肝素銀的製備及其應用的製作方法
2023-04-29 02:41:11
專利名稱：肝素銀的製備及其應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫療技術領域，涉及肝素銀鹽的製備方法及使用肝素銀製備治療燒燙傷用途的藥物。
背景技術：
肝素來源於動物組織，是一類硫酸糖胺聚糖，結構複雜，其基本骨架是由糖醛酸和葡萄糖胺以糖苷鍵連接起來的重複二糖單位組成的多糖鏈，其中糖醛酸有艾杜糖醛酸和葡萄糖醛酸，各單糖殘基硫酸化和乙醯化情況變化較多，有N-硫酸基、N-乙醯基和不同位置的O-硫酸基(酯)。未分級肝素分子量3000～30000道爾頓，平均分子量12000～15000道爾頓，分子量為3000～8000道爾頓的產品稱為低分子肝素。抗凝血和抗血栓是肝素最主要的生理活性，同時有引起血小板減少和出血的副作用，低分子肝素由於抗凝血酶活性降低，在抗血栓形成的同時減少了出血的危險，另外它還有生物利用度高，體內半衰期長等優點，成為目前肝素產品開發的熱點。目前上市的肝素產品為肝素鈉和肝素鈣，有注射液、乳膏和口含片等，其它的肝素鹽臨床還未見使用。肝素應用於臨床已有近70年的歷史，主要用於抗凝血、防治血栓性疾病及改善局部微循環。動物實驗證明，肝素應用於燒傷治療可以緩解疼痛、抗凝、抑制炎症反應、促進血管再生、恢復局部供血，並能影響膠原的合成和降解，創面癒合後皮膚光滑、減少瘢痕和瘢痕攣縮，還能保護腸道屏障功能，保護及改善肺和腎的功能，提高肌體免疫力，預防感染。眾所周知，銀鹽應用於皮膚創面具有收斂作用，可使創面乾燥、結痂和促進癒合。肝素銀應用於燒燙傷創面，集肝素和銀鹽的作用於一體，可明顯加快癒合速度，減少感染和炎症發生，改善創面癒合質量。肝素最主要的不良反應是出血，有活動性出血及潰瘍、有肝素過敏史或血小板減少、有出血體質等情況為肝素的禁忌症。實驗證明，大劑量肝素用於燒傷後早期(缺血、酸中毒期)，每天使用前測凝血時間15～30min為安全範圍，燒傷後早期採用局部用藥直到創面癒合，未發現明顯的抗凝陽性結果。目前，臨床皮膚使用的肝素為鈉鹽，主要用於淺表性靜脈炎、靜脈曲張性靜脈炎、靜脈曲張和硬化術後的輔助治療、血腫、挫傷、腫脹和水腫、血栓性靜脈炎，由靜脈輸液和注射引起的滲出、軟組織挫傷、凍瘡、皺裂、溼疹、抑制疤痕形成和軟化疤痕。然而，肝素銀鹽的製備方法和應用，以及用於治療燒燙傷的肝素銀的製劑還未見資料公開報導。
發明內容
本發明的目的是提供一種肝素銀鹽的製備方法，和使用該方法製得的肝素銀製備治療燒燙傷藥物的應用。經動物試驗證明，該肝素銀用於燒燙傷的治療，具有明顯加快癒合速度、減少感染和炎症發生、改善創面癒合質量等作用。
本發明中肝素銀的製備方法如下①將可溶性肝素鹽溶於去離子水中，製得肝素鹽溶液；②在步驟①得到的溶液中加入硝酸銀，攪拌溶解；③將步驟②得到的溶液進行減壓濃縮，使肝素銀髮生沉澱，過濾，收集沉澱；④將步驟③得到的沉澱溶解於去離子水中，採用透析或超濾的方法進行純化；⑤將步驟④得到的溶液進行減壓濃縮，製得肝素銀濃縮液；⑥將步驟⑤得到的濃縮液進行冷凍乾燥，或加入乙醇脫水，收集沉澱，常規減壓乾燥製得成品。
上述肝素銀的製備方法中，可溶性肝素鹽可以使用肝素鈉、肝素鉀、肝素鈣或肝素鋅。
上述肝素銀的製備方法中，硝酸銀的加入量可以是溶液中可溶性肝素鹽重量的150％～600％。
上述肝素銀的製備方法中，步驟⑥中可以用丙酮或甲醇代替乙醇對濃縮液進行脫水。
肝素鹽的製備和提取一般使用乙醇、甲醇、丙酮等有機溶劑進行沉澱、脫水和乾燥，在本發明肝素銀的製備方法中，反應原料採用溶解度較高的硝酸銀，在反應液中可以提供足夠多的游離銀離子，有利於肝素銀的生成和沉澱，同時由於反應液中存在大量的硝酸根離子，加入乙醇、甲醇、丙酮等有機溶劑則生成易爆的雷酸， 因此不能直接使用它們進行沉澱和脫水，本發明採用濃縮方法，使溶解度較小的肝素銀沉澱，過濾，濾液回收可以重複利用，所得沉澱再溶於去離子水中，使用透析或超濾的方法，除去沉澱中的雜質(包括殘餘的鈉離子、吸附的銀離子和硝酸根離子)之後，再次減壓濃縮，使用乙醇脫水或冷凍乾燥。
採用本發明方法製備生產的肝素銀，產品純度高、雜質含量少，其中銀離子含量25％～45％，鈉離子含量小於0.5％，硝酸根含量小於100ppm。
採用本發明製備的肝素銀經粉碎、滅菌之後，可以直接用於燒燙傷創面，也可以與其它藥物和常用輔料組方，製成燒燙傷藥物製劑施用於燒燙傷創面，達到加快癒合速度、減少感染和炎症發生、改善創面癒合質量等目的。
具體實施例方式實施例1將0.3公斤肝素鈉[平均分子量小於8000Da的重量為60～70％，按中國藥監局試行標準WS-487(X-423)-2001規定的方法，照羊血漿法測定抗凝(FIIa)效價，照COATEST試劑盒法測定抗FXa效價，抗FXa活性為抗FIIa活性的2.3倍。]溶於10升去離子水中溶解，以下步驟在避光條件下操作加入1.2公斤硝酸銀，室溫攪拌反應2小時，35℃～40℃減壓濃縮至反應液體積約3升，用0.8微米的微孔濾膜過濾反應液，濾液保留用於回收，沉澱物溶解於0.3升去離子水中，攪拌溶解，用截斷分子量3000的透析膜，去離子水流水透析24小時以上，再減壓濃縮至溶液體積約0.2升，冷凍乾燥後即得產物。將產物粉碎，過200目篩，用透氣紙包裝，環氧乙烷滅菌後，再用雙層塑膠袋包裝，得成品。
實施例2將0.3公斤肝素鈉(平均分子量12000～15000Da，按中國藥典2000年版二部附錄XIID肝素生物檢定法測定，效價為156單位/毫克。)溶於10升去離子水中溶解，以下步驟在避光條件下操作加入1.1公斤硝酸銀，室溫攪拌反應2小時，35℃～40℃減壓濃縮至反應液體積約3升，用0.8微米的微孔濾膜過濾反應液，濾液保留用於回收，沉澱物溶解於0.5升去離子水中，攪拌溶解，使用截斷分子量2000的超濾膜進行超濾，超濾過程中溶液體積減少至0.4升時，補加去離子水0.1升，補加3次後超濾至溶液體積約0.3升，再減壓濃縮至溶液體積約0.2升，3.5倍乙醇脫水，過濾，沉澱於35℃～40℃真空乾燥，即得產物。將產物於無菌環境用雙層塑膠袋包裝，得成品。
肝素銀應用於燒燙傷治療的動物實驗①增生性瘢痕動物模型在紐西蘭白兔兔耳腹面手術切除2cm×5cm全層皮膚缺損創面，作長期瘢痕模型〔具體操作方法參考Morris(1997)Acute and chronic animal models for excessive dermalscarringquantitative studies〕。對照組創面用磺胺嘧啶銀散劑外敷包紮至痊癒，換藥1次/周，試驗組創面用肝素銀散劑(本發明實施例1)外敷包紮至痊癒，亦換藥1次/周。術後12個月內觀察創面癒合情況，癒合標準為痂殼小於創面的5％。取瘢痕組織作Masson染色，光學顯微鏡下觀察並測定創面上皮化後的真皮厚度(Da)及鄰近正常組織中的真皮厚度(Db)，計算瘢痕指數＝(Da-Db)/Db。結果見下表。
*與對照組比較，差異有顯著性(p＜0.05)。
②燒傷動物模型大鼠5％水合氯醛腹腔麻醉後背部脫毛，90℃水蒸氣燙10秒，造成20％面積的深二度燙傷〔具體操作方法參考陸樹良主編(2003)燒傷創面癒合機制與新技術〕，傷後1小時腹腔注射生理鹽水1mL補充血容量。對照組創面撒塗磺胺嘧啶銀散劑至痊癒，厚度0.5～1mm，換藥1次/日，試驗組創面撒塗肝素銀散劑(本發明實施例1)至痊癒，厚度0.5～1mm，亦換藥1次/日。傷後間隔時間取樣，用重量法測定創面組織溼重(Ga)和經80℃烘72小時的組織乾重(Gb)，計算燒傷創面含水量W＝(Ga-Gb)/Ga×100％，W值表示水腫的程度；用氯胺T氧化法〔參考許志勤(1990)組織羥脯氨酸測定方法的改進〕測定創面羥脯氨酸含量，羥脯氨酸含量反映創面膠原的含量。結果見下表。
#與對照組比較，差異有顯著性(p＜0.05)。
*與正常組比較，差異有顯著性(p＜0.01)。
權利要求
1.一種肝素銀鹽的製備方法，其特徵在於，該方法包括以下步驟①將可溶性肝素鹽溶於去離子水中，製得肝素鹽溶液；②在步驟①得到的溶液中加入硝酸銀，攪拌溶解；③將步驟②得到的溶液進行減壓濃縮，使肝素銀髮生沉澱，過濾，收集沉澱；④將步驟③得到的沉澱溶解於去離子水中，採用透析或超濾的方法進行純化；⑤將步驟④得到的溶液進行減壓濃縮，製得肝素銀濃縮液；⑥將步驟⑤得到的濃縮液進行冷凍乾燥，或加入乙醇脫水，收集沉澱，常規減壓乾燥製得成品。
2.權利要求1所述的方法，其特徵在於，在所述的步驟①中，所述可溶性肝素鹽為肝素鈉、肝素鉀、肝素鈣或肝素鋅。
3.權利要求1或2所述的方法，其特徵在於，在所述的步驟②中加入硝酸銀的量為溶液中可溶性肝素鹽重量的150％～600％。
4.權利要求1或2所述的方法，其特徵在於，在所述步驟⑥中，用丙酮或甲醇代替乙醇對濃縮液進行脫水。
5.權利要求3所述的方法，其特徵在於，在所述步驟⑥中，用丙酮或甲醇代替乙醇對濃縮液進行脫水。
6.上述任一一項權利要所述製備方法製得的肝素銀。
7.權利要求6所述肝素銀在製備治療燒燙傷藥物中的應用。
全文摘要
本發明包括一種肝素銀鹽的製備方法及使用肝素銀製備治療燒燙傷用途的藥物。肝素銀製備方法在水溶液使用硝酸銀對可溶性肝素鹽進行離子置換，經濃縮，過濾，純化，乾燥等步驟得產品，其中銀離子含量25％～45％，鈉離子含量小於0.5％，硝酸根含量小於100ppm。應用肝素銀製備治療燒燙傷的藥物，經動物試驗證明，其具有加快傷口癒合和減少瘢痕形成的作用。
文檔編號A61P17/02GK1673236SQ20051004325
公開日2005年9月28日 申請日期2005年4月20日 優先權日2005年4月20日
發明者凌沛學, 賀豔麗, 陳建英, 汪敏, 龐曉陽, 王雷 申請人:凌沛學