一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉及其製備方法和用途的製作方法

2023-05-20 00:52:21

專利名稱：一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉及其製備方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫藥技術領域，涉及一種皮膚用槲皮素柔性脂質體及其製備方法。
背景技術：
目前，隨著空氣汙染的日益嚴重，過強紫外線照射對地球表面生物體的威脅日趨加劇，紫外線引起的皮膚損傷也日益嚴重。當臭氧層減少10%時，到達地面的紫外線輻射就增加2%，而皮膚病的發病率將增加25% 32%。根據「World Cancer r印ort」報導，世界上每年新診斷的癌症中有30%是皮膚癌，其中90%的皮膚癌是由日光中的紫外輻射引起的。紫外線引起的皮膚損傷主要與UVA及UVB有關，其中UVB是造成皮膚損傷的主要原因。紫外線等多種汙染物通過直接福射、產生活性氧簇(reactive oxygenspecies, R0S)導致氧化應激。ROS所致的氧化損傷在多種皮膚病的發病中起著重要的作用。過量的ROS等氧化物引起的氧化損傷主要有以下幾點:①致細胞前氧化狀態形成，抗氧化防禦系統受損。②破壞皮膚的酶及非酶性抗氧化防禦系統，使機體易受損而處於各種病理狀態，發生皮膚老化、免疫抑制、皮膚腫瘤等皮膚相關性疾病。③引起細胞外基質成分的降解及炎症反應。④氧化構成細胞組織的各種物質破壞細胞的結構、功能和代謝。⑤ROS在UVR引起的腫瘤發生和免疫抑制中都起著促進作用。懈皮素(4H-l-Benzopyran-4_one，2_(3，4-dihydroxyphenyl)-3,5, 7-trihydroxy-Flavone),異名櫟精,槲皮黃素。來源為殼鬥科植物伊比利亞櫟(Quercus iberica)皮和葉，小檗科植物紅八角蓮(Dysosma veitchii (Hems1.et ffils.) ) Fu,金絲桃科植物紅旱蓮(湖南連翅)(Hypericum ascyron L.)全草,夾竹桃科植物紅麻(Apocynum IancifoliumRus.)葉。廣泛分布於自然界各種植物的花、果實、種子中。近年來，研究人員發現蠶豆、甘藍型油菜、Malus domestica蘋果等植物在接受強紫外線照射情況下,植物體內的槲皮素的生物合成量相應增加，從而開展了基於槲皮素防護紫外損傷方面的研究。研究發現槲皮素對超氧陰離子、羥基自由基和單線態氧均有良好的清除作用，且量效關係明顯。與其它黃酮類物質相比，槲皮素表現出了較高的對抗輻射的能力。目前，研究者正致力於將槲皮素作為一種ROS清除劑來對抗皮膚的氧化損傷。槲皮素對ROS的清除作用主要表現在兩個方面:槲皮素能夠直接清除R0S，另外，槲皮素也能作用於與自由基產生有關的酶，間接清除R0S。不僅如此，槲皮素還能鰲合金屬離子，即槲皮素分子中的鄰苯二酚結構能夠鰲合Fe2+和Cu2+，從而發揮其抗氧化作用。本發明中所涉及的槲皮素的功效即為預防和修復紫外線對皮膚的輻射所造成的損傷，近而防治由紫外輻射引起的皮膚癌症。限制槲皮素應用的主要因素是槲皮素的溶解性，槲皮素幾乎不溶於水，在水中的溶解度為0.166 μ g *ml-l-7.7 μ g.ηι1-1。因此，目前對槲皮素製劑的研製多集中於提高藥物溶解性，延長靜脈給藥體內循環時間等特性，治療功效主要為降血脂，擴張冠狀動脈、抗腫瘤等藥理作用。CN101904820A公開了一種 槲皮素納米混懸劑凍幹組合物及其製備方法和應用，此發明將槲皮素在磷脂和表面活性劑的存在下利用機械力製備成納米混懸液用於改善槲皮素的溶解性。CN102058536A公開了槲皮素羥丙基β -環糊精包和物脂質體及其製備方法和用途，用於靜脈給藥顯著延長了槲皮素在小鼠的體內循環時間。CN100370968授權了一種槲皮素長效脂質體粉針劑及其製備方法，利用聚乙二醇-磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)製備槲皮素長循環脂質體粉針劑用於靜脈給藥，長效脂質體與普通脂質體相比可以顯著延長槲皮素在小鼠體內的循環時間，增加AUC。上述專利發明內容都是針對靜脈注射給藥途徑的，針對槲皮素皮膚外用製劑的研究和發明卻沒有。本發明針對槲皮素抵抗紫外輻射損傷、防治皮膚癌這一功效，將槲皮素製備成皮膚給藥柔性脂質體，同時解決槲皮素溶解性差，難以應用的問題，進而提高槲皮素對角質層的滲透量和滲透速度，並增強藥物在表皮和真皮中的滯留量，更好地發揮藥效。

發明內容
本發明的第一個目的是提供一種新型的以天然植物提取物槲皮素為有效成分，與現有同類產品相比具有安全、高效等特點的，並且具有較好溶解性的外用製劑。為達到上述目的，發明人進行深入研究，發明提供一種槲皮素皮膚外用柔性脂質體及其凍乾粉，該製劑大大增加了槲皮素在水性介質中的分散濃度，解決了槲皮素應用上的不便。本發明提供的一種新型的以天然植物為提取物槲皮素外用製劑是每IOOmL的脂質體溶液是由下列物質製備而成:槲皮素0.0lg-0.lg，兩親性脂質0.lg-1.2g，膽固醇0.025g-0.6g，表面活性劑
0.05g-3g，抗氧劑0.0Olg-0.5g，其餘為水性介質。進一步的，所述的兩親性脂質混合物是指蛋磷脂、豆磷脂、腦磷脂、氫化卵磷脂、1，2- 二油醯氧丙基-N，N, N-三甲基溴化銨、磷脂醯肌醇、磷脂醯甘油、磷脂醯絲氨酸、磷脂酸、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯膽鹼、鞘磷脂一種或一種以上。進一步的，所述的表面活性劑包括膽酸、膽酸鈉、Tween20、Tween60、Tween80、Span20、Span60、Span65、泊洛沙姆中的一種或一種以上。進一步的，所述的抗氧劑亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、依地酸二鈉、維生素E —種或一種以上。進一步的，所述的水性介質是由純水和水溶性物質組成的。更進一步的，所述的水溶性物質包括有機酸、有機鹽、無機酸、無機鹽、單糖、二糖及其組合物。有機酸包括有諸如羧酸，磺酸，亞磺酸，硫羧酸，比如甲酸，乙酸，檸檬酸，酒石酸。有機鹽包括有諸如羧酸鹽，磺酸鹽，亞磺酸鹽，硫羧酸鹽，烷基鹽等，比如膽酸鈉，醋酸鈉，甲基鈉，乙醇鈉。單糖包括有諸如糖，戊糖，己糖，麥芽糖、乳糖，乳糖等。本發明的第二個目的為提供一種製備上述外用製劑的方法，通過優選所用原料及用量，優化製備參數、提供一種操作簡便、適於大規模生產的製備工藝:(I)將槲皮素和兩親性脂質溶解於一種或多種有機溶劑中作為有機相， 用超聲波使之充分溶解，然後將抗氧劑加入有機相溶液中。(2)使表面活性劑充分溶於水性介質中作為水相；
(3)將有機相與水相混合之前或之後除去有機溶劑，形成分散均一的脂質體溶液，然後加入凍幹保護劑。(4)對步驟(3)所得的脂質體溶液用0.22 μ m的濾膜過濾3_5次，加入適量的凍幹保護劑充分溶解，-80°C預凍24h，放入減壓冷凍乾燥機進行乾燥48h後即得脂質體凍乾粉。進一步的，所述的抗氧劑可以步驟(I)後加入有機相中，也可以在步驟(2 )後加入水相中。進一步的，所述的凍幹保護劑的加入方法可以步驟(2)後加入到水相中，也可以在步驟(3)後加入到製備好的脂質體溶液中，優選前者。進一步的，所述的步驟(3)所述的除去有機溶劑，即可以在有機相和水相混合之前，也可以在機相和水相混合之後。進一步的，所述的步驟(3)所述的除去有機溶劑方法有蒸發、冷凍乾燥、超聲波等。蒸發是指將有機相與水相混合之前或之後，將有機相或有機相與水相混合液置於水浴鍋中加熱，攪拌，除去有機溶劑。冷凍乾燥又稱升華乾燥，是指將含水物料冷凍到冰點以下，使水轉變為冰，然後在較高真空下將冰轉變為蒸氣而除去的乾燥方法。進一步的，所述的凍幹使 用的方法包括冷凍乾燥法和噴霧乾燥法。冷凍乾燥法又稱升華乾燥。將含水物料冷凍到冰點以下，使水轉變為冰，然後在較高真空下將冰轉變為蒸氣而除去的乾燥方法。噴霧乾燥法即通過機械作用，將需乾燥的物料，分散成很細的像霧一樣的微粒，與熱空氣接觸，在瞬間將大部分水分除去，使物料中的固體物質乾燥成粉末。進一步的，所述的凍幹使用凍幹保護劑包括有葡聚糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖、甘氨酸、海藻糖、山梨醇、甘油、果糖、木糖醇、半乳糖中的一種或幾種。更進一步的，所述的凍幹使用凍幹保護劑的用量為2-10g/100m。更進一步的，所述的凍幹保護劑可以在製備脂質體溶液時加入到水相中，也可以在凍幹前加入到製備好的脂質體溶液中，優選前者。進一步的，根據該工藝生產的脂質體和凍乾粉為皮膚外用製劑，如軟膏、乳膏、凝膠、乳液、噴霧等。進一步的，根據該工藝生產的脂質體和凍乾粉適宜用於抗氧化、抗炎、抗紫外輻射損傷、抗皮膚癌，尤其是紫外線輻射弓I起的水腫、紅斑、色素沉著、炎症、免疫抑制等症狀。本發明所制的槲皮素脂質體為外用型製劑，用於防護紫外線輻射、修復輻射損傷、預防皮膚癌。槲皮素柔性脂質體的製劑學性質評價:(I)粒徑:利用NicompTM380/ZLS動態光散射粒度分析儀對實施例(1)_ (5)的粒徑進行測量，可得本製劑的平均粒徑為148nm。(2)包封率:使用微柱離心法分離游離槲皮素和脂質體，使用HPLC測定槲皮素藥物含量，按照下述公式計算包封率。可得本製劑的包封率為85.41 ±5.77%。E%= (CVC2) X 100%C1為過凝膠柱樣品的濃度；C2為未過凝膠柱樣品的濃度。(3)體外釋放行為:在(37 + 0.5) °C恆溫下以漿板法測定體外釋藥性能(25rpm攪拌)，HPLC法測定藥物含量，計算不同時間藥物的釋放量，計算累計釋放量，釋放曲線結果見

圖1。從圖中可以看出槲皮素柔性脂質體可以在48h緩慢釋放藥物，釋放行為符合一級動力學。(4)皮膚滲透行為:為研究脂質體的行為，我們做了如下實驗:鼠皮的製備:取健康雄性SD大鼠(180_220g)，拉頸處死，用電動剃毛刀剔去腹部皮膚上的毛，剝離腹部皮膚。用止血鑷小心剔除皮下脂肪組織，仔細檢查鼠皮的完整性，不得有任何破損。實驗方法:用Parafilm將大鼠腹部皮膚固定於Frans擴散池上，角質層朝上，供給室加入樣品溶液，接收室為PH7.4的PBS溶液，循環水溫度為32 士 TC，攪拌轉速為600r.min'供給室封閉式給藥，分別於l，2，3，4，5，6，7h定時取樣ImL，並立即補充在32°C下保溫的接收液lmL，取樣液用0.22 μ m微孔濾膜過濾，取20 μ L，HPLC法測定含量。計算單位面積累計透過量Q( μ g.cm-2)，以單位面積累計滲透量Q為縱坐標，時間t為橫坐標作圖，可以得到累計滲透曲線圖2，同時得到藥物的穩態滲透速率(Js，μ g.cm-2.IT1)和時滯(h)如下表。從圖中可以看出，經脂質體包裹後，槲皮素的皮膚透過速率顯著提高，時滯明顯減少，說明脂質體增加了藥物與皮膚的親和性，使得藥物進入皮膚深層的能力增加。
權利要求
1.一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉，其特徵在於，每IOOmL的脂質體溶液是由下列物質製備而成: 槲皮素0.0lg-0.1g,兩親性脂質0.lg-1.2g，膽固醇0.025g-0.6g，表面活性劑0.05g-3g，抗氧劑0.0Olg-0.5g，其餘為水性介質。
2.根據權利要求1所述的一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉，其特徵在於，所述的兩親性脂質混合物是指蛋磷脂、豆磷脂、腦磷脂、氫化卵磷脂、1，2-二油醯氧丙基-N，N, N-三甲基溴化銨、磷脂醯肌醇、磷脂醯甘油、磷脂醯絲氨酸、磷脂酸、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯膽鹼、鞘磷脂一種或一種以上。
3.根據權利要求1所述的一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉，其特徵在於所述的表面活性劑包括膽酸、膽酸鈉、Tween20、Tween60、Tween80、Span20、Span60、Span65、泊洛沙姆中的一種或一種以上。
4.根據權利要求1所述的一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉，其特徵在於述的抗氧劑亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、依地酸二鈉、維生素E —種或一種以上。
5.根據權利要求1所述的一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉，其特徵在於所述的水性介質是由純水和水溶性物質組成的。
6.根據權利要求5所述的一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉，其特徵在於所述的水溶性物質包括有機酸、有機鹽、無機酸、無機鹽、單糖、二糖及其組合物。
7.根據權利要求1-6任一所述的一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉的製備方法，其特徵在於，包括如下製備步驟: (1)將槲皮素和兩親性脂質溶解於一種或多種有機溶劑中作為有機相，用超聲波使之充分溶解，然後將抗氧劑加入有機相溶液中。
(2)使表面活性劑充分溶於水性介質中作為水相； (3)將有機相與水相混合之前或之後除去有機溶劑，形成分散均一的脂質體溶液，然後加入凍幹保護劑。
(4)對步驟(3)所得的脂質體溶液用0.22 μ m的濾膜過濾3_5次，加入適量的凍幹保護劑充分溶解，-80°C預凍24h，放入減壓冷凍乾燥機進行乾燥48h後即得脂質體凍乾粉。
8.根據權利要求7所述的一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉的製備方法，其特徵在於，所述的抗氧劑可以步驟(I)後加入有機相中，也可以在步驟(2 )後加入水相中。
9.根據權利要求7所述的一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉的製備方法，其特徵在於，所述的凍幹保護劑的加入方法可以步驟(2)後加入到水相中，也可以在步驟(3)後加入到製備好的脂質體溶液中。
10.根據權利要求7所述的一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉的製備方法，其特徵在於，所述的步驟(3)中除去有機溶劑，即可以在有機相和水相混合之前，也可以在機相和水相混合之後。
11.根據權利要求7所述的一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉的製備方法，其特徵在於，步驟(3)所述的除去 有機溶劑方法有蒸發、冷凍乾燥、超聲超聲波。
12.根據權利要求7所述的一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉的製備方法，其特徵在於，所述的凍幹使用的方法包括冷凍乾燥法和噴霧乾燥法。
13.根據權利要求7所述的一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉的製備方法，其特徵在於，所述的凍幹使用的凍幹保護劑包括有葡聚糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖、甘氨酸、海藻糖、山梨醇、甘油、果糖、木糖醇、半乳糖中的一種或幾種，用量為2-10g/100mL。
14.根據權利要求7所述的一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉的製備方法，其特徵在於，所述的凍幹保護劑可以在製備脂質體溶液時加入到水相中，也可以在凍幹前加入到製備好的脂質體溶液中。
15.根據權利要求1-15所述的槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉，其特徵在於，所述的脂質體及其凍乾粉為皮膚外用製劑，適宜用於抗氧化、抗炎、抗紫外輻射損傷、抗皮膚癌，對抗紫外線輻射引起的 水腫、紅斑、色素沉著、炎症、免疫抑制。
全文摘要
一種槲皮素皮膚用脂質體及其凍乾粉，屬於醫藥技術領域，為解決槲皮素溶解性差，難以應用的問題，同時提高槲皮素對角質層的滲透量和滲透速度，並增強藥物在表皮和真皮中的滯留量，更好地發揮藥效。每100mL的脂質體溶液是由下列物質製備而成槲皮素0.01g-0.1g，兩親性脂質0.1g-1.2g，膽固醇0.025g-0.6g，表面活性劑0.05g-3g，抗氧劑0.001g-0.5g，其餘為水性介質。該脂質體及其凍乾粉為皮膚外用製劑，適宜用於抗氧化、抗炎、抗紫外輻射損傷、抗皮膚癌，對抗紫外線輻射引起的水腫、紅斑、色素沉著、炎症、免疫抑制。
文檔編號A61P37/04GK103070826SQ20121059010
公開日2013年5月1日 申請日期2012年12月31日 優先權日2012年12月31日
發明者史小軍, 劉丹, 朱永原 申請人:清華大學深圳研究生院