八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測方法
2023-04-24 01:45:46 1
八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測方法
【專利摘要】一種八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測方法，包括以下步驟：精密稱取在五氧化二磷減壓乾燥器中乾燥24h的鹽酸小檗鹼對照品預定量，加1％的鹽酸甲醇溶液製成每1mL含0.01mg的對照品溶液；取八味獐牙菜丸研細取2.5g，加1％的鹽酸甲醇溶液預定量，回流加熱1小時，將提取液過濾至100ml量瓶中，用1％的鹽酸甲醇溶液洗滌殘渣，稀釋至刻度搖勻；取提取液5ml，置於氧化鋁柱上；用乙醇洗脫，收集洗脫液，置25ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度搖勻，取2ml至10ml量瓶中，用1％的鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度搖勻，經0.45μm微孔濾膜過濾，得供試品溶液；吸取對照溶液和供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀進行測定。
【專利說明】八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及中成藥成分檢測【技術領域】，特別涉及一種八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測方法。
【背景技術】
[0002]藏醫藥是我國民族醫藥中的一大重要組成部分，是祖國醫學中不可分割的一個重要部分。經過一千多年的發展及數代藏醫名家的潛心研究與繼承發揚，形成了具有獨特的一派醫藥理論體系，對於防止疾病、改善和提高健康水平具有非常重要的作用。藏醫藥經過千百年的發展，形成和積累完善了治療各種疾病的許多方劑，其中八味獐牙菜丸為較為著名的方藥，具有清熱，消炎。用於膽囊炎，初期黃疸性肝炎，療效卓著，收載於《衛生部藥品標準藏藥分冊第一冊》，標準中制定了對小檗皮藥材中鹽酸小檗鹼的鑑別項，但準確度低，靈敏度差，只是做了簡單的定性，不能有效體現製劑的質量。
[0003]例如，現有技術中提供的檢測方法:取本品粉末2g，加乙醚10ml，振搖I小時，濾過，殘渣將乙醚揮幹，加甲醇5ml振搖I小時，濾過，濾液作為供試品溶液；另取鹽酸小檗鹼對照品加甲醇製成每Iml含0.5mg的溶液作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液5 μ I和對照品溶液I μ 1，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿一甲醇一水(8:3:1)的下層溶液為展開劑，置氨蒸汽飽和的層析缸內，展開，取出，晾乾，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
[0004]然而，上述檢測方法主要存在以下問題:展開時間長；準確度差，靈敏度低；定量效果差，專屬性不強；受外界環境影響大，對顯色劑噴霧的要求較高。
【發明內容】
[0005]有鑑於此，有必要提供一種準確、穩定、展開時間短的八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測方法。
[0006]一種八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測方法，包括以下步驟:
制定採用高效液相色譜法測定八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的色譜條件:流動相:用H3PO4調PH值至3的0.05mol.L-1磷酸二氫鈉溶液、乙腈，其中，磷酸二氫鈉溶液與乙腈的體積比為70:30 ;流速:1.0mL/min ;檢測波長:270 nm ;柱溫:室溫；進樣量10 μ L ；
對照品溶液的製備:精密稱取在五氧化二磷減壓乾燥器中乾燥24h的鹽酸小檗鹼對照品預定量，加I %的鹽酸甲醇溶液製成每ImL含0.01mg的對照品溶液；
供試品溶液的製備:取八味獐牙菜丸，研細，取2.5g，精密稱定，加I %的鹽酸甲醇溶液預定量，回流加熱I小時，將提取液過濾至100ml量瓶中，用1%的鹽酸甲醇溶液洗滌殘渣，並稀釋至刻度，搖勻；精密吸取上述提取液5ml，置於已處理好的氧化鋁柱上，其中處理好的氧化鋁柱是指將5g中性氧化鋁進行溼法裝柱，且內徑0.9cm ;用乙醇洗脫，收集洗脫液，置25ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2ml，至IOml量瓶中，用I %的鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，經0.45Mffl微孔濾膜過濾，取續濾液，即得供試品溶液；八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的測定:吸取上述對照溶液和供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，並根據液相色譜儀顯示的對應的峰表來計算出八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的含量。
[0007]上述八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測方法中，設置最優的色譜條件，並製備滿足上述參數的對照品溶液、供試品溶液，吸取上述對照溶液和供試品溶液並注入液相色譜儀，並根據液相色譜儀顯示的對應的峰表來完成八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測，故實現了高度自動化及保留時間短和檢測時間快的目的；進一步的，上述色譜條件及滿足上述參數的對照品溶液、供試品溶液可以保證測量結果準確度高、靈明度高，專屬性強，定量效果好。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0008]附圖1是一較佳實施方式的八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測方法流程圖。
[0009]附圖2是對照品溶液的HPLC色譜圖。
[0010]附圖3是供試品溶液的HPLC色譜圖。
[0011]附圖4是陰性對照品溶液的HPLC色譜圖。
【具體實施方式】
[0012]本發明提供的八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測方法是經過研發人員反覆試驗及理論驗證後制定出最優參數的色譜條件、最優參數的對照品溶液、最優參數的供試品溶液，並通過高效液相色譜法實現八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的含量檢測。以下具體描述本發明的技術方案:
請同時參看圖1，一種八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測方法，包括以下步驟:
步驟S300，制定採用高效液相色譜法測定八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的色譜條件:流動相:用H3PO4調PH值至3的0.05mol.1磷酸二氫鈉溶液、乙腈，其中，磷酸二氫鈉溶液與乙腈的體積比為70:30 ;流速:1.0mL/min ;檢測波長:270 nm ;柱溫:室溫;進樣量10 μ L。
[0013]步驟S301，對照品溶液的製備:精密稱取在五氧化二磷減壓乾燥器中乾燥24h的鹽酸小檗鹼對照品預定量，加I %的鹽酸甲醇溶液製成每ImL含0.01mg的對照品溶液。
[0014]步驟S302，供試品溶液的製備:取八味獐牙菜丸，研細，取2.5g，精密稱定，加1%的鹽酸甲醇溶液預定量，回流加熱I小時，將提取液過濾至100ml量瓶中，用I %的鹽酸甲醇溶液洗滌殘渣，並稀釋至刻度，搖勻；精密吸取上述提取液5ml，置於已處理好的氧化鋁柱上，其中處理好的氧化鋁柱是指將5g中性氧化鋁進行溼法裝柱，且內徑0.9cm ;用乙醇洗脫，收集洗脫液，置25ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2ml，至IOml量瓶中，用I %的鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，經0.45ΜΠ1微孔濾膜過濾，取續濾液，即得供試品溶液。
[0015]步驟S303，八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的測定:吸取上述對照溶液和供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，並根據液相色譜儀顯示的對應的峰表來計算出八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的含量。其中，步驟S303具體為:吸取上述對照溶液和供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀；根據液相色譜儀顯示的色譜圖來判斷峰表中峰面積的是否準確；在判斷出峰表中峰面積準確時，根據峰表中鹽酸小檗鹼峰的峰面積計算出八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的含量。
[0016]上述八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測方法中，設置最優的色譜條件，並製備滿足上述參數的對照品溶液、供試品溶液，吸取上述對照溶液和供試品溶液並注入液相色譜儀，並根據液相色譜儀顯示的對應的峰表來完成八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測，故實現了高度自動化及保留時間短和檢測時間快的目的；進一步的，上述色譜條件及滿足上述參數的對照品溶液、供試品溶液可以保證測量結果準確度高、靈明度高，專屬性強，定量效果好。
[0017]為了進一步說明八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測方法的測量結果準確度高、重現性好，以下給出實驗實時過程描述及相關數據:
I儀器與試劑
島津LC-20AT高效液相色譜儀，島津STO-20A紫外檢測器；TU_1901雙光束紫外可見分光光度計；電子分析天平 AB135-S (梅特勒-託利多儀器有限公司)電子分析天平；鹽酸小檗鹼對照品(中國藥品生物製品檢定所，供含量測定用，批號110713-200208);八味獐牙菜丸、陰性樣品(寧夏多維藥業有限公司)；乙腈(色譜純，美國天地公司)，水(去離子水)，其他試劑均為分析純。
[0018]2方法與結果
2.1色譜條件:色譜柱:VP-ODS色譜柱(250mmX 4.6mm);流動相:0.05mol.L-1磷酸二氫鈉(用H3P04調PH至3) 一乙腈(70:30);流速:1.0mL/min ;檢測波長:270 nm ;柱溫:室溫；進樣量10 μ L。
[0019]2.2溶液製備
對照品溶液的製備:精密稱取在五氧化二磷減壓乾燥器中乾燥24h的八味獐牙菜丸對照品適量，加鹽酸一甲醇(1:100)的溶液製成每ImL含0.0lmg的溶液，作為對照品溶液。
[0020]供試品溶液的製備:取重量差異項下的本品內容物，研細，取約2.5g，精密稱定，加鹽酸-甲醇(1:100)溶液適量，回流加熱I小時，將提取液過濾至IOOml量瓶中，用鹽酸-甲醇(1:100)溶液洗滌殘渣，並稀釋至刻度，搖勻。精密吸取上述提取液5ml，置於已處理好的氧化鋁柱(內徑約0.9cm，中性氧化鋁5g，溼法裝柱)上，用乙醇洗脫，收集洗脫液，置25ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2ml，至IOml量瓶中，用鹽酸一甲醇(1:100)溶液稀釋至刻度，搖勻，經0.45ΜΠ1微孔濾膜過濾，取續濾液，作為供試品溶液。
2.2.3陰性對照溶液的製備:取除小檗皮外的其他藥材，按樣品處方比例及製備工藝製成缺小檗皮的製劑，按供試品溶液製備方法製成陰性對照品溶液。
[0021]3方法學考察
系統適用性試驗:取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，進行分析，結果見圖2、圖3、圖4,其中，1為鹽酸小檗鹼色譜峰；鹽酸小檗鹼的保留時間約為10分鐘,鹽酸小檗鹼與其他組分峰的分離度均大於1.5，陰性對照品溶液對測定無幹擾。
[0022]線性關係考察:精密稱取鹽酸小檗鹼對照品適量，加鹽酸一甲醇(1:100)溶液製成每ImL含鹽酸小檗鹼0.032mg的對照品溶液。精密吸取對照品溶液2，4，6，8，IOmL,分別置IOmL容量瓶中，加鹽酸一甲醇(1: 100)溶液至刻度，搖勻，各精密吸取10 μ L，分別注入液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積為縱坐標，以質量濃度為橫坐標繪製標準曲線，鹽酸小檗鹼的線性回歸方程為:y=l.55Χ108Χ — 3.83X 105 r=0.999 8 (n=5)，表明鹽酸小檗鹼在0.0064~0.032 mg.mL-1範圍內與峰面積線性關係良好。
[0023]穩定性試驗:吸取同一供試品溶液10μ L,於0,2,4,8,12h進行測定。結果峰面積RSD=L 17% (n=5)，結果表明供試品溶液在常溫下12小時內穩定性良好。
[0024]精密度試驗:精密吸取0.01mg/mL的對照品溶液10 μ L，連續進樣6次。結果峰面積的RSD=0.54% (η=6 )。表明儀器精密度良好。
[0025]重複性試驗:取同一批樣品6份，按供試品溶液製備方法，製備溶液並測定。結果鹽酸小檗鹼平均含量0.53mg/粒，RSD=L 02% (n=6)。
[0026]加樣回收率試驗:精密稱取已知含量為(2.21mg/g)的樣品6份，分別按照所取供試品含量的80%，100%, 120%準確加入鹽酸小檗鹼對照品溶液適量各2份，按供試品溶液製備方法製備溶液並測定，計算回收率，結果見表1。
[0027]表1加樣回收試驗結果(n=6 )
【權利要求】
1.一種八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測方法，其特徵在於包括以下步驟: 制定採用高效液相色譜法測定八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的色譜條件:流動相:用H3PO4調PH值至3的0.05mol.1磷酸二氫鈉溶液、乙腈，其中，磷酸二氫鈉溶液與乙腈的體積比為70:30 ;流速:1.0mL/min ;檢測波長:270 nm ;柱溫:室溫；進樣量10 μ L ； 對照品溶液的製備:精密稱取在五氧化二磷減壓乾燥器中乾燥24h的鹽酸小檗鹼對照品預定量，加I %的鹽酸甲醇溶液製成每ImL含0.01mg的對照品溶液； 供試品溶液的製備:取八味獐牙菜丸，研細，取2.5g，精密稱定，加I %的鹽酸甲醇溶液預定量，回流加熱I小時，將提取液過濾至100ml量瓶中，用1%的鹽酸甲醇溶液洗滌殘渣，並稀釋至刻度，搖勻；精密吸取上述提取液5ml，置於已處理好的氧化鋁柱上，其中處理好的氧化鋁柱是指將5g中性氧化鋁進行溼法裝柱，且內徑0.9cm ;用乙醇洗脫，收集洗脫液，置25ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2ml，至IOml量瓶中，用I %的鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，經0.45ΜΠ1微孔濾膜過濾，取續濾液，即得供試品溶液； 八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的測定:吸取上述對照溶液和供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，並根據液相色譜儀顯示的對應的峰表來計算出八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的含量。
2.如權利要求1所述的八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的檢測方法，其特徵在於:在「八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的測定」的步驟具體為:吸取上述對照溶液和供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀； 根據液相色譜儀顯示的色譜圖來判斷峰表中峰面積是否準確； 在判斷出峰表中峰面積準確時，根據峰表中鹽酸小檗鹼峰的峰面積計算出八味獐牙菜丸中鹽酸小檗鹼的含量。
【文檔編號】G01N30/02GK103698419SQ201310588401
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年11月21日 優先權日:2013年11月21日
【發明者】王景, 王春紅, 吳麗萍 申請人:寧夏多維藥業有限公司