一種提取純化構樹黃酮醇a的方法

2023-05-21 05:56:56

一種提取純化構樹黃酮醇a的方法
【專利摘要】本發明公開了一種提取純化構樹黃酮醇A的方法，包括以下步驟：（1）以構樹根皮為原料，進行乾燥、粉碎，採用超臨界二氧化碳技術萃取構樹根皮中的油脂類物質；（2）殘渣加丙酮溶液進行超聲循環提取；（3）提取液濃縮後上大孔樹脂柱，先用水和40-60%乙醇溶液洗脫，再用85-95%乙醇溶液洗脫，收集85-95%乙醇洗脫液；（4）洗脫液濃縮，上矽膠短粗柱，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液為洗脫劑，收集洗脫液，濃縮，放置結晶；（5）分出結晶，丙酮-正己烷混合溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍乾燥即得構樹黃酮醇A。本發明方法操作簡單，可實現規模化生產。
【專利說明】一種提取純化構樹黃酮醇A的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於天然藥物領域，具體而言，本發明涉及一種提取純化構樹黃酮醇A的方法。
【背景技術】
[0002]構樹黃酮醇A (Broussoflavonol A),是一種黃酮醇類化合物,分子式:C25H3tlO6,分子量:426.51,黃色無定形粉末(丙酮-己燒)，mp238_240°C。主要存在於桑科(Moraceae)構樹的根皮中。
[0003]現代藥理研究表明，構樹黃酮醇A能抑制脂質氧化，在鼠腦勻漿中，抑制由Fe2+引起的硫巴比妥酸反應物生成，其IC5tl為2.ΙμΜ;抑制大鼠血管平滑肌細胞(VSMC)增殖，使由下列三物刺激[3Η]-胸苷與DNA摻合百分率降為:胎牛血清(FCS，10%), 39.5% ；ADP (IO μ Μ)，67% ；5-ΗΤ (10 μ Μ)，19% ;抗血小板聚集，抑制花生四烯酸誘導的血小板聚集，其 IC50 為 86.7 μ M0
[0004]經文獻檢索，尚無適用於高純度構樹黃酮醇A的提取純化方法報導。

【發明內容】

[0005]本發明要解決的技術問題是提供一種適用於規模化生產、產品純度高的提取純化構樹黃酮醇A的方法。
[0006]為解決上述技術問題，本發明採用的技術方案如下:
(1)以構樹根皮為原料，進行乾燥、粉碎，採用超臨界二氧化碳技術萃取構樹根皮中的油脂類物質；
(2)殘渣加5-10倍(V/W)75-95%丙酮溶液進行超聲循環提取1_3次，每次l_2h，合併提取液；
(3)提取液濃縮後上大孔樹脂柱，先用水和40-60%乙醇溶液洗脫，再用85-95%乙醇溶液洗脫，收集85-95%乙醇洗脫液；
(4)洗脫液濃縮，上矽膠短粗柱，柱徑高比為1:4-5，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液為洗脫劑，收集洗脫液，濃縮，放置結晶；
(5)分出結晶，丙酮-正己烷混合溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍乾燥即得構樹黃酮醇A。
[0007]所述步驟(I)中超臨界二氧化碳萃取溫度為35_50°C，壓力為20_32MPa，萃取時間為 0.5-lh。
[0008]所述步驟(3)中大孔樹脂可選HPD100、ADS-17、D101或HZ801型。
[0009]所述步驟(4)中乙酸乙酯-丙酮混合溶液體積比為1:5-15。
[0010]所述步驟(5)中丙酮-正己烷混合溶劑體積比為1-1.5:1。
[0011]綜上所述，本發明存在以下優點:
(I)採用超臨界二氧化碳萃取技術脫除油脂類物質，快速、高效。
[0012](2)採用超聲循環提取的方法，提取效率高。[0013](3)採用大孔樹脂和矽膠短粗柱層析後進行結晶，，從而獲得含量98%以上的構樹黃酮醇A，成本低，分離效果好。
[0014](4)本發明所用試劑乙酸乙酯、丙酮等，可替代通常柱層析採用的氯仿、甲醇，降低毒性和汙染。
[0015]下面將結合【具體實施方式】對本發明做進一步闡述，但本發明要求保護的範圍並不局限於下列實施例。
【具體實施方式】
[0016]實施例1:
取構樹根皮粗粉500g，採用超臨界二氧化碳技術萃取構樹根皮中的油脂類物質，萃取溫度為35°C，壓力為20MPa，萃取時間為lh，殘渣加10倍(V/W) 90%丙酮溶液進行超聲循環提取I次，每次lh，合併提取液，濃縮後上HPD100型大孔樹脂柱，先用水和40%乙醇溶液洗脫，再用85%乙醇溶液洗脫，收集85%乙醇洗脫液，濃縮，與100-200目的矽膠按重量比I: I拌勻、陰乾，上矽膠短粗柱，柱徑高比為1: 5，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液為洗脫劑，依次按1: 5、1:10、1:15體積比進行洗脫，收集含構樹黃酮醇A的洗脫液，回收試劑，將所得構樹黃酮醇A濃縮液置於結晶罐中靜置20小時使其結晶，過濾，分出結晶，採用丙酮-正己烷(1.5:1)混合溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍乾燥即得構樹黃酮醇Al.1A，純度為97.4%。
[0017]實施例2:
取構樹根皮粗粉500g，採用超臨界二氧化碳技術萃取構樹根皮中的油脂類物質，萃取溫度為40°C，壓力為25MPa，萃取時間為0.5h，殘渣加7倍(V/W) 80%丙酮溶液進行超聲循環提取2次，每次lh，合併提取液，濃縮後上HZ801型大孔樹脂柱，先用水和45%乙醇溶液洗脫，再用90%乙醇溶液洗脫，收集90%乙醇洗脫液，濃縮，與100-200目的矽膠按重量比1:1拌勻、陰乾，上矽膠短粗柱，柱徑高比為1: 4，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液為洗脫劑，依次按1: 5、1: 9、1:13體積比進行洗脫，收集含構樹黃酮醇A的洗脫液，回收試劑，將所得構樹黃酮醇A濃縮液置於結晶罐中靜置24小時使其結晶，過濾，分出結晶，採用丙酮-正己烷(1:1)混合溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍乾燥即得構樹黃酮醇Al.3A，純度為98.2%。
[0018]實施例3:
取構樹根皮粗粉500A，採用超臨界二氧化碳技術萃取構樹根皮中的油脂類物質，萃取溫度為45°C，壓力為28MPa，萃取時間為0.5h，殘渣加10倍(V/W) 90%丙酮溶液進行超聲循環提取I次，每次2h，合併提取液，濃縮後上DlOl型大孔樹脂柱，先用水和60%乙醇溶液洗脫，再用85%乙醇溶液洗脫，收集85%乙醇洗脫液，濃縮，與100-200目的矽膠按重量比I: I拌勻、陰乾，上矽膠短粗柱，柱徑高比為1: 5，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液為洗脫劑，依次按1: 5、1:10、1:15體積比進行洗脫，收集含構樹黃酮醇A的洗脫液，回收試劑，將所得構樹黃酮醇A濃縮液置於結晶罐中靜置12小時使其結晶，過濾，分出結晶，採用丙酮-正己烷(1.5:1)混合溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍乾燥即得構樹黃酮醇Al.0A，純度為98.6%。
[0019]實施例4:
取構樹根皮粗粉lkA，採用超臨界二氧化碳技術萃取構樹根皮中的油脂類物質，萃取溫度為50°C，壓力為32MPa，萃取時間為0.5h，殘渣加6倍(V/W) 70%丙酮溶液進行超聲循環提取3次，每次lh，合併提取液，濃縮後上ADS-17型大孔樹脂柱，先用水和55%乙醇溶液洗脫，再用95%乙醇溶液洗脫，收集95%乙醇洗脫液，濃縮，與100-200目的矽膠按重量比
I: I拌勻、陰乾，上矽膠短粗柱，柱徑高比為1: 3，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液為洗脫劑，依次按1: 6、1: 11、1:14體積比進行洗脫，收集含構樹黃酮醇A的洗脫液，回收試劑，將所得構樹黃酮醇A濃縮液置於結晶罐中靜置18小時使其結晶，過濾，分出結晶，採用丙酮-正己烷(1:1)混合溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍乾燥即得構樹黃酮醇A2.0A,純度為98.9%。
[0020]實施例5:
取構樹根皮粗粉5kA，採用超臨界二氧化碳技術萃取構樹根皮中的油脂類物質，萃取溫度為38°C，壓力為30MPa，萃取時間為0.5h，殘渣加10倍(V/W) 80%丙酮溶液進行超聲循環提取3次，每次2h，合併提取液，濃縮後上HPD100型大孔樹脂柱，先用水和50%乙醇溶液洗脫，再用90%乙醇溶液洗脫，收集90%乙醇洗脫液，濃縮，與100-200目的矽膠按重量比
I: I拌勻、陰乾，上 矽膠短粗柱，柱徑高比為1: 5，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液為洗脫劑，依次按1: 5、1: 11、1:15體積比進行洗脫，收集含構樹黃酮醇A的洗脫液，回收試劑，將所得構樹黃酮醇A濃縮液置於結晶罐中靜置12小時使其結晶，過濾，分出結晶，採用丙酮-正己烷(1:1)混合溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍乾燥即得構樹黃酮醇AS.3A，純度為99.1%。
【權利要求】
1.一種提取純化構樹黃酮醇A的方法，其特徵在於按如下工藝步驟進行: (1)以構樹根皮為原料，進行乾燥、粉碎，採用超臨界二氧化碳技術萃取構樹根皮中的油脂類物質； (2)殘渣加5-10倍(V/W)75-95%丙酮溶液進行超聲循環提取1_3次，每次l_2h，合併提取液； (3)提取液濃縮後上大孔樹脂柱，先用水和40-60%乙醇溶液洗脫，再用85-95%乙醇溶液洗脫，收集85-95%乙醇洗脫液； (4)洗脫液濃縮，上矽膠短粗柱，柱徑高比為1:4-5，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液為洗脫劑，收集洗脫液，濃縮，放置結晶； (5)分出結晶，丙酮-正己烷混合溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍乾燥即得構樹黃酮醇A。
2.如權利要求1所述的一種提取純化構樹黃酮醇A的方法，其特徵在於，所述步驟(I)中超臨界二氧化碳萃取溫度為35-50°C，壓力為20-32MPa，萃取時間為0.5_lh。
3.如權利要求1所述的一種提取純化構樹黃酮醇A的方法，其特徵在於，所述步驟(3)中大孔樹脂可選HPD100、ADS-17、DlOl或HZ801型。
4.如權利要求1所述的一種提取純化構樹黃酮醇A的方法，其特徵在於，所述步驟(4)中乙酸乙酯-丙酮混合溶液體積比為1:5-15。
5.如權利要求1所述的一種提取純化構樹黃酮醇A的方法，其特徵在於，所述步驟(5)中丙酮-正己烷混合溶劑體積比為1-1.5:1。
【文檔編號】C07D493/04GK103450135SQ201310349997
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年8月13日 優先權日:2013年8月13日
【發明者】張金芳, 萬冬梅 申請人:南京標科生物科技有限公司