雌激素受體α調節劑在治療多發性硬化症中的用途的製作方法
2023-05-19 18:40:46
專利名稱：雌激素受體α調節劑在治療多發性硬化症中的用途的製作方法
技術領域：
本發明一般地涉及治療自身免疫疾病的療法，更具體地說，涉及具有雌激素受體α(ERα)激動劑活性的化合物在治療自身免疫疾病中的用途。具體而言，本發明涉及選擇性雌激素受體調節劑(SERMS)在治療自身免疫疾病中的用途。此外，本發明涉及選擇適用於治療自身免疫疾病的化合物的方法。
背景技術：
多發性硬化症(multiple sclerosis，簡稱為MS)是中樞神經系統(CNS)的自身免疫疾病，其中免疫系統對髓磷脂成分作出不適當的免疫反應。其特徵為CNS發炎以及髓磷脂損傷。CD4+輔助T-細胞-1(TH-1)細胞及其產物(例如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、幹擾素-γ(TNF-γ)以及金屬蛋白酶)在很大程度上介導了該免疫病理過程。
與很多自身免疫疾病相同，多發性硬化症在女性中的發病率(2至3倍)高於男性1。雌激素在MS中的免疫調節作用已被證實。例如，在懷孕期間臨床病症得以改善，此時雌激素水平較高；而在產後階段則惡化2-4。此外，已經報導給予雌二醇的MS患者的症狀得以改善5。雌激素可能直接影響T細胞的功能，來自MS患者的T細胞克隆的細胞因子生產的調節已被證實6-8。此外，在這些細胞中，雌三醇對轉錄因子NF-κB的抑制已被證實8。
也已證明雌激素調節鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)中的疾病活性，該模型是用於多發性硬化症的成熟模型9-13。該模型用於測試採用SERMS/組織選擇性雌激素(TSEs)和雌激素受體α選擇性激動劑的治療方法。
SERMS是一類與雌激素受體結合併表現出組織選擇性作用的藥物。例如，SERM雷洛昔芬(raloxifene)對骨、脂質和凝血因子具有雌激素激動作用，對乳房和子宮具有雌激素拮抗作用19。SERMS可能包括1)此前被認為是抗雌激素的試劑，例如16-表雌三醇、乙胺氧三苯醇、氯米芬及他莫昔芬(tamoxifen)；2)19-去甲睪酮衍生物、替勃龍；3)雷洛昔芬及其類似物；以及4)新的三苯乙烯衍生物，例如屈落昔芬(droloxifene)、妥瑞咪芬(toremifene)、艾多昔芬(idoxifene)和levomeloxifene19。SERMS與內源性雌激素競爭結合受體，並可能激活或阻斷雌激素的作用19。
本發明的一個目的是提供通過給予具有雌激素受體α活性的試劑特別是SERMS來治療自身免疫疾病(pathology)的新方法。
發明概述本發明提供了一種治療哺乳動物中的自身免疫疾病的方法，包括給予所述哺乳動物至少一種具有雌激素受體α激動劑活性的試劑，所述試劑的量足以減少TH-1和/或TH-2細胞因子的產生。
本發明提供了一種治療哺乳動物中的自身免疫疾病的方法，包括給予所述哺乳動物選擇性雌激素受體調節劑，所述選擇性雌激素受體調節劑的量足以減少TH-1和/或TH-2細胞因子的產生。
本發明還提供了一種篩選適用於治療多發性硬化症的化合物的方法，包括選擇具有雌激素受體α激動劑活性的化合物。
附圖的簡要說明在閱讀了詳細說明和附圖之後，可以更充分地理解本發明，其中附圖形成了本申請的一部分。
圖1A示出了ER拮抗劑ICI對雌激素介導的疾病抑制的作用。
圖1B示出了雷洛昔芬相對於化合物A對EAE的作用。
圖2示出了ER選擇性配體對EAE的作用。
圖3A示出了體內給予ER選擇性配體對EAE小鼠脾細胞TNF-α的產生的作用。
圖3B示出了體內給予ER選擇性配體對EAE小鼠脾細胞IL-4的產生的作用。
圖3C示出了體內給予ER選擇性配體對EAE小鼠脾細胞IFN-γ的產生的作用。
圖3D示出了體內給予ER選擇性配體對EAE小鼠脾細胞IL-5的產生的作用。
圖3E示出了體內給予ER選擇性配體對EAE小鼠脾細胞IL-2的產生的作用。
圖3F示出了體內給予ER選擇性配體對EAE小鼠脾細胞IL-10的產生的作用。
圖4A示出了化合物對抗原刺激後CD4-細胞增殖的作用。
圖4B示出了化合物對抗原刺激後CD4+細胞增殖的作用。
圖5A示出了化合物對抗原刺激後效應T細胞對TNF-α的產生的作用。
圖5B示出了化合物對抗原刺激後效應T細胞對IFN-γ的產生的作用。
圖5C示出了化合物對抗原刺激後效應T細胞對IL-4的產生的作用。
圖5D示出了化合物對抗原刺激後效應T細胞對IL-2的產生的作用。
發明詳述如此處所公開的，給予哺乳動物具有雌激素受體α激動劑活性的試劑降低了自身免疫疾病的嚴重性。這些效果可能部分地是因為此類激動劑減少了疾病位點處或其周邊的T細胞產生的TH1和/或TH-2細胞因子。
因此，本發明提供了一種治療哺乳動物中的自身免疫疾病的方法，包括給予所述哺乳動物具有雌激素受體α激動劑活性的試劑，所述試劑的量足以減少TH-1和/或TH-2細胞因子的產生。本發明還提供了一種治療哺乳動物中的自身免疫疾病的方法，包括給予所述哺乳動物選擇性雌激素受體調節劑，所述選擇性雌激素受體調節劑的量足以減少TH-1和/或TH-2細胞因子的產生。
本發明的方法可以用於多種自身免疫疾病。此類疾病是本領域已知的，包括但不限於多發性硬化症、類風溼性關節炎、牛皮癬、自身免疫性甲狀腺炎、葡萄膜炎(uvetis)、重症肌無力、炎症性腸病和Sjgren’s症候群。在本發明的優選實施方案中，所述哺乳動物可以是雌性、雄性、人類或非人類。
在本發明的一個實施方案中，具有雌激素受體α激動劑活性的試劑通過選自口服、經皮、呼吸、皮下及靜脈內給藥的途經給藥。
在本發明的優選實施方案中，所述TH-1細胞因子選自TNF-α、IFN-γ和IL-2，所述TH-2細胞因子選自IL-4、IL-5和IL-10。本領域技術人員知道，TH-1介導的免疫反應的特徵在於前炎症細胞因子的分泌，包括TNF-α、IFN-γ和IL-2。TH-2介導的免疫反應的特徵在於抗炎細胞因子例如IL-4、IL-5和IL-10的分泌。在本發明的一個優選實施方案中，TH-1細胞因子的產生被給予的試劑所抑制。在本發明的另一個優選實施方案中，TH-1和TH-2細胞因子的產生被抑制。在本發明的又一個實施方案中，TH-1細胞因子的產生被抑制，而TH-2細胞因子的產生增加。
作為一個優選實施方案，ERα激動劑表現出抗炎活性，例如NF-κB活性的降低。在另一個優選實施方案中，ERα激動劑是非甾族的。
在本發明的又一個實施方案中，SERM選自雷洛昔芬、他莫昔芬、拉索昔芬、艾多昔芬、屈落昔芬、bazedoxifene、妥瑞咪芬及其衍生物和類似物。在本發明的另一個優選實施方案中，所述選擇性雌激素受體調節劑對腦或中樞神經系統產生生物學作用。
本發明還提供了一種篩選適用於治療多發性硬化症的化合物的方法，包括選擇具有雌激素受體α激動劑活性的化合物。採用受體例如螢光素酶的用於檢測體外激動劑活性的傳統檢測方法是本領域公知的。下列出版物中給出了示例性的激動劑檢測，這些出版物以引用的方式被包括在本文中，可用於參考其中的ERα激動劑檢測Lyttle CR，Damian-Matsumura P.，Juul H.，Butt TR，Human estrogen receptorregulation in a yeast model system and studies on receptor agonistsand antagonists，J.Steroid Biochem Mol Biol 42677-685(1992)；Katzenellenbogen BS，Bhardwaj B，Fang H，Ince BA，Pakdel F，Reese JC，Schodin D，Wrenn CK，Hormone binding and transcriptionactivation by estrogen receptorsanalyses using mammalian and yeastsystems，J Steroid Biochem Mol Biol 4739-48(1993)；PCT國際公開號WO 00/37681；Webb P，Lopez GN，Greene GL，Baxter JD，KushnerPJ，1992，The limits of the cellular capacity to mediate an estrogenresponse，Mol Endocrinology，6(2)157-67。優選地，在此類檢測中，「雌激素受體α激動劑」被定義為在選定的雌激素活性試驗中，基本模擬了17-β雌二醇的ER-α活性的化合物。
在本發明的一個優選實施方案中，所述化合物是SERM。在本發明的另一個實施方案中，所述化合物降低了TNF-α的產量至少約20％-100％，如實施例2中所述。在可供選擇的實施方案中，所述的降低可以是至少30％、40％、50％、60％或80％。
縮寫和術語的定義下面提供的定義是為了充分理解說明書和權利要求書中所使用的術語和縮寫。
此處及所附的權利要求中所使用的單數形式「a」、「an」、「the」也包括複數，除非上下文中有明確的其它說明。因此，例如，「雌激素受體α激動劑」包括多種此類激動劑。
說明書和權利要求書中所使用的縮寫對應於測量、技術、性質或化合物的單位，如下所述「μg」是指微克，「ml」是指毫升，「μM」是指微摩爾，「mM」是指毫摩爾，「s.c.」是指皮下，「i.p.」是指腹腔，「p.o.」是指每次口服。
「多發性硬化症」簡寫為MS。
「中樞神經系統」簡寫為CNS。
「輔助T細胞-1」和「輔助T細胞-2」分別簡寫為TH-1和TH-2。
「腫瘤壞死因子-α」簡寫為TNF-α。
「幹擾素-γ」簡寫為IFN-γ。
「核因子(Nuclear Factor)-κB」簡寫為NF-κB。
「實驗性自身免疫性腦脊髓炎」簡寫為EAE。
「選擇性雌激素受體調節劑」簡寫為SERMS。
「組織選擇性雌激素」簡寫為TSEs。
「雌激素受體」簡寫為ER。
「白細胞介素」簡寫為IL。
「蛋白脂質蛋白肽(proteolipid protein peptide)」簡寫為PLP。
「完全弗氏佐劑」簡寫為CFA。
「轉移後」簡寫為PT。
此處所使用的術語「自身免疫疾病」是指由有害的自身免疫反應所介導的疾病。在大多數自身免疫疾病中，T細胞將一種或多種組織中的宿主成分識別為外來物，並攻擊該組織。
此處所使用的術語「治療(treatment)」包括預防性(例如預防疾病的)、治療性或緩解性治療，「治療(treating)」也包括預防性、治療性或緩解性治療。「治療」，當用於自身免疫疾病時，是指任何可以觀察到的治療效果。有益效果可以由易感哺乳動物中臨床症狀的延遲發作、疾病的某些或全部臨床症狀嚴重性的降低、疾病發展的延緩、疾病復發數的降低、疾病位點處或循環系統中致病T細胞數量或活性(例如細胞因子分泌)的降低、個體的總體健康狀況或舒適度的改善或者本領域公知的對該特定疾病具有特異性的其它參數來佐證。
此處所使用的術語「具有雌激素受體α激動劑活性的試劑」是指表現出ERα活性的試劑，包括但不限於選擇性雌激素受體調節劑和組織選擇性雌激素。該術語也可以包括部分激動劑、肽、多肽、基因、基因片段、非肽小分子、天然產物、反義DNA及mRNA。
此處所使用的術語「哺乳動物」是指人、非人類靈長類動物、犬、貓、牛、羊、豬、鼠或其它獸醫或實驗室用哺乳動物。本領域技術人員知道，在一種哺乳動物中降低免疫疾病嚴重性的療法可以預測其效果在另一種哺乳動物中也存在。本領域技術人員也知道，人類免疫疾病的可靠動物模型是已知的，包括EAE，其為多發性硬化症的可靠動物模型。
術語「減少TH-1和/或TH-2細胞因子產生的有效量」是指，就劑量和必需時間段而言，對於獲得治療自身免疫疾病的預期效果來說有效的量。可以理解，在本發明的方法中，雌激素受體α激動劑的減少TH-1和/或TH-2細胞因子產生的有效量將隨著個體的不同而變化，其不僅取決於所選擇的特定激動劑、給藥途經以及該激動劑在個體中引發預期反應的能力，還取決於其它因素例如疾病狀況或待緩解病症的嚴重性，個體的年齡、性別、體重，患者的狀況，以及所治療的疾病症狀的嚴重性，同時服用的藥物或特定個體隨後所遵循的特種膳食，以及本領域技術人員知道的其它因素，並且適當的劑量最終是由當值醫生決定的。可以調整劑量安排以改善治療反應。「減少TH-1和/或TH-2細胞因子產生的有效量」也指在所述量下，該激動劑的有益治療效果超過了該激動劑的任何毒性或有害效果。
優選地，在本發明的方法中給予雌激素受體α激動劑，其劑量和時間使得TH-1和/或TH-2細胞因子的產量與治療開始時這些細胞因子的產量相比有所下降。這種治療對於降低自身免疫疾病症狀的總體嚴重程度(相對於治療開始前症狀的嚴重程度)來說也可能是有益的。在一個優選實施方案中，劑量範圍為5mg/kg/天到500mg/kg/天，或者至少約10、50、100或150mg/kg/天。
實施例本發明在下面的實施例中被進一步說明。應當理解，雖然這些實施例中給出了本發明的優選實施方式，但提供這些實施例的目的僅僅是為了說明本發明。從上面的討論以及這些實施例中，本領域技術人員可以確定本發明的必要特徵，並且在不脫離其精神和範圍的情況下，本領域技術人員可以對本發明進行各種改變和變型，以使其適應於各種用途和情況。
實施例1在多發性硬化症動物模型中體內給予化合物的效果該實施例表明，在多發性硬化症動物模型中，體內給予雌激素受體α選擇性激動劑延遲了疾病的發作並降低了疾病的發病率和嚴重性。
材料和方法動物用25隻完好無損的雌性(6-8周齡)SJL小鼠(JacksonLaboratories，Bar Harbor，ME)作為EAE過繼轉移模型(adoptivetransfer model)的供體小鼠。
實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)的誘導採用此前描述的方法20的改進方法，通過PLP致敏的脾細胞的過繼轉移誘導EAE。用在完全弗氏佐劑(CFA)中乳化的蛋白脂質蛋白肽139-151(PLP)對小鼠進行免疫。每隻動物接受150μg的PLP，其溶於0.2ml的CFA中，並且CFA中含有4mg/ml熱殺死並乾燥的Mycobacteriumtuberculosis(H37RA菌株)。PLP/CFA乳液皮下注射到兩個位點上(背部和尾巴的根部(base))。每個位點注射0.1ml。10天後，對小鼠實施安樂死，收集脾臟。由所述脾臟製備單細胞懸浮液。在紅血球溶解後，以5×106細胞/ml的濃度，在75cm2組織培養瓶中的RPMI-10(RPMI培養基，其中含有10％熱失活的胎牛血清、100U/ml的青黴素、100μg/ml鏈黴素、2mM穀氨醯胺、50μM 2-巰基乙醇)中培養細胞3天。加入PLP至終濃度為5μg/ml。在5％的CO2中於37℃培養細胞。培養之後，收穫PLP刺激的效應細胞，用磷酸緩衝液衝洗，並腹腔注射到切除卵巢的雌性(6-8周齡)SJL小鼠(1.5×107細胞/小鼠)中。疾病發作通常在細胞轉移後(PT)7-14天發生。
根據表1中所示的等級，每天對疾病的嚴重程度進行監控。
表1疾病嚴重程度的等級0 沒有明顯的疾病體徵1 跛尾(limp tail)2 跛尾/後腿虛弱(通過蹣跚步態觀察到；小鼠後腿掉進鐵絲籠頂部)3 後腿部分麻痺(小鼠不能再保持臀部的姿態，但仍然能在某種程度上移動一條或兩條腿)4 後腿完全麻痺(後腿完全不能運動；動物拖著後腿；能夠沒有困難地抓住欄杆並將自己拖起來)5 後腿完全麻痺和/或輕微的前腿虛弱(仍然能夠抓住欄杆；但在將自己拖起來方面有些困難)6 後腿完全麻痺，前腿嚴重虛弱或麻痺；瀕臨死亡為了評價化合物對疾病的作用，按照指明的劑量每天將化合物給予(皮下或口服給藥)受體小鼠，使用10％乙醇/90％玉米油載體。對照組動物只接受載體。在對供體細胞進行過繼轉移之前5-7天開始對小鼠給藥。
組織學分析在疾病高峰時(轉移後14天)，用CO2對小鼠施行安樂死。在屍體解剖時移走腦和脊髓，並固定在10％的緩衝福馬林中。將腦切成三段(粗略來說，大腦、中腦和小腦)並作為一整塊進行包埋。將脊髓在10％HCl中脫鈣，並切成頸、胸和腰(lumber)段，作為一整塊進行包埋。由來自每隻小鼠的每一塊組織(腦和脊髓)製備標準HE(蘇木精和伊紅)載玻片，每隻被評價的小鼠得到兩塊HE載玻片。
對切片進行評價，針對存在與否(P＝存在)和/或嚴重性對看到的損傷進行主觀評分。嚴重性等級為0＝WNL(在正常範圍內)，1＝微小或最小，2＝輕微，3＝中等，4＝顯著，5＝嚴重。發現的位置(相對於所述器官)被記為血管周圍、室周圍、室管膜或腦膜，並且也被記為局部(在很小的區域內，或不是整個切片上都有)或擴散(所檢查的整個切片都有)。局部被定義為非常局部化，並且不影響每個結構。沒有被定義為局部的發現是擴散的或影響每一個結構(例如所有的脈管)。看到的白細胞主要是淋巴細胞和巨嗜細胞，偶爾有嗜中性粒細胞。觀察到的脊髓白質束中的明顯空洞即為脫髓鞘作用。
典型的小鼠EAE模型具有微小至中等大小淋巴細胞聚集體的彌散分布，很少在受影響的組織中有擴散的滲透物。
PLP特異性Recall反應分析細胞因子產生為了檢查體內給予的化合物對EAE小鼠脾細胞的細胞因子產生的作用，在疾病高峰時(轉移後14天)，用CO2對小鼠施行安樂死，收集脾臟。脾臟被分別處理為單細胞懸浮液。在紅血球溶解後，將細胞重懸在RPMI-10中，並在24孔組織培養板中以5×106細胞/ml的濃度進行培養。用5μg/mlPLP刺激細胞。3天後收集上清液並冷凍在-20℃待用。用市售的流式細胞儀試劑盒(Cytometric Bead Array，Becton DickinsonBioSciences，San Diego，CA)檢測上清液中的細胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-5、IL-4、IL-2)。通過IL-10特異性ELISA試劑盒(BectonDickinson BioSciences)檢測IL-10。
為了體外檢測化合物對PLP誘發的效應細胞的細胞因子產生的作用，利用乳化在CFA中的PLP免疫SJL小鼠。10天後，收集脾臟並製備單細胞懸浮液。在紅血球溶解後，於37℃5％CO2的條件下，用5μg/ml PLP在化合物存在下刺激脾細胞3天。對照樣品不進行刺激，僅在培養基中進行培養(「培養基」)。加入化合物至終濃度為1μM。在3天的培養之後，收集上清液並保存在-20℃。利用Cytometric BeadArray試劑盒檢測上清液中的細胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-5、IL-4、IL-2)。
化合物對抗原刺激後效應T細胞增殖的作用為了體外檢測對響應於PLP刺激的效應T細胞增殖的作用，通過流式細胞術按下述試驗方法檢測T細胞的增殖。利用乳化在CFA中的PLP免疫SJL小鼠。10天後，收集脾臟並製備單細胞懸浮液。在紅血球溶解後，用羧基螢光素琥珀醯亞胺酯(CFSE)標記脾細胞。然後，於37℃5％CO2的條件下，用PLP溫育CFSE標記的細胞3天。加入化合物至終濃度為1μM。為了確定分裂的CD4+細胞的比例，在進行流式細胞術分析之前，利用對CD4標記具有特異性的抗體對CFSE標記的細胞進行染色。
結果I.SERMs/組織選擇性雌激素對PLP誘導的效應細胞的過繼轉移所誘導的EAE的作用如前所示，用17-β雌二醇(E2)進行治療延遲了疾病的發作並降低了疾病的發病率和嚴重性(圖1A)。為了確定該模型中雌激素的保護作用是否是雌激素受體介導的，用E2和雌激素受體拮抗劑ICI182，780共同治療小鼠。ICI破壞了E2對疾病的作用(圖1A)。
用E2或SERMs雷洛昔芬或化合物A[2-(羥基苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)苯甲基]-1H-吲哚-5-醇鹽酸一水合物]進行治療延遲了疾病的發作並降低了疾病的發病率和嚴重性(圖1B及表II)。與這些化合物對疾病的臨床體徵的作用一致，與其它治療組小鼠相比，用化合物A治療過的小鼠中透過脊髓和腦的炎症細胞數量降低了。此外，用化合物A治療過的小鼠中，在脊髓上沒有檢測到脫髓鞘作用。
表II組織學發現
II.雌激素受體選擇性激動劑對PLP誘導的效應細胞的過繼轉移所誘導的EAE的作用用E2或ERα選擇性激動劑PPT(丙基吡唑三醇)進行治療延遲了疾病的發作並降低了疾病的發病率和嚴重性(圖2)。此外，與用載體或ERβ選擇性激動劑治療的小鼠相比，用PPT治療的小鼠在腦和脊髓中的炎症減少(圖3)。組織學檢查表明，與載體對照小鼠相比，給予PPT的小鼠具有最多的正常組織。所有四隻小鼠都在腦膜中有微小的白細胞滲透，但只在腦的基部(僅在腹面的後腦/小腦/腦橋/髓質附近)。這些小鼠中沒有一隻有脊髓損傷；這些小鼠的脊髓都在正常範圍內。
表III
III.ER選擇性激動劑對PLP特異性Recall反應的作用細胞因子生產與ERα選擇性激動劑PPT對疾病的作用一致，用PPT治療小鼠降低了在體外用PLP刺激脾細胞之後的細胞因子的產生(圖3)。Th1/前炎症細胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-2)和Th2/抗炎症(IL-4、IL-5、IL-10)細胞因子被PPT的體內治療所抑制，這表明PPT可能通過抑制T細胞活化而抑制疾病，而不是通過由致病的Th1反應向保護性Th2反應的免疫偏離來抑制疾病。與此相反，ERα選擇性激動劑對細胞因子產生沒有效果(*，p＜0.05，與載體組相比)。
實施例II化合物體外對抗原特異性免疫反應的效果組織選擇性雌激素(化合物A)和ERα選擇性配體(PPT)對抗原特異性免疫反應的效果在體外進行了檢測。
A.化合物對抗原刺激後效應T細胞增殖的作用用組織選擇性雌激素化合物A或ERα選擇性激動劑PPT治療PLP誘導的效應細胞減少了抗原特異性T細胞的增殖(圖4)。CD4+和CD4細胞群的增殖都被抑制。這些結果表明這些化合物中的每一種可能部分地通過限制抗原特異性T細胞克隆的擴大而起作用。
B.化合物對抗原刺激後效應細胞的細胞因子產生的作用用組織選擇性雌激素化合物A或ERα選擇性激動劑PPT治療PLP誘導的效應細胞減少了抗原刺激後的細胞因子產生(圖5)。兩種化合物都抑制了前炎症(TH-1)細胞因子TNF-α的產生。化合物A和ERα選擇性激動劑PPT也都抑制了IFN-γ的產生。將這些細胞與組織選擇性雌激素化合物A溫育也同時增加了抗炎症細胞因子IL-4，但其它化合物沒有作用。這些結果表明ERα選擇性激動劑(PPT)可能與組織選擇性雌激素在對抗原特異性細胞因子的生產上具有不同的作用。前者可能通過抑制前炎症(TH-1)細胞因子的生產而抑制EAE，而組織選擇性雌激素可能還促進了向保護性抗炎症/TH-2免疫反應的免疫偏離。
結論用SERMs/TSEs雷洛昔芬和化合物A以及ERα選擇性激動劑PPT進行治療，抑制了EAE，延遲了疾病的發作並降低了疾病的發病率和嚴重性。在用這些化合物治療過的小鼠中，疾病臨床體徵的抑制與腦及脊髓中的病理和白細胞滲透的減少有關。這表明這些化合物可能通過限制致病細胞向腦及脊髓中轉移而緩解疾病，例如，通過減少粘附分子的表達和/或通過影響趨化因子/趨化因子受體的表達。
SERMs/TSEs以及ERα選擇性激動劑對PLP誘導的效應細胞的過繼轉移所誘導的疾病的抑制作用表明，這些化合物具有改變致腦炎的效應細胞活性的能力。這些發現與原有的看法相反，此前認為，與初生細胞相比，分化的效應細胞對雌激素的作用更遲鈍。
此處所提供的體外數據表明，ERα選擇性激動劑，優選SERMS或ER-抗炎症配體，可能對抗原特異性T細胞的增殖和細胞因子的產生有直接作用，從而限制了致病T細胞的擴增和分化。所有三種類型的配體都有效地抑制了前炎症(TH-1)細胞因子的產生。但是，組織選擇性雌激素可能還促進了保護性抗炎症(TH-2)細胞因子的產生，這表明這些分子可能對PLP特異性免疫反應具有不同的作用。
我們觀察到SERMs/TSEs能夠改變該模型中的疾病病程，基於SERMs和雌激素拮抗劑在鼠系統性紅斑狼瘡(狼瘡的小鼠模型)中已知的作用，這多少有些令人吃驚。業已證明SERMs對狼瘡具有有益的治療效果，狼瘡是一種自身免疫疾病，雌激素會使該疾病惡化14-18。由於SERMs可能以拮抗劑的方式作用於狼瘡，因此可以預期SERMs將對EAE有類似的拮抗劑活性。因此，可以預測SERMs或者對EAE沒有作用，或者將惡化EAE。正相反，SERMs表現出了疾病抑制活性。
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權利要求
1.一種治療哺乳動物自身免疫疾病的方法，包括給予所述哺乳動物至少一種具有雌激素受體α激動劑活性的試劑，所述試劑的量足以減少TH-1和/或TH-2細胞因子的產生。
2.根據權利要求1的方法，其中所述的自身免疫疾病選自多發性硬化症、類風溼性關節炎、牛皮癬、自身免疫性甲狀腺炎、葡萄膜炎、炎症性腸病和Sjgren’s症候群。
3.根據權利要求1的方法，其中所述的哺乳動物為雌性。
4.根據權利要求1的方法，其中所述的哺乳動物為雄性。
5.根據權利要求1的方法，其中所述的哺乳動物為人。
6.根據權利要求1的方法，其中所述的哺乳動物為非人類。
7.根據權利要求1的方法，其中所述的試劑通過選自口服、經皮、呼吸、皮下及靜脈內給藥的途經給藥。
8.根據權利要求1的方法，其中所述的TH-1細胞因子選自TNF-α、IFN-γ和IL-2。
9.根據權利要求1的方法，其中所述的TH-2細胞因子選自IL-4、IL-5和IL-10。
10.根據權利要求1的方法，其中所述的試劑降低了核因子-κB的活性。
11.根據權利要求1的方法，其中所述的試劑是非甾族的。
12.根據權利要求1的方法，其中所述的試劑是選擇性雌激素受體調節劑，以足以減少TH-1和TH-2胞因子的產生的量給藥。
13.根據權利要求12的方法，其中所述的自身免疫疾病選自多發性硬化症、類風溼性關節炎、牛皮癬、自身免疫性甲狀腺炎、葡萄膜炎、炎症性腸病和Sjgren’s症候群。
14.根據權利要求12的方法，其中所述的哺乳動物為雌性。
15.根據權利要求12的方法，其中所述的哺乳動物為雄性。
16.根據權利要求12的方法，其中所述的哺乳動物為人。
17.根據權利要求12的方法，其中所述的哺乳動物為非人類。
18.根據權利要求12的方法，其中所述的選擇性雌激素受體調節劑通過選自口服、經皮、呼吸、皮下及靜脈內給藥的途經給藥。
19.根據權利要求12的方法，其中所述的TH-1細胞因子選自TNF-α、IFN-γ和IL-2。
20.根據權利要求12的方法，其中所述的TH-2細胞因子選自IL-4、IL-5和IL-10。
21.根據權利要求12的方法，其中所述的選擇性雌激素受體調節劑降低了核因子-κB的活性。
22.根據權利要求12的方法，其中所述的選擇性雌激素受體調節劑選自雷洛昔芬、他莫昔芬、拉索昔芬、艾多昔芬、屈落昔芬、bazedoxifene和妥瑞咪芬。
23.一種篩選適用於治療多發性硬化症的化合物的方法，包括選擇具有雌激素受體α激動劑活性的化合物。
24.根據權利要求23的方法，其中所述的化合物是選擇性雌激素受體調節劑。
25.根據權利要求23的方法，其中所述的化合物降低了TNF-α的產量至少約20％。
全文摘要
本發明提供了治療哺乳動物中的自身免疫疾病的方法，包括給予所述哺乳動物具有雌激素受體α激動劑活性的試劑，特別是選擇性雌激素受體調節劑，所述試劑的量足以減少TH－1和/或TH－2細胞因子的產生。本發明還提供了一種篩選適用於治療多發性硬化症的化合物的方法，包括選擇具有雌激素受體α激動劑活性的化合物。
文檔編號A61K31/55GK1723013SQ200480001876
公開日2006年1月18日 申請日期2004年1月5日 優先權日2003年1月6日
發明者M·M·埃羅索, R·米切爾, D·C·哈尼什, S·J·阿德爾曼 申請人:惠氏公司