含有穀胱甘肽類似物的治療用組合物的製作方法

2023-04-29 11:02:26

專利名稱：含有穀胱甘肽類似物的治療用組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及與至少一種穀胱甘肽S-轉移酶相互作用的穀胱甘肽類似物的組合物、製劑和方法。本發明進一步涉及穀胱甘肽類似物的脂質製劑及其製備方法。當通過胃腸外給藥時，脂質藥劑可以克服藥物的不溶解性，並減少藥物的毒副作用。本發明的組合物和製劑可以調節骨髓和血液的造血及其它有益反應。
與本發明相關的背景技術用於治療惡性腫瘤及其他適應症的化療藥物的副作用是眾所周知的。這些副作用會引起各種血細胞，包括嗜中性細胞、血小板和淋巴細胞的血象變化。這些副作用導致嗜中性白血球減少症、血小板減少症和全身免疫能力抑制。這些副作用不但令人煩惱，而且它們還限制癌症治療的效果，並使患者面臨很高的感染和不可控制的出血風險。
目前，對這些副作用，幾乎沒有治療手段。典型的方法是對症治療，大劑量使用抗生素或給藥生長因子。給藥生長因子，例如粒細胞集落刺激因子(GCSF)、粒性巨噬細胞集落刺激因子(GMCSF)和一些新研製的因子如巨核細胞生長、發展因子(MGDF)和血小板生成素(TPO)，這類藥物都很昂貴。另外，它們本身也有負作用。
目前，利用某種簡單的三肽化合物的生物活性，該化合物是穀胱甘肽S-轉移酶的多種同工酶的抑制因子，可以解決或至少部分解決化療副作用和其他造血抑制問題。
對於許多小的肽基化合物，這類化合物的組分對於它們的溶解性和功效起著重要的作用。眾所周知，脂質藥劑(G.Gregoriadis、John Wiley和Sons於1988年著的《作為藥物載體的脂質體》(Liposomes as Drug Carriers))和乳劑或脂質微球(Cummings，J.等1998年8(2)153《專家治療方案意見》(Expert Opin.Ther.Pat.)，Takenaga，M.所著《藥物轉運研究進展》(Adv.Drug Delivery Rev.)(1996)，20(2，3)，209；Yamaguchi，T.《藥物轉運研究進展》(Adv.Drug Delivery rev.)(1996)，20(2，3)，117；Mizushima.Y.的歐洲專利0432697A2；Kraft，M.的WO98/053011)都可用作合適的藥物載體，用以增加溶解度，調節藥物代謝動力學行為，改變機體分布，並防止酶降解化合物。提高化合物的親油性，通常有助於其形成乳液和脂質體。有較長碳鏈或其它親油基團的酯，可用於修整化合物以提高其溶解度。
一種脂質體是封閉的脂質雙層膜結構，構成一個含水內腔。脂質體是微小傳遞泡囊，部分由磷脂構成，與水混合後形成密封、充注液體的小球。脂質體既可以是單層脂質體，由一種類脂雙層膜構成；也可以是多層脂質體，由多層類脂雙層膜構成。脂質體可以在很長時間內，有較強的控制藥物釋放能力。並通過限制藥物在血液中活性成分的有效濃度，來減少其毒副作用。脂質體還可以改變藥物的組織分布和吸收，並且，改變組織分布，可以明顯提高藥物的治療效果。
PCT申請WO95/08563(1995年3月30日出版)和PCT/US94/10797，披露了所述穀胱甘肽類似物的三肽化合物。它們是常見的穀胱甘肽S-轉移酶的活性抑制因子，這組中的各種化合物對應穀胱甘肽S-轉移酶同工酶表現多種特性。在這些專利中披露的是1-10個碳原子的對稱酯單元，優選的是二乙酯。
發明簡述本發明提供用於調節造血並有助於腫瘤化療的化合物，以及含有該化合物的藥用組合物。本發明提供脂質製劑及其製備方法。一方面，本發明提供一種方法，通過使用一種分子式為A的化合物二酯形式，接觸骨髓或外周血液，或含有原粒子(幹細胞)的局部，以調節造血。分子式A如下 其中每個酯為1-25個C；YCO為γ-穀氨酸或β-天冬氨酸；G*是苯基甘氨酸；Z是CH2、O或S；以及X是一種烴基，選自由6-8C的烷基、苯甲基和萘基組成的組；或該化合物的藥用鹽。
另一方面，本發明涉及調節幹細胞造血作用的方法，包括用一種分子式I的化合物二酯的類脂組合物接觸含有幹細胞的骨髓、外周血液及含幹細胞的局部。 其中R1和R2是獨立的選自線型或支化烷基(1-25C)、環烷烴基(6-25C)、取代烷烴基團(2-25C)、雜環(6-20C)、醚或聚醚(3-25C)，或R1-R2共(2-20C)並與分子式I的剩餘部分形成大環，以及，其中R3是烴基，選自由6-8烷基、苯甲基和萘基組成的組；或使用該化合物的藥用鹽。
在本發明之前，曾有致力於用長鏈烷基酯來提高生物利用度的方法，這些長鏈烷基酯是指R1和R2中至少有一種是大於6C的基團。但是，已證明此方法既困難又昂貴。本發明人隨後發現利用類脂製劑，更具體而言，是利用脂質體製劑，可提高化合物在更適當靶位的吸收，從而提高生物利用度，並且避免了前面提到的合成長鏈烴酯的困難和高成本。
根據本發明的類脂製劑或組合物，包括脂質體、脂質微球和脂質乳劑。脂質微球是球狀顆粒，由含有本發明的化合物的類脂核/或基體組成。脂質體是由類脂層包封含有本發明化合物的水質內腔構成的磷脂泡囊組成。
分子式A或I表示的化合物，上文已交代其在水性溶液中溶解度有限，特別是在高滲透性溶液中的溶解度不高。這類化合物與類脂結合置於生物媒介中，具有很強的溶解性。進一步，將所述化合物製成類脂微球，具有更強的抗蛋白酶能力，並能提高其在血液中的半衰期。
一方面，本發明提供一種用分子式為A或I的化合物做核，包裹可藥用的油，以製備類脂微滴的方法。這樣，本發明提供了一種製備類脂基製劑的方法。
另一方面，本發明提供一種製備磷脂基脂質體的方法，其中分子式為A或I的化合物與脂質體結合。
另一方面，本發明涉及一種含有分子式為A或I的化合物的磷脂基脂質體的製備工藝。
另一方面，本發明涉及一種保護患者免於因化療藥物和放射性治療造成損害的方法。所述保護方法包括如何在副作用發生後加快恢復速度的作用模式，所述方法包括用分子式為A或I的化合物給藥，按前述方法進行製備，按照有效劑量和時間對所述患者給藥，以產生所述的保護作用。
在其他方面，本發明涉及化合物、製劑以及類脂製劑，含有分子式為A或I的化合物，所述化合物可促進生成嗜中性細胞、血小板和淋巴細胞，恢復被損害的骨髓，保護骨髓免於細胞毒素療法造成的破壞。對於因化療、感染或血液病引起的嗜中性白血球減少症、血小板減少症、淋巴細胞減少症和貧血有保護作用。還可用於骨髓移植時增加細胞的生成。這些化合物可以是上面提到的分子式為A或I的化合物，或者對應的醯胺、酯/醯胺、鹽的形式，或者其游離二酸。優選實施例是類脂組分內含低鏈烴酯。本發明進一步涉及本發明的化合物作為腫瘤特異性化學和放射增敏劑，從而增加治療效果的應用，並可作為一般的化學保護劑。本發明的另一方面，涉及用於治療貧血、感染等的全身免疫刺激劑。
本發明另一方面涉及含有分子式為A或I的化合物的類脂製劑，可按以下方式製備(i)藥物和類脂溶於乙醇/水的共溶劑；(ii)混合物在緩衝液中迅速稀釋，形成脂質體；(iii)通過一張或多張疊加的濾膜製備脂質體，形成一定粒徑的單層脂質體泡囊，以及(iv)被冷凍乾燥。發明詳述分子式為A或I的許多化合物，對於抑制至少一種穀胱甘肽S-轉移酶同工酶的同工酶亞型的活性非常有用。即使大量骨髓細胞受損不足以維持造血功能，含有這些化合物的組合物還能調節骨髓造血。另外，這些組合物對於骨髓和血細胞還有其他有益的效果。
本發明中分子式A或I的化合物可以表現為游離酸、鹽、單酯、二酯、單醯胺、二醯胺，或混合酯/醯胺的結構。這類酯或胺的結構，通常是烷基(1-25C)；烯基(1-25C)和芳烷基(1-25C)的醇和胺。特別的，任一種二酯可以包括那些1個碳原子的第一個酯基團，以及有1C、2C、3C、4C、5C、6C、7C、8C、9C、10C、11C、12C、13C、14C、15C、16C、17C、18C、19C、20C、21C、22C、23C、24C或25C原子的第二酯基團。同樣，它們也包括每一個前述第二酯基團結合有第一酯基團為1C、2C、3C、4C、5C、6C、7C、8C、9C、10C、11C、12C、13C、14C、15C、16C、17C、18C、19C、20C、21C、22C、23C、24C或25C原子。這些基團可以是直鏈，對那些有足夠碳原子的基團來說，可有一個或多個支鏈。特別地，至少有一個酯基團可有10-25C原子。對本發明有用的典型的酯為二油基(diolelyl)、棕櫚基/乙基，十二烷基/乙基、二十二烷基、十八烷醯/乙基等等。特別優選的是分子式為A或I的棕櫚基/乙基形式的化合物，其中R3為苯甲基。同樣，對於單醯胺或單酯，酯和醯胺基團可以包括前述任意碳原子數。至於二醯胺或混合酯/醯胺形式，兩個醯胺基團或醯胺和酯基團中任一個所含碳原子數，與上述二酯基團的要求一致。應該明了的是，對於以上基團和分子式為A或I的剩餘部分，可以有一個或多個取代基，所提供的取代基並不影響所述化和物表現的藥性(如上述至少一種作用)。這種取代基可以包括一個或多個(例如二或三個)滷素或羥基。
分子式為A或I的一種特選的酯(例如分子式為I的二酯)與對應的二乙酯比較，具有更強的親油性。這對將所述化合物製成含有該化合物的脂質體製劑很有利。所選的二酯與對應的二游離酸化合物相比較，表現出對人體細胞內苯丁酸氮芥細胞毒素的增效作用(如美國專利5,955,432的實施例1所描述的，結合上面文獻作為參考)，或者與對應的游離二酸比較，表現出懸浮於無血清介質中的人體癌細胞，例如HT-29(人體結腸腺癌)，對所述化合物吸收加強(如上述專利實施例1所描述)。相對於該化合物游離二酸形式，一種可選的二酯能夠增強小鼠或鼠的骨髓細胞的分化作用(如上述專利實施例9所描述)。
很顯然，本發明的三肽化合物有一個或多個手性中心。由此涉及因這些手性中心造成的異構體類別。本發明優選的胺基酸為L型。
本發明的組合物具有多種特性，使之對於化療和其他適應症特別適用。首先，它們可以調節骨髓血細胞生成，而破壞造血是化療藥物常見的毒副作用。第二，它們通常抑制至少一種GST同工酶，包括π亞型，該類型廣泛存在於腫瘤細胞中。最後，分子式為A或I的化合物直接增強化療藥物破壞腫瘤細胞的效果。結合這些特點，使得本發明的化合物既可用於直接增強血細胞生成，降低化療副作用，又可用於提高對靶細胞的毒性。當藥劑用於體內或與完整細胞相接觸，對於分子式為A或I的化合物，優選的是酯，特別優選的是二酯。
用於給藥的製劑採用標準方法製備，如Remington的《藥學科學》(Pharmaceutical Sciences)(Mack出版公司，Easton，PA.)，和《脂質體技術》(Liposome Technology)，卷III，《定靶藥物轉運和生物交互作用》(Targeted Drug Delivery and Biological Interaction)(1984，CRC Press，Inc.，Boca Raton，Flordia)以及所描述的特殊製備方式。對於分子式為A或I化合物的特別有用的藥劑形式為類脂組合物。類脂組合物包括類脂乳劑(例如水質類脂乳劑)、脂質體和類脂微球。類脂組分可包含磷酯醯膽鹼、磷酯醯甘油、膽固醇、磷脂酸、油酸、雙磷酯醯甘油、硫苷脂、神經節苷脂、脂肪酸、薄荷油、橄欖油、豆油、礦物油、花生油、紅花油、玉米油、卵磷脂等。構成類脂組分的他物質，包括二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)、二棕櫚醯磷脂醯甘油(DPPG)、二硬脂醯磷酯醯膽鹼(DSPC)、磷脂醯乙醇胺(PE)、二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺(DPPE)、糖代PE、二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼(DMPC)、二醇基磷脂醯膽鹼(DOPC)、鞘磷脂、二肉豆蔻醯卵磷脂(DML)、二棕櫚醯卵磷脂(DPL)、二硬酯醯卵磷酯(DSL)、二月桂醯卵磷酯(DLL)，以及二油醯磷脂醯膽鹼(DOPC)。
一種優選的組合物，具有一種化合物分子式為I的化合物，其中R1為棕櫚基，R2為乙基，R3為苯甲基，在一種豆油、蛋黃卵磷脂和甘油混合物中製備。
在本發明中，所述類脂優選的是由5％到50％(重量/體積)的甘油酯構成，如豆油；以及對應每100份甘油酯，有磷脂(如蛋黃卵磷脂)1到50份，優選的是5到30份。進一步包括一些等滲助劑如甘油，佔重量的1到50份，優選的是10到40份。含有穀胱甘肽類似物的類脂組合物，例如一種類脂乳劑，可以根據其使用目的進行調整，通常為0.02到5毫克/毫升。
另一種優選的組合物，具有一種化合物分子式為I的化合物，其中R1和R2為乙基，R3為苯甲基，在一種卵磷脂醯膽鹼(EPC)和卵磷脂醯甘油(EPG)組成的混合物中製備。
類脂製劑可由類脂和分子式為A或I的化合物按3∶1至6∶1組成。優選的類脂製劑由是卵磷脂醯膽鹼(EPC)卵磷脂醯甘油(EPG)按重量比3∶1，2∶2或1∶3組成，1份分子式為A或I的化合物，7份蔗糖。最優選的類脂製劑，按重量由2份卵磷脂醯膽鹼(EPC)，2份的卵磷脂醯甘油(EPG)，1份分子式為A或I的化合物和7份蔗糖組成。進一步可以加入添加劑，如檸檬酸緩衝液，以控制pH值。類脂製劑的靜電荷可以是負電性到中電性。優選的是，類脂製劑淨電荷為負性。製備類脂/化合物製劑的步驟，優選的是，採用擠出機，用過濾方法，製成粒徑約50-2000納米的單層泡囊。更優化的單層泡囊粒徑為50-1000納米。最優選的單層泡囊粒徑為400-600納米。脂質體可冷凍乾燥，並可用藥用稀釋劑復原。
優選的是，藥物在脂質體中的包結率大於50％，最好超過80％，並且最後凍幹可以增加粘度和泡囊粒徑(75-600納米)。藥物在脂質體的最優選包結率約95％。給藥與應用「調整骨髓或外周血液的血細胞生成」是指如對細胞集落形成或分化能力測定表現的，改變了血細胞形成速率。分化細胞包括嗜中細胞、血小板、紅血細胞、淋巴細胞、巨嗜細胞、粒性白細胞、巨嗜細胞-粒性白細胞，等等。申請提到的「調節骨髓或外周血液的血細胞生成」，是指用本發明組合物治療的骨髓或血液，比較未治療的骨髓，具有集落形成和細胞分化水平上的差異。類似的，含有合適的始粒子(幹細胞)的骨髓和外周血液部分，也會表現出這種效果。應注意這裡所指的「外周血液」特別包括臍帶血(cord blood)。
通常，當使用對骨髓或血液中血細胞生成有破壞作用的藥物時，本發明組合物會表現出保護效果。「保護效果」指給藥所述組合物較之不給藥的情況，對骨髓或血液的損害結果有所減小。
本發明組合物的保護效果可用於許多情況。它們包括放射造成結果，或可能造成的結果；或一些負面效果，如患者因任何原因造成的免疫系統損害，患者的腎受損，患者進行化療等。另外，本發明組合物可用於骨髓移植手術中，增加供體的骨髓細胞；通常，這種情況可以通過在體法或回體法(in vivo or ex vivo)給藥。在這種情況中，本發明組合物可促進始粒子(幹細胞)進入外周血，促進供體外周血液中白細胞的活動，從而，加快供體外周白細胞數量恢復；類似地，本發明組合物也可提高受體外周白細胞數量恢復。通常，本發明組合物在體內或體外給藥後，可促進移植細胞生成。本發明組合物還可直接用於受體加速恢復。
本發明組合物可應用於回體法(in vitro)或在體法(in vivo)。例如，在基因轉移之前或基因轉移之後，這些組合物可用於促進或調節骨髓中血細胞生成作用。對患者用回體法給藥技術治療，可用於促進其血液中相對不易分化細胞增長。本發明組合物還可製成適於在體法給藥的形式。
當採取回體法給藥時，骨髓或外周血液(包括臍血)或兩者兼有，均可直接接觸本發明組合物，或對含有這類始粒子(幹細胞)的部分進行處理。
所述化合物可以製成適於注射、口服或其他給藥的方法，如經黏膜(transmucosal)或經皮給藥。注射可以是靜脈、腹膜內、肌內注射，或任一種其他常規方法。
製劑中的活性組分化合物(或化合物的混合物)的百分比具有很寬的範圍，例如從約0.5％到95％或達到100％(重量百分比)。活性組分優選百分比取決於組合物本身的性質。因而，本發明中化合物的「藥用組合物」可以是，僅包含化合物，或化合物與其它組分(最好為無毒組分)。優選的組分百分比，取決於製劑本身的性質。另外，本發明組合物可以與其他有益的製劑混合，如免疫刺激劑或生長因子。
所需服藥量應根據患者的症狀、具體條件、給藥方式，以及醫師或獸醫的判斷來確定。合適的劑量範圍應根據以上參數來調整。通常，每個患者的常用藥量為10-40天，0.1-100毫克/千克每天；優選的是14-28天，1-10毫克/千克每天。此範圍僅用於說明，最佳劑量應根據常規方法確定。
如果本發明組合物用於化療的保護性藥物時，應當考慮給藥時機的選擇。應當根據所用化療藥劑選擇給藥時機。顯然，用現有常規技術，即可以對所採用化療藥劑確定合適時機。
優選的二酯是，在至少一個酯基團有長碳鏈，其在動物和人的血漿中表現出較低的水解速率和較長的半衰期(例如C16/C2與C2/C2二酯比較)。類似的，可選至少具有一個長碳鏈基團的二酯，(如C16/C12二酯)，比較具有短碳鏈基團的二酯(如C2/C2二酯)，具有更強的調節動物或人的血細胞生成的能力。
以下實施例用於說明本發明。進一步的舉例見上文提到的美國專利5,955,432，對於特定化合物，以及其他化合物，可以用作類似的方式。這些實施例不能理解為限制本發明範圍，僅為更清楚地說明如何製造和使用本發明組合物。在下面實施例中，所有溫度均為攝氏度，「RT.」指室溫。穀胱甘肽類似物可用傳統的有機物合成工藝製備，是現有技術中為技術人員熟知的，如美國專利5,786,336所描述。在某些情況下，可引入保護基團並在最後去除。在Greene等的《有機合成中的保護基團》(Protective Groups in organicSynthesis)，第二版，John Wiley和Sons，紐約，1991年，介紹了適合的保護基團，有氨基、羥基、羧基等。可通過使用許多種不同的試劑來獲得羧酸的活性，參見Larock所著《綜合有機轉變》″Comprehensive Organic tranformations″，VCH出版社，紐約，1989。
製備類脂乳劑和脂質體是現有的成熟技術。本發明中，用作甘油酯的豆油是純淨豆油，有很高的純度(含三甘油酯、二甘油酯和單甘油酯至少99.9％)。磷脂也是純化的，例如，蛋黃卵磷脂或大豆卵磷脂，可用常規有機溶劑分離製備。通常，預定數量的前述豆油、類脂、穀胱甘肽類似物和其他添加劑，被加熱形成溶液，然後通過常規的均質器(如加壓噴射型均質器或一種超生波均質器)處理，在25-90℃得到水油分散體。然後加入一定量水，將混合物再次通過上述均質器轉化為油水型乳液，這樣，本發明乳劑製成。為方便產品使用，在乳劑形成後，可添加如穩定劑或等滲劑這樣的助劑。
脂質體的製備根據熟知方法，參見《脂質體技術》(LiposomeTechnology)，卷III，《定靶藥物轉運和生物交互作用》(TargetedDrug Delivery and Biological Interaction)(1984，CRC出版公司，Boca Raton Florida)。也可通過將類脂和分子式為A或I的化合物溶解於乙醇/水溶劑，用一定比例的緩衝液迅速稀釋，通過至少一層濾膜擠出產品，隨後凍幹濾出物，獲得脂質體。
實施例1製備穀胱甘肽類似物L-穀氨酸1，在鹼性條件下，用二叔丁基二碳酸酯(di-t-butyldicarbonate)保護。然後化合物2通過與多聚甲醛(paraformaldehyde)、催化量的中間體7，發生反應環化得到噁唑烷二酮3(oxazolidinone3)。該中間體7為N-α-叔丁氧基羰基-α-乙基g-穀氨醯基-S(苯甲基)半胱氨酸丁二醯亞胺酯)(N-α-t-Boc-a-ethyl-g-glutamyl-S(benzyl)cysteine succinimide ester)，未在上述合成方案中表述出。
p-甲苯磺酸。化合物4是通過噁唑二酮(oxazolidinone)與醇鈉(R』ONa)反應製備。丁二醯亞胺酯(succiminide ester)，化合物5，是通過二環己基碳二亞胺(DCC)，偶合N-羥基丁二醯亞胺(N-hydroxysucinimide)和g游離酸4來製備，再與S-苯甲基-L半胱氨酸形成被保護的二肽6。通過DCC偶連而得丁二醯亞胺酯(succiminide ester)，其再與苯基甘氨酸生成保護三肽8。去掉保護基團再酯化得到最終產物9。
實施例2N-α-叔丁氧基羰基-L-穀氨酸，2將兩份500克的L-穀氨酸(6.8摩爾)，分別加入盛有4升含有10％四氫呋喃(THF)的水溶液。然後加入碳酸鈉粉末調節至pH9，得到澄清溶液。每份溶液加熱到40℃(最初10小時持續加入二叔丁氧羰基酸酐(Boc anhydride))，然後分別向每個燒瓶每隔30分鐘，以50克為增量加入各1kg二叔丁基二碳酸酯(4.58摩爾)，同時用碳酸鈉來保持pH9。反應在室溫下攪拌過夜。次日，依前日操作，再加入1kg二叔丁基二碳酸酯。第三日早晨，每份溶液用2升乙酸乙酯(EtoAc)，萃取兩次。(發現當加入1當量二叔丁基乙酸酐後，形成的丁醇妨礙反應進一步進行。用乙酸乙酯提取後，產率明顯提高)。收集水質層，再按上述步驟操作加入二叔丁基二碳酸酯(加熱40℃，每天加入二叔丁基二碳酸酯500克，每次以50克為1份，分別加入每個燒瓶，共兩天。)整個反應過程共4天，共加入4kg(18.32摩爾)的二叔丁基二碳酸酯。長時間的反應和加熱是可接受的產率的基本條件。接著，反應物每次用2升的乙酸乙酯提取，共提取兩次。合併水層，在冰浴下冷確至0℃，用濃鹽酸以每秒1滴的速度酸化，約30分鐘，達到pH3(叔丁氧基羰基穀氨酸對酸化過程十分敏感。假如pH值太低或鹽酸滴得過快，一些脫保護反應發生，大量穀氨酸從溶液中沉澱出來)。完成酸化過程後，形成白色凝膠，通過任意放入氯化鈉而略微超過溶液飽和點後，促進凝膠形成。對該溶液每次用2升乙酸乙酯萃取共兩次。從水質層中將叔丁氧基羰基-L-穀氨酸除去，用薄層色譜法檢測。合併乙酸乙酯，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，在35℃下旋轉蒸發，得到澄清黃色油狀物。在真空下乾燥過夜，得到1097.1克叔丁氧基羰基穀氨酸(4.44摩爾)；產率65％。
(S)-叔丁氧基羰基-5-氧代-4-噁唑烷丙酸((S)-t-Butyloxycarbonyl-5-oxo-4-oxazolidinepropanoic)，31077克(4.36摩爾)叔丁氧基羰基-L-穀氨酸(Boc-L-Glu)2，在加熱條件下溶解於1升乙氰(CH3CN)。並將溶液倒入5升三口燒瓶中。向上述溶液中加入3升苯，196克(6.54摩爾)多聚甲醛和40克(0.26摩爾)對甲苯磺酸。在圓底燒瓶中安裝迪安-斯達克裝置(Dean-Stark apparati)，-10℃的雙冷凝器和一個機械攪拌器。反應物加熱至70℃，回流6小時(當迪安-斯達克裝置收集100毫升水，表示反應完全。)反應液清亮棕紅色溶液，冷卻至室溫，旋轉蒸發至棕紅色油。該油再溶於2升乙醚，並用每次1升的水提取3次。合併水相，用2升乙醚將水層中產物充分提取。合併所有乙醚，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，並旋轉蒸發得到澄清黃色油。真空乾燥，得到952克(3.67摩爾)，產率為84.3％的化合物粗品3。
化合物3的精製採用開柱。該柱由3升粗玻璃砂漏鬥拉伸為30cm製成。將2千克的Baker矽膠，40微米閃式色譜法填料(flashchromatography packing)和4升二氯甲烷調成漿糊物，倒入柱中。溶劑可以排乾至樹脂床底部，附加倒入2升二氯甲烷可以排乾至樹脂床底部至矽膠層。此時，溶有(溫和加熱)化合物的750毫升二氯甲烷倒入柱內，使其產物完全裝入。然後用20升二氯甲烷洗脫，每份400毫升收集。蒸發為油狀，在高真空度下乾燥，得到黃白色泡沫，745.7克(2.88摩爾)，產率為66.2％。
N-α叔丁氧羰基-L-穀氨酸α乙酯(N-α-t-Boc-L-Glutamic acidα-ethyl ester)，4將150克鈉棒(6.5摩爾)放置於裝有500毫升甲苯的容器中，切掉氧化層，切成將薄的方塊。稱重50克的小鈉塊放入盛有100毫升甲苯並稱好皮重的容器中。將甲苯傾倒後，在氮氣保護下，將鈉加入3升的無水乙醇中，此時保持溫度為0℃。當泡沫沉降後，依上述操作，再加入50克鈉。如此重複至200克鈉全部加完。溶液在氮氣保護下攪拌過夜，得澄清粘稠溶液。將745.7克(2.88摩爾)的化合物3溶於3升的無水乙醇(稍微加熱下)，並倒入裝有機械攪拌的5升三口燒瓶中。在氮氣保護下，用恆壓滴液漏鬥以每秒1滴的速度，將乙醇鈉滴入上述溶液。反應液攪拌過夜，得到帶有大量白色沉澱的黃白溶液。反應物在冰浴降溫至0℃，用濃鹽酸以每秒1滴的速度滴定，使達到pH9(反應完畢時pH13)。加入6升水後形成澄清液。每次用3升按1∶1混合的乙醚和石油醚混合溶劑提取兩次。合併水層，在冰浴下降至0℃，在攪拌下，以每秒1滴滴速加入鹽酸使pH3。酸化液每次用3升乙醚提取兩次。合併乙醚層，用硫酸鈉乾燥，過濾旋轉蒸發為澄清黃色油。真空乾燥後得609克(2.11摩爾)產率為73.5％。
N-α-叔丁氧基羰基-L-穀氨酸-α-乙酯-γ-丁二醯亞胺酯(N-α-t-Boc-L-Glutamic acid α-ethvl ester γ-succinimide ester)，5將609克(2.11摩爾)N-α-叔丁氧基羰基-L-穀氨酸-α-乙酯4和280.4克N-羥基丁二醯亞氨酯(2.43摩爾)，溶解於盛有3升二氯甲烷的裝有機械攪拌器的5升三口燒瓶中。將547.1克N，N'-二環己基碳二醯亞胺(N，N』-dicyclohexylcarbodiimide)(2.65摩爾)溶於500毫升二氯甲烷中，在氮氣保護和攪拌下，滴入上述反應液。再將50克二環己基碳二亞胺(DCC)(0.24摩爾)，溶於100毫升二氯甲烷中，滴加入上述反應液，攪拌過夜。薄層色譜指示反應完全。二環己基碳二亞胺(DCC)通過過濾，從反應物中除去，濾液旋轉蒸發至油狀物，在真空乾燥後呈泡沫狀，得到1042.7克(2.81摩爾)化合物5的粗品。
化合物5的精製採用精製化合物3的開柱。1.5千克烘烤過的矽膠，40微米閃式矽膠柱填料，4升二氯甲烷倒入柱中。溶劑可以排乾至樹脂床底部，附加倒入2升二氯甲烷可以排乾至樹脂床底部至矽膠層。當溶液達到樹脂床頂部，溶有(溫和加熱的)化合物的750毫升二氯甲烷倒入柱內，在重力作用下裝入。當溶液到達樹脂床，可以加入1升二氯甲烷以完全裝入產品。然後用20升二氯甲烷洗脫，每份400毫升收集。餾分蒸發得到一種油狀物，高真空下乾燥得到泡沫狀物；853克(2.28摩爾)，獲得108.0％產出率(注意純度增加#5)。
N-α-叔丁氧基羰基-α-乙酯-γ-穀氨醯基-S(苯甲基)-L-半胱氨酸(N-α-t Boc-α-ethyl-γ-glutamyl-S(benzyl)-L-cysteine)，6將465克(2.2摩爾)S(苯甲基)-L-半胱氨酸混於4升含有20％四氫呋喃(THF)水溶液，形成漿狀物。在磁力攪拌下，將碳酸鈉粉末加入使達到pH。該反應物呈漿狀。將853克(2.28摩爾)的化合物5在溫和加熱下，加入1.5升四氫呋喃。用碳酸鈉保持pH9，將其滴入(2滴/秒)漿狀物。每次用2升乙醚∶石油醚混合溶劑對反應混合物提取兩次。薄層色譜檢測產物留在水相中，因為水中溶有大量四氫呋喃。水層分離並在冰浴下降至0℃。在磁力攪拌下，滴加濃鹽酸，直pH值為3。得到油狀沉澱物，用兩升醚分兩次提取。醚層合併，倒入硫酸鈉，過濾，蒸發至油狀，高真空度下乾燥為泡沫狀，得到895.8克(1.91摩爾)，產率為90.4％。
N-α-叔丁氫基羰基-α-乙基-L-γ穀氨醯基-L-S(苯甲基)半胱氨酸丁二醯亞胺酯(N-α-t-Boc-α-ethyl-L-γ-glutamyl-L-S(benzyl)cysteine succinimide ester)，7將895克(1.91摩爾)的化合物6和240.6克N-羥基丁二醯亞胺(N-hydroxysuccinimide)(2.09摩爾)溶於盛有3升二氯甲烷的裝有機械攪拌器的5升三口瓶中。將472.5克N-N』-二環己基碳二亞胺(N，N』-dicyclohexylcarbodiimide)(2.29摩爾)溶於500毫升二氯甲烷中，在氮氣保護下，滴入(2滴/秒)上述溶液。5小時後，薄層色譜檢測，還存在原料。再將50克(0.24摩爾)二環己基碳二亞胺(DCC)溶於50毫升二氯甲烷中，並滴入混合物中，攪拌過夜。薄層色譜檢測反應充分。二環己基碳二亞胺從反應物中濾掉，溶液蒸發剩餘1升。將乙醚加入到其濁點，在冰浴下冷至0℃。通過刮容器壁有結晶形成。加入少量乙醚維持濁點，並擠出產物。溶液在4攝氏度儲存過夜。過濾得到結晶，高真空度下乾燥，得到953克(1.67摩爾)，產率87.4％。
N-α-叔丁氧基羰基-α-乙基-L-γ-穀氨醯基-L-S(苯甲基)半胱氨醯-R-苯基甘氨酸(N-α-t-Boc-α-ethyl-L-γglutamyl-L-S(benzyl)cystenyl-R-phenylglycine)，8將253克(1.67摩爾)的(R)-(-)-苯基甘氨酸溶於4升含有20％四氫呋喃(THF)的水溶液中，呈漿狀物。在磁力攪拌下，加入碳酸鈉粉末使溶液達pH9，生成部分可溶漿狀物。將953克(1.67摩爾)化合物7在溫熱下溶於1.5升四氫呋喃。在用碳酸鈉維持溶液pH9時，將其滴入(2滴/秒)上述溶液。反應6小時後得到橙黃色溶液。反應物用乙醚∶石油醚為1∶1的混合溶劑2升，提取兩次。薄層色譜檢測後，確保產物存在於水相，因為水中存有大量四氫呋喃。分出水相，在冰浴下冷至0℃。在磁力攪拌下，滴加(1滴/秒)濃鹽酸，使溶液達pH3。產物用乙醚每次2升提取兩次。合併乙醚，倒入硫酸鈉，過濾，蒸發至油狀，真空乾燥下得到泡沫狀物。853克(1.45摩爾)，產率86.8％。
γ-穀氨醯基-S(苯甲基)半胱氨醯-R-苯基甘氨酸二乙酯鹽酸鹽(γ-Glutamyl-S(benzyl)cysteinyl-R-phenyl glycine diethyl esterhydrochloride)，9將767.5克(1.26摩爾)的化合物8分成兩分，分別溶於盛有2.4升無水乙醇的5升裝有機械攪拌的三口圓底燒瓶中。在氬氣保護下攪拌，每份溶液在冰浴中降溫至0℃。將385毫升(6.32摩爾)的三甲基矽氯化物滴入(1滴/秒)每份溶液，溫度保持在0℃。當三甲基矽氯化合物加畢(2.5小時)，反應液從冰浴中取出，使其溫度升至室溫。反應物攪拌過夜。18小時過後，反應混合物變成白色固體。該固體被分散形成漿狀物，每份在30℃下旋轉至體積為2升。在機械攪拌器劇烈攪拌下，加入2升無水乙醚(1滴/秒)到漿狀物中，整個過程在室溫下需要2.5小時。過濾得到不溶物。濾餅在真空下乾燥過夜得到312.8克化合物9粗品。將312.8克粗品在攪拌下溶於7升熱乙腈(79℃)，趁熱過濾，除去不溶物，濾液冷至室溫。當溶液冷卻時，有小型針狀白色結晶開始形成，當達到室溫時其開始固化為固體團。將其分散，通過過濾收集固體，濾餅在真空和氫氧化鈉片中乾燥16小時，得到277.0克(0.49摩爾)乾燥物，產率38.8％。化合物10、11和13也可用同樣方法獲得。化合物12由化合物8通過濃鹽酸解離，除去叔丁氧基羰基(t-Boc)基團得到。
表1化合物9-13中的取代基R1，R2和R3
實施例3製備類脂微球將30毫克化合物9，10克精製豆油和1.8克純化蛋黃卵磷脂混合，用機質器在加熱下溶解。然後將2.21毫克甘油和足量蒸餾水100毫升(接近90毫升)加入其中，用均質器成粗乳化劑。該產物用manton gaulin型均質器進一步乳化。再將溶液通過1.2微米濾膜得到最終濃度為300微克/毫升，粒徑為220微米的乳劑。用類似方法，可以製備包括化合物10到12的類脂微球。
表2脂質微球測量參數
上面表2中K1值的降低表示本發明穀胱甘肽類似物生物利用度的提高。當然，對以上描述可以有多種變化和改進。本發明不局限於上述實施例的描述。
實施例4脂質體生產方法除非另作說明，下列一般的方法用於製備類脂製劑(i)將1573毫克化合物9，3146毫克卵磷酯醯膽鹼(EPC)和3146毫克卵磷酯醯甘油(EPG)，溶於14.3毫升無水乙醇，在室溫下與2.2毫升水混合；(ii)用容量為30毫升的注射器，使用20號針，直接(1分鐘內)注射入攪拌下的80.9毫升370好摩爾的蔗糖中，形成多層泡囊(MLVs)；(iii)攪拌下加入2.5毫升1M檸檬酸(pH4.0)成為攪拌緩衝溶液；(iv)用100毫升擠出器(Lipex生物膜，Vancouveor加拿大)將溶液通過兩張疊加的80納米聚碳酸酯濾膜十次，形成單層囊泡；(v)通過0.22微米濾劑滅菌；然後(vi)凍幹去掉水分和乙醇。凍幹周期包括樣品(10毫升安瓿中填樣品2.5毫升)速凍至-50℃，隨後在擱板中-35℃下凍幹42小時，除去主要水分，然後在20℃下凍幹2小時除去剩餘水分。
用Nicomp粒度分布光度測定儀(270型)得到樣品的準彈性光散射(QELS)，就可以確定泡囊平均粒徑。由兩種獨立方法得到藥物摻入泡囊(包結率％)的程度。第一種方法，將0.1毫升製劑在含有水合交聯葡萄糖G-50的1毫升結核菌素注射液中；樣品在離心機以2,000每分鐘轉數，離心5分鐘。泡囊空隙率恢復(大於70％)。通過該過程，將未包囊藥物和沉澱物除去，剩餘物留在凝膠過濾柱中。包結率(％)的計算由先前的藥物/類脂比例和通過柱色譜脂質體得到。第二種方法，是從未包囊藥物中分離出脂質體。該過程用離心方法通過30微米濾膜得到分子量為30,000道爾頓(Amicon)的溢出物。包結率(％)為1-([游離藥物]/([總藥物])*100。
實施例5用乙醇稀釋法得到化合物9的類脂製劑由下面表3的結果，可看出在幾種類脂製劑中化合物9的包結率，可成為藥物/類脂比和類脂組合物的參數。將乙醇加入蔗糖緩衝液稀釋後，立刻形成脂質體(形成多層脂質體，MLVs)，是一種相對較大(平均直徑為700納米)，多相，但不含有可見的類脂或藥物沉澱。多層脂質體可以用擠出器(Lipex生物膜，Vancouver，加拿大)，通過疊加的聚碳酸酯濾膜5-10次。該過程可除去藥物沉澱(小於2％)，並使泡囊粒徑平均直徑減小為140納米(±20納米)。
表3經乙醇稀釋結合化合物9得到脂質體
實施例6凍幹法效果和泡囊粒徑由下面表4的結果，可看出凍幹條件和泡囊粒徑及藥物包結率有關。除非特別說明，脂質體按照實施例4製備，過濾無菌，並以每瓶2.5毫升裝瓶。將小瓶冷凍至樣品保存溫度，為-50℃。將樣品溫度保持保藏溫度，然後施加真空(50-200毫託)足夠時間(24-48小時)，以除去主要水分，然後保持室溫2-6小時。
表4不同凍幹過程對化合物9脂質體的影響
實施例7藥物/類脂比對包結水平的影響由下面表5的結果可總結出初始藥物/類脂比對包結水平的影響。當藥物/類脂比為0.33(重量/重量)時，化合物9在卵磷酯醯膽鹼(EPC)/卵磷酯醯甘油(EPG)脂質體中可充分包結。表5藥物/類脂比對化合物9在EPC/EPG脂質體包結率的影響
實施例8泡囊粒徑穩定性由下面表6所示，經多批次檢驗，儲存溫度為2-8℃時，經48小時，包結水平不受影響。
表6乙醇含量對擠出泡囊粒徑穩定性的影響
實施例9凍幹時間對包結物的影響由下表7，總結出凍幹條件對化合物9與EPC/EPG製劑的包結效率、粘度和粒徑的影響。
表7主要凍幹周期對含化合物9的EPC/EPG製劑的包結率、泡囊粒徑和粘度的影響
實施例10化療引起嗜中性白血球減少的鼠模型依照實施例4形成的化合物9，對鼠經化療引起的嗜中性白細胞減少症有加速恢復作用。雄性CD鼠(250-300克)經腹膜內可注射抗腫瘤藥，氟尿嘧啶(fluorouracil)(125毫克/千克)，也可注射等當量體積的其賦形物(鹽水)。經氟尿嘧啶注射後的第一天，每隻經氟尿嘧啶治療的鼠，既可用化合物9(35毫克/千克，n＝4，G-CSF(10微克/千克，n＝5)，或其賦形物(鹽水n＝4)經靜脈注射；對先用鹽水注射，而非氟尿嘧啶注射的鼠，繼續靜脈注射鹽水(n＝7)。在注射氟尿嘧啶前測量血液中嗜中性細胞數，注射以後每隔1-2天測量，共14天。通過引入脂質體複合的化合物9，由氟尿嘧啶引起的嗜中性細胞減少得到加速恢復(見

圖1)。
實施例11化合物9對正常鼠的作用依照實施例4得到的化合物9(35毫克/千克，靜脈注射(i.v.))，也可增強正常鼠的循環的嗜中性細胞水平(圖B)。給雄性CD鼠(250-300克)，經靜脈注射化合物9(35毫克/千克，n＝9)，G-CSF(10微克/千克，n＝4)或其賦形物(鹽水n＝11)，注射5天。每天測量的採樣的中嗜中性細胞數，正常鼠經給藥化合物9的類脂製劑，提高了其血液循環嗜中性細胞水平(見圖2)。
權利要求
1. 一種用於刺激血細胞生成，保護造血細胞免於因放療、化療造成的損害，或促進在造血幹細胞形成的集落中的一種或多種細胞因子的刺激作用的方法，所述方法包括用具有如下分子式的化合物的二酯接觸骨髓或外周血液或其局部 其中每個酯為1-25個C；YCO為γ-穀氨醯或β-天冬氨醯；G*是苯基甘氨酸；Z是CH2、O或S；以及X是一種烴基，選自由6-8C的烷基、苯甲基和萘基組成的組；或其藥用鹽；在刺激造血有效的劑量和時間內，保護所述造血細胞免受所述損害，或在所述骨髓、外周血液或局部中，促進所述一種或多種細胞因子的所述刺激作用。
2.根據權利要求1所述的方法，其中YCO為γ-穀氨醯，Z是S。
3.根據權利要求2所述的方法，其中至少有一種酯是10到25C的酯。
4.根據權利要求1所述的方法，其中所述化合物具有比相應的二乙酯更強的親油性。
5.根據權利要求1所述的方法，其中所述化合物可被配製成一種類脂組合物。
6.根據權利要求4所述的方法，其中所述化合物可被配製成一種類脂組合物。
7.根據權利要求1所述的方法，其中所述化合物是分子式為 其中R1和R2是獨立的選自線型或支化烷基(1-25C)、環烷烴基(6-25C)、雜環類(6-20C)、醚或聚醚(3-25C)，或R1-R2共2-20C，並與分子式I的剩餘部分形成大環；以及，其中R3是烴基，選自由6-8C烷基、苯甲基和萘基組成的組；或其藥用鹽。
8.根據權利要求7所述的方法，其中R3是苯甲基。
9.根據權利要求7所述的方法，其中R1和R2分別有10-25C。
10.根據權利要求1所述的方法，其中所述接觸是通過對需要所述刺激、保護或增強作用的患者，進行所述化合物或者藥物組合物給藥，按照有效劑量刺激所述造血、保護所述造血細胞免於所述損害，或增強所述細胞因子的所述作用。
11.根據權利要求10所述的方法，其中所述患者是人類。
12.一種保護患者免受因化療藥物或輻射造成破壞性影響的方法，所述方法包括給藥一種分子式為A的化合物的二酯 其中每個酯為1-25個C；YCO為γ-穀氨醯或β-天冬氨醯；G*是苯基甘氨酸；Z是CH2、O或S；以及X是一種烴基，選自由6-8C的烷基、苯甲基和萘基組成的組；或其藥用鹽；對所述患者，按有效的劑量和時間，以產生所述保護效果。
13.根據權利要求12所述的方法，其中YCO為γ-穀氨醯，Z是S。
14.根據權利要求13所述的方法，其中至少有一種酯是10到25C的酯。
15.根據權利要求12所述的方法，其中所述化合物具有比相應的二乙酯更強的親油性。
16.根據權利要求12所述的方法，其中所述化合物可被配製成一種類脂組合物。
17.根據權利要求15所述的方法，其中所述化合物可製成一種脂質組合物。
18.根據權利要求7所述的方法，其中所述化合物是分子式為 其中R1和R2是獨立的選自線型或支化烷基(1-25C)、環烷烴基(6-25C)、雜環類(6-20C)、醚或聚醚(3-25C)，或R1-R2共2-20C，並與分子式I的剩餘部分形成大環；以及，其中R3是苯甲基或萘基；或其藥用鹽。
19.根據權利要求18所述的方法，其中R3是苯甲基。
20.根據權利要求18所述的方法，其中R1和R2分別有10-25C。
21.一種增強對患者給藥化療藥劑效果的方法，所述方法包括給藥一種具有如下分子式的化合物的二酯 其中每個酯為1-25個C；YCO為γ-穀氨醯或β-天冬氨醯；G*是苯基甘氨酸；Z是CH2、O或S；以及X是一種烴基，選自由6-8C的烷基、苯甲基和萘基組成的組；或其藥用鹽；對所述患者，按有效劑量和時間給藥，以產生所述保護效果。
22.根據權利要求21所述的方法，其中YCO為γ-穀氨醯，Z是S。
23.根據權利要求22所述的方法，其中至少有一種酯是10到25C的酯。
24.根據權利要求21所述的方法，其中所述化合物具有比相應的二乙酯更強的親油性。
25.根據權利要求21所述的方法，其中所述化合物可被配製成一種類脂組合物。
26.根據權利要求24所述的方法，其中所述化合物可被配製成一種類脂組合物。
27.一種增強對患者給藥化療藥劑效果的方法，所述方法包括給藥一種具有如下分子式的化合物 其中R1和R2獨立的選自線型或支化烷基(1-25C)、環烷烴基(6-25C)、雜環類(6-20C)、醚或聚醚(3-25C)，或R1-R2共2-20C，並與分子式I的剩餘部分形成大環；以及，其中R3是苯甲基；或其藥用鹽。
28.根據權利要求27所述的方法，其中R1和R2分別有10-25C。
29.一種藥用組合物包括一種如下分子式的化合物 或其酯、醯胺、酯/醯胺或鹽的形式，其中YCO為γ-穀氨醯或β-天冬氨醯；G*是苯基甘氨酸或甘氨酸；Z是CH2、O或S；以及X是烴基，選自由6-8C的烷基、苯甲基和萘基組成的組；或其藥用鹽。
30.根據權利要求29所述的藥用組合物，其中所述化合物為一種二酯。
31.根據權利要求30所述的藥用組合物，其中YCO為γ-穀氨醯，G*是苯基甘氨酸；以及Z是S。
32.根據權利要求31所述的藥用組合物，其中每一種酯是1-25C的酯。
33.根據權利要求31所述的藥用組合物，其中至少一種酯是10-25C的酯。
34.根據權利要求31所述的藥用組合物，其中所述化合物具有比相應的二乙酯更強的親油性。
35.根據權利要求31所述的藥物組合物，其中所述化合物與二乙酯相比較，其在人體血液中不易水解。
36.根據權利要求29所述的藥物組合物，其中所述化合物可被配製成一種類脂組合物。
37.根據權利要求34所述的藥物組合物，其中所述的化合物可被配製成一種類脂組合物。
38.根據權利要求30所述的藥物組合物，其中所述化合物是分子 其中R1和R2是各自獨立的，選自由線型或支化烷基(1-25C)、環烷烴基(6-25C)、雜環類(6-20C)、醚或聚醚(3-25C)，或R1-R2共2-20C，並與分子式I的剩餘部分形成大環；以及R3是烴基，選自由6-8C烷基、苯甲基和萘基組成的組；或其藥用鹽。
39.根據權利要求38所述的藥物組合物，其中R3是苯甲基。
40.根據權利要求30所述的藥物組合物，其中所述化合物的二酯較之游離二酸形式，有更強的促進人體細胞內苯丁酸氮芥細胞毒素作用。
41.根據權利要求30所述的藥物組合物，其中所述化合物的二酯形式較之游離二酸形式，可更增強鼠或小鼠骨髓中的細胞分化。
42.在根據權利要求29-41之一所述的藥物組合物的製備中，化合物為分子式A的應用 其中每個酯為1-25個C；YCO為γ-穀氨醯或β-天冬氨醯；G*是苯基甘氨酸；Z是CH2、O或S；以及X是烴基，選自由6-8C的烷基、苯甲基和萘基組成的組；或其藥用鹽。
43.一種類脂製劑含有分子式為A的化合物 其中每個酯為1-25C；YCO為γ-穀氨醯或β-天冬氨醯；G*是苯基甘氨酸；Z是CH2、O或S；以及X是一種烴基，選自由6-8C的烷基、苯甲基和萘基組成的組；或其藥用鹽；或分子式為I的化合物 其中R1和R2是獨立的選自線型或支化烷基(1-25C)、環烷烴基(6-25C)、雜環類(6-20C)、醚或聚醚(3-25C)，或R1-R2共2-20C，並與分子式I的剩餘部分形成大環；以及，其中R3是烴基，選自由6-8C烷基、苯甲基和萘基組成的組；或其藥用鹽；以利於對所述化合物的吸收並提高其生物利用度。
44.根據權利要求43所述的類脂製劑，包含一種用於調節血細胞生成並針對化療引起的破壞作用進行保護的脂質體成分，包括由泡囊型類脂構成的脂質體，含有一種脂質體包載形式的分子式為A或I的化合物或其藥用鹽，其特徵為(i)含有自然存在的磷脂；以及(ii)所述化合物的包結率大於50％；以及(iii)平均粒徑為50-2000納米；以及(iv)帶有負淨電荷。
45.根據權利要求43和44之一所述的製劑，其中分子式為A或I的化合物或其藥用鹽，至少50％為脂質體包結形式，優選的是大於80％。
46.根據權利要求43至45之一所述的製劑，類脂與分子式為A或I的化合物或其藥用鹽的重量比範圍是從3∶1至6∶1，優選的是3.5-4.5∶0.5-1.5。
47.根據權利要求43至46之一所述的製劑，包括具有平均粒徑範圍在50-2000納米之間，優選的是400-600納米脂質體。
48.根據權利要求43至47之一所述的製劑，包括具有淨電荷從負到中性，優選的是負淨電荷的脂質體。
49.根據權利要求43至48之一所述的製劑，特徵是分子式為A或I的化合物或其藥用鹽非經腸給藥，可提高其溶解度並降低毒性。
50.根據權利要求43至49之一所述的製劑，其中泡囊形式(vesicle-forming lipids)的類脂，有兩種不同的自然存在的磷脂，其比例範圍從1∶3到3∶1，優選的比例是0.75-1.25∶0.75-1.25。
51.根據權利要求43至50之一所述的製劑，其中泡囊形式的類脂中，卵磷酯醯膽鹼(EPC)和卵磷酯醯甘油(EPG)比例範圍從1∶3到3∶1，優選的比例為0.75-1.25∶0.75-1.25。
52.根據權利要求43至51所述的製劑，包括按重量比由2份卵磷酯醯膽鹼、2份卵磷酯醯甘油、1份分子式為A或I的化合物或其藥用鹽，以及7份蔗糖組成的脂質體。
53.一種調節血細胞生成並保護免於化療破壞作用的方法，包括將權利要求1和7所述的分子式為A或I的化合物或其藥用鹽包結於特徵如下的脂質體(i)由自然存在的磷脂構成；以及(ii)所述化合物在脂質體中的包結率大於50％；(iii)平均粒徑為50-2000納米；以及(iv)帶負淨電荷。
54.根據權利要求53所述的一種調節造血並保護免於化療造成破壞作用的方法，包括將分子式為A或I的化合物或其藥用鹽包結於特徵如下的脂質體(i)由卵磷酯醯膽鹼(EPC)和卵磷酯醯甘油(EPG)按照0.75-1.25∶0.75-1.25的比例組成；以及(ii)脂質體中化合物的包結率大於80％；(iii)平均粒徑為400-600納米；以及(iv)帶負淨電荷。
55.根據權利要求43至52任一權項所述製劑的給藥，用以調節造血並保護免於化療造成的破壞作用的方法。
56.根據權利要求43至52任一權項所述的結合分子式為A或I的化合物或其藥用鹽、用於調節造血並保護免於化療造成的破壞作用的組合物的應用。
57.根據權利要求44所述的用於調節造血，並保護免於化療造成的破壞作用的類脂製劑，包括由泡囊型類脂構成的脂質體，包結有γ-穀氨醯基-S(苯甲基)半胱氨醯基-R-苯基甘氨酸二乙酯、或其藥用鹽，形成一種脂質體包結形式，具有如下特徵(i)由自然存在的磷脂構成；以及(ii)所述化合物的包結率至少50％；以及(iii)平均粒徑為50-2000納米；以及(iv)帶負淨電荷。
58.根據權利要求53所述的一種調節造血並保護其免於化療造成破壞作用的方法，包括包結γ-穀氨醯基-S(苯甲基)半胱氨醯基-R-苯基甘氨酸二乙酯或其藥用鹽於具有如下特徵的脂質體(i)由自然存在的磷脂構成；以及(ii)所述化合物的脂質體包結率至少是50％；(iii)平均粒徑為50-2000納米；以及(iv)帶負淨電荷。
59.根據權利要求58所述的一種調節造血並保護免於化療造成的破壞作用的方法，包括包結γ-穀氨醯基-S(苯甲基)半胱氨醯基-R-苯基甘氨酸二乙酯或其藥用鹽於具有如下特徵的脂質體(i)由卵磷酯醯膽鹼(EPC)和卵磷酯醯甘油(EPG)按照0.75-1.25∶0.75-1.25的比例組成；以及(ii)脂質體中化合物的包結率至少80％；(iii)平均粒徑為400-600納米；以及(iv)帶負淨電荷。
60.根據權利要求43至52的任一個權項所述的結合γ-穀氨醯基-S(苯甲基)半胱氨醯基-R-苯基甘氨酸二乙酯或其藥用鹽的製劑，用於調節造血並保護免於化療造成破壞作用的應用。
全文摘要
使用穀胱甘肽類似物的藥物組合物和方法。穀胱甘肽類似物的脂類組合物和生產方法。用於刺激血細胞生成,保護造血細胞免於因放療、化療帶來的損害,或促進一種或多種細胞因子,來增強造血幹細胞集落形成,還可保護患者免於因化療藥劑或放療引起的破壞作用,或增強化療藥劑的治療效果。
文檔編號A61K9/127GK1342084SQ00804652
公開日2002年3月27日 申請日期2000年1月27日 優先權日1999年1月27日
發明者託馬斯·雷得美爾, 勞倫斯·M·卡瓦, 羅伯特·T·盧穆, 馬修·H·利特爾, 羅伯特·W·馬克撒塔, 史蒂文·R·修, 胡果·O·維拉, 米歇爾·R·柯孜盧斯基 申請人:泰立克公司