些實施方案中，。/。AUC預期與該混合物中二氫外酚物質的濃度成正比，因為它們共用相同的發色團。因此，通過測量HPLC色譜中經分離的物質的。/。AUC，有可能測定反應混合物中存在的物質的相對濃度和/或mol%。在一些實施方案中，相應HPLC繪圖峰的相對AUC可以用來確定反應混合物中存在的物質的相對濃度和/或moI0/o。在一些實施方案中，該反應產物包含單-L-天冬氨醯基二氫p卜酚e6或其藥學上可接受的鹽，和二天冬氨醯基二氫卟酚e6。在一些實施方案中，該反應產物包含小於約2mol。/。二天冬氨醯基二氫吟酚e6，基於31該反應產物中存在的總二氫卟酚物質。在一些實施方案中，該反應產物包含小於約lmol。/。二天冬氨醯基二氫卟酚e6，基於該反應產物中存在的總二氫卟酚物質。在一些實施方案中，該第一反應體積還包含二甲亞碸或二甲基甲醯胺。可以通過分離過程純化該第一反應體積以除去二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體。在一些實施方案中，該分離過程是活性二氧化矽色譜。在一些實施方案中，將所得的活化混合物與L-天冬氨酸在鹼性水溶液中結合(如圖4所示)而產生他拉泊芬鈉以及其它副產物。本公開內容的某些實施方案涉及二氫卟酚e6和碳二亞胺的化學反應產物，該化學反應產物包含以下形式的二氫卟酚e6酸酐和二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體。在一些實施方案中，該二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體佔該化學反應產物內存在的總二氫吟酚物質的不到約5moI%。在一些其它實施方案中，該二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體佔該化學反應產物內存在的總二氬p卜酚物質的不到約3mol%。在一些實施方案中，二氫卟酚e6酸酐佔該化學反應產物內存在的總二氫卟酚物質的至少約85mol%。在一些實施方案中，該碳二亞胺是EDC或DCC。本公開內容的某些實施方案涉及以基本上純的形式包含式I的化合物或其藥學上可接受的鹽的組合物。在一些實施方案中，式I化合物或其藥學上可接受的鹽的總含量是該組合物內總二氫卟酚物質的大於約85mol%。在一些實施方案中，式I化合物或其藥學上可接受的鹽的總含量是該組合物內總二氫卟酚物質的大於約90mol%。在一些實施方案中，式I化合物或其藥學上可接受的鹽的總含量是該組合物內總二氫卟酚物質的大於約95mol%。在一些實施方案中，式I化合物或其藥學上可接受的鹽的總含量大於該組合物的約85wt%。在一些實施方案中，式I化合物或其藥學上可接受的鹽的總含量大於該組合物的約90wt%。在一些實施方案中，式I化合物或其藥學上可接受的鹽的總含量大於該組合物的約95wt%。本公開內容的某些實施方案涉及以基本上純的形式包含式I的化合物33或其藥學上可接受的鹽的化學反應產物。在一些實施方案中，式I化合物的總含量大於約85mol%，基於該化學反應產物內存在的二氫卟酚物質的總量。在一些實施方案中，式I化合物的總含量大於約90mol%，基於該化學反應產物內存在的二氬吟酚物質的總量。在一些實施方案中，式I化合物的總含量大於約95mol%，基於該化學反應產物內存在的二氫卟酚物質的總量。本公開內容的某些實施方案涉及他拉泊芬鈉或其藥學上可接受的鹽的製備方法。該方法包括將pH值為約8-約12的天冬氨酸鹽組合物與二氬吟酚e6和碳二亞胺的化學反應產物在有機溶劑的存在下結合以形成反應混合物。在一些實施方案中，該有機溶劑選自二曱基曱醯胺、二曱亞碸、四氬呋喃、乙酸乙酯、二氯曱烷或它們的混合物。一些實施方案中，該化學反應產物包含以下形式的二氫外酚e6酸酐和二天冬氨醯基二氫p卜酚e6的前體。在一些實施方案中，該二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體佔不到約5mol%，基於該化學反應產物內存在的二氫吟酚物質的總量。該方法還可以包括使該反應混合物呈鹼性。在一些實施方案中，使該反應混合物呈鹼性包括添加氬氧化物以維持該反應混合物的pH值在約8-約12。在一些實施方案中，該方法還可以包括使他拉泊芬或其藥學上可接受的鹽從該鹼性反應混合物中沉澱。在一些實施方案中，使該他拉泊芬或其藥學上可接受的鹽沉澱包括將適合的沉澱溶劑添加到該鹼性反應混合物中。該方法還可以包4舌通過過濾、離心分離和/或色i普從該鹼性反應混合物中分離他拉泊芬(或其藥學上可接受的鹽)沉澱。本公開內容的某些實施方案涉及他拉泊芬鈉的製備方法。該方法包括在反應中使用純化的中間體反應混合物來製備他拉泊芬鈉，該純化的中間體反應混合物是從包含二氫卟酚e6、二氫吟酚e6酸酐和二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體的粗反應混合物獲得的，該粗反應混合物中已經除去了顯著比例的二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體。在一些實施方案中，該純化的中間體反應混合物包含小於約5%二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體，基於總二氫p卜酚物質。在一些實施方案中，該純化的中間體反應混合物包含小於約3mol。/。二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體，基於總二氫卟酚物質。在一些實施方案中，該二氫卟酚e6環狀酸酐是式I的二氫卟酚e6環狀酸酐或其鹽在一些實施方案中，該純化的中間體反應混合物還包含二甲亞碸。在一些實施方案中，該純化的中間體反應混合物還包含EDC或DCC和二甲基曱醯胺。在一些實施方案中，通過使用活性二氧化矽除去了顯著比例的二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體。本公開內容的某些實施方案涉及光活性劑或其藥學上可接受的鹽的製備方法。該方法包括將包含下式化合物或其藥學上可接受的鹽，有機溶劑和一種或多種二天冬氨醯基二氫36組合物結合以形成粗單-L-天冬氨醯基二氬卟酚e6反應混合物，該粗反應混合物包含小於約2摩爾二天冬氨醯基二氫卟酚e6，基於該粗反應混合物內存在的總二氫H、酚物質。該方法還可以包括4吏該反應混合物呈鹼性。該方法還可以包括使相當大量該單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6從該反應混合物中沉澱。在一些實施方案中，使相當大量單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6從該反應混合物中沉澱包括提供足夠量的有機溶劑以引起該反應混合物中存在的單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6的多於約50mol。/。沉澱。在一些實施方案中，使該反應混合物呈鹼性包括為該反應混合物提供足夠量的鹼性劑以維持pH值為約8-約12。在一些實施方案中，使該反應混合物呈鹼性包括為該反應混合物提供足夠量的鹼性劑以維持pH值為約10-約12。在一些實施方案中，該至少一種二天冬氨醯基二氫卟酚e6前體佔該反應混合物中存在的總二氫p卜酚物質的小於約lmol。/。至約2mol%。本公開內容的某些實施方案涉及包含以下形式的二氫卟酚e6酸酐和二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體的反應產物；其中該二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體佔存在的總二氫卟酚物質的小於約1至2mol%。實施例1二氬外酚e6酸酐合成將二氫吟酚e6(2.0g，3.3mmol)(FrontierScientific)溶於10mLDMF。將EDC(0.61g，3.2mmol)添加到該混合物中並允許反應1.5h。將該反應混合物裝到矽膠(Sigma-Aldrich)床上並用丙酮洗脫。收集著色部分並在真空中濃縮。進一步在真空存在下乾燥該酸酐。實施例2他拉泊芬鈉合成通過將10MNaOH添加到在10mL水中的天冬氨酸(~1.3g，10mmol)中直到達到pH值11而製備天冬氨酸鈉溶液。將實施例1的二氬外酚e6酸酐溶於DMF並緩'隻地添加到該天冬氨酸鈉溶液中。用10MNaOH使該混合物呈鹼性。將過量DMF添加到該暗色懸浮液中以使產物沉澱。通過過濾收集產物並用丙酮洗滌。將該材料再懸浮在丙酮中並通過過濾收集。在真空存在下乾燥所得的粗他拉泊芬鈉。雖然上述詳細描述中已經給出了至少一個實施例實施方案，但是不言而喻的是，存在許多變型。還不言而喻的是，在此描述的實施例實施方案沒有以任何方式限制本公開內容的範圍、適用性或配置的意的適宜的路線圖。應當理解，在不脫離所附權利要求書和其合法等效物所給出的公開範圍的情況下可以在元素的職能和安排方面作出各種改變。38權利要求1.二氫卟酚e6和碳二亞胺的化學反應產物，該化學反應產物包含以下形式的二氫卟酚e6酸酐和二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體；其中該二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體佔不到約5mol％，基於該化學反應產物內存在的二氫卟酚物質的總量。2.權利要求1的化學反應產物，其中該二天冬氨醯基二氫吟酚e6的前體佔不到約3mol%，基於該化學反應產物內存在的二氫吟酚物質的總量。3.權利要求1的化學反應產物，其中該二氬外酚e6酸酐佔該化學反應產物的至少約85mol%。4.權利要求1的化學反應產物，其中該碳二亞胺是^乙基-]\，-(3-二曱基氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽或N，N'-二環己基-碳二亞胺。5.組合物，以基本上純的形式包含下式化合物I或其藥學上可接受的鹽6.權利要求5的組合物，其中式I化合物或其藥學上可接受的鹽的總含量大於該組合物的約85wt%。7.權利要求5的組合物，其中式I化合物或其藥學上可接受的鹽的總含量大於該組合物的約90wt%。8.權利要求5的組合物，其中式I化合物或其藥學上可接受的鹽的總含量大於該組合物的約95wt%。9.二氫卟酚e6酸酐或其藥學上可接受的鹽的製備方法，該方法包括將二氫卟酚e6與羧基活化劑結合而獲得包含具有下式的二氫卟酚e6酸酐或其藥學上可接受的鹽的混合物並且將該二氫卟酚e6酸酐或其藥學上可接受的鹽純化。10.權利要求9的方法，其中該羧基活化劑是N，N'-二環己基-碳二亞胺或N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽。11.權利要求9的方法，其中將該二氫卟酚&酸酐或其鹽純化包括使用一種或多種萃取、分離、色譜和/或純化技術從該混合物中離析該二氬卟酚ee酸酐或其鹽。12.中間體的製備方法，該方法包括用羧基活化劑活化二氫卟酚e6而獲得包括中間體的混合物，當使用質子核磁共振^H-NMR)波譜在500MHz下使用d6-丙酮/d6-二曱亞碸作為溶劑分析時，該中間體顯示的譜圖包括在約1.63(t，3H)，1.72/2.05(m，2H)，1.78(d,3H)，2.50/2.65(m2H)，3.14(s，3H)，3.42(s,3H)，3'68(br.q，2H),3.69(s，3H)，4.63(br，q，1H),4.67(br.d,1H)，5.59/5.56(d，2H)，6.37/6.16(d，1H),8.07(dd,1H)，8.86(s,1H)，9.35(s，1H)和9.67(s，1H)處的以ppm為單位的化學位移；和離析該中間體。13.權利要求12的方法，其中離析該中間體包括使用一種或多種萃取、分離、色譜和/或純化技術從該混合物中分離該中間體。14.權利要求13的方法，其中該一種或多種萃取、分離、色譜和/或純化技術包括使該混合物與活性二氧化矽接觸。15.權利要求12的方法，還包括在真空存在下乾燥經離析的中間體。16.他拉泊芬的製備方法，該方法包括將根據權利要求9製備的中間體與含胺的試劑結合以形成單胺基酸二氫卟酚e6或其藥學上可接受的鹽。17，權利要求16的方法，其中該含胺的試劑是L-天冬氨酸或其酯。18.他拉泊芬或其藥學上可接受的鹽的製備方法，該方法包括在有機溶劑存在下將pH值為約10-約12的天冬氨酸鹽組合物與根據權利要求1的化學反應產物結合以形成反應混合物；4吏該反應混合物呈鹼性；和使他拉泊芬或其藥學上可接受的鹽從該鹼性反應混合物中沉澱。19.權利要求18的方法，其中該有機溶劑是二甲基甲醯胺、二甲亞碸、四氫呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷或它們的混合物。20.權利要求18的方法，其中使該反應混合物呈鹼性包括添加氫氧化物以維持該反應混合物的pH值在約8-約12的範圍內。21.權利要求18的方法，其中使他拉泊芬或其藥學上可接受的鹽沉澱包括將適合的沉澱溶劑添加到該鹼性反應混合物中。22.權利要求18的方法，還包括通過過濾和/或色譜從該鹼性反應混合物中分離他拉泊芬或其藥學上可接受的鹽的沉澱。23.他拉泊芬鈉的製備方法，該方法包括在反應中使用純化的中間體反應混合物製備他拉泊芬鈉，該純化的中間體反應混合物是從包含二氫吟酚e6、二氫卟酚e6酸酐和二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體的粗反應混合物獲得的，該粗反應混合物中已經除去了顯著比例的二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體。24.權利要求23的方法，其中該純化的中間體反應混合物包含小於約5mol。/。二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體，基於該純化的中間體反應混合物內存在的二氫外酚物質的總量。25.權利要求23的方法，其中該純化的中間體反應混合物包含小於約3mol。/。二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體，基於該純化的中間體反應混合物內存在的二氫卟酚物質的總量。26.權利要求23的方法，其中二氫卟酚e6環狀酸酐是式I的二氫外酚e6環狀酸酐或其鹽27.權利要求23的方法，其中該純化的中間體反應混合物還包含二甲亞碸。28.權利要求23的方法，其中該純化的中間體反應混合物還包含N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽、N，N'-二環己基-碳二亞胺或二甲基曱醯胺，或它們的結合物。29.權利要求23的方法，其中已經通過使用活性二氧化矽除去了顯著比例的二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體。30.反應產物，包含第一反應體積和第二反應體積之間的偶合反應產物，該第一反應體積包含下式的二氫卟酚e6酸酐和小於約5molV。二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體，基於該第一反應體積內存在的總二氫卟酴物質；和該第二反應體積包含L-天冬氨酸或其酯；其中該反應產物包含單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6或其藥學上可接受的鹽，和二天冬氨醯基二氫卟酚e6。31.權利要求30的反應產物，其中該反應產物包含小於約2mol%二天冬氨醯基二氫卟酚e。基於該反應產物內存在的總二氫卟酚物質。32.權利要求30的反應產物，其中該反應產物包含小於約lmol%二天冬氨醯基二氫卟酚e6,基於該反應產物內存在的總二氫卟酚物質。33.權利要求30的反應產物，其中該第一反應體積還包含二曱亞碸或二曱基甲醯胺。34.權利要求30的反應產物，其中通過分離過程純化該第一反應體積以除去二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體。35.權利要求34的反應產物，其中該分離過程是活性二氧化矽色語》36.單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6或其藥學上可接受的鹽的製備方法，該方法包4舌將二氫卟酚e6與羧基活化劑結合而獲得包含式I中間體或其鹽的混合物；H02C23o式I，離析該式I中間體或其鹽；和將該經離析的式I中間體或其鹽與含胺的試劑結合以形成他拉泊芬鈉或其藥學上可接受的鹽。37.權利要求36的方法，其中將該二氫卟酚e6與羧基活化劑結合包括使該二氫p卜酚e6與碳二亞胺反應。38.權利要求37的方法，其中該碳二亞胺是N，N'-二環己基-碳二亞胺、N-乙基-N，-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、N，N'-二環己基-碳二亞胺或它們的混合物。39.權利要求36的方法，其中將該二氫卟酚e6與羧基活化劑結合包括使該二氫卟酚e6與碳二亞胺在二曱亞碸或二甲基曱醯胺存在下反應。40.權利要求36的方法，其中使該二氫卟酚e6與羧基活化劑反應包括使該二氫卟酚e6與N-乙基-N，-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽或N，N'-二環己基J灰二亞胺反應。41.權利要求36的方法，其中離析式I中間體或其鹽包括通過使用活性二氧化矽從該混合物中分離式I中間體或其鹽以產生基本上純的式I中間體或其鹽。42.權利要求36的方法，其中將經離析的式I中間體或其鹽與含胺的試劑結合包括使該經離析的式I中間體或其鹽與天冬氨酸鈉反應以形成他拉泊芬鈉。43.權利要求36的方法，其中將該經離析的式I中間體或其鹽與含胺的試劑結合包括在二甲亞碸存在下將該經離析的式r中間體或其鹽與L-天冬氨酸或其酯結合以形成他拉泊芬鈉。44.權利要求36的方法，其中將該經離析的式I中間體或其鹽與含胺的試劑結合包括在鹼性水溶液中將該二氫吟酚e6酸酐與L-天冬氨酸或其酯偶合以形成單-L-天冬氨醯基二氫吟酚e6的四-鈉鹽。45.光活性劑或其藥學上可接受的鹽的製備方法，該方法包括將包含下式化合物或其藥學上可接受的鹽，有機溶劑和一種或多種二天冬氨醯基二氫吟酚e6前體的組合物與鹼性含水天冬氨酸鈉組合物結合以形成粗單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6反應混合物，該粗反應混合物包含小於約2mol。/。二天冬氨醯基二氬吟酚e6，基於該組合物內的總二氫卟酚物質；-使該反應混合物呈鹼性；和4吏相當大量該單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6從該反應混合物中沉澱。46.權利要求45的方法，其中該至少一種二天冬氨醯基二氫卟酚e6前體佔小於約5mol%，基於該組合物內的總二氫卟酚物質。47.權利要求45的方法，其中該至少一種二天冬氨醯基二氫卟酚e6前體佔小於約3mol%，基於該組合物內的總二氬外酚物質。48.權利要求45的方法，其中使該反應混合物呈鹼性包括為該反應混合物提供足夠量的鹼性劑以維持pH值為約8-約12。49.權利要求45的方法，其中使相當大量單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6從該反應混合物中沉澱包括提供足夠量的有機溶劑以引起該反應混合物中存在的多於50mol。/。單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6沉澱。50.二氫卟酚e6和脫水劑的化學反應產物，該化學反應產物包含以下形式的二氫卟酚e6酸酐和二天冬氨醯基二氫外酚e6的前體；其中該二天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體佔不到約5mol。/。，基於該化學反應產物內存在的二氫卟酚物質的總量。51.權利要求50的化學反應產物，其中該脫水劑是碳二亞胺。52.權利要求51的化學反應產物，其中該碳二亞胺是N-乙基-N'-(3-二曱基氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽或N，N'-二環己基-碳二亞胺。53.組合物，以基本上純的形式包含式I的化合物或其藥學上可接受的鹽formulaseeoriginaldocumentpage11式I。54.權利要求53的組合物，其中式I化合物的總含量大於約85mol%，基於該組合物內存在的二氫卟酚物質的總量。55.權利要求53的組合物，其中式I化合物的總含量大於約90mol%，基於該組合物內存在的二氫p卜酚物質的總量。56.權利要求53的組合物，其中式I化合物的總含量大於約95mol%，基於該組合物內存在的二氬卟酚物質的總量。全文摘要製備單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6的改進的兩階段反應過程。在第一階段中，二氫卟酚e6和碳二亞胺之間的活化反應在活化反應產物中產生此前未知的酸酐。將這一反應產物純化以除去顯著比例的二-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6的前體。該經純化的活化反應產物包含更高濃度的該此前未知的酸酐。將這一經純化的反應產物用於第二階段該經純化的活化反應產物與天冬氨酸的偶合反應。該偶合反應產生具有顯著降低的二-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6濃度的偶合反應產物。這種降低的二-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6濃度促進從該偶合反應混合物中提純單-L-天冬氨醯基二氫卟酚e6。文檔編號C07D491/22GK101490057SQ200780027494公開日2009年7月22日申請日期2007年6月29日優先權日2006年6月30日發明者A·J·帕倫伯格,L·徐申請人:光子科學腫瘤研究公司