治療胃癌的含補骨脂素的中藥組合物及其製備方法和應用的製作方法
2023-04-29 11:49:56 1
專利名稱：治療胃癌的含補骨脂素的中藥組合物及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及中藥領域，具體涉及一種治療胃癌的中藥組合物以及該中藥組合物的製備方法和應用。
背景技術：
胃癌是世界範圍內最常見的惡性腫瘤之一。據2000年資料統計，全球每年新發胃癌87萬例，佔所有新發癌症病例的9 %，僅次於肺癌、乳腺癌和腸癌之後，居第4位。每年約有64萬人因胃癌死亡，居癌症病因的第2位，亞洲、南美等國家及前蘇聯地區是胃癌高發區(徐飈，王建明。胃癌流行病學研究[J]。中華腫瘤防治雜誌，2006，13 (I):1-7。)。單純手術難以根治，化療雖在綜合治療中發揮很大的作用，但其效果仍不理想，而且副作用較多，年老體弱者難以堅持。而我國傳統醫學，博大精深，在腫瘤的治療方面已不僅是西醫的補充治療而已。實踐證明，中醫藥在腫瘤的治療的全過程都可發揮積極作用。中國抗癌協會臨床腫瘤學協作中心(CSCO)也非常強調中西醫結合和祖國醫學的發展在腫瘤學方面的地位(儲大同。腫瘤中醫藥治療評價標準的新共識及其啟迪[J]。中國處方藥，2004，8 (29):42— 4)。現代藥理學證實，補骨脂的有效成分補骨脂素，有良好的體外抑瘤作用。補骨脂素對多種小鼠肉瘤、長氏腹水瘤、肝癌等有抑制作用(吳少華。補骨脂素體內外抗癌活性的實驗研究[J]。中國中藥雜誌，1998，23(5):303-305)。我們前期體外實驗也證實:補骨脂素對胃癌SGC-7901細胞增殖有明顯的抑制作用。白蘧仁是臨床常用的芳香化溼藥，有良好的行氣散結，引藥直達病所的功效。而白豆蘧果實含有大量揮髮油，揮髮油的主要成分為桉油精(相對含量75.16%)(張耀華，郭國寧，蔡冰。白豆蘧揮髮油的Ge / Ms分析及在捲菸中的應用[J]。中國菸草科學，2009，30 (3):24-27)。
補骨脂為豆科植物補骨脂的果實。性溫，味辛、苦。有補腎助陽，納氣止瀉之功能，是臨床常用溫陽藥之一。現代醫學研究證實，補骨脂有良好的抗腫瘤作用，譚敏等(譚敏，孫靜，賓曉農等。補骨脂素對乳腺癌MCF-7細胞的體外抗腫瘤作用[J]。廣東醫學，2008，29
(11):1817-1819[5])證實補骨脂素對人乳腺癌MCF-7細胞有明顯體外抑制作用，其抑制機制與影響細胞周期及誘導細胞凋亡有關。Whelan LC等(Whelan LC, Ryan MF.Ethanolicextracts of Euphorbia and other ethnobotanical species as inhibitors of humantumour cell growth [J].Phytomedicine, 2003, 10 (I):53-58.)研究發現，補骨脂對HEp_2、A549細胞株有較強的細胞毒性作用。補骨脂素加UVA(長波紫外線)可抑制多種白血病細胞株的生長，並誘導其凋亡(陳楠楠，黃世林，張德傑。補骨脂素加長波紫外線對人白血病細胞株NB4、HL-60、K562作用的研究[J]。中國中醫急症，2007，16 (4) =444-446)0白豆蘧為姜科植物白豆蘧或爪哇白豆蘧的乾燥成熟果實。該藥是臨床常用的芳香化溼藥，其味辛，性微溫。有化溼行氣，溫中止嘔的功效。揚州大學的陳平教授對此進行了一系列研究，認為豆蘧提取物對胃癌有一定的抑制作用(趙偉，苗毅，陳平。豆蘧提取物對人胃癌細胞裸鼠移植瘤的影響的實驗研究[J]。實用臨床醫藥雜誌，2009，13(6):26-29 ;石磊，陳平，趙偉。豆蘧提取物對人胃癌裸鼠移植瘤生長及血管生成的影響[J]。腫瘤學雜誌，2010，(10): 776-778)。
發明內容
發明目的:為了克服現有技術中存在的不足，本發明所要解決的目的是提供一種含有補骨脂素的中藥組合物及其製備方法和應用。技術方案:為了解決上述目的，本發明所採用的技術方案為:一種含補骨脂素的中藥組合物，所述中藥組合物含有以下重量百分比的組分:96.77%的白蘧仁揮髮油，3.23%補骨脂素。所述的含補骨脂素的中藥組合物的製備方法包括以下步驟:(I)製備補骨脂素:a、取補骨脂飲片打粗粉，將95%乙醇溶液多次浸潰12-24小時，濾過，合併各次浸潰液，並去除浸潰液 中乙醇得到回收液，將回收液放置過夜，傾去上清液，得棕黃色粘稠物；b、將粘稠物加4倍甲醇回流使其溶解，趁熱抽濾，濾液靜置，放冷析晶，得補骨脂素粗品，C、取粗品加甲醇溶解，加活性炭，於水浴煮沸5min左右，趁熱抽濾，放冷析晶，濾
出結晶。d、將上述步驟b-c過程進行純化2至3次，即得補骨脂素；(2)製備白蘧仁揮髮油:取白蘧仁飲片打粗粉，加水浸泡I 2小時，其中加水量為白蘧仁粗粉重量的5至20倍量；再加熱蒸餾，收集揮發液，揮發液二次蒸餾，得到含少量水分的白蘧仁揮髮油，加入無水硫酸鈉振搖，靜置，濾去硫酸鈉，即得白蘧仁揮髮油；(3)取通過步驟(I)得到的補骨脂素溶解於生理鹽水中得到補骨脂素溶液0.5% ；(4)取通過步驟(2)得到的白蘧仁揮髮油15%加入補骨脂素溶液中即得到所述中藥組合物。所述步驟(2)中的加水量為白蘧仁粗粉重量的20倍。所述步驟(3)中的補骨脂素溶液中的補骨脂素質量濃度為0.5%。所述步驟(4)中的補骨脂素溶液中的白蘧仁揮髮油質量濃度為15%。所述的含補骨脂素的中藥組合物在製備抗胃癌藥物中的應用。所述的藥物包括治療胃癌的含補骨脂素的中藥組合物與藥學上可接受的載體結合製成的各種劑型。上述劑型包括合劑，或者糖漿劑，或者片劑，或者膠囊劑，或者顆粒劑。所述的含補骨脂素的中藥組合物在抑制腫瘤細胞藥物中的應用。有益效果:與現有技術相比，本發明的優點在於:補骨脂素有較好的抑制小鼠實體瘤生長的作用，白蘧仁揮髮油對抑制腫瘤生長無明顯作用。補骨脂素與白蘧仁揮髮油聯用有協同抑瘤作用，當補骨脂素與白蘧仁油質量為1:30配成的含補骨脂素中藥組合物可顯著抑制小鼠腫瘤的生長。從中醫理論分析，考慮白蘧仁為芳香化溼藥物，香氣走竄，可助溫藥補骨脂之藥效。兩藥配伍，共收腫瘤治療之良效。
具體實施例方式以下通過實驗例來進一步闡述本發明所述中藥的有益效果。
1、實驗材料1.1細胞及實驗動物BALB/c裸鼠(由上海斯萊克實驗動物有限責任公司，合格證號:SCXK (滬)，2007-0005)30隻，雌雄各半，4周齡，體重18_22g ;SPF級環境下飼養，室內定期進行紫外線照射，鼠籠、墊料、飲水均嚴格消毒。1.2實驗藥物及配製:1.2.1實驗藥物:5-Fu (5-氟尿嘧啶)注射液:25mg/ml，由天津金耀胺基酸有限公司提供，批號:1011092 ；補骨脂素溶液:5mg/ml，江蘇省中醫院製劑部提供，批號:110726 ；白蘧仁揮髮油:10g/ml，江蘇省中醫院製劑部提供，批號:101109 ；1.2.2藥物配製:補骨脂素溶液:取40mg補骨脂素溶解於8ml生理鹽水中，配成5mg/ml溶液，現配現用。白蘧仁揮髮油溶液:取120ul白蘧仁揮髮油加入8ml生理鹽水中，配成150mg/ml溶液，現配現用。含補骨脂素中藥組合物(補骨脂素複方組):將120ul濃度為10g/ml濃度為的白蘧仁揮髮油加入8ml濃度為5mg/ml 補骨脂素溶液中，配成155mg/ml的補骨脂素複方溶液,現配現用。5-FU溶液:取Iml5-Fu注射液加入9ml生理鹽水中，配成25mg/ml溶液，現配現用。1.3試劑及設備1640培養液購自Gibco公司；小牛血清購自杭州四季青公司；胰蛋白酶購自Biosharp公司；SPF動物房:南京中醫藥大學實驗中心SPF動物房。2、建立模型人胃癌SGC7901細胞用含10%小牛血清的1640培養液常規培養，消化並重懸細胞，每隻裸鼠接種0.2ml細胞懸液，5 X 106個細胞。約3周後裸鼠移植瘤增長約2cm3大小，在無菌條件下，自裸鼠腋部皮下剝取腫瘤組織，剔除纖維包膜，選取生長良好的淡紅色、魚肉狀瘤組織，置於生理鹽水中切成Imm3大小的組織塊備用。裸鼠術前常規消毒，用帶有2個組織塊的穿刺針刺入裸鼠左側腋下，將組織塊推入。18天後，裸鼠左側腋下出現直徑為
的硬結,造模成功。3.動物分組、給藥將30隻裸鼠隨機分為:陰性對照組(NS組)、陽性對照組(5-FU組)、補骨脂素組、白蘧仁揮髮油組、補骨脂素複方組，每組6隻。陰性對照組(NS組)，每天灌服生理鹽水
0.2ml/10g ;陽性對照組(5-FU組)，按照25mg/kg劑量給藥，隔日一次，灌胃0.2ml/10g ;補骨脂素組:100mg/kg,0.2ml/10g, I/日;白蘧仁揮髮油組:3g/kg, 0.2ml/10g, I/日；補骨脂素複方組:155mg/ml，l/日。連續用藥10d，次日處死荷瘤裸鼠，眼眶取血，剖瘤稱重。4、抗腫瘤效果觀察4.1觀察項目:每日觀察裸鼠的飲食、排便、排尿、活動狀態，移植瘤生長情況；出瘤後以遊標卡尺測量瘤體的最長徑和最短徑，每周測量2次，根據Steel公式(BoehmT，Folkman Jj Browder Τ，et al.Antiangiogenic therapy of experimental cancer doesnot induce acquired drug resistance.Nature，1997，390 (6658): 404-407.)計算瘤體體積(V)=(長徑X短徑2)/2 (cm3)，計算出腫瘤體積，同時繪製腫瘤生長曲線。於實驗的第11日處死全部動物，解剖剝離瘤體， 稱瘤質量和體積。4.2根據腫瘤體積及瘤體重量計算腫瘤抑制率:測量瘤體體積計算腫瘤抑制率:抑制率(％) = (1-V實驗組/V陰性對照組)X 100%測量瘤體重量計算腫瘤抑制率:抑制率(％)= ( 1-給藥組平均瘤重/對照組平均瘤重)X 100%ο4.3判斷標準:腫瘤抑制率>30%，經統計學處理有明顯差異者為有抗腫瘤作用(中華人民共和國衛生部藥政局中藥新藥研究指南，1994，104-105)。5、統計處理實驗數據均以(P±s)表示，採用SPSS13.0統計軟體進行統計學處理，方差齊性檢
驗後，組間比較用t檢驗。6、實驗結果6.1裸鼠生長狀況各組裸鼠皮下移植瘤成功率均為100%，瘤塊種植後約I周，皮下明顯可見腫瘤，直徑約2 4mm, 15天左右瘤體直徑為進入實驗。以後瘤體繼續增大,各組移植瘤生長不一，大小不等，至處死前，各組均未見死亡，裸鼠進食、排尿、排便均正常，活動敏捷，各組裸鼠均未出現明顯消瘦。6.2中藥對SGC7901細胞裸鼠皮下移植瘤體積的影響對造模成功的裸鼠進行分組，比較各組的腫瘤體積大小無差異(P > 0.05)。治療後補骨脂素複方組可抑制腫瘤體積(p〈0.05)(見表1、表2)。通過腫瘤生長曲線，當陰性對照組裸鼠腫瘤進入快速生長期的時候，補骨脂複方荷瘤鼠腫瘤體積的增大的速度明顯較陰性對照組慢。其中表格中η是指小鼠的只數。表I補骨脂素複方對裸鼠皮下移植瘤體積的影響(mm3X±s)
權利要求
1.一種治療胃癌的含補骨脂素的中藥組合物，其特徵在於所述中藥組合物含有以下重量百分比的組分50%-96. 77%的白蘧仁揮髮油，3. 23%-50%補骨脂素。
2.根據權利要求I所述的治療胃癌的含補骨脂素的中藥組合物，其特徵在於所述中藥組合物含有以下重量百分比的組分96. 77%的白蘧仁揮髮油，3. 23%補骨脂素。
3.權利要求I所述的治療胃癌的含補骨脂素的中藥組合物的製備方法，其特徵在於該方法包括以下步驟 (1)製備補骨脂素 a、取補骨脂飲片打粗粉，將體積濃度為50%-95%乙醇溶液多次浸潰12-24小時，濾過，合併各次浸潰液，並去除浸潰液中乙醇得到回收液，將回收液放置過夜，傾去上清液，得棕黃色粘桐物； b、將粘稠物加甲醇回流使其溶解，趁熱抽濾，濾液靜置，放冷析晶，得補骨脂素粗品，其中所述甲醇的加入量為粘稠物體積的1-6倍； c、取粗品加甲醇溶解，加活性炭，於水浴煮沸5min,趁熱抽濾,放冷析晶，濾出結晶； d、將上述步驟b-c過程進行純化2至3次，即得補骨脂素； (2)製備白蘧仁揮髮油取白蘧仁飲片打粗粉，加水浸泡I 2小時，其中加水量為白蘧仁粗粉重量的5至20倍量；再加熱蒸餾，收集揮發液，揮發液二次蒸餾，得到含少量水分的白蘧仁揮髮油，加入無水硫酸鈉振搖，靜置，濾去硫酸鈉，即得白蘧仁揮髮油； (3)取通過步驟(I)得到的補骨脂素溶解於生理鹽水中得到質量濃度為O.5%-8%補骨脂素溶液； (4)取通過步驟(2)得到的質量濃度為8%-15%白蘧仁揮髮油加入補骨脂素溶液中即得到所述中藥組合物。
4.權利要求3所述的治療胃癌的含補骨脂素的中藥組合物的製備方法，其特徵在於，所述步驟(2)中的加水量為白蘧仁粗粉重量的20倍。
5.權利要求3所述的含補骨脂素的中藥組合物的製備方法，其特徵在於，所述步驟(3)中的補骨脂素溶液中的補骨脂素質量濃度為O. 5%。
6.權利要求3所述的含補骨脂素的中藥組合物的製備方法，其特徵在於，所述步驟(4)中的補骨脂素溶液中的白蘧仁揮髮油質量濃度為15%。
7.權利要求I所述的含補骨脂素的中藥組合物在製備抗胃癌藥物中的應用。
8.根據權利要求7所述的應用，其特徵在於，所述的藥物包括治療胃癌的含補骨脂素的中藥組合物與藥學上可接受的載體結合製成的各種劑型。
9.根據權利要求8所述的應用，其特徵在於，所述劑型包括合劑，或者糖漿劑，或者片劑，或者膠囊劑，或者顆粒劑。
10.權利要求I所述的含補骨脂素的中藥組合物在抑制腫瘤細胞藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種治療胃癌的含補骨脂素的中藥組合物及其製備方法和應用，所述中藥組合物含有以下重量百分比的組分50%-96.77%的白蔻仁揮髮油，3.23%-50%補骨脂素。本發明還公開了含補骨脂素的中藥組合物的製備方法，本發明還公開了含補骨脂素的中藥組合物在製備抗胃癌藥物中的應用和抑制腫瘤細胞藥物中的應用。補骨脂素與白蔻仁揮髮油聯用有協同抑瘤作用，當補骨脂素與白蔻仁揮髮油質量為1:30配成的含補骨脂素的中藥組合物可顯著抑制小鼠腫瘤的生長。從中醫理論分析，考慮白蔻仁為芳香化溼藥物，香氣走竄，可助溫藥補骨脂之藥效。兩藥配伍，共收腫瘤治療之良效。
文檔編號A61K36/9064GK103251869SQ20131007947
公開日2013年8月21日 申請日期2013年3月13日 優先權日2013年3月13日
發明者劉沈林, 吳堅, 鄒璽, 劉志輝 申請人:南京中醫藥大學附屬醫院