Glp-1類似物藥物組合物的製作方法

2023-04-23 14:39:01

專利名稱：Glp-1類似物藥物組合物的製作方法
GLP-1類似物藥物組合物
背景技術：
本發明涉及含有胰高血糖素樣肽-1肽類似物和/或其可藥用鹽的組合物的改進、 藥物組合物、用於製備此類組合物的方法及其用途。胰高血糖素樣肽-1(7-36)醯胺(GLP-I)在腸L-細胞中通過胰高血糖素前體胰高血糖素原(pr印roglucagon)的組織特異性翻譯後加工合成(Varndel 1，J. M.等， J. Histochem Cytochem, 1985 33 1080-6)，並且響應於食物而被釋放入循環系統中。GLP-1 的血漿濃度從約15pmol/L的禁食水平上升至40pmol/L的餐後峰值水平。已經證實，就給定的血糖濃度上升而言，當口服施用葡萄糖時血漿胰島素的增加比靜脈內施用葡萄糖時約高3倍(Kreymann，B.等，Lancet 1987 :2，1300-4)。這種被稱作腸降血糖素作用的胰島素釋放的飲食性增加主要是體液性的，且認為GLP-I是人最有效的生理腸降血糖素。除了促胰島素作用外，GLP-I還抑制胰高血糖素分泌、延緩胃排空(Wettergren A.等，Dig Dis Sci
199338 :665-73),並且可以促進外周葡萄糖處理(D' Alessio, D. A.等，J.Clin Invest
199493 :2293-6)。在1994年，在觀察到GLP-I的單次皮下(s/c)劑量能完全使具有非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)的患者的餐後葡萄糖水平正常後，就提示GLP-I的治療潛能(Gutniak， Μ. K.等，Diabetes Care 1994:17:1039-44)。認為該作用既受胰島素釋放增加的介導，又受胰高血糖素分泌減少的介導。此外，已經證實靜脈內輸注GLP-I可延遲NIDDM患者的餐後胃排空(Williams,B.等，J. Clin Endo Metab 1996:81 :327-32)。不同於磺醯脲類，GLP-1 的促胰島素作用依賴於血糖濃度(Holz, G. G. 4th等，Nature 1993 :361 :362-5)。因此，在低血糖濃度下GLP-I-介導的胰島素釋放損失可防止嚴重的低血糖。這種聯合作用使得GLP-I 具有超過目前用於治療NIDDM的其它活性劑的獨特的潛在治療優勢。大量研究已經證實，在給予健康個體時，GLP-I有效地影響血糖水平以及胰島素和胰高血糖素濃度(Orskov, C, Diabetologia 35 :701-711,1992 ；Hoist, J. J.等，Potential of GLP-1 in diabetes management in Glucagon III, Handbook of Experimental Pharmacology, Lefevbre PJ 編輯，柏林，Springer Verlag, 1996，第 311-326 頁)，這些作用是葡萄糖依賴性的(Kreymann, B.等，Lancet ii 1300-1304，1987 ；Weir, G. C.等， Diabetes38 :338-342，1989)。此外，它在糖尿病患者中也是有效的(Gutniak,M. ,N. Engl J Med 226 :1316-1322,1992 ；Nathan, D. Μ.等，Diabetes Carel5 :270_276，1992)，可使 2 型糖尿病個體的血糖水平正常(Nauck, M.A.等，Diabetologia 36 :741-744,1993)和改善1 型患者的血糖控制(Creutzfeldt, W. 0.等，Diabetes Care 19 :580_586，1996)，從而表明了其尤其可增加胰島素敏感性/減少胰島素抵抗的能力。已經提出將GLP-I及其激動劑用於處於發生非胰島素依賴型糖尿病風險中的個體(參見WO 00/07617)以及用於治療妊娠糖尿病(美國專利公開No. 20040266670)。除了上述內容外，還提示GLP-I及其激動劑可用於許多哺乳動物例如人中的治療應用，包括但不限於改善學習、增強神經保護和/或緩解中樞神經系統的疾病或障礙的症狀，例如通過調節神經發生，和例如帕金森病、阿爾茨海默病、亨廷頓舞蹈病、ALS、中風、ADD和神經精神病症候群(美國專利公開No. 20050009742和2002011560 ；將肝臟幹細胞/祖細胞轉化成功能性胰腺細胞(W0 03/033697)；預防β -細胞衰退(美國專利公開 No. 20040053819 和 20030220251)和刺激 β -細胞增殖(美國專利公開 No. 20030224983)； 治療肥胖(美國專利公開No. 20040018975 ；WO 98/19698)；抑制食慾和誘導飽感(美國專利公開No. 200302327Μ)；治療腸易激性症候群(W0 99/64060)；降低與心肌梗死相關的發病率和/或死亡率(美國專利公開No. 20040162241, WO 98/08531)和中風(參見WO 00/16797)；治療以不存在Q-波心肌梗死為特徵的急性冠狀動脈症候群(美國專利公開 No. 20040002454)；減弱術後分解代謝改變(美國專利No. 6，006，753)；治療冬眠心肌或糖尿病性心肌病(美國專利公開No. 20050096276)；抑制去甲腎上腺素的血漿水平(美國專利公開No. 20050096276)；增加尿鈉排洩、降低尿鉀濃度(美國專利公開No. 20050037958)； 治療與中毒性血容量過多(toxic hypervolemia)相關的病症或障礙，例如腎衰竭、充血性心力衰竭、腎病症候群、肝硬化、肺水腫和高血壓(美國專利公開No. 20050037958)；誘導變力反應(inotropic response)和增加心臟收縮力(美國專利公開No. 20050037958)； 治療多囊卵巢症候群(美國專利公開No. 2004(^66678&20040029784)；治療呼吸窘迫(美國專利公開No. 200402357 )；通過非飲食途經、即通過靜脈內、皮下、肌內、腹膜或其它注射或輸注途徑改善營養(美國專利公開No. 20040209814)；治療腎病(美國專利公開 No. 20040209803)；治療左心室收縮功能障礙，例如具有異常左心室射血分數的左心室收縮功能障礙(美國專利公開No. 20040097411)；抑制胃竇十二指腸(antro-duodenal)運動性，例如用於治療或預防胃腸道障礙如腹瀉、術後傾倒症候群和腸易激惹症候群和作為內窺鏡檢查操作中的術前用藥法(美國專利公開No. 20030216292)；治療危重病多神經病 (CIPN)和全身性炎性反應症候群(S^S)(美國專利公開No. 20030199445)；調節甘油三酯水平和治療血脂異常(美國專利公開No. 20030036504和2003014318 ；治療局部缺血後血流再灌注導致的器官組織損傷(美國專利公開No. 20020147131)；治療冠心病危險因子 (CHDRF)症候群(美國專利公開No. 20020045636)等。 然而，GLP-I代謝不穩定，在體內的血漿半衰期(t1/2)僅為1-2分鐘。外源性施用的 GLP-I 也快速降解(Deacon，C. F.等，Diabetes 44:1126-1131,1995)。這種代謝不穩定性限制了天然GLP-I的治療潛能。已經進行了大量嘗試以通過製劑的改進來改善GLP-I和其類似物的治療潛能。例如，國際專利公開No. WO 01/57084描述了用於生產GLP-I類似物的晶體的方法，據說這些類似物可用於製備包含所述晶體和可藥用載體的藥物組合物如可注射藥物。已經從鹽水溶液中生長出了 GLP-I (7-37)0H的非均勻微晶簇並且在用鋅和 /或間-甲酚進行晶體浸入處理後進行了檢查(Kim和Harem Pharma. Res.第12卷，第11 期(19%))。已經由含有鋅或魚精蛋白的磷酸鹽溶液製備了含有針狀晶體和無定形沉澱的 GLP (7-36) NH2 的粗結晶懸浮液(Pridal 等，International Journal of Pharmaceutics 第 136卷，第53-59頁(1996))。歐洲專利公開No. EP 0619322A2描述了通過混合蛋白質在pH 7-8. 5緩衝液中的溶液與鹽和低分子量聚乙二醇(PEG)的某些組合製備GLP-I (7-37)OH的微晶形式的方法。美國專利No. 6，566，490描述了尤其是GLP-I的微晶種晶，據說它有助於生產純化的肽產品。美國專利6，555，521 (US 『 521)中披露了具有四方平杆或板狀形狀的GLP-I晶體，據說它們具有改善的純度並且表現出延長的體內活性。US' 521教導了這類晶體相對均勻並且比現有的結晶簇和無定形結晶懸浮液更長時間地保持混懸狀態，據說現有的結晶簇和無定形結晶懸浮液快速沉降、聚集或彼此團簇，阻塞注射器針頭並且一般加重不可預知的給藥量。已經提示將生物可降解的聚[(dl-丙交酯-共-乙交酯)-β -乙二醇-β -(丙交酯-共-乙交酯)]的三嵌段共聚物用於GLP-I的控制釋放製劑。然而，類似於其它聚合物系統，三嵌段共聚物的製備涉及複雜的方案和不一致的顆粒形成。類似地，還提示將生物可降解的聚合物例如聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)用於肽的持續遞送製劑。然而，在本領域中並不贊成應用這類生物可降解聚合物，因為這些聚合物一般具有較差的水溶性，需要與水不混溶的有機溶劑例如二氯甲烷，和/或在生產過程中需要苛刻的製備條件。認為這類有機溶劑和/或苛刻的製備條件會增加誘導所關注的肽或蛋白質構象改變的風險，從而導致結構完整性下降和生物活性受損(Choi等，Pharm. Research，第21卷，第5期Q004))。泊洛沙姆同樣存在缺陷。(Id.)上述參考文獻中所述的GLP-I組合物在製備GLP的藥物製劑方面不太理想，因為它們趨向於捕獲雜質和/或還難以可再現地生產和施用。此外，已知GLP類似物在濃度升高時誘發噁心，因此需要提供具有降低的初始血漿濃度的持續藥物作用(Ritzel等， Diabetologia,38 :720-725(1995) ；Gutniak 等，Diabetes Care,17(9) :1039-1044(1994)； Deacon等，Diabetes，44 :1126-1131 (1995))。因此，需要更易於和可靠地生產、更易於和可再現地施用於患者並且提供降低的初始血漿濃度以減少或消除不希望的副作用的GLP-I 製劑。發明概述本發明可概括在下面的段落以及權利要求中。一方面，本發明提供持續釋放液體藥物組合物，其包含 液體；·根據式(I) [Aib8'35]hGLP-l (7-36) NH2 的肽類似物；· 二價金屬和/或二價金屬鹽；和 乙酸鹽和/或乙酸。另一方面，本發明提供包含根據前述權利要求中任一項的藥物組合物的容器。又一方面，本發明提供用於製備所述藥物組合物的方法，所述方法包括以下步驟A.將液體、乙酸鹽和/或乙酸和肽類似物混合；以及B.加入二價金屬和/或二價金屬鹽並將其溶解。再一方面，本發明提供所述藥物組合物用於治療II型糖尿病的用途。附圖簡述

圖1描繪了對犬單次皮下(s. c.)施用約lmg[Aib8』35]hGLP_l (7-36)NH2後獲得的血漿特徵圖(中位值)。在每種情況中，將肽以包含約(wt/vol)肽且具有約1. 5的肽Si摩爾比率的含水鋅組合物的形式施用。實心正方形和空心正方形代表如本文所述用NaOH調整pH的組合物；實心三角形代表未用NaOH調整pH的組合物；實心圓圈代表用 AcOH/AcO-緩衝的組合物。圖2描繪了對犬單次皮下(s. c.)施用約15mg[Aib8』35]hGLP_l (7-36)NH2後獲得的血漿特徵圖(中位值)。在每種情況中，將肽以包含約10% (wt/vol)肽且具有約1. 5的肽Si摩爾比率的含水鋅組合物的形式施用。實心正方形和空心正方形代表如本文所述用NaOH調整pH的組合物；實心三角形代表未用NaOH調整pH的組合物；實心圓圈代表用 AcOH/AcO-緩衝的組合物。圖3描繪了對犬單次皮下(s. c.)施用約lmg[Aib8』35]hGLP_l (7-36)NH2後獲得的血漿特徵圖(中位值)。在每種情況中，將肽以如下的半固體含水鋅組合物施用實心圓圈 約5% (wt/vol)肽，肽Si摩爾比率約5.4 1，無pH調整；空心圓圈約10% (wt/vol) 肽，肽Si摩爾比率約5.4 1，無pH調整；空心正方形約10% (wt/vol)肽，肽Si摩爾比率約5.4 1，用NaOH調整pH;實心正方形約10% (wt/vol)肽，肽Si摩爾比率約 4 1，用 NaOH 調整 pH。圖4提供可用於製備本發明的某些製劑的各種裝置的示意圖。圖5描繪了對犬單次皮下(s. c.)施用約lmg[Aib8』35]hGLP_l (7-36)NH2後獲得的血漿特徵圖(中位值)。將肽以肽濃度為約2%且肽Si摩爾比率為約1.5 1的含水鋅組合物的形式施用。圖6描繪了對犬單次皮下(s. c.)施用約15mg[Aib8』35]hGLP-l (7-36)NH2後獲得的血漿特徵圖(中位值)。將肽以肽濃度約25%且肽Si摩爾比率為約4 1的半固體鋅組合物的形式施用。圖7描繪了對犬單次皮下(s.c.)施用約15!^^138』35]1^1^-1(7-36)冊2後獲得的血漿特徵圖(中位值)。將肽以肽濃度約23%且肽Si摩爾比率為約1.5 1的半固體鋅組合物的形式施用。圖8描繪了對大鼠單次皮下(s.c.)施用約0.3mg(3y 1 10%溶液)下述GLP-1類似物HCl鹽測試製劑後獲得的全時程血漿特徵圖(中位值)(1) (Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2HCl 鹽和 CuCl2 (Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2/CuC12 的摩爾比率為1.5 1。在約pH5. 5的水(w/w)中該肽濃度是10% (30mM)。(2) (Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2HCl 鹽和 ZnCl2 (Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2/ZnCl2 的摩爾比率為1.5 1。在約pH5. 5的水(w/w)中該肽濃度是10% (30mM)。圖9描繪了對大鼠單次皮下(s.c.)施用約0.3mg(3y 1 10%溶液)下述GLP-1類似物乙酸鹽測試製劑後獲得的全時程血漿特徵圖(中位值)
(Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2 乙酸鹽和 ZnCl2 (Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2/ZnCl2 的摩爾比率為1. 5 1。在約ρΗ5· 5的水(w/w)中該肽濃度是10% (30mM)。圖10描繪了對大鼠單次皮下(s.c.)施用0.3mg(3yl 10%溶液)圖8中所示的測試製劑後獲得的早期血漿特徵圖(中位值)。圖11描繪了對大鼠單次皮下(s.c.)施用0.3mg(3yl 10%溶液)圖9中所示的測試製劑後獲得的早期血漿特徵圖(中位值)。圖12描繪了對大鼠單次皮下(s.c.)施用0.3mg(3yl 10%溶液)圖8中所示的三種測試製劑後注射位置剩餘的(Aib8』35)hGLP-1 (7-36)NH2的估計百分比。詳細描述本發明提供包含GLP-I類似物的藥物組合物。特別優選的是根據式(I)的GLP-I 類似物(Aib835) hGLP-1 (7-36) NH2 (I)
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或其可藥用鹽，其中所述組合物的製劑提供優良的生產、施用、藥動學和藥效學特性以及減弱的不良副作用。本發明的藥物組合物優選不由具有PH4的澄清ZnCl2水溶液組成，其中所述的[Aib8』35]hGLP-l(7-36)NH2存在濃度為％ig/ml，且所述SiCl2以0. 5mg/ml的濃度存在。本發明的一個優選實施方案提供具有改善的藥物釋放特性、優選具有減少的初始突釋的藥物組合物。本發明還提供具有延長作用持續時間、包含式(I)化合物的藥物組合物。本發明可概括在下面的段落以及權利要求中。一方面，本發明提供持續釋放液體藥物組合物，其包含·液體；·根據式(I) [Aib8』35]hGLP_l (7-36) NH2 的肽類似物；· 二價金屬和/或二價金屬鹽；和 乙酸鹽和/或乙酸。優選地，本發明提供持續釋放液體藥物組合物，其包含·液體；·根據式(I) [Aib8』35]hGLP_l (7-36) NH2 的肽類似物；· 二價金屬和/或二價金屬鹽；和 乙酸鹽和/或乙酸；其特徵在於，· 二價金屬和/或二價金屬鹽是鋅和/或氯化鋅；·所述藥物組合物的最終pH在4至5的範圍內； 乙酸鹽和/或乙酸與肽類似物的摩爾比率範圍為約1 1至6 1; 肽類似物與鋅的摩爾比率範圍為約6 1至1 1。優選地，肽類似物的一部分與乙酸鹽的一部分以肽類似物的鹽形式存在。優選地，所述藥物組合物的最終pH在3. 5至6的範圍內。更優選地，所述藥物組合物的最終PH在4至5的範圍內。甚至更優選所述藥物組合物的最終pH為4.5 士 0. 1。所述藥物組合物的最終PH為組合物當其準備被施用時的pH。優選地，乙酸鹽和/或乙酸與肽類似物的摩爾比率範圍為約0. 5 1至約10 1。 更優選地，藥物組合物中乙酸鹽和/或乙酸與肽類似物的摩爾比率範圍為約1 1至約 6 1。甚至更優選地，藥物組合物中乙酸鹽和/或乙酸與肽類似物的摩爾比率範圍為約 3. 2 1(3. 2 士 0. 32)。優選地，二價金屬和/或二價金屬鹽是鋅和/或氯化鋅。更優選地，二價金屬和/ 或二價金屬鹽是氯化鋅。優選地，肽類似物與鋅的摩爾比率範圍為約6 1至約1 1。更優選地，肽類似物與鋅的摩爾比率範圍為約1.5 1(1. 5士0.15)。優選地，本發明提供如上定義的持續釋放液體藥物組合物，且包含·液體；·根據式(I) [Aib8』35]hGLP_l (7-36) NH2 的肽類似物；· 二價金屬和/或二價金屬鹽是氯化鋅；
乙酸鹽和/或乙酸；·所述藥物組合物的最終pH在4. 5 士0. 1的範圍內； 乙酸鹽和/或乙酸與肽類似物的摩爾比率範圍為約3. 2 1(3. 2士0.32)；以及·肽類似物與鋅的摩爾比率範圍為約1. 5 1(1. 5士0. 15)。優選地，肽類似物的濃度為約10%重量/體積(mg/ml)。優選地，鋅的濃度範圍在0.重量/體積至2. 35%重量/體積(mg/ml)。優選地，對所述組合物進行配製以使根據式(I)的肽類似物在個體內釋放至少約 1周。優選地，對所述組合物進行配製以使根據式(I)的肽類似物在個體內釋放至少約 1周，優選2周。優選地，所述組合物還包含液體(或稀釋劑)。所述液體(或稀釋劑)用作懸浮液的溶劑或媒介物。優選地，所述液體選自無菌水或包含等滲劑例如NaCl的無菌水。優選地，所述藥物組合物適用於胃腸外施用。更優選地，所述藥物組合物適用於通過注射施用。優選地，藥物組合物適於在使用之前以準備被使用的狀態並且在5°C的溫度貯存至少1年的時間。優選地，在不凍幹所有組分的情況下、優選通過將所有組分混合在一起而製備所述藥物組合物。另一方面，本發明提供包含如上定義的藥物組合物的容器。優選地，所述容器是預填充注射器。優選地，本發明提供預填充注射器，其含有如上定義的藥物組合物，其中所述組合物包含·作為液體的水(qs 210 μ 1)；· 2Img 根據式(I) [Aib8』35]hGLP_l (7-36) NH2 的肽類似物；· 0. 571mg作為二價金屬鹽的氯化鋅；·乙酸；·所述藥物組合物的最終pH為4. 5 士 0. 1 ；·乙酸與肽類似物的摩爾比率為約3. 2 1 (3. 2士0. 32)；·肽類似物與鋅的摩爾比率為約1. 5 1 (1. 5士0. 15)。另一方面，本發明提供用於製備藥物組合物的方法，包括以下步驟A.將液體、乙酸鹽和/或乙酸和肽類似物混合；以及B.加入所述二價金屬和/或二價金屬鹽並將其溶解。優選地，所述方法還包括以下步驟C.無菌過濾由步驟B產生的組合物；以及D.用所述組合物填充容器。優選地，在步驟A之前，將乙酸和無菌水混合。更優選地，所述方法包括將另外的無菌水加至溶液中的最終步驟。另一方面，本發明提供藥物組合物用於治療II型糖尿病的用途。
在優選的特徵中，本發明也提供藥物組合物，其在體內生理pH下形成持續釋放藥物特性的原位儲庫(in situ deposit)。本發明的進一步實施方案提供包含式(I)化合物或其可藥用鹽和可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物。優選地，所述載體或稀釋劑包含水。在優選的特徵中，本發明提供包含藥物組合物，包含化合物或GLP-I肽類似物，用所述肽的鹽或肽和其鹽的混合物製備。優選地，所述藥物組合物中GLP-I肽類似物的鹽選自有機酸如乙酸、乳酸、蘋果酸、抗壞血酸、琥珀酸、苯甲酸、檸檬酸、甲磺酸或甲苯磺酸的可藥用鹽、或者無機酸如鹽酸、 氫溴酸、氫碘酸、硫酸或磷酸的可藥用鹽。諸如鹽酸的強酸的可藥用鹽是尤其優選的。強酸定義為PKA小於4. 5的酸。所述藥物組合物中的其他優選肽鹽是有機酸如乙酸或三氟乙酸、 乳酸、蘋果酸、抗壞血酸、琥珀酸、苯甲酸或檸檬酸的鹽。在一個優選的實施方案中，藥物組合物的溶解度、pH和釋放特性可調節，通過調節鹽形式GLP-I類似物與非鹽形式GLP-I類似物的摩爾比以延長釋放特性，並降低GLP-I類似物濃度的初始峰(initial spike)。在優選的實施方案中，藥物組合物還包含二價金屬，以降低組合物的水溶性，由此延長釋放特性而同時降低血漿濃度的初始突釋或初始峰。優選的二價金屬包括鋅和銅。二價金屬的鹽形式是尤其優選的，包括但不限於二價金屬的鹽酸鹽和乙酸鹽。CuAc2、CuCl2, ZnAc2和/或ZnCl2是最優選的。優選地，所述藥物組合物中的二價金屬和/或二價金屬鹽的濃度為約0. 0005mg/ml至約50mg/m。甚至更優選地，所述藥物組合物中的二價金屬和/ 或二價金屬鹽的濃度為約0. 01mg/ml至約0. 50mg/ml。更優選地，所述藥物組合物包含稀釋液，其中所述稀釋液包含可藥用的水溶液。稀釋液可包含無菌水或作為等滲劑的鹽如NaCl 的無菌水溶液。術語「等滲劑」在本文中是指溶液中維持與血液相等滲透壓的鹽或任何賦形劑。術語「可藥用的」在本文中是指為哺乳動物或人生理學上所充分耐受。在又一個實施方案中，所述藥物組合物還包含二價金屬和/或二價金屬鹽，其中所述藥物組合物中所述GLP-I類似物與所述二價金屬和/或二價金屬鹽的摩爾比率範圍為約6 1至約1 1。優選地，所述比率範圍為約5. 5 1至約1 1。更優選地，所述比率範圍為約5. 4 1至約1.5 1。甚至還更優選地，所述比率為約5.4 1,4.0 1或 1.5 1。最優選地，所述比率為約1.5 1。GLP-I類似物與二價金屬和/或二價金屬鹽的摩爾比率是指藥物組合物中肽類似物的摩爾比例與二價金屬和/或二價金屬鹽的摩爾比例。肽類似物的摩爾比例包括任何以肽類似物鹽形式存在的肽。本發明該方面中約的含義是1.5 1 士 10%每個目標值的比率，因此期望比率包括涵蓋例如1.；35-1.65 0. 85-1. 15 的比率。優選地，所述藥物組合物包含水性混合物、懸浮液或溶液，其中所述GLP-I類似物、式(I)化合物或其鹽以約0.5%-30% (w/w)的濃度存在。在所述水性混合物、懸浮液或溶液中，所述GLP-I類似物和/或其鹽的濃度更優選為約l^d^d^d^j^j^、 7%,8%,9% ,10% ,11% >12% ,13% ,14% ,15% ,16% ,17% ,18% ,19%,20%,21%,22%, 23 %、24 %、25 %、26 %、27 %、28 %、29 % 或 30 % (w/w)。更優選地，所述水溶液中所述 GLP-I 類似物和 / 或其鹽的濃度為約 1%>2%,3%,4%,5%,6%,7%,8%,9%,10%,11%>14%,15%、16%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、29%或 30% (w/w)。還更優選地，所述水溶液中所述GLP-I類似物和/或其鹽的濃度為約1 %、2 %、3 %、4 %、5 %、6 %、 9%、10%、11%、22%、23%、對％、25%或洸％ (w/w) 0甚至還更優選地，所述水溶液中所述 GLP-I 類似物和 / 或其鹽的濃度為約 1%、2%、3%、4%、5%、6%、10%、22%、23%、24%、 25%或沈(％ (w/v) 0還更優選地，所述水溶液中所述GLP-I類似物和/或其鹽的濃度為約 1%、2%、5%、10%、23%或25% (w/w) 0 「約」是指如下含義對於約0. 5%至約4%的濃度而言，士0.5%目標值是期望的範圍(例如，0.5%至1.5%為約)；對於約5%和5%以上的目標濃度而言，20%目標值是期望的範圍(例如8%至12%是約10%)。優選地，[Aib8'35]hGLP-l (7-36) NH2XLP-I類似物或其鹽在藥物組合物中的濃度為約1 % (重量/體積)，且[Aib8』35] hGLP-1 (7-36) NH2與所述二價金屬和/或二價金屬鹽的摩爾比率為約1.5 1。更優選地，[Aib8』35]hGLP-l(7-36)NH2或其鹽在所述藥物組合物中的濃度為約2% (重量/體積)，且[Aib8』35]hGLP-1 (7-36)NH2或其鹽與所述二價金屬和/或二價金屬鹽的摩爾比率為約1.5 1。還更優選地，[Aib8』35]hGLP-1 (7-36)NH2或其鹽在所述藥物組合物中的濃度為約10% (重量/體積)，且[Aib8』35]hGLP-1 (7-36)NH2或其鹽與所述二價金屬和/或二價金屬鹽的摩爾比率為約1.5 1。最優選地，[Aib8』35] hGLP-1 (7-36) NH2或其鹽在所述藥物組合物中的濃度為約23 %或約25 % (重量/體積)，且[Aib8』35] hGLP-1 (7-36) NH2或其鹽與所述二價金屬和/或二價金屬鹽的摩爾比率為約1.5 1。在優選的實施方案中，GLP-I類似物、[Aib8』35]hGLP-1 (7-36)NH2或其鹽在藥物組合物中的濃度為約5 % (重量/體積)，且肽與二價金屬和/或二價金屬鹽的摩爾比率為約 5.4 1。更優選地，[Aib8』35]hGLP-1 (7-36)NH2或其鹽在所述組合物中的濃度為約5% (重量/體積)，且所述比率為約4.0 1。還更優選地，[Aib8』35]hGLP-l(7-36)NH2或其鹽在所述組合物中的濃度為約10% (重量/體積)，且所述比率為約5. 4 1。還進一步優選地， [Aib8』35]hGLP-l (7-36)NH2或其鹽在所述組合物中的濃度為約10% (重量/體積)，且所述比率為約4.0 1。優選地，所述二價金屬和/或二價金屬鹽以氯化鋅或乙酸鋅提供。更優選地，所述乙酸鋅以ZnAc2-2H20的形式提供。在備選的實施方案中，所述二價金屬和/或二價金屬鹽以氯化銅或乙酸銅提供。在一個實施方案中，使用鹼向上調整所述藥物組合物的pH。更優選地，使用 NaOH進行所述pH調整。還更優選地，使用NaOH調整所述藥物組合物的pH，使得當使用 0.9% NaCl稀釋至約初始濃度時，使用直接電位測定法(direct potentiometric determination)5. 0-5. 5 白勺 pH {t。本發明的優選實施方案特徵在於藥物組合物或持續釋放製劑，其中對該組合物進行配製以使GLP-I的肽類似物或其鹽、例如根據式(I)的化合物或其鹽在需要其的個體如哺乳動物、優選人中釋放延長的時間。優選地，所述化合物的所述釋放延長至少1小時、更優選至少4、6、12或對小時。還更優選地，對所述組合物進行配製以使根據式(I)的化合物在個體內釋放至少36、48、60、72、84或96小時。還更優選地，對所述組合物進行配製以使式(I)化合物在個體內釋放至少約5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天。還更優選地，對所述組合物進行配製以使式(I)化合物在個體內釋放至少約2、3或4周。本文所使用的術語「持續釋放」是指這種釋放，其導致生物學活性GLP-I類似物的可測量血清水平達至少1周的時間，更優選達至少2周的時間。在本發明的一方面中，調節所述藥物組合物中GLP-I肽類似物的鹽含量可改善 GLP-I肽類似物在所述藥物組合物中的溶解度和穩定性，並且還通過降低初始突釋提供改進的體內釋放特性。本發明該方面中的詞語「調節」意指通過調整鹽形式的GLP-I類似物與非鹽形式的GLP-I類似物的摩爾比來調整鹽含量。甚至更優選地，所述藥物組合物中的肽鹽是所述式(1)肽的鹽酸或乙酸的鹽，或氯化物或乙酸鹽。在所述藥物組合物中，乙酸鹽或氯化物與所述式(I)化合物的最終摩爾比率在約0.5 1至約10 1的範圍。更優選地，所述比率為約0.8 1至約9 1。甚至更優選地，所述比率為約1 1至約6 1。最優選地，所述比率為約3.0 1，尤其是在本發明的這個方面，乙酸鹽或氯化物與肽的摩爾比率意味著藥物組合物中乙酸鹽(CH3COO-)或氯化物(Cl—)的摩爾比例與藥物組合物中肽的摩爾比例。例如，藥物組合物中3 1的摩爾比，乙酸鹽按比例是肽摩爾含量的三倍。這是化合物與其他物質的化學計量比。乙酸鹽的摩爾比例與肽的摩爾比例包括任何以肽類似物的鹽形式存在的乙酸鹽和肽。最初製備的肽中乙酸鹽的濃度可根據用於製備肽的方法而變化。因此，必須改變加入製劑中的乙酸鹽的量以使獲得適當的肽與乙酸鹽的最終比率。另一方面，本發明涉及使用此類組合物治療哺乳動物的方法。在該優選的實施方案中，詞語「約」意指1.5 1 士 10%每個目標值的比率，因此期望的比率包括涵蓋例如1. 35-1. 65 0. 85-1. 15的比率。在本發明的另外優選方面，藥物組合物的pH通過調節組合物的乙酸鹽含量來調節。優選地，所述藥物組合物的PH範圍是pH 3至pH 6。更優選地，所述藥物組合物的所述 PH範圍是pH 3. 5至5. 5。最優選地，所述藥物組合物的所述pH範圍是pH 4. 2至pH 4. 6。優選地，為了酸化藥物組合物，可通過加入乙酸增加乙酸鹽的含量。在一個實施方案中，所述藥物組合物的pH可通過調整乙酸鹽含量、從具有低乙酸鹽含量或沒有乙酸鹽含量的GLP-I類似物的肽鹽開始增加。在優選的實施方案中，通過調節乙酸鹽或氯化物的含量來調整最終藥物組合物的 PH，可以調節參數如肽濃度、鋅濃度、化學穩定性、物理穩定性和通過降低初始突釋來調節體內釋放特性。在本發明的一個方面中Si或Cu的含量是固定的，通過調節乙酸鹽的含量控制pH。 增加的乙酸鹽含量顯示改進的溶解度和物理穩定性，而降低的乙酸鹽含量顯示對PH的增加作用和對Cmax的降低作用。在優選的實施方案中，所述藥物組合物包含水性混合物、懸浮液或溶液。本發明還提供引發GLP-I激動劑作用的方法，所述方法包括使GLP-I (7-36)NH2配體的受體與GLP-I類似物或其鹽直接或間接接觸。在前述方法中，所述GLP-I (7-36) NH2配體的受體存在於動物個體中，優選存在於靈長類中，更優選存在於人中。因此，在該實施方案中，本發明提供了在需要其的個體中引發來自GLP-I受體的激動劑作用的方法，該方法包括對所述個體施用本發明的組合物，其中所述組合物包含有效量的GLP-I類似物或其可藥用鹽。在前述方法的優選方面中，所述個體是罹患或處危罹患選自以下的疾病或病症的人1型糖尿病、II型糖尿病、妊娠糖尿病、肥胖、食慾過盛(excessive appetite)、飽感不足(insufficient satiety)和代謝紊亂。優選所述疾病是I型糖尿病或II型糖尿病。在前述方法的另一更優選的方面，所述個體是罹患或處危罹患選自下組的疾病的人1型糖尿病；II型糖尿病；肥胖；胰高血糖素瘤(glucagonomas)；氣道分泌性障礙；關節炎；骨質疏鬆症衝樞神經系統疾病；再狹窄；神經變性疾病；腎衰竭；充血性心力衰竭；腎病症候群；肝硬化；肺水腫；高血壓；和其中需要減少食物攝入的障礙；中樞神經系統疾病或障礙(例如通過調節神經發生，並且例如帕金森病、阿爾茨海默病、亨廷頓舞蹈病、ALS、 中風、ADD和神經精神病症候群)；腸易激惹症候群；心肌梗死(例如降低與其相關的發病率和/或死亡率)；中風；急性冠狀動脈症候群(例如以不存在Q-波心肌梗死為特徵)；術後分解代謝改變；冬眠心肌或糖尿病性心肌病；尿鈉排洩不足、尿鉀濃度過高；與中毒性血容量過多相關的疾患或障礙(例如腎衰竭、充血性心力衰竭、腎病症候群、肝硬化、肺水腫和高血壓)；多囊卵巢症候群；呼吸窘迫；腎病；左心室收縮功能障礙(例如具有異常左心室射血分數)；胃腸道障礙如腹瀉、術後傾倒症候群和腸易激惹症候群(即通過抑制胃竇十二指腸運動性)；危重病性多發性神經病(CIPN)；全身性炎性反應症候群(S^S)；血脂異常；局部缺血後血流再灌注導致的器官組織損傷；和冠心病危險因子(CHDRF)症候群。在本發明的另一方面中，本發明的特徵在於在需要其的個體中將肝臟幹細胞/祖細胞轉化成功能性胰腺細胞、預防β-細胞衰退和刺激β-細胞增殖、抑制去甲腎上腺素血漿水平、誘導變力反應和增加心臟收縮力、通過非飲食途徑(例如通過靜脈內、皮下、肌內、 腹膜或其它注射或輸注途徑)改善營養、預處理進行內窺鏡檢查操作的個體和調節甘油三酯水平的方法，所述方法包括對所述個體施用本發明的包含有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽的製劑。所述個體優選是哺乳動物，更優選是靈長類動物，還更優選是人。用作本發明的肽鹽的優選的GLP-I肽在本文中由下式表示，例如(Aib8』35) hGLP-1 (7-36)NH2，其中來自天然序列的被置換的氫基酸位於第一組圓括號之間(例如 Aib8,35表示Aib置換hGLP-Ι中的Ala8和Gly35)。Aib是α -氨基異丁酸的縮寫。縮寫GLP-I 意指胰高血糖素樣肽-1 ；hGLP-Ι意指人胰高血糖素樣肽-1。第二組圓括號之間的數字指的是存在於肽中的胺基酸的編號(例如hGLP-1 (7-36)指人GLP-I的肽序列的第7到第36個胺基酸。hGLP-1 (7-37)的序列列在 Mojsov，S.，ht. J. P印tide Protein Res. 40，1992，第 333-342頁中。hGLP-1 (7-36)NH2中的命名"NH2」表示肽的C-末端被醯胺化。hGLP-1 (7-36) 意指C-末端是游離酸。在hGLP-1 (7-38)中，除非另有說明，否則第37和38位上的殘基分別為Gly和Argo本發明中所用的GLP-I肽類似物尤其優選是可藥用鹽的形式。此類鹽的實例包括但不限於那些與有機酸(例如乙酸、乳酸、馬來酸、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、琥珀酸、苯甲酸、甲磺酸、甲苯磺酸或撲酸)、無機酸(例如鹽酸、硫酸或磷酸)和聚合酸(例如單寧酸、羧甲基纖維素、聚乳酸、聚乙醇酸或聚乳酸-乙醇酸共聚物)形成的鹽。製備本發明的肽鹽的典型方法在本領域中是眾所周知的並且可以通過鹽交換的標準方法進行。因此，可以通過將肽溶於少量0. 25N乙酸水溶液中而將本發明肽的TFA鹽(TFA鹽由使用製備型HPLC、用含有TFA的緩衝溶液洗脫純化肽而得到)轉化成另一種鹽，如乙酸鹽。將所得的溶液應用在半-製備型HPLC柱(Zorbax,300SB,C-8)上。用如下溶液洗脫柱(1) 0. IN乙酸銨水溶液， 0. 5小時；(2)0. 25N乙酸水溶液，0. 5小時；和(3)線性梯度(20%M 100%的溶液B，30分鐘內)，流速細1/分鐘(溶液A為0. 25N乙酸水溶液；溶液B為0. 25N在乙睛/水80 20 中的乙酸)。收集含有肽的級分並且冷凍至幹。如本領域技術人員眾所周知，GLP-I的已知和潛在用途可以改變並且是多種多樣的(參見！"odd，J. F.等，Clinical Science，1998，95，第 325-3 頁；和！"odd，J. F.等， European Journal of Clinical Investigation, 1997, 27, H 533-536 M ) 因此，以引起激動劑作用為目的的本發明化合物的施用可以具有與GLP-I本身相同的作用和用途。可以將GLP-I的這些可變的用途概括如下，治療1型糖尿病、II型糖尿病、肥胖、胰高血糖素瘤、氣道分泌性障礙、代謝紊亂、關節炎、骨質疏鬆症、中樞神經系統疾病、再狹窄、神經變性疾病、腎衰竭、充血性心力衰竭、腎病症候群、肝硬化、肺水腫、高血壓、其中需要減少食物攝入的障礙以及本文所述的各種其它病症和障礙。因此，本發明在其範圍內包括本文所定義的包含式(I)化合物作為活性成分的藥物組合物。本發明的製劑中活性成分的劑量可以改變；然而，活性成分的量必須使得可獲得合適的劑量。選擇的劑量取決於所需的治療作用、施用途徑和治療持續時間，並且一般由主治醫師決定。一般而言，用於本發明活性的有效劑量在1X10_7至200mg/kg/天、優選 1 X ΙΟ"4至100mg/kg/天的範圍內，可以將其作為單劑量或分成多個劑量進行施用。本發明的製劑優選胃腸外施用，例如肌內、腹膜內、靜脈內、皮下施用等。用於胃腸外施用的本發明的製劑包括無菌水性或非水性溶液、混懸劑、凝膠劑或乳劑，條件是可達到所需的體內釋放特性。非水性溶劑或媒介物的實例有丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油和玉米油、明膠和可注射有機酯類如油酸乙酯。這類劑型還可以含有輔劑如防腐劑、溼潤劑、乳化劑和分散劑。可以通過例如經截留細菌濾器過濾、通過向組合物中摻入滅菌劑、通過照射組合物或通過加熱組合物對它們進行滅菌。也可以將它們製成無菌固體組合物形式，可在使用前即刻溶解在無菌水或一些其它無菌可注射溶媒中。肽的合成可用於實施本發明的肽可以且已通過標準固相肽合成製備。例如參見Mewart， J. Μ.等 Solid Phase Synthesis (Pierce Chemical Co.，第 2 版 1984)。下列實施例描述了可用於或已用於製備可用其有利實施本發明的肽的合成方法， 所述合成方法是本領域技術人員眾所周知的。其它方法也是本領域技術人員眾所周知的。 提供實施例的目的在於進行舉例說明，並不意味著以任何方式限制本發明的範圍。所述肽如GLP-I類似物可通過本領域技術人員已知的不同合成法獲得，所述合成包括肽的最終沉澱、凍幹過程、真空乾燥或其他本領域已知的乾燥過程。在本發明中離子交換層析、緩衝液的滲透交換和脫濾(difiltration)可以是純化或選擇不同鹽形式的肽的合適方法。Boc-β Ala-0H、Boc-D-Arg(Tos)-OH 禾口 Boc-D-Asp(OcHex)購自 Nova Biochem, San Diego, California。 Boc-Aun-ΟΗ 購自 Bachem, King of Prussia, PA。 Boc-Ava-OH 禾口 Boc-Ado-OH 購自 Chem-Impex International, Wood Dale, IL。 Boc-2Nal_0H 購自 Synthetech, Inc. Albany, 0Ro本文中使用的其它縮寫的全名如下Boc 叔丁氧羰基；HF :氟化氫；Fm 甲醯基；Xan 咕噸基；Bzl 苄基；Tos 甲苯磺醯基；DNP :2，4_ 二硝基苯基；DMF 二甲基甲醯胺； DCM:二氯甲烷；HBTU :2-(1Η-苯並三唑-1-基-1，1，3，3-四甲基脲鐺六氟磷酸鹽；DIEA 二異丙基乙基胺；HOAc 乙酸；TFA 三氟乙酸；2C1Z :2_氯苄氧羰基；2BrZ :2_溴苄氧基羰基； OcHex 0-環己基；Fmoc :9_芴基甲氧羰基；HOBt =N-羥基苯並三唑；PAM樹脂4_羥基甲基苯基乙醯氨基甲基樹脂；Tris:三(羥甲基)氨基甲烷；和Bis-Tris:雙(2-羥乙基)氨基-三(羥甲基甲烷)(即2-雙(2-羥乙基)氨基-2-(羥甲基)-1，3_丙二醇)。術語「滷代」或「滷素」包括氟、氯、溴和碘。除非另有定義，否則本文所用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬技術領域普通技術人員通常理解的相同的含義。另外，將本文提及的所有公開物、專利申請、專利和其它參考文獻均通過引入併入。實施例1(Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2(Aib8'35) hGLP-1 (7-36) NH2的詳細合成操作已經在國際專利公開No. WO 00/34331 (PCT/EP99/09660)中提供，將該文獻的內容完整地併入本文。簡言之，在Applied Biosystems (Foster City, CA) 430A型肽合成儀上合成化合物，調節所述儀器以進行加速 Boc-化學固相肽合成。參見 khnolzer 等，Int. J.P印tide Protein Res.，40 180 (1992)。 使用具有0. 91mmol/g取代度的4-甲基二苯甲基胺(MBHA)樹脂(Peninsula，Belmont, CA)。使用具有下列側鏈保護的 Boc 胺基酸(Bachem，CA, Torrance, CA ；Nova Biochem.， LaJolla, CA) :Boc-Ala_0H、Boc-Arg (Tos)-0H> Boc-Asp (OcHex)-0H> Boc-Tyr (2BrZ) _0H、 Boc-His (DNP)-OH、Boc-Val_0H、Boc-Leu_0H、Boc_Gly-0H、Boc-GIn_0H、Boc-lle_0H、 Boc-Lys (2CIZ) -OH、Boc-Thr (Bzl)-OH、Boc-Ser (Bzl)-OH、Boc-Phe-OH、Boc-Aib-OH、 Boc-Glu (OcHex)-OH 和 Boc-Trp (Fm)-OH。通過用 100% TFA 處理 2X 1 分鐘除去 Boc 基團。 使用在4ml DMF中的HBTU (2. Ommol)和DIEA (1. Oml)預活化Boc胺基酸(2. 5mmol)，並且在不對肽-樹脂TFA鹽進行預先中和的情況下將其偶聯。偶聯時間為5分鐘，Boc-Aib-OH殘基和下列殘基除外Boc-Lys (2C1Z)-OH和Boc-His (DNP)-0H，其中偶聯時間為2小時。在肽鏈裝配結束時，用20%巰基乙醇/10% DIEA在DMF中的溶液將樹脂處理 2X30分鐘以除去His側鏈上的DNP基團。然後通過用100% TFA處理2X2分鐘除去N-末端Boc基團。在用含10% DIEA的DMF中和肽-樹脂(1 X 1分鐘)後，通過用15%乙醇胺 /15%水/70% DMF的溶液處理2X 30分鐘除去Trp側鏈上的甲醯基。用DMF和DCM洗滌肽-樹脂並且在減壓下乾燥。通過在O"C將肽-樹脂在含有Iml茴香醚和二硫蘇糖醇O^ig) 的IOml HF中攪拌75分鐘，進行最終的裂解。用氮氣流除去HF。用乙醚(6X10ml)洗滌殘餘物並且用4N HOAc (6 X IOml)萃取。使用反相製備型高效液相色譜法(HPLC)、應用反相VYDAC C18柱(Nest Group, Southborough, ΜΑ)純化水性萃取物中的肽混合物。用線性梯度(20%至50%的溶液B，105分鐘)、以IOml/分鐘的流速(溶液A =含0. 1 % TFA的水；溶液B =含0. 1 % TFA 的乙腈)洗脫柱。收集級分並且用分析型HPLC檢驗。合併那些含有純產物的級分並且冷凍至幹。在該化合物合成的一個實例中，獲得了 135mg白色固體。基於分析型HPLC分析的純度為98.6%。電噴霧質譜儀(MS(ES))S分析得到分子量為3339.7(與計算的分子量 3339. 7 一致)。
實施例2配製操作I2. 1材料、儲備溶液、計算A)材料=ZnCl2, NaOH 片狀物和；35 % 鹽酸獲自 Panreac Quimica, Barcelona, Spain。WFI (無菌注射 / 灌洗用水)獲自 B. Braun Medical, Barcelona, Spain。B)儲備溶液(i)ZnCL, pH = 3 1.在攪拌下，將HCl加入到WFI中以達到pH= 3。2.在容量瓶中，轉移稱量量的&iCl2。在攪拌下，加入pH = 3HC1以達到約Hmg ZnCl2/ml的終濃度。(ii)ZnCL, pH = 2 1.在攪拌下，將HCl加入到WFI以達到pH = 2。2.在容量瓶中，轉移稱量量的&iCl2。在攪拌下，加入pH = 2HC1以達到約4_12mg ZnCl2/ml的終濃度。(iii)Na0H,0. 1 至 lOmg/ml 1.在容量瓶中，轉移稱量量的NaOH。在攪拌下，加入WFII以達到約0. I-IOmg Na0H/ml的終濃度。(iv)冷凍乾燥的 2011^ 等分試樣(Aib—) HGLP-I (7-36) Mi/ 小瓶1.製備WFI和乙酸的0. 04% (ν/ν)稀釋液。2.在容量瓶中，轉移稱量量的(Aib8』35) HGLP-I (7-36) NH2 (乙酸鹽)。在攪拌下，加入足量的0. 04%乙酸以使終濃度達到20mg (Aib8』35) HGLP-I (7-36) NH2/ml。在使用0. 45微米濾器進行無菌過濾後，將Iml該溶液的等分試樣轉移入凍幹小瓶，冷凍乾燥，將乾燥的產物儲存在-22 °C。(ν)冷凍乾燥的 5011^ 等分試樣(Aib_) HGLP-I (7-36) NH2/ 小瓶1.製備WFI和乙酸的0. 1% (ν/ν)稀釋液。2.在容量瓶中，轉移稱量量的(Aib8』35) HGLP-I (7-36) NH2 (乙酸鹽)。在攪拌下，加入足量的0. 乙酸以使終濃度達到50mg(Aib8』35)HGLP-I (7-36)NH2/ml。在進行無菌過濾後，將Iml該溶液的等分試樣轉移至凍幹小瓶，冷凍乾燥。C)計算(i)確定用於組合物的賦形劑(E)的總重量/體積E = (AX100/T)-(A/P)其中E=以mg計的賦形劑A=純肽的含量(mg);T =組合物的目標濃度；例如，如果目標為2% ；則該值為2 ；且P =純肽的濃度(mg肽/IOOmg製劑)。關於賦形劑的總體積，使用Iml = Ig的假設。(ii)確定向每ml或g組合物溶液中加入的SiCl2的體積/重量(W)a)對於其中不進行pH調整的組合物而言，W= 100% E ；
b)對於其中肽為約或約2%或高至約10%且使用鹼調整pH的液體製劑而言， W = 80% E ；c)對於其中肽為約或約2%或高至約10%且使用鹼調整pH的半固體或凝膠製劑而言，W = 50% E ；d)對於其中肽為約25%且使用鹼調整pH的半固體或凝膠製劑而言，W = 66. 66% E ；e)對於其中肽是由凍幹製劑重構且使用鹼調整pH的製劑而言，W = 90% E0(iii)確定向每ml或g組合物溶液中加入的NaOH的體積/重量(W)a)對於其中肽為約或約2%或高至約10%且使用鹼調整pH的製劑而言，W = 20% E ；b)對於其中肽為約或約2%或高至約10%且使用鹼調整pH的半固體或凝膠製劑而言，W = 50% E ；c)對於其中肽為約25%且使用鹼調整pH的半固體或凝膠製劑而言，W = 33. 33% E ；d)對於其中肽是由凍幹製劑重構且使用鹼調整pH的製劑而言，W= 10% E0(iv)確定用於各組合物中的SiCl2的濃度(mg/ml或mg/g)[ZnCl2] = (136. 29 XA) / (WX 3339. 76 XR)其中A=純肽的含量(mg)R=肽/Zn的摩爾比率對於其中肽為約或約2%或約10%或高至約23%的製劑而言，R = 1. 5 ；對於其中肽為約25%的製劑而言，R = 4. 0 ；且W =每g或ml組合物溶液中加入的SiCl2溶液的重量(g)或體積(ml)。2. 2具有1-10%凍幹肽和SiCL、不進行pH調整的組合物的製備如本文所用，包含一定百分比的肽的製劑描述了每組合物總重量包含一定重量的肽的製劑，例如肽描述了每IOOg總組合物包含Ig肽的製劑。如下製備包含約或約 2%高至約10%肽的製劑。將如所述的那樣製備的(Aib8』35)HGLP-I (7-36)NH2的冷凍乾燥樣品與PH 3的SiCl2儲備溶液以100%的總賦形劑體積和[肽Zn]=1.5 1進行充分混
口 OA)通過混合 20mg 凍幹的(Aib8』35) HGLP-1 (7-36) NH2 (參見上文 2. IB (iv))與 2ml ZnCl2溶液(0. 272mg/ml ；參見上文2. IB⑴)製備組合物；B)通過混合 20mg 凍幹的(Aib8』35) HGLP-1 (7-36) NH2 (參見上文 2. IB (iv))與 Iml ZnCl2溶液(0. 544mg/ml ；參見上文2. IB⑴)製備2%組合物；C)通過混合 50mg 凍幹的(Aib8』35) HGLP-I (7-36) NH2 (參見上文 2. IB (v))與 0. 45ml ZnCl2溶液(3. 023mg/ml ；參見上文2. IB⑴)製備10%組合物。使凍幹的肽和溶液平衡至室溫。將指定體積的SiCl2溶液注入含有凍幹肽的小瓶， 允許或2%肽組合物水化約2分鐘，允許10%肽組合物水化約60分鐘，或直到所有凍幹肽完全水化並且溶液中不含肽的團塊。在水化後，將重構的肽振搖約1分鐘。可取出適量的溶解的肽進行給藥，例如，100 μ 1按照上文A製備的肽溶液等
17於Img劑量，50 μ 1按照上文B製備的2%肽溶液等於Img劑量，150 μ 1按照上文C製備的 10%肽溶液等於15mg劑量等。使用本申請中的教導，本領域技術人員可以改變肽和ZnCl2的量以獲得下文詳述的1%、2%和10%組合物以外的組合物以及所需的劑量。2. 3具有1-10%凍幹的肽和ZnCL的講行DH調整的組合物的製備 如下製備包含約1 %或約2 %高至約10 %肽的製劑。將如所述的那樣製備的(Aib8』 35)HGLP-I (7-36)NH2的凍幹樣品與pH 3的ZnCl2儲備溶液以90%的總賦形劑體積充分混合。通過添加稀NaOH溶液達到所需的溶液pH。Α)通過混合 20mg 凍幹的(Aib8』35) HGLP-1 (7-36) NH2 (參見上文 2. IB (iv))與 1. 8ml ZnCl2溶液(參見上文2. IBa))製備組合物；B)通過混合 20mg 凍幹的(Aib8』35) HGLP-1 (7-36) NH2 (參見上文 2. IB (iv))與 0. 9ml ZnCl2溶液(參見上文2. IBa))製備2%組合物；C)通過混合 50mg 凍幹的(Aib8』35) HGLP-1 (7-36) NH2 (參見上文 2. IB(V))與 0. 40ml ZnCl2溶液(參見上文2. lB(i))製備10%組合物。向上述溶液中加入必需體積(10%的賦形劑總體積)的稀NaOH溶液以達到目標濃度和pH。例如，對每種情況而言1 %組合物加入0. 2ml合適濃度的NaOH溶液2%組合物加入0. Iml合適濃度的NaOH溶液10%組合物加入0. 05ml合適濃度的NaOH溶液使用本申請中的教導，本領域技術人員可以改變肽和ZnCl2的量以獲得下文詳述的1^^2%和10%組合物以外的組合物。2. 4具有1-10%肽和SiCL、不進行pH調整的液體組合物的製備如下製備包含約1 %或約2 %高至約10 %肽的液體製劑。稱量(Aib8』35) HGLP-I (7-36)NH2樣品並且與pH 3的ZnCl2儲備溶液混合以達到l^d1^、高至10%肽的目標濃度。在混合後，將組合物無菌過濾，儲存備用。2. 5具有1-10%肽和SiCL、進行pH調整的液體組合物的製備如下製備包含約1 %或約2 %高至約10 %肽的液體製劑。稱量(Aib8』35) HGLP-I (7-36)NH2樣品並且與pH 3的SiCl2儲備溶液以80%的總賦形劑體積充分混合。鋅溶液可以為SiCl2或ZnAc2 ·2Η20。通過添加稀NaOH溶液達到溶液的所需pH。使用這種方法製備製劑C5至C13。使用本申請中的教導，本領域技術人員可以改變肽和ZnCl2的量以獲得本文所述的1%、2%和10%以外的組合物。2. 6具有25%肽和SiCL、不進行pH調整的半固體/凝膠組合物的製備如下製備包含約25%肽的半固體或凝膠製劑。稱量(Aib8』35)HGLP-I (7-36)NH2樣品並且與PH 2的SiCl2儲備溶液以66. 66%的總賦形劑體積充分混合。鋅溶液可以是SiCl2 或ZnAc2 · 2H20。使用這種方法製備製劑Cl和C2。更具體地，使用「推-拉(push-pull)，，混合法製備半固體或凝膠組合物a)將所需量的肽稱量入預先安裝了專用雙路手動閥HV(I. D. = 0. 5mm)的一次性注射器Sl的柱桶，並且將管放入注射器Luer孔內；
b)使用不鏽鋼杆SR固定注射器柱塞；c)使Sl中的HV與真空源連接並且打開HV。10分鐘後，關閉HV;d)將鋅溶液準確稱量入第二支一次性注射器S2的柱桶；e)然後使S2與HV的游離部分連接；f)打開HV，用真空將溶劑抽入包含肽粉末的Sl柱桶；g)關閉HV，取出溶劑注射器S2，從而水化Sl中的肽粉末；h)取出SR，緩慢釋放注射器柱塞；i)在不打開HV的情況下移動注射器柱塞(推和拉)，以便粉末物料被溶劑完全浸溼；J)將雙路不鏽鋼連接器SC(I. D. = 1. 0mm)放入注射器Luer孔內放置管的注射器 S2中，並且將其柱塞推至末端；k)打開Sl中的HV以排出真空，然後取出HV。使注射器柱塞移動以便將注射器柱桶中的空氣減少至最低限度；和1)通過SC連接Sl和S2並且使組合物從Sl通過SC到S2進行捏合。使用本申請中的教導，本領域技術人員可以改變肽和ZnCl2的量以獲得本文所述的25%以外的組合物。2. 7具有25%肽和SiCL、講行dH調整的半固體/凝膠組合物的製備如下製備包含約25%肽的半固體或凝膠製劑。稱量(Aib8』35)HGLP-I (7-36)NH2樣品並且與PH 2的SiCl2儲備溶液以66. 66%的總賦形劑體積充分混合。鋅溶液可以是SiCl2 或ZnAc2 ·2Η20。通過添加稀NaOH溶液達到所需的溶液ρΗ。在本實施例中，必須在鋅與NaOH 溶液之間分割加入到粉末中的液體總體積。因此，調整鋅溶液的濃度，以便所需的鋅溶液的總體積降至添加至肽粉末中的總液體積的50% (步驟d)。如下所詳述，加入NaOH溶液作為加入到肽粉末中的剩餘50%的總液體體積。使用這種方法製備製劑C3和C4。使用「推-拉」混合法製備ρΗ調整的半固體或凝膠組合物a)將所需量的肽稱量入預先安裝了專用雙路手動閥HV(I. D. = 0. 5mm)的一次性注射器Sl的柱桶，並且將管放入注射器Luer孔內；b)使用不鏽鋼杆SR固定注射器柱塞；c)使Sl中的HV與真空源連接並打開HV。10分鐘後，關閉HV ；d)將鋅溶液準確稱量入第二支一次性注射器S2的柱桶；e)然後使S2與HV的游離部分連接；f)打開HV，用真空將溶劑抽入包含肽粉末的Sl柱桶；g)關閉HV，取出溶劑注射器S2，從而水化Sl中的肽粉末；h)取出SR，緩慢釋放注射器柱塞；i)在不打開HV的情況下移動注射器柱塞(推和拉)，以便粉末物料被溶劑完全浸溼；j)將雙路不鏽鋼連接器SC(I. D. = 1. 0mm)放入注射器Luer孔內放置管的注射器 S2中，並將其柱塞推至末端；k)打開Sl中的HV以排出真空，然後取出HV。使注射器柱塞移動以便將注射器柱桶中的空氣減少至最低限度；
1)通過SC連接Sl和S2並且使組合物從Sl通過SC到S2進行捏合。m)在勻化後，取出混合產物的等分試樣以測定肽的濃度；η)準確稱量剩餘的中間主體產物，計算達到期望ρΗ所需的NaOH溶液的量；ο)將NaOH溶液準確稱量入第三支一次性注射器S3 ；和ρ)將注射器柱塞緩慢壓縮以將注射器腔中的空氣減少至最低限度。通過SC連接兩支注射器並且通過SC捏合組合物。使用本申請中的教導，本領域技術人員可以改變肽和ZnCl2的量以獲得本文所述的25%以外的組合物。表權利要求
1.持續釋放液體藥物組合物，其包含 液體； 根據式⑴[Aib8』35]hGLP-l (7-36)NH2的肽類似物； 二價金屬和/或二價金屬鹽；和 乙酸鹽和/或乙酸； 其特徵在於， 所述二價金屬和/或二價金屬鹽是鋅和/或氯化鋅； 所述藥物組合物的最終PH在4至5的範圍內； 所述乙酸鹽和/或乙酸與所述肽類似物的摩爾比率範圍為約11至61; 所述肽類似物與鋅的摩爾比率範圍為約6 1至1 1。
2.根據權利要求1的藥物組合物，其中所述肽類似物的一部分和所述乙酸鹽的一部分以肽類似物的鹽形式存在。
3.根據權利要求1或2的藥物組合物，其中所述藥物組合物的最終pH為4.5士0. 1。
4.根據前述權利要求中任一項的藥物組合物，其中所述液體選自無菌水或包含等滲劑如NaCl的無菌水。
5.根據前述權利要求中任一項的藥物組合物，其中所述乙酸鹽和/或乙酸與所述肽類似物的摩爾比率為約3. 2 1。
6.根據前述權利要求中任一項的藥物組合物，其中所述肽類似物與鋅的摩爾比率範圍為約1. 5至1。
7.根據前述權利要求中任一項的藥物組合物，其中所述二價金屬和/或二價金屬鹽為氯化鋅。
8.根據前述權利要求中任一項的藥物組合物，其中 所述二價金屬和/或二價金屬鹽為氯化鋅； 所述藥物組合物的最終pH範圍為4. 5士0. 1 ； 所述乙酸鹽和/或乙酸與所述肽類似物的摩爾比率範圍為約3. 2 1 ； 所述肽類似物與鋅的摩爾比率範圍為約1.5 1。
9.根據前述權利要求中任一項的藥物組合物，其中所述肽的濃度為10%重量/體積。
10.根據權利要求1至9中任一項的藥物組合物，其中所述鋅的濃度範圍為0.重量/體積至2. 35%重量/體積。
11.根據前述權利要求中任一項的藥物組合物，其中所述組合物在5°C的溫度穩定至少1年的時間。
12.根據前述權利要求中任一項的藥物組合物，其中對所述組合物進行配製以使根據式(I)的化合物在個體內釋放至少約1周，優選2周。
13.根據前述權利要求中任一項的藥物組合物，其中在不凍幹所有組分的情況下、優選通過將所有組分混合在一起而製備所述藥物組合物。
14.根據前述權利要求中任一項的藥物組合物，其被置於容器中，所述容器優選為預填充注射器。
15.用於製備根據前述權利要求中任一項的藥物組合物的方法，包括以下步驟 A.將液體、乙酸鹽和/或乙酸和肽類似物混合；以及B.加入所述二價金屬和/或二價金屬鹽並將其溶解。
16.權利要求15的方法，其還包括以下步驟C.無菌過濾由步驟B產生的組合物；以及D.用所述組合物填充容器。
17.預填充注射器，其含有根據權利要求1至9中任一項的藥物組合物，其中所述組合物包含 作為液體的水(qs 210 μ 1)； 21mg 根據式(I) [Aib8'35] hGLP-1 (7-36) NH2 的肽類似物； 0. 571mg作為二價金屬鹽的氯化鋅； 乙酸； 所述藥物組合物的最終pH為4. 5 士 0. 1 ； 所述乙酸與所述肽類似物的摩爾比率為約3. 2 1 ； 所述肽類似物與鋅的摩爾比率為約1.5 1。
全文摘要
本發明涉及持續釋放液體藥物組合物，其包含液體、根據式[Aib8，35]hGLP-1(7-36)NH2的肽類似物、二價金屬和/或二價金屬鹽、以及乙酸鹽和/或乙酸。本發明還涉及包含藥物組合物的容器和用於製備藥物組合物的方法。
文檔編號A61K38/26GK102405055SQ201080006820
公開日2012年4月4日 申請日期2010年2月8日 優先權日2009年2月9日
發明者A·布羅沙爾, N·莫恩多利 申請人:益普生製藥股份有限公司