一種赤芍有效組分的製備方法與用途的製作方法
2023-05-20 04:13:21
專利名稱：一種赤芍有效組分的製備方法與用途的製作方法
技術領域：
本發明屬於中藥領域，涉及中藥有效提取物，具體涉及一種從赤芍中提取有效組分的製備方法及其製藥用途。
背景技術：
心血管疾病是危害人類健康的第一殺手，近年來，隨著我國人口老年化以及人們工作、生活、飲食結構及環境等的變化，冠心病等心腦血管疾病的發生率也逐年增多，嚴重威脅著人民的身心健康。天然產物中許多活性物質具有抗心肌缺血、缺氧作用，其中一些已開發成治療冠心病和心絞痛的新藥。因而從天然產物中尋找具有抗心肌缺血、缺氧生理活性的有效物質，是發現、開發新藥的有效途徑之一。我國藥用生物資源十分豐富，其生理活性物質是研究和發現新藥先導化學物，開發新藥的天然寶庫。目前，我國從天然產物中提取活性物質，用於開發成治療冠心病、安全性好、毒性低的新藥還很少，從天然產物中提取活性物質，開發成具有抗心肌缺血，用於治療冠心病和心絞痛的新藥，具有重要應用價值和廣闊發展前景。赤芍為毛茛科芍藥(Paeonialactiflora Pall.)或川赤芍(A veitchii Lynch.)的乾燥根。其味苦，微寒，歸肝經，具有清熱涼血，散瘀鎮痛之功效。現代研究表明， 赤芍中主要含有芍藥苷、羥基芍藥苷、苯甲醯芍藥苷、氧化芍藥苷、芍藥花苷、沒食子醯芍藥苷等苷類化合物，此外還有環烯醚萜類、三萜類、酚及其苷類、留醇及其苷類、鞣質、酸類、酯類、黃酮類、酮類、烷類、揮髮油、糖、胺基酸、蛋白質、脂肪油、樹脂、黏液質、生物鹼、色素、微量元素等物質。赤芍是傳統的活血化瘀類中藥，有較強的抗動脈粥樣硬化作用，該藥也能擴張冠脈血管，增加冠脈血流量從而增加心肌營養性血流量，保護缺血心肌，提高心肌對低氧的耐受性，降低肺血管阻力，減輕後負荷。同時赤芍能夠降低門脈高壓，對微循環也有影響。藥理學研究表明赤芍能抑制血小板聚集，改善紅細胞的通透性，增加紅細胞對低滲張力的抗性， 有一定穩定紅細胞膜結構的作用。另外，赤芍總苷能明顯延長大鼠和小鼠的凝血時間，並能延長電刺激大鼠頸總動脈血栓形成的時間，提示赤芍總苷通過對凝血系統和血小板功能的影響而產生抗血栓作用。赤芍具有以上對心血管系統的明顯藥理作用，因此，從赤芍中分離出有效組分，開發出治療心血管疾病的現代中藥具有重要的意義。
發明內容
本發明的目的在於提供一種赤芍有效組分的製備方法，通過以下步驟實現將赤芍藥材粉碎後加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取，藥渣加乙醇水溶液提取，將提取液濃縮成浸膏，用反相矽膠柱對其進行分離，首先用低濃度甲醇作為流動相，得洗脫液I，棄之，然後改用高濃度甲醇作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮乾燥後得樣品；用製備液相色譜繼續分離得到的樣品；製備色譜的分離條件色譜柱為半製備柱，流動相為水和乙腈，梯度洗脫。該有效組分主要含有沒食子酸甲酯、芍藥苷或五沒食子醯葡萄糖。
本發明優選的赤芍有效組分製備方法，通過以下步驟實現取赤芍藥材，將其粉碎後加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時，提取2次，濾液合併得提取液I。 藥渣加入70%乙醇，加熱回流1小時，提取2次，濾液合併得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，採用ODS-C18柱對其進行分離，首先用5%甲醇作為流動相，得洗脫液I，然後改用60%甲醇作為流動相，得洗脫液II，濃縮乾燥後得樣品；用製備液相色譜繼續分離得到的樣品製備色譜的分離條件色譜柱為半製備柱(Lichrospher Cl8; 10. Omm χ 250mm, 5 μιη )，流動相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序如下0min時，流動相A為90%的水，流動相B為10%的乙腈溶液；15min時，流動相A為75%的水，流動相B為25%的乙腈溶液；時，流動相A為70%的水，流動相B為30%的乙腈溶液；柱溫為室溫；樣品經製備液相色譜分離，在23. 9^26. 8 min時間段收集溶液，溶液經濃縮乾燥後得到有效組分。本發明的另一個目的是提供所述赤芍有效組分在製備治療、預防心血管疾病的藥物中的應用。經藥理實驗證明，本發明提供的赤芍有效組分對心肌細胞有保護作用。本發明的赤芍有效組分可以作為活性成分，加入藥劑學上接受的輔料，按照藥劑學上記載的製劑的製備方法製成製劑。所述的製劑包括注射液、滴注液、粉針劑、顆粒劑、片劑、衝劑、散劑、口服液、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口含劑、顆粒劑、丸劑、膏劑、 丹劑、噴霧劑、滴丸劑、崩解劑、口崩片、微丸等。本發明提供的赤芍有效組分可在製備治療、預防心血管疾病藥物中的應用。本發明提供的製備方法設計合理，能快速準確地得到有效成分，在生產中更易於藥物的質量控制。
圖1赤芍有效組分的HPLC色譜圖(λ =230nm)，其中1沒食子酸甲酯，2芍藥苷， 3五沒食子醯葡萄糖。圖2 1號色譜峰質譜圖。圖3 2號色譜峰質譜圖。圖4 3號色譜峰質譜圖。
具體實施例方式
下面將結合實施例進一步詳細說明本發明的實質內容和有益效果，該實施例僅用於說明本發明而非對本發明的限制。實施例一赤芍有效組分的製備
將赤芍藥材粉碎後加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液I，棄之。藥渣加入乙醇，加熱提取得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，採用ODS-C18柱對其進行分離，首先用低濃度甲醇作為流動相，得洗脫液I，然後改用高濃度甲醇作為流動相，得洗脫液II，濃縮乾燥後得樣品；用製備液相色譜繼續分離得到的樣品，經製備液相色譜分離， 在時間段23. 9^26. Smin收集溶液，濃縮乾燥後得到有效組分。實施例二赤芍有效組分的製備
取赤芍藥材250g，將其粉碎後加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時， 提取2次，濾液合併得提取液I。藥渣加入70%乙醇，加熱回流1小時，提取2次，濾液合併得提取液II，將提取液11濃縮成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，採用ODS-C18柱對其進行分離，首先用5%甲醇作為流動相，得洗脫液I，然後改用60%甲醇作為流動相，得洗脫液II，濃縮乾燥後得樣品；用製備液相色譜繼續分離得到的樣品製備色譜的分離條件色譜柱為半製備柱(Lichrospher C18 ； 10. Omm ,、250mm, 5 μ ι )，流動相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序如下0min時，流動相A為90%的水，流動相B為10%的乙腈溶液；15min時，流動相A為75% 的水，流動相B為25%的乙腈溶液；時，流動相A為70%的水，流動相B為30%的乙腈溶液；流速為3ml/min，柱溫為室溫；樣品經製備液相色譜分離，在時間段23. 9^26. Smin收集溶液，溶液經濃縮乾燥後得到有效組分。該有效組分主要含有沒食子酸甲酯、芍藥苷、五沒食子醯葡萄糖，其色譜圖及質譜圖見圖廣4。實施例三滴丸製劑的製備
取赤芍有效組分0. 5g與10. 5g聚乙二醇-20000混合均勻，加熱熔融，化料後移至滴丸滴灌中，藥液滴至6、°C液體石蠟中，除油，製得滴丸400粒。實施例四凍乾粉針劑的製備
取赤芍有效組分0. 5g、葡萄糖4. 5g、硫代硫酸鈉0. 9g和蒸餾水1000ml，上述組分混合均勻後，分裝400支，冷凍乾燥，即得。實施例五赤芍組分的活性評價實驗
1.赤芍組分對H》2損傷心肌細胞的保護作用
體外培養H9C2心肌細胞，培養液為DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需胺基酸+0. 1%雙抗。取對數生長期細胞置於96孔細胞培養板上，恆溫培養M h後，加入200 μ mol/mL H2O2 損傷心肌細胞30 min,再加入終濃度為50 μ g/mL的赤芍組分孵育M h，採用MTT法測定細胞活力。結果表明，該組分對H2O2損傷心肌細胞的保護率為58.96%。2.赤芍組分對缺氧復氧損傷心肌細胞的保護作用
體外培養H9C2心肌細胞，培養液為DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需胺基酸+0. 1%雙抗。取對數生長期細胞置於96孔細胞培養板上，恆溫培養M h後，在缺氧小室中培養6 h。 缺氧結束後，取出細胞培養板加入經無糖Hank』 s稀釋的終濃度為50 μ g/mL的赤芍組分，在正常培養條件下孵育6 h，取細胞培養上清液測定乳酸脫氫酶(LDH)含量。結果表明，該組分對缺氧復氧損傷的心肌細胞保護率為52. 17%。
權利要求
1.一種赤芍有效組分，其特徵在於，通過以下步驟獲得將赤芍藥材粉碎後加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取，藥渣加乙醇水溶液提取，將提取液濃縮成浸膏，用反相矽膠柱對其進行分離，首先用低濃度甲醇溶液作為流動相，得洗脫液I，棄之，然後改用高濃度甲醇溶液作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮乾燥後得樣品，用製備液相色譜繼續分離得到的樣品，製備色譜的分離條件色譜柱為半製備柱，流動相為水和乙腈，梯度洗脫，收集溶液，溶液經濃縮乾燥後得到有效組分；該有效組分中主要含有沒食子酸甲酯、芍藥苷、五沒食子醯葡萄糖。
2.根據權利要求1所述的一種赤芍有效組分，其特徵在於，低濃度甲醇為5%的甲醇溶液，高濃度甲醇60 %的甲醇溶液。
3.根據權利要求1所述的一種赤芍有效組分，其特徵在於，通過以下步驟獲得取赤芍藥材，將其粉碎後加入體積比1:1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時，提取2次，濾液合併得提取液I，藥渣加入70%乙醇，加熱回流1小時，提取2次，濾液合併得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏，用50%甲醇溶液溶解浸膏，採用ODS-C18柱對其進行分離，首先用5%甲醇溶液作為流動相，得洗脫液I，然後改用60%甲醇溶液作為流動相，得洗脫液II，濃縮乾燥後得樣品；用製備液相色譜繼續分離得到的樣品製備色譜的分離條件色譜柱為半製備柱，Lichrospher C18 ； 10. Omm250mm, 5 μ ι,流動相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序為=Omin, 10%Β ； 15min,25%B ；34min, 30%B ；流速為3ml/min，柱溫為室溫；樣品經製備液相色譜分離，在23. 9^26. Smin時間段收集溶液，溶液經濃縮乾燥後得到有效組分。
4.根據權利要求1或3所述的一種赤芍有效組分在製備治療心血管疾病的藥物中的應用。
5.根據權利要求4所述的應用，其特徵在於，所述藥物由赤芍有效組分加入藥劑學上可接受的輔料，按照藥劑學上記載的製劑製備方法製成。
6.根據權利要求5所述的應用，其特徵在於，所述的製劑包括液體製劑或固體製劑。
全文摘要
本發明提供一種赤芍有效組分，該有效組分主要含有沒食子酸甲酯，芍藥苷，五沒食子醯葡萄糖等幾種化合物。藥材通過加熱提取，濃縮，矽膠柱分離，洗脫，洗脫液濃縮乾燥，再用液相色譜繼續分離，收集溶液，溶液經濃縮乾燥後得到有效組分。本發明提供的赤芍有效組分可在製備治療、預防心血管疾病藥物中的應用。本發明方法設計合理，能快速準確地得到有效成分，在生產中更易於藥物的質量控制。
文檔編號A61K36/71GK102258587SQ201110057638
公開日2011年11月30日 申請日期2011年3月10日 優先權日2011年3月10日
發明者李雲飛, 王毅, 程翼宇, 葛志偉 申請人:浙江大學