多用途免疫組化筆在細胞爬片免疫組織化學檢測中的應用的製作方法
2023-05-20 13:33:01
多用途免疫組化筆在細胞爬片免疫組織化學檢測中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種多用途免疫組化筆在細胞爬片免疫組織化學檢測中的應用，將細胞接種於載玻片式培養皿中進行細胞爬片，細胞培養結束後進行免疫細胞組織化學染色鑑定；所述載玻片式培養皿設有培養皿體和皿蓋，培養皿體型號分單孔室和多孔室兩種；各孔室面積大於載玻片，皿體底直接作為載玻片使用，皿體底外側面設有與載玻片尺寸對應的長方形框痕線凹溝，在外力作用下可將皿體的底部沿長方形框痕線凹溝脫出。本發明適用於玻璃切片的各種免疫組織化學染色實驗，可顯著減少抗體和試劑用量，避免染色時液體流淌和擴散，提高操作速度。尤其可適用於細胞爬片或細胞塗片的實驗研究中進行大規模，大樣本多組別的免疫組化染色。
【專利說明】多用途免疫組化筆在細胞爬片免疫組織化學檢測中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種免疫組化筆在細胞爬片免疫組織化學檢測中的應用。
【背景技術】
[0002]用特異性抗體對組織切片及其細胞爬片中某些化學成分分布的標記及其含量進行組織和細胞原位定性、定位或定量研究，這種技術稱為免疫細胞化學(immunocytochemistry)技術。
[0003]通常細胞爬片免疫組織化學檢測是對單張細胞爬片一片一片進行染色操作，一般只能對單樣本做一種抗體，蛋白及基因的檢測，難以勝任大規模，多樣本及多組別的醫學實驗科學研究。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在於提供一種適用於各種免疫組織化學染色實驗，可顯著減少抗體和試劑用量，避免染色時液體流淌和擴散，提高操作速度的多用途免疫組化筆在細胞爬片免疫組織化學檢測中的應用。
[0005]本發明的技術解決方案是:
一種多用途免疫組化筆在細胞爬片免疫組織化學檢測中的應用，其特徵是:將細胞接種於載玻片式培養皿中進行細胞爬片，細胞培養結束後進行免疫細胞組織化學染色鑑定；所述載玻片式培養皿設有培養皿體和皿蓋，培養皿體型號分單孔室和多孔室兩種；各孔室面積大於載玻片，皿體底直接作為載玻片使用，皿體底外側面設有與載玻片尺寸對應的長方形框痕線凹溝，在外力作用下可將皿體的底部沿長方形框痕線凹溝脫出；
所述免疫細胞組織化學染色鑑定依次包括下列步驟:
(1)用冰丙酮固定15min或4%多聚甲醒固定；
(2)流水漂洗，用PBS清洗標本3次；
(3)用0.5%Triton X-100 孵育 10 min ；
(4)0.3%H202 孵育 10 min ；
(5)用PBS清洗標本3次後,熱風充分乾燥；
(7)用免疫組化筆將油墨在細胞爬片上畫分2-20個分隔染色區；
(8)空氣充分乾燥；
(9)用正常二抗血清封閉孵育10min ；
(10)在各細胞染色區分別滴加小鼠或兔抗第一抗體孵育30?60min ；
(11)吸除各細胞染色區液體並用PBS清洗標本3次；
(12)滴加酶聯小鼠或兔第二抗體工作液孵育30?60min ；
(13)PBS清洗標本3次；
(14)DAB顯色，避光，鏡下觀察；
(15)蒸餾水洗； (16)蘇木素襯染；
(17)鹽酸酒精分化，自來水洗；
(18)水性封固劑封片。
[0006]所述油墨由下列重量百分比的組分混合組成:松香2?6%，蜂蠟18?26%，石蠟3?8%，異丙醚5?10%，二氯甲烷5?10%，汽油25?30%，二硫化碳12?17%，四氯化碳2?6%，氯仿2?6%，環已酮2?6% ;上述各組分用量之和為100% ；
或所述油墨由下列組分混合組成:聚苯乙烯2?4%，DMF9?11%，THF9?11%，松香2?4%，蜂蠟13?16%，石蠟2?4%，異丙醚4?6%，二氯甲烷4?6%，汽油18?22%，二硫化碳9?11%，四氯化碳9?11%，氯仿I?2%，環已酮I?2%，煤油2?4%，松節油I?2% ;上述各組分用量之和為100% ；或所述油墨由下列組分混合組成:硬脂酸30?36%，苯15?20%，46°C石蠟9?15%，異丙醚7?11%，二硫化碳15?20%，氯仿15?20%;上述各組分用量之和為100%。
[0007]在外力作用下可將皿體的底部沿長方形框痕線凹溝脫出前，先用銳利刀具沿線凹溝劃、勾，然後在皿底面加用外力可將皿體的單孔槽底脫出。
[0008]所述免疫組化筆包括筆筒，筆筒內設置海綿樣的圓柱體筆芯，筆筒內灌注有油墨，海綿樣的圓柱體筆芯前端設置木質筆芯；海綿樣的圓柱體筆芯放置在筆筒中，筆筒為長方體或圓柱體，筆筒口外側有螺紋與內筆帽的內螺紋匹配吻合；筆筒中放置不鏽鋼珠一個，搖晃筆筒時作攪和油墨的作用；所述內筆帽起封閉筆筒口，防止油墨揮發保持其液相狀態和聯接外筆帽的作用，其內表面有與筆筒口吻合的內螺紋，可旋蓋筆筒口，內筆帽的外表面設有與外筆帽內口緣匹配吻合的鎖口凹，圓柱體筆芯末端一側設有油墨刷；外筆帽的內口緣周設有鎖口凹，與內筆帽外口緣匹配吻合，起封閉內筆帽和固定內筆帽為一體開啟筆筒口，並起提出油墨刷的作用。
[0009]多孔室培養皿的一個角呈斜面形式，方便方位標識；培養皿蓋的一個角呈與培養皿呈斜面的角配合的斜面形式；培養皿蓋與培養皿吻合口周緣的交錯深度> 10mm。
[0010]本發明有利於免疫組化的染色，染色步驟與常規免疫組織化學相似，但樣本處理的溫度，時間，試劑濃度等標準一致，標記的一抗種類多，可比性和可靠性均顯著提高！處理的樣本數量多，高效快捷。PBS清洗、血清孵育、標記二抗，襯染(蘇木素)等不需要分隔的實驗操作可同步進行處理，方便快捷，實驗條件標準一致且易控制。採用大面積細胞爬片進行細胞培養其處理的溫度，時間，試劑濃度等標準一致，使實驗結果的可比性和可靠性均顯著提高。細胞培養皿孔槽的數量減少，操作方便，高效快捷。特定的油墨配方充分保證了工作效果。適用於各種免疫組織化學染色實驗，包括；石蠟組織切片，冰凍組織切片和細胞爬片的免疫組織化學染色實驗，可顯著減少抗體和試劑用量，避免染色時液體流淌和擴散，提高操作速度；尤其可適用於細胞爬片或細胞塗片的實驗研究中進行大規模，大樣本多組別的的免疫組化染色。
[0011]該組化筆適用於玻璃為載體的組織切片和聚苯乙烯材質載體的細胞爬片上進行各種免疫組織化學染色實驗，可顯著減少抗體和試劑用量，避免染色時液體流淌和擴散，提高操作速度。可進行大規模，多樣本及多組別的醫學實驗科學研究。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0012]下面結合附圖和實施例對本發明作進一步說明。
[0013]圖1是本發明培養皿的結構示意圖。
[0014]圖2是免疫組化筆的結構示意圖。
[0015]圖3是皿體底脫出示意圖。
【具體實施方式】
[0016]一種多用途免疫組化筆在細胞爬片免疫組織化學檢測中的應用，將細胞接種於載玻片式培養皿中進行細胞爬片，細胞培養結束後進行免疫細胞組織化學染色鑑定；所述載玻片式培養皿設有培養皿體I和皿蓋2，培養皿體型號分單孔室和多孔室兩種；各孔室面積大於載玻片，皿體底3直接作為載玻片使用，皿體底外側面設有與載玻片尺寸對應的長方形框痕線凹溝4，在外力作用下可將皿體的底部沿長方形框痕線凹溝脫出；
所述免疫細胞組織化學染色鑑定依次包括下列步驟:
(1)用冰丙酮固定15min或4%多聚甲醒固定；
(2)流水漂洗，用PBS清洗標本3次；
(3)用0.5%Triton X-100 孵育 10 min ；
(4)0.3%H202 孵育 10 min ；
(5)用PBS清洗標本3次後,熱風充分乾燥；
(7)用免疫組化筆將油墨在細胞爬片上畫分2-20個分隔染色區；
(8)空氣充分乾燥；
(9)用正常二抗血清封閉孵育10min ；
(10)在各細胞染色區分別滴加小鼠或兔抗第一抗體孵育30?60min ；
(11)吸除各細胞染色區液體並用PBS清洗標本3次；
(12)滴加酶聯小鼠或兔第二抗體工作液孵育30?60min ；
(13)PBS清洗標本3次；
(14)DAB顯色，避光，鏡下觀察；
(15)蒸餾水洗；
(16)蘇木素襯染；
(17)鹽酸酒精分化，自來水洗；
(18)水性封固劑封片。
[0017]所述油墨由下列重量百分比的組分混合組成:松香2飛％，蜂蠟18?26%，石蠟:Γ8%，異丙醚5?10%，二氯甲烷5?10%，汽油25?30%，二硫化碳12?17%，四氯化碳2?6%，氯仿2?6%，環已酮2?6% ;上述各組分用量之和為100% ；
或所述油墨由下列組分混合組成:聚苯乙烯2?4%，DMF9?11%，THF9?11%，松香2?4%，蜂蠟13?16%，石蠟2?4%，異丙醚4?6%，二氯甲烷4?6%，汽油18?22%，二硫化碳9?11%，四氯化碳9?11%，氯仿I?2%，環已酮I?2%，煤油2?4%，松節油I?2% ;上述各組分用量之和為100% ；或所述油墨由下列組分混合組成:硬脂酸30?36%，苯15?20%，461:石蠟9?15%，異丙醚7?11%，二硫化碳15?20%，氯仿15?20% ;上述各組分用量之和為100%。
[0018]在外力作用下可將皿體的底部沿長方形框痕線凹溝脫出前，先用銳利刀具沿線凹溝劃、勾，然後在皿底面加用外力可將皿體的單孔槽底脫出。
[0019]所述免疫組化筆包括筆筒5，筆筒內設置海綿樣的圓柱體筆芯6，筆筒內灌注有油墨，海綿樣的圓柱體筆芯前端設置木質筆芯10 ;海綿樣的圓柱體筆芯放置在筆筒中，筆筒為長方體或圓柱體，筆筒口外側有螺紋與內筆帽7的內螺紋匹配吻合；筆筒中放置不鏽鋼珠8—個，搖晃筆筒時作攪和油墨的作用；所述內筆帽起封閉筆筒口，防止油墨揮發保持其液相狀態和聯接外筆帽的作用，其內表面有與筆筒口吻合的內螺紋，可旋蓋筆筒口，內筆帽的外表面設有與外筆帽9內口緣匹配吻合的鎖口凹，圓柱體筆芯末端一側設有油墨刷11 ；外筆帽的內口緣周設有鎖口凹，與內筆帽外口緣匹配吻合，起封閉內筆帽和固定內筆帽為一體開啟筆筒口，並起提出油墨刷的作用。內筆帽上設置油墨交流孔12。
[0020]多孔室培養皿的一個角呈斜面形式，方便方位標識；培養皿蓋的一個角呈與培養皿呈斜面的角配合的斜面形式；培養皿蓋與培養皿吻合口周緣的交錯深度> 10mm。
【權利要求】
1.一種多用途免疫組化筆在細胞爬片免疫組織化學檢測中的應用，其特徵是:將細胞接種於載玻片式培養皿中進行細胞爬片，細胞培養結束後進行免疫細胞組織化學染色鑑定；所述載玻片式培養皿設有培養皿體和皿蓋，培養皿體型號分單孔室和多孔室兩種；各孔室面積大於載玻片，皿體底直接作為載玻片使用，皿體底外側面設有與載玻片尺寸對應的長方形框痕線凹溝，在外力作用下可將皿體的底部沿長方形框痕線凹溝脫出，獲得有培養細胞面形同載玻片的皿底，備用於各種免疫組織化學檢測； 所述免疫細胞組織化學染色鑑定依次包括下列步驟: (1)用冰丙酮固定15min或4%多聚甲醒固定； (2)流水漂洗，用PBS清洗標本3次；
(3)用0.5%Triton X-1OO 孵育 10 min ；
(4)0.3%H202 孵育 10 min ； (5)用PBS清洗標本3次後,熱風充分乾燥； (7)用免疫組化筆將油墨在細胞爬片上畫分2-20個分隔染色區； (8)空氣充分乾燥； (9)用正常二抗血清封閉孵育10min ； (10)在各細胞染色區分別滴加小鼠或兔抗第一抗體孵育30?60min ； (11)吸除各細胞染色區液體並用PBS清洗標本3次； (12)滴加酶聯小鼠或兔第二抗體工作液孵育30?60min ； (13)PBS清洗標本3次； (14)DAB顯色，避光，鏡下觀察； (15)蒸餾水洗； (16)蘇木素襯染； (17)鹽酸酒精分化，自來水洗； (18)水性封固劑封片。
2.根據權利要求1所述的多用途免疫組化筆在細胞爬片免疫組織化學檢測中的應用，其特徵是:所述油墨由下列重量百分比的組分混合組成:松香2飛％，蜂蠟If 26%，石蠟3?8%，異丙醚5?10%，二氯甲烷5?10%，汽油25?30%，二硫化碳12?17%，四氯化碳2?6%，氯仿2?6%，環已酮2?6% ;上述各組分用量之和為100% ； 或所述油墨由下列組分混合組成:聚苯乙烯2?4%，DMF9?11%，THF9?11%，松香2?4%，蜂蠟13?16%，石蠟2?4%，異丙醚4?6%，二氯甲烷4?6%，汽油18?22%，二硫化碳9?11%，四氯化碳9?11%，氯仿I?2%，環已酮I?2%，煤油2?4%，松節油I?2% ;上述各組分用量之和為100% ； 或所述油墨由下列組分混合組成:硬脂酸30?36%，苯15?20%，461:石蠟9?15%，異丙醚7?11%，二硫化碳15?20%，氯仿15?20% ;上述各組分用量之和為100%。
3.根據權利要求1或2所述的多用途免疫組化筆在細胞爬片免疫組織化學檢測中的應用，其特徵是:在外力作用下可將皿體的底部沿長方形框痕線凹溝脫出前，先用銳利刀具沿線凹溝劃、勾，然後在皿底面稍加用外力可將皿體的單孔槽底脫出。
4.根據權利要求1或2所述的免疫組化筆在細胞爬片免疫組織化學檢測中的應用，其特徵是:所述免疫組化筆包括筆筒，筆筒內設置海綿樣的圓柱體筆芯，筆筒內灌注有油墨，海綿樣的圓柱體筆芯前端設置木質筆芯；海綿樣的圓柱體筆芯放置在筆筒中，筆筒為長方體或圓柱體，筆筒口外側有螺紋與內筆帽的內螺紋匹配吻合；筆筒中放置不鏽鋼珠一個，搖晃筆筒時作攪和油墨的作用；所述內筆帽起封閉筆筒口，防止油墨揮發保持其液相狀態和聯接外筆帽的作用，其內表面有與筆筒口吻合的內螺紋，可旋蓋筆筒口，內筆帽的外表面設有與外筆帽內口緣匹配吻合的鎖口凹，圓柱體筆芯末端一側設有油墨刷；外筆帽的內口緣周設有鎖口凸，與內筆帽的鎖口凹匹配吻合，起封閉內筆帽和固定內筆帽為一體開啟筆筒口，並起提出油墨刷的作用。
【文檔編號】G01N1/30GK104359741SQ201410500701
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年9月26日 優先權日:2014年9月26日
【發明者】鄂群, 江明, 田 健, 王海英, 王東林, 李春筍, 陸錦標, 蔣春峰, 朱順星, 儲成存, 劉小飛, 焦麗燕, 劉麗麗, 曹靖晨, 張衝, 顏民, 鄔迪, 張小川, 唐妙 申請人:南通大學