用於解離Fcgamma-受體-IgG複合物及純化與檢測IgG的方法和試劑盒的製作方法

2023-05-20 14:47:06 1

專利名稱：用於解離Fcgamma-受體-IgG複合物及純化與檢測IgG的方法和試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明涉及分離細胞群、用於分離和評價IgG的方法、用於分離IgG的Fab或Fe 片段的方法以及用於實施所述方法的試劑盒。
背景技術：
抗體的免疫球蛋白G(IgG)類在人宿主抵抗病原體的適應性免疫防禦中起著重要作用。IgG由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈構成，而重鏈和輕鏈由可變區和恆定區組成。IgG分子經木瓜蛋白酶處理可生成識別抗原的Fab片段和作為宿主受體的識別位點和與多個效應分子相互作用的位點的Fe片段。IgG的Fe部分還含有與各重鏈的Ch2結構域中天冬醯胺297殘基連接的保守的複合糖或聚糖。當IgG是其天然形式時，這些聚糖位於(^2結構域之間的相接處。它們由具有添加的末端及支鏈糖殘基(例如N-乙醯葡糖胺、巖藻糖、唾液酸以及半乳糖)的N-乙醯葡糖胺和甘露糖的二天線核心(biantennary core)構成。該糖的存在對於正確的抗體結構以及與細胞免疫球蛋白G Fcy受體(FcyR)和補體系統的相互作用來說至關重要。內切糖苷酶S(EndoS)由化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes)分泌，通過水解與IgG重鏈上的天冬醯胺297殘基連接的保守聚糖而對天然IgG具有特異性內切糖苷酶活性。EndoS是第一種已知對天然IgG具有專一特異性的細菌酶。相比之下,其他已知的內切糖苷酶的活性需要對糖蛋白底物進行變性，或通過對糖蛋白底物進行變性而加強。諸如IgG的抗體在基礎研究以及在診斷和藥物開發中具有許多應用。在一些應用中，諸如，在免疫組織化學、免疫測定、腫瘤檢測、放射療法、抗體結合位點和免疫靶向的晶體學研究中，使用Fab片段要比使用完整的IgG分子方便。使用Fab片段的一些優點是它們不會受到細胞上的Fe受體或沉澱抗原影響，它們表現出免疫原性降低和對吞噬作用較不敏感，並且放射性標記的Fab片段比完整的IgG分子被更快速地從組織中清除。對於其他應用，使用IgG的Fe片段是合乎需要的。如果要大規模製備Fab或Fe片段，可以以重組蛋白的形式進行製備。為了純化的目的，通常製備重組IgG和血清IgG的完整分子，然後進行化學處理以獲得Fab或Fe片段。最常使用諸如胃蛋白酶或木瓜蛋白酶的蛋白水解酶將IgG切成Fab和Fe片段。 這些酶經常切割其他蛋白，所以切割反應通常必須對純化的IgG級分進行。另外，胃蛋白酶或木瓜蛋白酶通常在多處切割IgG。這意味著所獲得的片段經常不對應於完整的Fab或Fe 片段，即使切割確實產生Fab和Fe片段，它們也通常容易進一步切割成更小的片段。通常使用蛋白A或G親和分離柱來進行Fe片段與Fab片段的分離，該分離柱利用了細菌蛋白A和G的Fe結合特性。

發明內容
本發明人獲得了下述令人驚訝的發現，使細胞與EndoS接觸去除已經與Fe Y R結合的IgG。根據本發明，由此提供了一種體外解離Fe Y -受體-IgG複合物的方法，所述方法包括使該複合物與EndoS多肽接觸，由此獲得不與IgG結合的Fe Y -受體，其中，所述 Fe Y-受體-IgG複合物可隨意地存在於含有細胞的樣品中。本發明還提供了一種用於分離基本不含Fe Y -受體-結合的IgG分子的細胞群的方法，所述方法包括(a)使含有細胞的樣品與EndoS多肽接觸；以及(b)從所述接觸過的樣品中分離所述細胞；由此獲得所述細胞群。本發明人還確定了用於分離IgG的改良方法。所述方法利用了缺乏內切糖苷酶活性的修飾的EndoS多肽。本發明人首次揭示了所述修飾的EndoS多肽對於功能活性形式的天然IgG糖蛋白具有專一的特異性。因此，所述方法特別有助於分離糖基化的和/或具有功能活性的IgG。通過將所述修飾的EndoS多肽與能夠結合變性和/或去糖基化的IgG的另外IgG結合試劑聯合使用，本發明人還確定了一種用於評價含有IgG的樣品的糖基化狀態或功能特性的方法。因此，根據本發明，提供了一種用於從含有IgG的樣品中分離IgG的方法，所述方法包括(a)使所述含有IgG的樣品與缺失IgG內切糖苷酶活性的修飾的EndoS多肽接觸； (b)從所述接觸過的樣品中分離所述EndoS ;由此獲得分離的IgG。另外，本發明提供了一種評價含有IgG的樣品的糖基化狀態或功能特性的方法， 所述方法包括取含有IgG的樣品的第一小例樣和第二小例樣，其中，對所述第一小例樣實施上述方法的步驟(a)和(b)，並且，其中除了使用可選的能夠結合變性和/或去糖基化的 IgG的IgG結合試劑取代EndoS多肽以外，對所述第二小例樣實施上述步驟(a)和(b)，並且所述方法還包括(c)對所述第一小例樣中的與EndoS多肽結合的IgG的量和所述第二小例樣中的與可選的IgG結合試劑結合的IgG的量進行定量；以及(d)將(c)中測定的結合的IgG的量進行比較；由此，評價含有IgG的樣品的糖基化狀態或功能特性。本發明人還確定了用於分離IgG的Fab或Fe片段的改良方法。本發明的方法利用了來自化膿性鏈球菌的高特異性IgG切割酶IdeS (化膿性鏈球菌的IgG降解酶)和Fe 結合蛋白。因此，本發明的方法不受到背景技術部分描述的現有方法的限制(例如使用胃蛋白酶和木瓜蛋白酶)。這是因為IdeS在IgG分子的鉸鏈區內僅有一個確定的切割位點， 因此不可能進一步切割Fab和Fe片段。在本發明的一個方法中，使含有IgG的樣品與IdeS和Fe結合蛋白接觸。Fe結合蛋白優選是如上所述缺乏內切糖苷酶活性的修飾的EndoS多肽。所述修飾的EndoS蛋白優選為廣泛使用的可選的Fe結合蛋白，例如蛋白A和蛋白G。這是因為修飾的EndoS蛋白僅結合Fe，而本發明人發現蛋白A和蛋白G還可以結合Fab片段。因此，使用這些蛋白將Fab 片段與Fe片段分離更加困難。其他優選的Fe結合蛋白包括蛋白H。在本發明的方法中，通常IdeS將IgG切割成Fab和Fe片段，並且Fe結合蛋白結合Fe片段。然後將Fe片段與Fab片段分離。該方法特別有助於從包含純化的IgG的樣品中分離Fab或Fe片段。更特別地，使用本發明的修飾的EndoS多肽，有助於從包含純化的IgG的樣品中分離Fab或Fe片段。然而，所述方法還可適用於含有未純化的IgG的樣品，例如血清、細胞裂解物或細胞培養基。本發明還提供了實施本發明方法的試劑盒和通過本發明的方法分離的細胞群。


圖I顯示了 EndoS對人IgG所有四種亞類的糖苷酶活性。小圖A :人IgG的聚糖結構。IgG的Y鏈上的聚糖與天冬醯胺297連接。GlcNAc, N-乙醯葡糖胺；Fuc,巖藻糖； Man，甘露糖；Gal，半乳糖；NeuAc，唾液酸。示出了 EndoS的切割位點和小扁豆凝集素(LCA) 的識別位點。小圖B :純化的IgGp4與EndoS —起孵育，通過SDS-PAGE進行分析，並進行染色。小圖C =IgGp4與EndoS —起孵育，使用LCA凝集素印跡進行分析。圖2顯示了血漿環境中EndoS對人IgG亞類的水解。使用EndoS或PBS處理人血漿，然後對純化的IgG級分進行LCA凝集素ELISA。使用LCA凝集素ELISA檢測IgG聚糖水解。將結果表示為各亞類與來自未處理的血漿的信號進行比較的水解百分數。圖3 顯示了 EndoS(E235Q)結合所有 IgG亞類。小圖 A :表示EndoS和EndoS (E235Q) 以3 μ g、I. 5 μ g以及O. 75 μ g的量與固定化至硝酸纖維素膜上的各IgG亞類結合的狹線印跡。使用針對EndoS的抗血清檢測結合。小圖B :使用BIAcore技術將EndoS (E235Q)與固定化的IgG亞類結合。所選擇的曲線使用IgGl作為參照(扣除批變化)顯示了與IgGl結合的EndoS (E235Q)。結合動力學常數示於適用的表格中。Nb表示使用BIAcore技術研究組合但顯不未結合。圖4顯示了 IgG亞類的EndoS處理抑制IgG與Fe Y RII的結合。小圖A :使用 EndoS處理或未使用EndoS處理的純化的IgG亞類與固定化至微量滴定板的Fe y RIIa和 FcyRIIb結合。HRP標記的蛋白G用於檢測結合的IgG亞類。(+)表示完整的IgG，㈠表示EndoS水解的IgG。小圖B :使用BIAcore表面等離子共振觀察到的IgG亞類與固定化的受體結合。曲線顯示了典型的傳感圖(sensorgram),這裡，IgGl結合Fe Y Rlla。空流動細胞用作參照(扣除的)。表2中顯示的數據是結合IgG亞類的動力學常數。Nb表示使用所述技術研究的IgG受體對，但這裡顯示未相互作用。圖5顯示了 EndoS處理的IgG不與K562細胞上的Fe YRIIa結合。小圖A:使用EndoS處理或未使用EndoS處理的放射性IgG與K562細胞的相對結合。將該細胞與 125I-標記的IgG(完整或EndoS處理的)一起孵育。檢測所洗滌的細胞沉澱物的放射性。 125I-IgG (完整)與K562細胞結合(這裡表示為100% )，表示IgG與K562細胞特異性結合可通過添加冷IgG而抑制。小圖B :將K562細胞與使用EndoS或PBS處理的人血漿一起孵育。將細胞重懸浮於裂解緩衝液，使用針對人IgG的抗血清通過SDS-PAGE和蛋白質印跡 (Western blot)進行分析。圖6顯示了 EndoS處理的IgG不與單核細胞結合。小圖A :將單核細胞與125I-標記的IgG (完整或EndoS處理的)一起孵育。在室溫下孵育30分鐘之後，通過10% SDS-PAGE 從細胞裂解物分離蛋白質(IOyg總蛋白)。乾燥凝膠，並通過感光成像進行分析。小圖B: 流式細胞計量分析顯示在使用EndoS處理的血液中IgG與活化的單核細胞結合減少。在添加白細胞活化劑fMLP之前，使用EndoS處理人血液。使用小鼠抗人IgG和FITC標記的山羊抗小鼠IgG作為第二抗體檢測與單核細胞結合的IgG。
圖7顯示了使用EndoS處理時，IgG與Fc Y RII解離。小圖A :當與K562細胞結合的 IgG與EndoS —起孵育但不與EndoS(E235Q) —起孵育時，IgG與Fc y Rlla解離。將K562細 胞與血漿一起孵育，然後與EndoS、EndoS(E235Q)或PBS—起孵育。通過SDS-PAGE並使用針 對人IgG的抗血清的印跡來分析細胞裂解物(10 u g總蛋白)的IgG。小圖B :在使用EndoS 處理之後與單核細胞結合的IgG與Fc yR解離。將單核細胞與血漿一起孵育，之後與EndoS 或PBS —起孵育。使用針對人IgG的抗血清對於重懸浮的細胞沉澱物的IgG進行分析。通 過印跡法檢測IgG的聚糖，並使用LCA凝集素檢測其放射性。小圖C BIAcore設置顯示了 EndoS影響IgGl與固定化的受體Fc yRIIa解離。在兩個平行實驗中，在IgGl-Fc y Rlla相 互作用的解離過程中，在相同時間點對注入EndoS(黑色曲線)與注入緩衝液(虛線)進行 比較。圖8顯示了來自不同化膿性鏈球菌血清型的馬鏈球菌(S. equi)和獸疫鏈球菌 (S. zooepidemicus)的EndoS同源物的ClustalW胺基酸序列比對。菌株名稱、種以及M血 清型在左側顯示。胺基酸同一性和相似性以灰色顯示，共有序列在比對下顯示。保守的殼 多糖酶基序被加上邊框，在比對下使用星號標記活性所必需的穀氨酸。圖9顯示了 EndoS a -結構域與來自腦膜膿毒性伊莉莎白菌(Elizabethkingia meningoseptica)的 EndoF2 和來自假結核棒狀桿菌(Corynebacterium pseudotuberculosis)的CP40的ClustalW胺基酸序列比對。蛋白質名稱在左側顯示。氨 基酸同一性和相似性以灰色顯示，共有序列在比對下顯示。保守的殼多糖酶基序以方框表 示，在比對下方使用星號標記活性所必需的穀氨酸。序列說明SEQ ID NO : 1是從化膿性鏈球菌API分離的EndoS多肽的胺基酸序列。SEQ ID NO 2是衍生自SEQ ID NO 1的序列的修飾的EndoS多肽(E235Q)的氨基 酸序列。SEQ ID NO 3是從化膿性鏈球菌API分離的EndoS多肽的胺基酸序列，包括信號 序列。該序列對應於NCBI登錄號AAK00850。SEQ ID NO 4是從化膿性鏈球菌API分離的編碼EndoS的核酸序列，包括信號序 列。SEQ ID N0S :5至7為引物序列。SEQ ID NO 8是從化膿性鏈球菌API分離的IdeS的胺基酸序列。SEQ ID N0 :9是從化膿性鏈球菌API分離的IdeS的胺基酸序列，包括推定的信號 序列。SEQ ID NO 10是從化膿性鏈球菌API分離的編碼IdeS的核酸序列，包括信號序 列。SEQ ID NO 11是成熟的蛋白H的胺基酸序列。SEQ ID NO 12是蛋白H的胺基酸序列，包括信號序列。SEQ ID NO 13是編碼蛋白H的核酸序列，包括信號序列。
具體實施例方式一般多肽特性具體實施方式

一般多肽特性
本發明提供了利用細菌蛋白質EndoS和IdeS以及其他蛋白質的多種方法。術語 「蛋白質」、肽以及多肽在本文可互換使用。可以這樣理解本發明的某些方法需要具有IgG 內切糖苷酶活性的EndoS多肽，而本發明的其他方法需要缺失所述活性的修飾的EndoS多肽。下列部分涉及本發明所有多肽的一般特性，特別涉及本發明多肽的胺基酸序列的變異、改變、修飾或衍生。可以這樣理解本文所述的多肽的變異、改變、修飾或衍生需要滿足使這些多肽保留此說明書的後續部分所詳述的任何必須的活性或特性的要求。本發明多肽的變體可通過本說明書後續部分更詳細描述的胺基酸同一性的特定水平來定義。可使用任何適當的算法來計算胺基酸同一性。例如，PILEUP和BLAST算法可用於計算同源性或比對序列(諸如識別同等或對應序列(特別是在它們的預設設置下)，例如在「J Mol Evol 」(Altschul S. F. (1993)，36 :290-300) ;「J Mol Biol，，(Altschul S. F.等人(1990),215 :403-10)中所述。用於進行BLAST分析的軟體可通過美國國家生物技術中心(http://www. ncbi. nlm. nih. gov/)公開獲得。該算法包括首先通過識別查詢序列中的長度W的短欄位(當與資料庫序列中相同長度的欄位進行比對時，匹配或滿足某一正閾值得分T)來識別高得分序列對(high scoring sequence pair, HSP)。T是指鄰近欄位得分閾值(Altschul等人，同上文)。這些初始的鄰近欄位命中用作起始搜索的種子，以發現含有它們的高得分序列對。該欄位命中沿著各序列向兩個方向延伸至累積比對得分不能增加。各方向的欄位命中的延伸在下列情況停止；累積比對得分從其最大獲得值降低X量; 由於一個或多個負得分殘基比對的累積，累積得分達到零或更低；或者，達到任一序列的末端。BLAST算法參數W、T以及X決定比對的敏感性和速度。BLAST程序使用11的欄位長 (W)，50 個比對(B)的 BL0SUM62 得分矩陣(參見 Henikoff 和 Henikoff (1992) Proc. Natl. Acad. Sci.USA 89 :10915-10919)、10的期望值(E) ,M = 5、N = 4以及兩條鏈的比較作為預設值。BLAST算法進行兩個序列之間相似性的統計分析,參見例如「Karlin和Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 :5873_5787」。由 BLAST 算法提供的一種對相似性的測量值是最小總概率(P(N))，其提供了兩條多核苷酸或胺基酸序列之間匹配偶然存在的概率讀數。例如，如果在第一和第二序列比較的最小總概率小於約1，優選小於約O. 1，更優選小於約O. 01，以及最優選小於約O. 001，則認為該序列與另一序列相似。可選地，UWGCG軟體包提供了可用於計算同源性(例如根據其預設設置使用)(Devereux等人(1984)Nucleic Acids Research 12，387-395)的 BESTFIT 程序。可以這樣理解本發明的多肽的變體還包括取代變體。取代變體優選包括使用一個或多個胺基酸取代相同數量的胺基酸，以及進行保守性胺基酸取代。例如，可使用具有相似特性的可選胺基酸取代胺基酸，所述可選胺基酸例如為另一鹼性胺基酸、另一酸性胺基酸、另一中性胺基酸、另一帶電荷胺基酸、另一親水性胺基酸、另一疏水性胺基酸、另一極性胺基酸、另一芳香族胺基酸或另一脂肪族胺基酸。可用於選擇適當的取代基的20種主要胺基酸的一些特性如下
權利要求
1.一種用於從含有IgG的樣品中分離Fab片段的方法，所述方法包括(a)使所述含有IgG的樣品與IdeS和Fe結合蛋白接觸；(b)從所述接觸過的樣品中分離所述IdeS和所述Fe結合蛋白；以及由此分離Fab片段；其中所述Fe結合蛋白是缺乏IgG內切糖苷酶活性的EndoS多肽。
2.根據權利要求I所述的方法，其中步驟(a)還包括使所述樣品與能夠結合IdeS多肽和Fe結合蛋白的磁性納米顆粒群接觸，且步驟(b)包括對所述接觸過的樣品進行磁場分離，和/或其中所述EndoS多肽包括(a)SEQ ID NO 2的胺基酸序列；(b)(a)的變體，該變體與SEQ ID NO 2的胺基酸序列具有至少50%同一性並具有IgG 結合活性；或(c)上述任一者的具有IgG結合活性的片段。
3.一種用於從含有IgG的樣品中分離Fe片段的方法，所述方法包括(a)使所述含有IgG的樣品與IdeS接觸；(b)從步驟(a)獲得的混合物中分離IdeS，由此分離Fab和Fe片段；(C)使所述Fab和Fe片段與Fe結合蛋白接觸，由此能夠形成Fe片段-Fe結合蛋白複合物；(d)從步驟(c)獲得的混合物分離所述Fe片段-Fe結合蛋白複合物；以及(e)從步驟(d)獲得的所述Fe片段-Fe結合蛋白複合物分離Fe片段；其中所述Fe結合蛋白是缺乏IgG內切糖苷酶活性的EndoS多肽。
4.根據權利要求3所述的方法，其中步驟(a)還包括使所述樣品與能夠結合IdeS的磁性納米顆粒群接觸，步驟(C)還包括使步驟(b)獲得的所述分離的Fab和Fe片段與能夠結合Fe結合蛋白的磁性納米顆粒群接觸，且步驟(b)和(d)包括對所述接觸過的樣品或分離的Fab和Fe片段分別進行磁場分離，和/或其中所述EndoS多肽包括(a)SEQ ID NO 2的胺基酸序列；(b)(a)的變體，該變體與SEQ ID NO 2的胺基酸序列具有至少50%同一性並具有IgG 結合活性；或(c)上述任一者的具有IgG結合活性的片段。
5.根據權利要求I至4中任一項所述的方法，所述方法在步驟(a)之前包括(i)使得所述含有IgG的樣品與所述EndoS多肽接觸，由此能夠形成IgG-EndoS多肽複合物；(ii)從所述接觸過的樣品中分離所述IgG-EndoS多肽複合物；(iii)從IgG-EndoS多肽複合物洗脫IgG，由此獲得含有IgG的樣品；以及其中，對在步驟(iii)獲得的含有IgG的樣品進行步驟(a)和(b)。
6.一種用於從含有IgG的樣品中分離IgG的方法，所述方法包括(a)使所述含有IgG的樣品與缺乏IgG內切糖苷酶活性的EndoS多肽接觸，由此能夠形成IgG-EndoS多肽複合物；(b)從所述接觸過的樣品中分離所述EndoS;以及由此獲得分離的IgG。
7.一種用於測定樣品中是否存在IgG的方法，所述方法包括(a)使所述樣品與缺乏IgG內切糖苷酶活性的EndoS多肽接觸，由此能夠形成 IgG-EndoS多肽複合物；(b)任選地，從所述接觸過的樣品中分離所述EndoS;以及(c)測定所述分離的EndoS是否與IgG結合，以及由此測定所述樣品中是否存在IgG。
8.根據權利要求6或7所述的方法，其中所述EndoS多肽包括(a)SEQ ID NO 2的胺基酸序列；(b)(a)的變體，該變體與SEQ ID NO 2的胺基酸序列具有至少50%同一性並具有IgG 結合活性；或(c)上述任一者的具有IgG結合活性的片段。
9.根據權利要求6至8中任一項所述的方法，其中所述分離或檢測到的IgG為天然的功能活性形式。
10.根據權利要求6至9中任一項所述的方法，其中所述分離或檢測到的IgG包括IgG 亞類IgGp IgG2、IgG3以及IgG4中的至少一種、優選兩種、三種或所有四種。
11.根據權利要求6至10中任一項所述的方法，其中步驟(a)還包括使所述樣品與能夠結合EndoS多肽的磁性納米顆粒群接觸，且步驟(b)包括對所述接觸過的樣品進行磁場分離。
12.—種評價含有IgG的樣品的糖基化狀態或功能特性的方法，所述方法包括取含有 IgG的樣品的第一小例樣和第二小例樣，其中，對所述第一小例樣實施根據權利要求6或8 至10中任一項所述的步驟(a)和(b)，除了使用可選的能夠結合非糖基化和/或變性的無活性IgG的IgG結合試劑取代EndoS多肽，對所述第二小例樣實施根據權利要求6或8至 10中任一項所述的步驟(a)和(b)，以及所述方法還包括(c)對所述第一小例樣中的與EndoS多肽結合的IgG的量和所述第二小例樣中的與可選的IgG結合試劑結合的IgG的量進行定量；以及(d)將(c)中測定的結合的IgG的量進行比較；由此，評價含有IgG的樣品的糖基化狀態或功能特性。
13.根據權利要求12所述的方法，其中所述可選的IgG結合試劑包括蛋白G和/或蛋白A。
14.一種用於分離IgG的Fab或Fe片段的試劑盒,所述試劑盒包含(a)IdeS；(b)Fc結合蛋白；以及(C)從樣品中分離所述IdeS和所述Fe結合蛋白的工具。
15.根據權利要求14所述的試劑盒，其中所述試劑盒還包括在權利要求2中定義的 EndoS多肽，和用於從樣品中分離所述EndoS多肽的工具，和/或其中所述Fe結合蛋白為蛋白H或在權利要求2中定義的所述EndoS多肽。
16.一種用於從含有IgG的樣品中分離IgG的試劑盒，所述試劑盒包含(a)在權利要求8中定義的EndoS多肽；以及任選地(b)用於從樣品中分離所述EndoS多肽的工具。
17.一種用於測定樣品中是否存在IgG的試劑盒，所述試劑盒包括(a)在權利要求8中定義的EndoS多肽；以及任選地(b)用於從樣品中分離所述EndoS多肽的工具。
18.一種用於評價含有IgG的樣品的糖基化狀態或功能特性的試劑盒，所述試劑盒包含(a)在權利要求8中定義的EndoS多肽；(b)可選的能夠結合變性和/或去糖基化的IgG的IgG結合試劑；(c)用於從樣品中分離所述EndoS多肽和所述可選的IgG結合試劑的工具。
19.根據權利要求18所述的試劑盒，其中所述可選的IgG結合試劑包括蛋白G和/或蛋白A和/或蛋白A/G。
20.根據權利要求14至19中任一項所述的試劑盒，其中所述用於從樣品中分離所述 EndoS多肽、所述可選的IgG結合試劑、所述IdeS或所述Fe結合蛋白的工具為磁性納米顆粒群，其中各群能夠結合指明的多肽/試劑/蛋白質的至少一者，以及任選地所述試劑盒還包括用於對所述樣品進行磁場分離的說明書。
全文摘要
本發明提供了用於用於解離Fcgamma-受體-IgG複合物及純化與檢測IgG的方法和試劑盒。本發明的用於從含有IgG的樣品中分離Fab片段的方法包括(a)使所述含有IgG的樣品與IdeS和Fc結合蛋白接觸；(b)從所述接觸過的樣品中分離所述IdeS和所述Fc結合蛋白；以及由此分離Fab片段；其中所述Fc結合蛋白是缺乏IgG內切糖苷酶活性的EndoS多肽。
文檔編號G01N33/53GK102584989SQ20121002064
公開日2012年7月18日 申請日期2008年9月11日 優先權日2007年9月14日
發明者安德斯·奧琳, 瑪利亞·奧霍恩, 福克·尼莫雅恩, 馬蒂亞斯·科林 申請人:季諾維斯公司