紫三葉的組織培養方法

2023-05-05 00:55:16

專利名稱：紫三葉的組織培養方法
技術領域：
本發明涉及一種植物的組織培養方法，尤其是涉及紫三葉的組織培養方法。
背景技術：
紫三葉為豆科車軸草屬植物，原產於溫帶及亞熱帶地區，為多年生草本，指狀複葉 通常有3片小葉，小葉近無柄，常有齒缺，小葉呈紫紅色與綠色相間，是一種良好的花鏡材 料。但是作為國外引進的新品種，紫三葉初期引種數量較少，因此種苗供應受到一定限制。

發明內容
本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種可提高繁殖速 度和苗的整齊度，並提高性狀穩定性的紫三葉的組織培養方法。本發明的目的可以通過以下技術方案來實現紫三葉的組織培養方法，其特徵在於，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得取萌發的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片後，用自來水衝洗l_3h後於超淨工作 臺上，依次利用質量濃度為70-75 %的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0. 5-2 %。的汞浸泡 10-30min，再用無菌水衝洗4_6次，利用無菌濾紙吸乾芽表面的水分後，將芽切成0. 5-2cm 長的帶腋芽的節段，節段接種於芽誘導培養基上；(2)芽的分化和增殖節段接種於芽誘導培養基上1-3周後，小芽部位開始膨大，出現綠色突起，2-3周 後可見芽分生組織，再培養1-2個月，小芽可以長到2-3cm，將小芽切下轉入芽的增殖培養 基中進行增殖培養，小芽的分化較多，但生長迅速且無玻璃化等不良現象，在培養基中生長 發育良好；(3)不定芽壯苗培養在芽的增殖培養基上，誘導出的叢生芽中每叢有3-4株能夠伸長，其餘的處於矮 化狀態，將叢生芽分成小叢後，轉至壯苗培養基上生長，不定芽迅速伸長，15-30天後可以長 至 1. 5_3cm ；(4)生根培養取1.5-3cm的不定芽小植株，轉接入生根培養基中誘導生根，5-15天後幼苗 基部分化出白色的根原基，15-30天後可以長至2-3cm，根系粗壯，鬚根眾多，生根率為 90-100% ；(5)煉苗與移栽生根培養15-30天，根系長至0. 5-lcm時，選擇根系發達、生長健壯的無菌苗，於室 內開瓶煉苗1-4天，然後將苗取出，洗淨根部的瓊脂，栽於溫室內的苗床中馴化20-40天，即 可移栽室外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-100%。所述的芽誘導培養基包括MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L。
所述的芽誘導培養基優選MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。所述的芽的增殖培養基包括MS+6-BA0. 5-2. Omg/L+NAAO. 1-0. 2mg/L。所述的芽的增殖培養基優選MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L。所述的壯苗培養基包括MS+6-BA0. 5-2. Omg/L+NAAO. 1-0. 2mg/L。所述的壯苗培養基優選MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L。所述的生根培養基包括MS+NAA0. 05-0. 2mg/L。所述的生根培養基優選MS+NAAO. lmg/L。所述的培養基還包括蔗糖20_40g/L、瓊脂粉4_8g/L，培養基pH5. 5-6. 0，培養溫度 24-26°C，光照 1500-25001x。與現有技術相比，本發明通過組培技術，極大提高了紫三葉的繁殖速度和苗的整 齊度，並提高了其性狀的穩定性，可實現育苗的工廠化大批量生產。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明進行詳細說明。實施例1(1)無菌材料的獲得取萌發的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片後，用自來水衝洗Ih後於超淨工作檯 上，依次利用質量濃度為70%的乙醇浸泡10s，體積濃度為0. 5%。的汞浸泡lOmin，再用無菌 水衝洗4次，利用無菌濾紙吸乾芽表面的水分後，將芽切成0. 5cm長的帶腋芽的節段，節段 接種於包括MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L的芽誘導培養基上；(2)芽的分化和增殖節段接種於芽誘導培養基上1周後，小芽部位開始膨大，出現綠色突起，2周後 可見芽分生組織，再培養1個月，小芽可以長到2cm，將小芽切下轉入包括MS+6-BA0. 5mg/ L+NAAO. lmg/L的芽的增殖培養基中進行增殖培養，小芽的分化較多，但生長迅速且無玻璃 化等不良現象，在培養基中生長發育良好；(3)不定芽壯苗培養在芽的增殖培養基上，誘導出的叢生芽中每叢有3株能夠伸長，其餘的處於矮化 狀態，將叢生芽分成小叢後，轉至包括MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L的壯苗培養基上生長， 不定芽迅速伸長，15天後可以長至1. 5cm ；(4)生根培養取1. 5cm的不定芽小植株，轉接入包括MS+NAAO. 05mg/L的生根培養基中誘導生 根，5天後幼苗基部分化出白色的根原基，15天後可以長至2cm，根系粗壯，鬚根眾多，生根 率為90% ；(5)煉苗與移栽生根培養15天，根系長至0. 5cm時，選擇根系發達、生長健壯的無菌苗，於室內開 瓶煉苗1天，然後將苗取出，洗淨根部的瓊脂，栽於溫室內的苗床中馴化20天，即可移栽室 外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90%。上述各種情況的培養基還包括蔗糖20g/L、瓊脂粉4g/L，pH= 5. 5，培養溫度24°C， 光照 15001x。
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實施例2(1)無菌材料的獲得取萌發的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片後，用自來水衝洗2h後於超淨工作檯 上，依次利用質量濃度為75%的乙醇浸泡30s，體積濃度為1%。的汞浸泡15min，再用無菌水 衝洗5次，利用無菌濾紙吸乾芽表面的水分後，將芽切成Icm長的帶腋芽的節段，節段接種 於包括MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的芽誘導培養基上；(2)芽的分化和增殖節段接種於芽誘導培養基上2周後，小芽部位開始膨大，出現綠色突起，3周後可 見芽分生組織，再培養1個半月，小芽可以長到3cm，將小芽切下轉入包括MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L的芽的增殖培養基中進行增殖培養，小芽的分化較多，但生長迅速且無玻璃 化等不良現象，在培養基中生長發育良好；(3)不定芽壯苗培養在芽的增殖培養基上，誘導出的叢生芽中每叢有4株能夠伸長，其餘的處於矮化 狀態，將叢生芽分成小叢後，轉至包括MS+6-BA0. 2mg/L+NAA0. lmg/L的壯苗培養基上生長， 不定芽迅速伸長，20天後可以長至2cm ；(4)生根培養取1. 5cm的不定芽小植株，轉接入包括MS+NAAO. 05mg/L的生根培養基中誘導生 根，5天後幼苗基部分化出白色的根原基，25天後可以長至2cm，根系粗壯，鬚根眾多，生根 率為90% ；(5)煉苗與移栽生根培養20天，根系長至Icm時，選擇根系發達、生長健壯的無菌苗，於室內開瓶 煉苗3天，然後將苗取出，洗淨根部的瓊脂，栽於溫室內的苗床中馴化30天，即可移栽室外， 給予肥水管理，最終的移栽成活率為100%。上述各種情況的培養基還包括蔗糖30g/L、瓊脂粉6g/L，pH = 5. 8，培養溫度25°C， 光照 20001x。實施例3(1)無菌材料的獲得取萌發的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片後，用自來水衝洗3h後於超淨工作檯 上，依次利用質量濃度為75%的乙醇浸泡50s，體積濃度為1%。的汞浸泡30min，再用無菌水 衝洗6次，利用無菌濾紙吸乾芽表面的水分後，將芽切成2cm長的帶腋芽的節段，節段接種 於包括MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L的芽誘導培養基上；(2)芽的分化和增殖節段接種於芽誘導培養基上3周後，小芽部位開始膨大，出現綠色突起，4周後 可見芽分生組織，再培養2個月，小芽可以長到3cm，將小芽切下轉入包括MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L的芽的增殖培養基中進行增殖培養，小芽的分化較多，但生長迅速且無玻璃 化等不良現象，在培養基中生長發育良好；(3)不定芽壯苗培養在芽的增殖培養基上，誘導出的叢生芽中每叢有4株能夠伸長，其餘的處於矮化 狀態，將叢生芽分成小叢後，轉至包括MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的壯苗培養基上生長，不定芽迅速伸長，30天後可以長至2cm ；(4)生根培養取2cm的不定芽小植株，轉接入包括MS+NAAO. 2mg/L的生根培養基中誘導生根，15 天后幼苗基部分化出白色的根原基，30天後可以長至2. 5cm,根系粗壯，鬚根眾多，生根率 為 93% ；(5)煉苗與移栽生根培養30天，根系長至Icm時，選擇根系發達、生長健壯的無菌苗，於室內開瓶 煉苗4天，然後將苗取出，洗淨根部的瓊脂，栽於溫室內的苗床中馴化40天，即可移栽室外， 給予肥水管理，最終的移栽成活率為96%。上述各種情況的培養基還包括蔗糖40g/L、瓊脂粉8g/L，pH = 6. 0，培養溫度26°C， 光照 25001x。
權利要求
紫三葉的組織培養方法，其特徵在於，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得取萌發的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片後，用自來水衝洗1-3h後於超淨工作檯上，依次利用質量濃度為70-75％的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用無菌水衝洗4-6次，利用無菌濾紙吸乾芽表面的水分後，將芽切成0.5-2cm長的帶腋芽的節段，節段接種於芽誘導培養基上；(2)芽的分化和增殖節段接種於芽誘導培養基上1-3周後，小芽部位開始膨大，出現綠色突起，2-3周後可見芽分生組織，再培養1-2個月，小芽可以長到2-3cm，將小芽切下轉入芽的增殖培養基中進行增殖培養，小芽的分化較多，但生長迅速且無玻璃化等不良現象，在培養基中生長發育良好；(3)不定芽壯苗培養在芽的增殖培養基上，誘導出的叢生芽中每叢有3-4株能夠伸長，其餘的處於矮化狀態，將叢生芽分成小叢後，轉至壯苗培養基上生長，不定芽迅速伸長，15-30天後可以長至1.5-3cm；(4)生根培養取1.5-3cm的不定芽小植株，轉接入生根培養基中誘導生根，5-15天後幼苗基部分化出白色的根原基，15-30天後可以長至2-3cm，根系粗壯，鬚根眾多，生根率為90-100％；(5)煉苗與移栽生根培養15-30天，根系長至0.5-1cm時，選擇根系發達、生長健壯的無菌苗，於室內開瓶煉苗1-4天，然後將苗取出，洗淨根部的瓊脂，栽於溫室內的苗床中馴化20-40天，即可移栽室外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-100％。
2.根據權利要求1所述的紫三葉的組織培養方法，其特徵在於，所述的芽誘導培養基 包括 MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L。
3.根據權利要求2所述的紫三葉的組織培養方法，其特徵在於，所述的芽誘導培養基 優選 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。
4.根據權利要求1所述的紫三葉的組織培養方法，其特徵在於，所述的芽的增殖培養 基包括 MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。
5.根據權利要求4所述的紫三葉的組織培養方法，其特徵在於，所述的芽的增殖培養 基優選 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
6.根據權利要求1所述的紫三葉的組織培養方法，其特徵在於，所述的壯苗培養基包 括 MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。
7.根據權利要求6所述的紫三葉的組織培養方法，其特徵在於，所述的壯苗培養基優 選 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L。
8.根據權利要求1所述的紫三葉的組織培養方法，其特徵在於，所述的生根培養基包 括 MS+NAA0. 05-0. 2mg/L。
9.根據權利要求8所述的紫三葉的組織培養方法，其特徵在於，所述的生根培養基優 選 MS+NAA0. lmg/L。
10.根據權利要求2或4或6或8所述的紫三葉的組織培養方法，其特徵在於，所述的培養基還包括蔗糖20-40g/L、瓊脂粉4-8g/L，培養基pH5. 5-6. 0,培養溫度24-26°C，光照 1500-25001x。
全文摘要
本發明涉及紫三葉的組織培養方法，包括無菌材料的獲得，芽的分化和增殖，不定芽壯苗培養，生根培養，煉苗與移栽等步驟。與現有技術相比，本發明大大提高了紫三葉的繁殖速度和苗的整齊度，並提高了其性狀的穩定性，可實現育苗的工廠化大批量生產。
文檔編號A01H4/00GK101869065SQ20091004997
公開日2010年10月27日 申請日期2009年4月24日 優先權日2009年4月24日
發明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請人:上海上房園林植物研究所