含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(aoz)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質的製備的製作方法

2023-05-20 17:26:21 2

專利名稱：：含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(aoz)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質的製備的製作方法
技術領域：
：本發明屬於化學
技術領域：
，更具體涉及一種含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(A0Z)的li鱺肌肉凍乾粉基體標準物質的製備方法。
背景技術：
：呋喃唑酮屬硝基呋喃類藥物，動物服用呋喃唑酮後，原藥分子在動物體內迅速代謝，其在體內的穩定性不超過幾小時，代謝的部分化合物分子與細胞膜蛋白結合成為結合態，結合態可長期保持穩定，從而延緩原藥在體內的清除速度。而普通的食品加工方法(如燒烤、微波加工、烹調等)難以使蛋白結合態呋喃唑酮殘留物大量降解，食用含有該殘留物的肉製品會對人體產生一定的毒副作用。研究表明，蛋白結合態的呋喃唑酮殘留物含有稱為3-氨基一2-唑酮(AOZ)的完整側鏈，在人胃的弱酸性條件下，側鏈可以從蛋白結合態的母體分子上解離下來，A0Z可以代謝成為0—輕乙基麟，該代謝物是致突變和致癌化合物。在獸藥殘留分析中，樣品基體涉及到各種動、植物及加工食品。分析基體本身的差別使得在分析過程中不能簡單地採用傳統的純品標準物質來校準或進行質量控制，需要採用基體標準物質兩類標準物質以滿足要求，包括證明檢測工作與所要求的標準操作程序相符或參加能力驗證中、校準儀器、用於質量控制、解決分析中遇到的問題以及保證結果的準確。歐洲委員會對標準物質有明確定義，歐盟有關農、獸藥殘留檢測的法規性文件均提到了要採用標準物質作為質量控制手段，對檢測方法進行驗證；因此標準物質對於獸藥殘留分析是十分重要的。發明目的本發明的目的是提供一種含呋喃哇酮代謝物3-氨基-2-唑酮(A0Z)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質的製備方法，製備科學合理，可操作性強，製備得到的基體標準物質不需冷凍可在室溫條件下長期保存，可作為實物標樣在日常檢測工作中用於建立分析方法、確定實驗準確度與精密度及在檢測質量控制，萆用方便廣泛，品質好。本發明的含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(A0Z)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質的製備步驟為1)將含有濃度約57iig/kg左右呋喃唑酮代謝物AOZ的鰻鱺肌肉組織按約l:4重量比例加入不含呋喃唑酮代謝物A0Z的鰻鱺肌肉組織，勻漿；2)組織勻漿後的魚漿進行低溫冷凍乾燥、第一次粉碎；3)粉碎後的產物進行脫脂、二次粉碎均質，混勻，過篩後成所述的含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(A0Z)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質。3本發明的顯著優點本發明獲得的基體標準物質本發明採用含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2_唑酮(A0Z)的鰻鱺肌肉為原料，製備科學合理，可操作性強，製備得到的基體標準物質不需冷凍可在室溫條件下長期保存，可作為實物標樣在日常檢測工作中用於建立分析方法、確定實驗準確度與精密度及在檢測質量控制，運用方便廣泛，品質好。圖l是本發明的製備流程圖。圖2是本發明實施例2的A0Z標準溶液(上)與鰻鱺肌肉凍乾粉(下)的MRM色譜圖。具體實施例方式製備步驟為採用藥浴給藥呋喃唑酮的方式，使呋喃唑酮藥物在鰻鱺體內代謝，對其代謝曲線進行測定，獲得肌肉中呋喃唑酮代謝物A0Z濃度在約57ug/kg左右的鰻鱺，將鰻鱺宰殺、放血、去骨、去內臟，取得含有呋喃唑酮代謝物AOZ的鰻鱺肌肉；所述藥浴給藥呋喃唑酮為所述藥浴給藥呋喃唑酮約為0.16mg/L，全池潑灑方式藥浴給藥，養鰻池日換水率約95%，給藥後第10小時開始採集樣本，之後每24小時採集一次樣本，每次取樣隨機取6條鰻鱺，宰殺、去皮、去骨，洗淨，取肌肉一併勻漿作為一個樣本進行檢測。按GB/T21311-2007《動物源性食品中硝基呋喃類藥物代謝物殘留量檢測方法高效液相色it"串聯質譜法》檢測，同位素稀釋內標法定量。用藥15曰後經檢測取呋喃唑酮代謝至一平臺，取全部鰻鱺，宰殺、去皮、去骨、洗淨，待製備。將呋喃唑酮代謝物A0Z的濃度約57ug/kg左右的鰻鱺肌肉組織按約l:4比例加入不含呋喃唑酮代謝物AOZ的鰻鱺肌肉組織，勻漿；將製得的樣品按GB/T21311-2007《動物源性食品中硝基呋喃類藥物代謝物殘留量檢測方法高效液相色譜-串聯質譜法》檢測AOZ含量，同位素稀釋內標法定量。以方差檢驗法對勻漿的魚漿進行均勻性檢驗；組織勻漿後的魚漿進行低溫冷凍乾燥、第一次粉碎；低溫冷凍乾燥的條件為樣品先置於-7(TC冰箱中預凍7個小時，取出於冷凍乾燥機中冷凍乾燥56小時後取出。粉碎後的產物進行脫脂、二次粉碎均質，混勻，過篩後成所述的含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(AOZ)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質。步驟3的含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(AOZ)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質經過鋁箔袋複合膜真空獨立包裝、輻照殺菌後製備成含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(M)Z)的鰻ig肌肉凍乾粉基體標準物質成品。製備的凍乾粉基體標準物質成品經過均勻性檢驗、穩定性檢驗後進行定值及不確定值計算，獲得了最終成品。本產品最終定值為3.71土0.686ug/kg，樣品數據400個，獨立包裝約3g，可置於室溫保存對該產品進行了長期穩定性(有效期)與短期穩定性(運輸條件下材料的穩定性)兩種類型的穩定性。本項目的穩定性實驗設計為經典穩定性研究，即同時製備的樣品在相同條件下隨著時間的推移進行測量。在第4個月測定時樣品模擬運輸條件，置於-6(TC冰櫃中放置60天後於室溫下放置30天，再於70'C烘箱放置48小時後測定。另外，由於測量是在(實驗室內)再現性條件下進行的，其中也包括了測量的不穩定性。研究證明該產品十分穩定，有效期長，使用方便。製備得到的含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(AOZ)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質可作為實物標樣在日常檢測工作中用於建立分析方法、確定實驗準確度與精密度及在檢測質量控制。以下是本發明的幾個具體實施例，進一步說明本發明，但是本發明不僅限於此。採用本發明製得了鰻鱺肌肉中呋喃唑酮代謝物AOZ的標準物質，定值為3.71土0.686ug/kg,已用於從事相關檢測實驗進行分析方法的確認和質量控制，並保證食品分析量值溯源鏈的有效性和不間斷性。實施例l採用藥浴給藥呋喃唑酮的方式，使呋喃唑酮藥物在鰻鱺體內代謝，對其代謝曲線進行測定，獲得呋喃哇酮代謝物A0Z的濃度約57ug/kg左右的鰻鱺，將鰻鱺宰殺、放血、去骨、去內臟，取得含有呋喃唑酮代謝物AOZ的鰻鱺肌肉；所述藥浴給藥呋喃唑酮為O.16iig/L，全池潑灑方式藥浴給藥，養鰻池日換水率約95%，給藥後第10小時開始採集樣本，之後每24小時採集一次樣本，每次取樣隨機取6條鰻鱺，宰殺、去皮、去骨，洗淨，取肌肉一併勻漿作為一個樣本進行檢測。按GB/T21311-2007《動物源性食品中硝基呋喃類藥物代謝物殘留量檢測方法高效液相色譜-串聯質譜法》檢測，同位素稀釋內標法定量。用藥15日後經檢測取呋喃唑酮代謝至一平臺，取全部鰻鱺，宰殺、去皮、去骨、洗淨，待製備。將呋喃唑酮代謝物A0Z的濃度約57ug/kg左右的鰻鱺肌肉組織按約l:4重量比例加入不含呋喃唑酮代謝物AOZ的鰻鱺肌肉組織，勻漿，將製得的樣品按GB/T21311-2007《動物源性食品中硝基呋喃類藥物代謝物殘留量檢測方法高效液相色譜-串聯質譜法》檢測AOZ含量，同位素稀釋內標法定量。以方差檢驗法對勻漿的魚漿進行均勻性檢驗；組織勻漿後的魚漿進行低溫冷凍乾燥、第一次粉碎；低溫冷凍乾燥的條件為樣品先置於-70'C冰箱中預凍7個小時，取出於冷凍乾燥機中冷凍乾燥56小時後取出。粉碎後的產物進行脫脂、二次粉碎均質，混勻，過篩後成所述的含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(AOZ)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質。步驟3的含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(AOZ)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質經過鋁箔袋複合膜真空獨立包裝、輻照殺菌後製備成含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(AOZ)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質成品。實施例2含呋喃唑酮代謝物AOZ樣本的獲得用於研究的樣本為格每條大小約200g300g的鰻鱺，全池潑灑方式藥浴給藥，藥浴濃度約O.16mg/L。用藥15天後採集陽性樣本。將宰殺、去皮、洗淨後的肌肉組織於一20'C冷庫保存。養殖過程在福建省三明市梅列區華盛特種養殖場進行。均勻實驗材料的獲得將魚肉樣本取出，置於4'C冰箱解凍後，去皮，取魚肌肉切成小塊，置於勻漿機中，充分勻漿，將勻漿後的樣本按四分法隨機取出1/4，分裝於潔淨的塑料離心管(容量為50mL)中，密閉，製成供試樣，置於-18'C冰櫃中保存。鰻鱺肌肉中水分含量較高，為便於貯存、包裝、運輸及使用，本項目將其製成凍乾粉。鰻鱺肌肉中含有大量脂肪，為防脂肪可能在保存過程中析出以及可能酸敗變質，本項目採用正己烷脫脂。經實驗證明正已垸脫脂不會造成AOZ損失。為延長保存期，本文將樣品以鈷60輻照，接收劑量為9kGY，輻照後樣品按GB/T4789.2-2003檢測細菌總數，檢測值〈10CFU/g。均勻性檢驗均勻性實驗按GB/T21311-2007《動物源性食品中硝基呋喃類藥物代謝物殘留量檢測方法高效液相色譜-串聯質譜法》檢測，同位素稀釋內標法定量，用以定量的參數見表l,譜圖見圖2。表1保留時間、母離子和子離子序號化合物母離子(M+H)子離子碰撞能量(cv)1NPAOZ23610419134112NPd4-A0Z24013412注下劃線為定量離子碎片均勻性實驗的總樣本數共100個，順序編號後按總樣本數N的3XN1/3隨機抽取14個樣品進行樣品均勻性實驗，其中l個樣品(編號2)因取樣時汙染棄用。以每個檢體3個重複性條件下檢測獲得的數據為一組，共獲得15組數據；計算每組內的均方差和組間的均方差，以及各自的自由度，顯著性水平a，按方差檢驗給定的方法計算統計量F。査F分布表，找出臨界值F，進行比較判斷，作出結論。F值岣.703〈F。.。5(14，30)=2.31，樣本是均勻的。結果見表2。6表2凍乾粉的均勻性檢驗結果及方差分析結果tableseeoriginaldocumentpage7由表2可見，均勻性實驗所得F值〈F。.。5(14，30)，表明樣品間不存在明顯差異，證明製得的樣本是均勻的。穩定性考察根據GB/T15000.3-2008，標準物質在進行定值時，需考慮長期穩定性(如有效期)與短期穩定性(如運輸條件下材料的穩定性)兩種類型的穩定性。標準物質的長期穩定性與fe^準物質在生產者的貯存條件下的行為有關，短期穩定性與樣品運輸過程中的外部因素有關。本項目的穩定性實驗設計為經典穩定性研究，即同時製備的樣品在相同條件下隨著時間的推移進行測量。在第4個月測定時樣品模擬運輸條件，置於-60'C冰櫃中放置60天後於室溫下放置30天，再於70'C烘箱放置48小時後測定。另外，由於測量是在(實驗室內)再現性條件下進行的，其中也包括了測量的不穩定性。穩定性研究的基本模型可表示為；r-A+AY+e，其中A和A為回歸係數，s為隨機誤差分量。本項目中作為候選標準物質是由復現了實驗材料研製過程所得的，因而穩定性數據採用實驗材料研製過程所進行的穩定性實驗所得的數據。數據見表3。表3穩定性實驗數據tableseeoriginaldocumentpage8根據表10的相關數據，回歸參數可按下式計算得到斜率的計算6,=-=——=0.0139;截距的計算6。=f-6^=5.152;通過誤差分析可以計算、和6。的標準偏差，按S=式中一^1-=0.3536，w—20.3536估計^的標準偏差，4.24260.0833;自由度為n-2和口=0.95(95%置信水平)的學生分布t因子為2.35，由於|6」</Q95,,.故斜率是不顯著的，因而未觀測到不穩定性。瓶),定值與不確定度評估定值根據中華人民共和國國家標準GB/T15000.3-2008"標準物質工作導則(3)標準物質定值的一般原則和統計方法"中有關技術及要求，對呋喃唑酮代謝物殘留質量控制樣品進行定值。採用同位素稀釋質譜法進行測定(n=3)。定值結果匯總於表4。表4定值結果實驗室編號測定結果(yg/kg)標準偏差Si第一次第二次第三次平均值0014.094.183.914.0613.750023.553,823.673.6813.530034.003.553.743.7622.590043.283.753.653.5624.760054.053.293.263.5344.770063.893.943.903.912.6460073.513.643.553.576.6580083.703.453.563.5712.530093.733.693.923.7812.290103.493.743.783.6715.72平均值(ug/kg)3.71/標準偏差S/0.1721對所得數據進行檢驗分析，包括的步驟有(1)檢驗實驗室平均值之間顯著性差異以此來決定是否應該求出單個數值的平均值或實驗室平均值的均值；(2)檢驗根據(1)中決定選取的數據組的正態性並找出異常值；(3)檢驗全部數據組中異常的實驗室的方差。檢驗過程如下(1)先對所有數據進行柯克倫(Cochran)檢驗。給定P個由相同的n次重複測試結果計算的標準偏差Si，柯克倫(Cochran)檢驗的定義為C二^L^，柯克倫的結果判定如下判定結果正確可疑值離群值值C與臨界值Co關係C《CoCo(5%)Coa在p二10，11=3時，柯克倫的臨界值為C。(1W=0.536，C。<5W=0.445，而10個實驗室的柯克倫(Cochran)檢驗的結果為0.4881，005實驗室的Si值最大，結果可疑，需進一步檢驗決定是否採用該實驗室數據。(2)對005實驗室的最大值和最小值進行格拉布斯(Grubbs)檢驗單值格拉布斯(Grubbs)檢驗量C^則是檢驗該單元中最大值、是否為離群值，其中Gn則檢驗該單元中最小值^是否為離群值，其中(^=^-a)/S;單值格拉布斯檢驗結果判定如下9判定結果正確值可疑值離群值^與臨界值G。關係Gi《G。(5%)Go(5%)<Gl《GoU%)&>Go(1在n=3時，單值格拉布斯(Grubbs)的臨界值G咖和G。(加均為1.155，而005實驗室的格拉布斯檢驗結果Gu=0.6105，Glp=l.1541,屬正確值，故該單元數據可保留以參加下一步檢驗。(3)對10個單元的均值進行單值格拉布斯(Grubbs)檢驗在11=10時，單值格拉布斯(Grubbs)的臨界值G。(1W=2.482，G。(5W=2.290，而單值格拉布斯(Grubbs)檢驗結果G=2.0375，Glp=1.0226，所有單元的均值均可保留以參加下一步雙值格拉布斯(Grubbs)檢驗。4、對10個單元的均值進行雙值格拉布斯(Grubbs)檢驗雙值格拉布斯(Grubbs)檢驗量《p則是檢驗最大的兩個值是否為離群值，《p=is(2p-^)/isc2其中《是原數組的方差，《P-^是p個數據去除最大兩值後的方差。檢驗量《i是檢驗最小兩值是否為離群值，e"-《""《其中《'"是p個數據去除最小兩值後方差。雙值格拉布斯檢驗結果判定如上判定結果正確值歧離值離群值G2與臨界值G0關係G2》G0(5%)Go(1%)《G2<Go(5%)G2<Go(1在n二10時，雙值格拉布斯(Grubbs)的臨界值G,=0.1150，G。(5=0.1864，而雙值格拉布斯(Grubbs)檢驗結果G21=0.7505，G2p=0.2452，因此所有單元的數據均為正確值，均可以保留並參與定值。本項目定值最終是協同定值實驗室提供結果的平均值。不確定度評估根據GB/T15000.3-2008，標準物質特性值不確定度的確定應考慮的因素包括4點(1)材料的測定過程伴隨的不確定度；(2)用戶一般每次只用一個樣品；(3)材料被生產者/銷售者在較長時間內儲存；(4)材料必須運送給用戶。這些因素對標準物質被測量值(也就是標準值)的不確定度有顯著貢獻，可用式l來表示x隱=u+++<-(1)式中一特性值；AA。r—由批測定得到的特性值，或在測定單個製品時，由該製品得到的特性值；&M—瓶間差異引起的誤差項；&to—長期不穩定性引起的誤差項；—短期不穩定性引起的誤差項。根據GB/T15000.7"標準物質工作導則(7)標準物質生產者能力的通用要求"中對標準物質定值方式的劃分，本項目中採用的定值方式屬由實驗室網絡，用特定方法測量，只給出該方法評定的特性值。參與協同定值的實驗室給出的數據格式為每個實驗室的檢測值。CCQM(國際物質量諮詢委員會)確定的基準測量方法中包括同位素稀釋質譜法，採用同位素稀釋質譜法進行定值，屬基準測量方法，消除了由儀器不同、樣品前處理等過程對測試結果的影響。不確定度計算過程如下(雖然所有的不確定度計算過程均給出了計算公式，但全部計算過程是由EXCEL所帶的統計軟體完成的)(1)由協同定值實驗室所帶來的批測定的不確定度"^,的計算由於本項目中參與協同定值的所有數據經檢驗，均可採納進行定值，即本項目實驗材料的特性值是平均值的均值，即^=K，與平均值的均值有關的合成標準不確定度的主要分量是由式(2)得到的標準偏差P—lS而合成不確度為"￡^=+，在這些公式中，P代表實驗室數。由表ll所給的數據，s為O.1721，本項目中0.0544。(2)由瓶間均勻性所帶來的不確定度i^的計算在預實驗所進行的均勻性研究中，瓶間均勻性已被驗證。因此，此時的統計方法採用的是單因素方差分析。表5均勻性研究的測量數據tableseeoriginaldocumentpage12瓶間方翻的計算《=巡。隱廣風"0.歸-謹36=0扁8瓶間標準偏差是該方差的平方根&"0.0308=0.1755重複性標準偏差^==V0.0136=0.1167由瓶間均勻性所帶來的不確定度"M=、^+formulaseeoriginaldocumentpage13(3)由穩定性所帶來的不確定度^,的計算根據GB/T15000.3-2008,有效期與長期穩定性的標準不確定度的關係見式3，其基礎是穩定性數據中無顯著趨勢。r(W,^)=;rfl(i+6'x)-(3)式中假設特性值y從初始值y。以一個常數6'線性降解，6'是相對降解速率，為時間x的函數。特性值的不確定度可通過將自變量K、z和6'的不確定度傳播給因變量y得到。在給定的有效期x沒有顯著降解的情況下，可採用式4估計樣品長期穩定性的不確定度。(4)作為候選標準物質是由復現了實驗材料研製過程所得的，因而穩定性數據採用實驗材料研製過程所進行的穩定性實驗所得的數據。數據見表8。表8穩定性實驗數據時間(月)AOZ的含量(ug/kg)04.81815.56825.14035.40345.112由於沒有一種物理/化學模型能夠真實地描述該實驗材料的降解機理，故採用直線作為經驗模型。事實上，對於鰻鱺肌肉凍乾粉中的特性值(AOZ含量)而言，所希望的是截距(在不確定度內)等於測定得到的值，而斜率趨近於零。2(A-;c)(y-y)根據表15相關數據，斜率的計算——^~~=0.0139;截距的計算60=;r-V-5.152;直線上的點的標準偏差的計算S=n—20.3536與斜率相關的不確定度的計算S(&,)=,^==0.0833;724.242J2A-"自由度為n-2和p^.95(95%置信水平)的學生分布t因子為4.30，由於1、hA^,"^^fe)，故斜率是不顯著的，因而未觀測到不穩定性。根據式4，有效期t二4月的長期穩定性的不確定度為"to=&.,=0.0833x4=0.3332。(4)鰻鱺肌肉凍乾粉中AOZ的擴展不確定度綜上，鰻鱺肌肉凍千粉中AOZ的擴展不確定度是通過合成測定、均勻性和穩定性對特性值總不確定度的貢獻來估計的，按式5計算"，=+《+《+"i-(5)在置信水平為95%時，A=2。由於本項目採用的是協同定值，通過郵政網絡將候選標準物質分發給各參加協同定值的實驗室，所得到的一系列測量值已包含了運輸不穩定性造成的附加不確定度，另外，在進行穩定性實驗時，第4個月測定時樣品模擬運輸條件，置於-60。C冰櫃中放置60天後於室溫下放置30天，再於7(TC烘箱放置48小時後測定，在穩定性不確定度中也包括了運輸不穩定性造成的不確定度，因此，此處的^=0。由上述計算過程中得到的各不確定度值，根據式5，鰻鱺肌肉凍乾粉中AOZ的擴展不確定度計算如下"隱=2xV0.05442+0.05942+0.33322=0.686。該不確定度是根據3個月的有效期確定的。如果材料的穩定性得到進一步證明，則有效期還可延長。測量結果本發明的標準物質最終確定標準值為3.71±0.686(ng/kg)。權利要求1.一種含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(AOZ)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質的製備，其特徵在於所述製備步驟為1)將呋喃唑酮代謝物AOZ的濃度5～7μg/kg的鰻鱺肌肉組織按重量比例1∶4加入不含呋喃唑酮代謝物AOZ的鰻鱺肌肉組織，勻漿；2)組織勻漿後的魚漿進行低溫冷凍乾燥、第一次粉碎；3)粉碎後的產物進行脫脂、二次粉碎均質，混勻，過篩後成所述的含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮AOZ的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質。2.根據權利要求1所述的含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(AOZ)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質的製備，其特徵在於所述步驟3的含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(AOZ)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質經過鋁箔袋複合膜真空獨立包裝、輻照殺菌後製備成含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(AOZ)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質成品。3.根據權利要求1所述的含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(AQZ)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質的製備，其特徵在於所述步驟1)的含有呋喃唑酮代謝物AOZ的鰻鱺肌肉的製備方法為採用藥浴給藥呋喃唑酮的方式，使呋喃唑酮藥物在鰻鱺體內代謝，對其代謝曲線進行測定，獲得肌肉中含呋喃唑酮代謝物AOZ的濃度57ug/kg的鰻鱺，將鰻鱺宰殺、放血、去骨、去內臟，取得含有呋喃唑酮代謝物AOZ的鰻鱺肌肉。4.根據權利要求3所述的含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(AOZ)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質的製備，其特徵在於所述藥浴給藥呋喃唑酮為0.16mg/L，全池潑灑方式藥浴給藥，養鰻池日換水率95%，給藥後第10小時開始釆集樣本，之後每24小時採集一次樣本，每次取樣隨機取6條鰻鱺，宰殺、去皮、去骨，洗淨，取肌肉一併勻漿作為一個樣本進行檢觀ij，按GB汀21311-2007《動物源性食品中硝基呋喃類藥物代謝物殘留量檢測方法高效液相色譜-串聯質譜法》檢測，同位素稀釋內標法定量，用藥15日後經檢測取呋喃唑酮代謝至一平臺，取全部鰻鱺，宰殺、去皮、去骨、洗淨，待製備。5.根據權利要求1所述的含呋喃哇酮代謝物3-氨基-2-唑酮(A0Z)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質的製備，其特徵在於所述步驟2)中低溫冷凍乾燥的條件為樣品先置於-70'C冰箱中預凍7個小時，取出於冷凍乾燥機中冷凍乾燥56小時後取出。全文摘要本發明是提供一種含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(AOZ)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質的製備方法，將含有預期濃度呋喃唑酮代謝物AOZ的鰻鱺肌肉組織勻漿；組織勻漿後的魚漿進行低溫冷凍乾燥、第一次粉碎；粉碎後的產物進行脫脂、二次粉碎均質，混勻，過篩後成所述的含呋喃唑酮代謝物3-氨基-2-唑酮(AOZ)的鰻鱺肌肉凍乾粉基體標準物質。本發明製備科學合理，可操作性強，製備得到的基體標準物質不需冷凍可在室溫條件下長期保存，可作為實物標樣在日常檢測工作中用於建立分析方法、確定實驗準確度與精密度及在檢測質量控制，運用方便廣泛，品質好。文檔編號C07D263/26GK101504341SQ200910111188公開日2009年8月12日申請日期2009年3月10日優先權日2009年3月10日發明者方楊申請人:福建出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心