表皮生長因子複合物脂質體及其製備方法和應用的製作方法
2023-04-24 03:53:26
表皮生長因子複合物脂質體及其製備方法和應用的製作方法
【專利摘要】本發明屬於中藥領域，公開了一種表皮生長因子複合物脂質體及其製備方法和應用。該表皮生長因子複合物脂質體由下述按質量份數計的原料製備而成：表皮生長因子0.1～5份、水飛薊賓5～30份、薏仁油5～30份、酵母提取物5～30份、微生物多糖5～30份、氫化卵磷脂30～200份、膽固醇10～80份、甘油5～30份。本發明工藝簡單、安全無毒，對皮膚刺激性小，性質平和，效果穩定。
【專利說明】表皮生長因子複合物脂質體及其製備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明屬於中藥領域，特別涉及一種表皮生長因子複合物脂質體及其製備方法和應用。
【背景技術】
[0002]目前，傳統的化妝品只是對皮膚外在營養的補給和對衰老皮膚進行遮蓋，無法阻止皮膚的衰老。而且一般方法製造的營養物和活性物化妝品實際效果不大，因為營養物和活性物不易滲入到皮膚深層，正常皮膚只能吸收一些小分子及脂溶性物質，對大分子蛋白質是不能吸收的，更難進入細胞內，活性物由於易受外界條件影響，在使用時也往往早巳失活了。表皮生長因子(EGF)作為多肽和蛋白質，對酶、光、PH值等敏感，具有穩定性差、易失活、生物利用度低等特點，這使其應用受到很大限制，為解決上述問題，很多化妝品單純將表皮生長因子經脂質體包封后，形成單一的表皮生長因子脂質體來使用，雖然隔絕了酶、PH值等作用，對表皮生長因子的活性有了一定保護，但利用率仍不理想，還不能充分的發揮表皮生長因子的護膚健膚效果。針對這些問題，經過多年的研究，將表皮生長因子與營養精華結合，形成一種相互的協同作用，並做成脂質體運用於化妝品中，使營養物和活性物的有效時間極大延長.將各種營養物和活性物滲入到細胞內被充分吸收利用，使化妝品不僅具有護膚、滋養和保護的功效，同時還能參與細胞的新陳代謝，從根本上使皮膚光潤富有彈性，保持肌膚自然健康。
【發明內容】
[0003]為了解決上述現有技術中存在的不足之處，本發明的首要目的在於提供一種表皮生長因子複合物脂質體。
[0004]本發明的又一目的在於提供一種上述表皮生長因子複合物脂質體的製備方法。
[0005]本發明的再一目的在於提供上述表皮生長因子複合物脂質體的應用。
[0006]本發明的目的通過下述技術方案實現:一種表皮生長因子複合物脂質體， 該表皮生長因子複合物脂質體由下述按質量份數計的原料製備而成:
[0007]表皮IiKW子0.1~5份
水飛薊賓5~30份
+惹?:油5~30份
酵母IS取物5~30份
徵生物多糖5~30份
氪化卵_1130~200份
膽固醉10~80汾 貨_15~30份。
[0008]所述表皮生長因子複合物脂質體更加優選由下述按質量份數計的原料製備而成:
[0009]
'M 皮 ζ k K [?'| /.0.5 ~3 份
水飛薊ft10~20份
惹f:油10~25份
+醇邛提取物8~20份
微物多糖8~20份`
M化卵磷脂50~150份
膽同醉15~50份 11'油10~20份。
`[0010]上述的一種表皮生長因子複合物脂質體的製備方法，包括以下操作步驟:
[0011](I)將30~200質量份氫化卵磷脂、10~80質量份膽固醇、5~30質量份水飛薊賓和5~30質量份薏仁油溶於無水乙醇中配得膜材溶液；將0.1~5質量份表皮生長因子、5~30質量份酵母提取物、5~30質量份微生物多糖和5~30質量份甘油溶於磷酸鹽緩衝液中配得EGF溶液；所述無水乙醇的用量為每30~200mg氫化卵磷脂使用50ml的無水乙醇；所述磷酸鹽緩衝液的用量為每0.1~5mg表皮生長因子使用IOml的磷酸鹽緩衝液；
[0012](2)將上述膜材溶液和EGF溶液裝入超臨界高壓釜中，密閉超臨界高壓釜，經二氧化碳高壓泵通入CO2，在壓力10~30Mpa、溫度30~60°C條件下乳化20~50分鐘，CO2流速為15L/h ;減壓分離出乳化產物，分離溫度為30~60V，分離壓力為5~15Mpa ;收集分離後的乳化產物，即得表皮生長因子複合物脂質體。
[0013]步驟(1)所述磷酸鹽緩衝液的pH為6.8。
[0014]步驟(2)所述乳化的壓力為20Mpa，溫度為45°C，乳化時間為35分鐘。
[0015]上述的表皮生長因子複合物脂質體在製備護膚品中的應用。[0016]所述表皮生長因子複合物脂質體在護膚品中的質量百分含量為0.01~10%，更加優選為質量百分含量0.05~5%。
[0017]所述護膚品中含有美白劑、保溼劑、抗氧化劑、表面活性劑、醇類化合物或水。
[0018]所述護膚品為溶液、懸浮液、乳狀液、霜劑、膏狀、凝膠、奶液、護膚液、粉、香皂、油、乾粉、粉底液、溼粉或噴劑。
[0019]各種原料的藥理療效如下:
[0020]表皮生長因子(EGF)是最早發現的生長因子，對調節細胞生長、增殖和分化起著重要作用。在臨床上廣泛應用於各種創傷的治療，尤其是皮膚創傷的治療，獲得良好的療效。表皮生長因子EGF通過與EGF受體高親和力的結合剌激表皮細胞(包括多種組織來源的上皮細胞、各種間質細胞)進入細胞分裂周期，啟動細胞內一些重要功能基因活化、表達、分泌生物活性蛋白質等。促使膠原纖維呈線狀排列，表皮細胞快速規則生長並及時覆蓋創面，啟動創面修復的過程，明顯加速美容、整容術後及其它皮膚創傷等傷口癒合，並保持創面平整光滑，減少癍痕和色素沉著。現代研究發現，表皮生長因子能剌激外胚層和內胚層起源的各種細胞如角膜上皮和內皮細胞、表皮、真皮層細胞(如纖維母細胞)、乳腺腺泡及間質細胞等，使其增殖遷移，加快新陳代謝，達到嫩膚的效果。同時能促進各種蛋白質的生物合成，促進細胞外大分子的合成(如透明質酸、彈性纖維蛋白等)，增加皮膚含水量，進而增加皮膚彈性，滋潤肌膚。促進細胞營養物質從細胞外主動運至細胞內，增加細胞內的營養，促進真皮層細胞分泌合成膠原纖維、多糖、糖蛋白等功能分子，使皮下真皮組織飽滿、肌纖維排列整齊緊密，從而減少和消除皺紋。對表皮細胞的增殖有較強的促進作用，使表皮細胞變得年輕化，使得表皮組織中較少有色素及死亡細胞的殘留等累積，使皮膚表現出嫩白無暇，消除色斑及色素沉著等異常皮膚表現，能有效遏制色斑的復發。
[0021]水飛薊賓是菊科藥用植物水飛薊種子的種皮中提取所得的一種黃酮木脂素類化合物，能促進細胞的再生和修復，具有穩定細胞及細胞內生物膜的作用。作為強抗氧化劑，具有抗氧化和抗衰老的功效，能夠清除人體內的自由基，延緩衰老。
[0022]薏仁油中富含薏仁酯、薏仁素、不飽和脂肪酸、蛋白質、維生素等，能清熱排水減輕肌膚疲勞，能有效阻止不良細胞生長，修護細胞維持細胞彈性，促進皮膚的新陳代謝，令肌膚美白而富有彈性。同時也是中國特有的基礎油，皮膚對薏仁油的吸收力強，兼具調和及功效的作用。
[0023]酵母提取物採用來自於酵母的天然原料精製而成，是酵母經破壁後將其中蛋白質、核酸、維生素等抽提，再經生物酶解的富含小分子的胺基酸、肽、核苷酸、維生素等天然活性成分的物質。其中含有豐富的胺基酸、肽、核酸(核苷酸)等生物活性成分，具有滋養皮膚、抗衰老等功能。
[0024]微生物多糖是來源於微生物的一種活性多糖，多糖作為人體皮膚真皮層重要組成成分，在皮膚新陳代謝過程中具有突出的調節作用，應用於化妝品中，能產生保溼、穩定、改善膚色、抗衰老和抗菌，保護血管，促進上皮細胞的細胞增殖和美化皮膚等功效，具有多效性、無毒性、來源廣 泛、天然綠色等優點。
[0025]本發明的原理是:
[0026]表皮生長因子的護膚健膚作用主要依賴於它獨特的生物活性，要充分利用它的生理特性，使它在皮膚新陳代謝過程中最大限度的發揮作用，一方面要保護其充分活性，另一方面還要保護皮膚的充分水分。在表皮生長因子複合物中，水飛薊賓和薏仁油除具有本身的營養成分功效外，由於具有強的抗氧化性和抗紫外線的能力，對表皮生長因子的活性起到很好的保護作用。同時研究還發現表皮生長因子EGF與肽類化合物等保溼因子具有優良的正協同作用，因此在配製含表皮生長因子複合物中添加酵母提取物和微生物多糖，很好的起到保護EGF生物活性和皮膚充分的水分，從而提高EGF的透滲性和有利皮膚吸收EGF的作用。根據表皮生長因子複合物所具有的良好生理特性和脂質體的特點，將表皮生長因子複合物做成一種脂質體化妝品，由於脂質體的磷脂雙分子膜和細胞有著相同的基本結構，兩者有很強的親合力，使脂質體及其所包含的表皮生長因子複合物容易進入到細胞內。脂質體進入皮膚深層後.有的進入細胞內，有的在細胞間停留。由於磷脂雙分子膜的圍繞，脂質體內的表皮生長因子複合物能緩慢地通過脂質體膜滲透出來，從而較長時間發揮作用.可較長時間保持活力，大大的提高了表皮生長因子複合物的生物利用度，從而對細胞進行修復和調整，全面的改善和更新代謝過程，促進皮膚細胞的生長，調節細胞中色素的平衡，合理調整皮膚結構，使皮膚細胞年輕化，達到滋潤、抗皺、美白、嫩膚、祛痘斑等目的，通過細胞本身新陳代謝從根本上使皮膚光潤富有彈性，保持肌膚自然健康。
[0027]本發明的表皮生長因子複合物脂質體是採用二氧化碳超臨界技術製備。在超臨界狀態下二氧化碳兼有氣液兩相的雙重特點，處於不同相態的二氧化碳有不同的密度，因而有不同的溶劑強度。利用超臨界二氧化碳溶融、膨脹、沉析的性質，將含有EGF、酵母提取物和微生物多糖活性成分的溶液與含有水飛薊賓和薏仁油營養成分的膜材溶液混合，在一定條件下通入超臨界二氧化碳，使二氧化碳滲透並溶脹磷脂雙分子層，保持一定時間後，然後快速釋放壓力，分離出表皮生長因子複合物脂質體。傳統的多種製備脂質體的方法，如逆向蒸發法、薄膜分散法、超聲波分散法、有機溶劑注入法等，這些方法在製備的過程中都必需加入對人體有害的有機溶劑，而超臨界二氧化碳是一種無毒、惰性、不燃、廉價易得又環保的反應介質，採用超臨界二氧化碳代替有機溶劑製備表皮生長因子複合物脂質體，其主要優點有:節約資源、沒有有機溶劑殘留，操作簡單可行，提高了 EGF的利用率。
[0028]本發明相對於現有技術具有如下的優點及有益效果:本發明工藝簡單、安全無毒，對皮膚刺激性小，性質平和，效果穩定。
【具體實施方式】
[0029]下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限於此。
[0030]實施例1
[0031](I)將30mg氫化卵磷脂、IOmg膽固醇、5mg水飛薊賓和5mg薏仁油溶於50ml的無水乙醇中配得膜材溶液；將0.1mg表皮生長因子、5mg酵母提取物、5mg微生物多糖和5mg甘油溶於IOml磷酸鹽緩衝液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0032](2)將上述膜材溶液和EGF溶液裝入超臨界高壓釜中，密閉超臨界高壓釜，經二氧化碳高壓泵通入CO2，在壓力達lOMpa、溫度達30°C中乳化20分鐘，CO2流速為15L/h ;減壓分離出乳化產物，分離溫度為30°C，分離壓力為5Mpa ;收集分離後的乳化產物，即得表皮生長因子複合物脂質體I。
[0033]實施例2
[0034](I)將50mg氫化卵磷脂、15mg膽固醇、IOmg水飛薊賓和IOmg薏仁油溶於50ml的無水乙醇中配得膜材溶液；將0.5mg表皮生長因子、8mg酵母提取物、8mg微生物多糖和IOmg甘油溶於IOml磷酸鹽緩衝液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0035](2)將上述膜材溶液和EGF溶液裝入超臨界高壓釜中，密閉超臨界高壓釜，經二氧化碳高壓泵通入CO2，在壓力達15Mpa、溫度達35°C中乳化25分鐘，CO2流速為15L/h ;減壓分離出乳化產物，分離溫度為35°C，分離壓力為6Mpa ;收集分離後的乳化產物，即得表皮生長因子複合物脂質體II。
[0036]實施例3
[0037](I)將80mg氫化卵磷脂、25mg膽固醇、12mg水飛薊賓和20mg薏仁油溶於50ml的無水乙醇中配得膜材溶液；將Img表皮生長因子、IOmg酵母提取物、IOmg微生物多糖和15mg甘油溶於IOml磷酸鹽緩衝液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0038](2)將上述膜材溶液和EGF溶液裝入超臨界高壓釜中，密閉超臨界高壓釜，經二氧化碳高壓泵通入CO2，在壓力達15Mpa、溫度達40°C中乳化30分鐘，CO2流速為15L/h ;減壓分離出乳化產物，分離溫度為40°C，分離壓力為SMpa ;收集分離後的乳化產物，即得表皮生長因子複合物脂質體III。[0039]實施例4
[0040](I)將IOOmg氫化卵磷脂、35mg膽固醇、15mg水飛薊賓和20mg薏仁油溶於50ml的無水乙醇中配得膜材溶液；將2mg表皮生長因子、15mg酵母提取物、15mg微生物多糖和15mg甘油溶於IOml磷酸鹽緩衝液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0041](2)將上述膜材溶液和EGF溶液裝入超臨界高壓釜中，密閉超臨界高壓釜，經二氧化碳高壓泵通入CO2，在壓力達20Mpa、溫度達45°C中乳化35分鐘，CO2流速為15L/h ;減壓分離出乳化產物，分離溫度為40°C，分離壓力為IOMpa;收集分離後的乳化產物，即得表皮生長因子複合物脂質體IV。
[0042]實施例5
[0043](I)將150mg氫化卵磷脂、50mg膽固醇、20mg水飛薊賓和25mg薏仁油溶於50ml的無水乙醇中配得膜材溶液；將3mg表皮生長因子、20mg酵母提取物、20mg微生物多糖和20mg甘油溶於IOml磷酸鹽緩衝液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0044](2)將上述膜材溶液和EGF溶液裝入超臨界高壓釜中，密閉超臨界高壓釜，經二氧化碳高壓泵通入CO2，在壓力達20Mpa、溫度達50°C中乳化40分鐘，CO2流速為15L/h ;減壓分離出乳化產物，分離溫度為50°C，分離壓力為IOMpa ;收集分離後的乳化產物，即得表皮生長因子複合物脂質體V。
[0045]實施例6
[0046](I)將180mg氫化卵磷脂、60mg膽固醇、25mg水飛薊賓和25mg薏仁油溶於50ml的無水乙醇中配得膜材溶液；將4mg表皮生長因子、25mg酵母提取物、25mg微生物多糖和25mg甘油溶於IOml磷酸鹽緩衝液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0047](2)將上述膜材溶液和EGF溶液裝入超臨界高壓釜中，密閉超臨界高壓釜，經二氧化碳高壓泵通入CO2，在壓力達25Mpa、溫度達55°C中乳化45分鐘，CO2流速為15L/h ;減壓分離出乳化產物，分離溫度為55°C，分離壓力為12Mpa ；)收集分離後的乳化產物，即得表皮生長因子複合物脂質體VI
[0048]實施例7[0049](I)將200mg氫化卵磷脂、80mg膽固醇、30mg水飛薊賓和30mg薏仁油溶於50ml的無水乙醇中配得膜材溶液；將5mg表皮生長因子、30mg酵母提取物、30mg微生物多糖和30mg甘油溶於IOml磷酸鹽緩衝液(PH6.8)中配得EGF溶液；[0050](2)將上述膜材溶液和EGF溶液裝入超臨界高壓釜中，密閉超臨界高壓釜，經二氧化碳高壓泵通入CO2，在壓力達30Mpa、溫度達60°C中乳化50分鐘，CO2流速為15L/h ;減壓分離出乳化產物，分離溫度為60°C，分離壓力為15Mpa;收集分離後的乳化產物，即得表皮生長因子複合物脂質體νπ。
[0051]對比例I
[0052](I)將IOOmg氫化卵磷脂、35mg膽固醇、15mg水飛薊賓溶於50ml的無水乙醇中配得膜材溶液；將2mg表皮生長因子、15mg酵母提取物、15mg微生物多糖和15mg甘油溶於IOml磷酸鹽緩衝液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0053](2)將上述膜材溶液和EGF溶液裝入超臨界高壓釜中，密閉超臨界高壓釜，經二氧化碳高壓泵通入CO2，在壓力達20Mpa、溫度達45°C中乳化35分鐘，CO2流速為15L/h ;減壓分離出乳化產物，分離溫度為40°C，分離壓力為IOMpa;收集分離後的乳化產物，即得表皮生長因子複合物脂質體A。
[0054]對比例2
[0055](I)將IOOmg氫化卵磷脂、35mg膽固醇、20mg薏仁油溶於50ml的無水乙醇中配得膜材溶液；將2mg表皮生長因子、15mg酵母提取物、15mg微生物多糖和15mg甘油溶於IOml磷酸鹽緩衝液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0056](2)將上述膜材溶液和EGF溶液裝入超臨界高壓釜中，密閉超臨界高壓釜，經二氧化碳高壓泵通入CO2，在壓力達20Mpa、溫度達45°C中乳化35分鐘，CO2流速為15L/h ;減壓分離出乳化產物，分離溫度為40°C，分離壓力為IOMpa;收集分離後的乳化產物，即得表皮生長因子複合物脂質體B。
[0057]對比例3
[0058](I)將IOOmg氫化卵磷脂、35mg膽固醇、15mg水飛薊賓和20mg薏仁油溶於50ml的無水乙醇中配得膜材溶液；將2mg表皮生長因子和15mg甘油溶於IOml磷酸鹽緩衝液(PH6.8)中配得EGF溶液；
[0059](2)將上述膜材溶液和EGF溶液裝入超臨界高壓釜中，密閉超臨界高壓釜，經二氧化碳高壓泵通入CO2，在壓力達20Mpa、溫度達45°C中乳化35分鐘，CO2流速為15L/h ;減壓分離出乳化產物，分離溫度為40°C，分離壓力為IOMpa;收集分離後的乳化產物，即得表皮生長因子複合物脂質體C。
[0060]通過對以上實施例1-7所得表皮生長因子複合物脂質體的粒徑大小和包封率的測定，結果見表1。
[0061]表1表皮生長因子複合物脂質體粒徑大小和包封率
[0062]
I實施例1~I實施例2~I實施例3~I實施例4~I實施例5~I實施例6 I實施例7 平均粒徑 106.2nm 108.6nm 109.1nm 100.2nm 100.8nm 105.8nm 110.8nm
包封率 40%42%44%42%40%38%38%[0063]本發明表皮生長因子複合物脂質體的外觀形態是直觀地反映了脂質體質量的標準，上述實驗結果表明，採用二氧化碳超臨界技術製備的表皮生長因子複合物脂質體顆粒形態均為球形，邊緣平整光滑，粒徑為正態分布，各實驗例之間的顆粒形態無明顯差異，表明其製備方法合理穩定。採用超臨界法製備脂質體的過程中，磷脂的乳化是非常重要的步驟，控制合適的乳化條件(壓力、溫度和時間)是脂質體粒徑大小和包封率的質量關鍵，此時二氧化碳形成超臨界流體，溶解磷脂的能力和非極性有機溶劑相似，將溶解於超臨界二氧化碳中的磷脂溶液和水相均勻混合形成乳劑，減壓除去二氧化碳後就可以得到均勻的脂質體溶液，同時也解決了有機溶劑殘留的問題。最佳的乳化條件為壓力20Mpa，溫度45°C，時間35分鐘。
[0064]應用實施示例
[0065](I)含表皮生長因子複合物脂質體的潤膚霜的製備
[0066]取上述實施例和對比例所得表皮生長因子複合物脂質體分別配製成潤膚霜，配方如下(按質量百分比計):
[0067]
【權利要求】
1.一種表皮生長因子複合物脂質體，其特徵在於:該表皮生長因子複合物脂質體由下述按質量份數計的原料製備而成:
表皮生長因了0.1-5份
水飛薊ft:5~30份惹仁油5~30 ?分 醇母提取物5~30份 微生物多糖5~30份氫化卵磷脂3 O~200份膽固醇10~80 f分廿油5~30份^
2.根據權利要求1所述的一種表皮生長因子複合物脂質體，其特徵在於:該表皮生長因子複合物脂質體由下述按質量份數計的原料製備而成: 表皮生長因子0.5~3份水飛薊賓IO~20份著仁油10~25份酵母提取物8~20份微生物多糖8~20份氫化卵磷脂50~150份 膽同醇15~50份 貨油10~20份。
3.根據權利要求1所述的一種表皮生長因子複合物脂質體的製備方法，其特徵在於包括以下操作步驟: (1)將30~200質量份氫化卵磷脂、10~80質量份膽固醇、5~30質量份水飛薊賓和5~30質量份薏仁油溶於無水乙醇中配得膜材溶液；將0.1~5質量份表皮生長因子、5~30質量份酵母提取物、5~30質量份微生物多糖和5~30質量份甘油溶於磷酸鹽緩衝液中配得EGF溶液；所述無水乙醇的用量為每30~200mg氫化卵磷脂使用50ml的無水乙醇；所述磷酸鹽緩衝液的用量為每0.1~5mg表皮生長因子使用IOml的磷酸鹽緩衝液； (2)將上述膜材溶液和EGF溶液裝入超臨界高壓釜中，密閉超臨界高壓釜，經二氧化碳高壓泵通入CO2，在壓力10~30Mpa、溫度30~60°C條件下乳化20~50分鐘，CO2流速為15L/h ;減壓分離出乳化產物，分離溫度為30~60°C，分離壓力為5~15Mpa ;收集分離後的乳化產物，即得表皮生長因子複合物脂質體。
4.根據權利要求3所述的製備方法，其特徵在於:步驟(1)所述磷酸鹽緩衝液的pH為6.8。
5.根據權利要求3所述的製備方法，其特徵在於:步驟(2)所述乳化的壓力為20Mpa，溫度為45°C，乳化時間為35分鐘。
6.根據權利要求1所述的一種表皮生長因子複合物脂質體在製備護膚品中的應用。
7.根據權利要求6所述的應用，其特徵在於:所述表皮生長因子複合物脂質體在護膚品中的質量百分含量為0.01~10%。
8.根據權利要求6所述的應用，其特徵在於:所述表皮生長因子複合物脂質體在護膚品中的質量百分含量為0.05~5%。
9.根據權利要求6所述的應用，其特徵在於:所述護膚品中含有美白劑、保溼劑、抗氧化劑、表面活性劑、醇類化合物或水。
10.根據權利要求6所述的應用，其特徵在於:所述護膚品為溶液、懸浮液、乳狀液、霜劑、膏狀、凝膠、奶液、護膚液、粉、香皂、油、乾粉、粉底液、溼粉或噴劑。
【文檔編號】A61K8/73GK103505403SQ201310456300
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2013年9月29日 優先權日:2013年9月29日
【發明者】侯秋紅 申請人:廣州市嬌蘭化妝品有限公司