白首烏總苯乙酮及苯乙酮在製備治療胃腸道疾病藥物中的應用的製作方法

2023-05-25 14:10:21 2

專利名稱：白首烏總苯乙酮及苯乙酮在製備治療胃腸道疾病藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一類具有治療胃腸道疾病作用的化合物的應用，尤其是從中藥白首烏中提取分離得到的9種苯乙酮以及9種苯乙酮化之一及其任意組合的總含量≥50％的混合物(白首烏總苯乙酮)，在製備預防和治療胃及十二指腸潰瘍、胃炎、胃和腸運動障礙等胃腸道疾病的藥物中的應用。
背景技術：
白首烏系蘿藦科(Asclepiadaceae)鵝絨藤屬植物耳葉牛皮消(Cynanchum auriculatumRoyle ex Wight.)、戟葉牛皮消(Cynanchum bungei Decne.)、隔山消(Cynanchum wilfordii(Maxim.)Hemsl.)的塊根，中醫理論中白首烏具有養肝益血、固腎益精、強筋健骨的功效，併兼有健脾益氣的功能，用於治療失眠健忘、鬚髮早白、筋骨不健、胸悶心痛以及消化不良等症。
土家族和苗族民族醫藥理論中白首烏具有消食健胃、理氣止痛、消腫散節的功效，用於治療腸胃炎、消化不良等症。現代藥理研究表明白首烏含有的苯乙酮具有抗胃潰瘍、抗潰瘍復發和鎮痛的作用。
本發明根據土家族、苗族民族醫藥理論和治療經驗，結合現代化學和藥理手段，從白首烏中提取分離高效低毒、治療胃腸道疾病的苯乙酮。

發明內容
本發明的目的在於從白首烏中提取分離高效低毒、具有治療胃腸道疾病作用的白首烏總苯乙酮和苯乙酮，並用於製備治療胃腸道疾病的藥物。
本發明從白首烏中提取分離得到的具有治療胃腸道疾病作用的9種苯乙酮為cynandione A，cynandione B，cynandione C，cynandione D，cynanchone A，cynantetrone，2，4-dihydroxyacetophenone，2，5-dihydroxyacetophenone，4-hydroxyacetophenone，以及包含這9種苯乙酮之一種或任意組合且苯乙酮化合物總重量含量≥50％的混合物——白首烏總苯乙酮。
本發明與現有技術相比，具有高效低毒、治療胃炎、胃腸道潰瘍、胃腸道動力障礙、疼痛以及減少胃腸道疾病復發等特點，是從天然資源中提取分離得到的治療胃腸道疾病的新藥。
這些苯乙酮，以及包含有這些苯乙酮的混合物白首烏總苯乙酮，對大鼠應激性急性胃潰瘍、幽門結紮型急性胃潰瘍、乙酸燒灼型慢性胃潰瘍、熱烙型慢性胃潰瘍、皮下注射利血平藥物誘發的胃潰瘍、巰基乙胺誘導的大鼠十二指腸潰瘍、大鼠淺表性胃炎等均具有抑制作用，能夠降低潰瘍和出血發生率，使平均潰瘍面積和出血面積減少；對大鼠胃液及胃酸的分泌具有抑制作用；對大鼠口服阿司匹林製造的胃黏膜損傷具有保護作用；對體外培養的幽門螺旋桿菌具有殺滅作用；對大鼠腹腔注射強酸製造的炎性疼痛具有鎮痛作用；在大鼠乙醇灌胃引起胃黏膜損傷中，能夠降低胃黏膜脂質過氧化物含量，對氧自由基所致胃黏膜損傷具有保護作用；並能夠促進大鼠胃排空率和大鼠腸蠕動。研究開發抗胃潰瘍新藥，給胃潰瘍患者帶來福音，具有重要的科學和實際價值，並且可以產生較大的社會效益和經濟效益。
本發明提供的苯乙酮以及包含有苯乙酮的混合物白首烏總苯乙酮的提取方法如下以白首烏為原料，以乙醇等作為提取溶劑，進行提取，濃縮得到的浸膏經大孔樹脂柱層析分離，收集乙醇洗脫液，濃縮得到白首烏總苯乙酮；經矽膠柱層析，用薄層層析檢測層析流分，具有相同單一斑點的流分合併，濃縮，再經RP-18低壓柱或HPLC(高效液相色譜)分離和純化，即分得cynandione A，cynandione B，cynandione C，cynandione D，cynanchone A，cynantetrone，2，4-dihydroxyacetophenone，2，5-dihydroxyacetophenone，4-hydroxyacetophenone。
通過酸水解以及紫外光譜儀、紅外光譜儀、高分辨快速原子轟擊質譜儀、核磁共振氫譜儀、核磁共振碳譜儀、異核多量子相關譜儀、異核多鍵相關譜儀等光譜分析技術，9種苯乙酮的化學結構已經被闡明，分別為如下所示
本發明對白首烏總苯乙酮和9個苯乙酮化合物進行了抗胃潰瘍活性的評價實驗。
(一)白首烏苯乙酮抗大鼠應激性急性胃潰瘍作用。
1.方法1.1潰瘍模型的複製及潰瘍程度的指標選用SD大鼠，雌雄各半，體重200-250g，動物隨機分為27個實驗組，1個法莫替丁組和1個空白對照組。實驗前禁食24h，自由飲水。實驗組於浸水應激前30min分別ig 9個苯乙酮(10mg/kg，20mg/kg，40mg/kg)，白首烏總苯乙酮(50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg)，體積10mL/kg(下同)，法莫替丁組ig法莫替丁(100mg/kg)，以上藥物用前均以5g/L羧甲基纖維素(carboxymethylcellulose，CMC)溶液配成所需濃度。空白對照組ig相應體積的生理鹽水。水溫(23±1)℃，浸水應激5h，處死動物，觀察潰瘍情況。按Cuth的方法計算潰瘍指數。
1.2數據處理數據以均數±標準差(x±SD)表示。根據所得每組潰瘍指數，按潰瘍抑制率的計算公式潰瘍抑制率＝[(對照組指數-給藥組指數)/對照組指數]×100％；算出潰瘍抑制率。各組間差異的比較採用t檢驗。
2結果ig 9個苯乙酮和白首烏總苯乙酮(10-40mg/kg)能明顯抑制大鼠應激性急性胃潰瘍的形成(表1)。
表1 ig 9個苯乙酮和白首烏總苯乙酮對大鼠應激性急性胃潰瘍的影響

與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01
(二)白首烏苯乙酮抗大鼠幽門結紮型急性胃潰瘍作用。
1.方法1.1Wister大鼠，體重250g±30g，雌雄各半。動物隨機分為27個實驗組，1個法莫替丁對照組和1個空白對照組。實驗組分別ig 9個苯乙酮(10mg/kg，20mg/kg，40mg/kg)，白首烏總苯乙酮(50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg)，體積10mL/kg(下同)，法莫替丁組ig法莫替丁(100mg/kg)，以上藥物用前均以5g/L羧甲基纖維素(carboxymethylcellulose，CMC)溶液配成所需濃度。空白對照組ig相應體積的生理鹽水。上述各組按容量每日灌胃1次，連續15d，各組均供給正常飲食。各組末次給藥後禁食48h，用幽門結紮法，製作胃潰瘍模型。具體操作為大白鼠全麻狀態下，無菌操作，沿腹中線打開腹腔，結紮幽門，縫合腹壁，術後將動物分籠飼養。19h後斷頭處死動物，然後用1％甲醛溶液固定胃標本。30min後剖檢，計算潰瘍指數。
1.2數據處理數據以均數±標準差(x±SD)表示。根據所得每組潰瘍指數，按潰瘍抑制率的計算公式潰瘍抑制率＝[(對照組指數-給藥組指數)/對照組指數]×100％；算出潰瘍抑制率。各組間差異的比較採用t檢驗。
2.結果解剖後發現空白對照組中有3例發生胃潰瘍穿孔，其他各組未見穿孔，ig 9個苯乙酮和白首烏總苯乙酮(10-40mg/kg)能明顯抑制大鼠幽門結紮型急性胃潰瘍的形成(表2)。
表2 ig 9個苯乙酮和白首烏總苯乙酮對大鼠幽門結紮型急性胃潰瘍的影響


與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01(三)白首烏苯乙酮抗大鼠乙酸燒灼型慢性胃潰瘍作用。
1方法1.1造摸與分組 取SD大鼠，雌雄各半，體重200-250g。常規飼養，並用10％大黃水煎液按10g/kg溉胃，1次/d，連續10天。後用20％乙酸0.1mL，用微量注射器注入胃腺部漿膜下，以形成丘疹為度。術前用乙醚麻醉後開腹，暴露全胃。術後縫合腹壁，消毒創口.常規飼養。術後次日，動物隨機分為27個實驗組，1個西咪替丁對照組和1個空白對照組。
1.2指標收集 將大鼠按上述分組後，分別用ig 9個苯乙酮(5mg/kg，10g/kg，20mg/kg)和白首烏總苯乙酮(50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg)、藥物對照組ig西咪替丁(100mg/kg)，以上藥物用前均以5g/L羧甲基纖維素(carboxymethyl cellulose，CMC)溶液配成所需濃度。空白對照組ig蒸餾水(10mL/kg)。1次/d，連續14天。第15天處死大鼠，取胃後，沿胃大彎剪開，衝洗胃內容物，置1％甲醛溶液中固定5分鐘。將胃平展在木板上，用放大鏡觀察並測量胃黏膜上的潰瘍數、潰瘍面積、評定饋瘍指數，計算潰瘍抑制率。
2.結果ig 9個苯乙酮和白首烏總苯乙酮(10-40mg/kg)能明顯抑制大鼠乙酸燒灼型慢性胃潰瘍的形成(表3)。
表3 ig 9個苯乙酮和白首烏總苯乙酮對大鼠乙酸燒灼型慢性胃潰瘍的影響


與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01(四)白首烏苯乙酮抗小鼠藥物誘發胃潰瘍作用。
1方法昆明種小鼠，體重18～20g，雌雄各半，動物隨機分為27個實驗組，1個陽性對照組和1個空白對照組，每組10隻。實驗組ig 9個苯乙酮(10mg/kg，20mg/kg，40mg/kg)，白首烏總苯乙酮(50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg)，體積10mL/kg(下同)，陽性對照組ig西咪替丁(100mg/kg)，以上藥物用前均以5g/L羧甲基纖維素(carboxymethylcellulose，CMC)溶液配成所需濃度。空白對照組ig相應體積的生理鹽水。灌胃給藥，每天1次，連續9天。於末次給藥後1小時後，腹腔注射利血平5mg/kg，18小時後處死小鼠，手術取出胃部，顯微鏡下檢查每隻小鼠胃壁產生的點狀潰瘍個數(實驗結果見表4)。
2.結果ig 9個苯乙酮和白首烏總苯乙酮能明顯抑制小鼠藥物誘發胃潰瘍的形成(表4)。
表4ig 9個苯乙酮和白首烏總苯乙酮對小鼠藥物誘發胃潰瘍的影響


與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01(五)白首烏苯乙酮抑制大鼠胃液和胃酸分泌的作用。
1.方法SD大鼠，雌雄各半，體重(240±10)g。大鼠隨機分為27個實驗組，1個法莫替丁組和1個空白對照組。實驗組ig 9個苯乙酮(10mg/kg，20mg/kg，40mg/kg)，白首烏總苯乙酮(50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg)，以上藥物用前均以5g/L羧甲基纖維素(carboxymethyl cellulose，CMC)溶液配成所需濃度。對照組大鼠灌服等容量的藥或等體積CMC溶液，連續3d。將禁食24h的大鼠，行幽門結紮術，並十二指腸給藥一次，術後禁食禁水，4h後處死動物，收集胃液於刻度離心管。同時沿胃大彎剪開胃，外翻，用PH5.8檸檬酸-磷酸鹽緩衝液衝洗去胃黏膜表面的游離粘液，再將胃浸泡在10mL 0.2g/L阿爾新蘭液中，置25℃溫育2h，取出胃，以2500r/min離心阿爾新蘭液10min，取上清液615nm處比色。取胃液0.1mL置試管，加入10g/L阿爾新蘭溶液0.1mL，PH5.8檸檬酸-磷酸鹽緩衝液3.3mL，蒸餾水0.6mL，充分混勻，室溫24h，2500r/min離心反應液10min，取上清液615nm處比色，測定剩餘阿爾新蘭液量。其餘胃液2000r/min離心10min，分別測定胃液量、總酸度、總酸排出量、胃蛋白酶排出量。胃酸測定採用酸鹼中和滴定法。
2.結果
9個苯乙酮和白首烏總苯乙酮能明顯降低大鼠胃液分泌量；並對大鼠胃液總酸排出量和胃蛋白酶排出量均有明顯的抑制。
表5白首烏苯乙酮抑制大鼠胃液和胃酸分泌的影響

與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01(六)白首烏苯乙酮對體外培養幽門螺旋桿菌(HP)的抑制作用。
1.方法白首烏苯乙酮濃度配製苯乙酮溶在4.65ml無菌羧甲基纖維素(5g/L)溶液中，然後倍比稀釋，其濃度分別為1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0313、0.0156、0.0098、0.0039g/mL。然後運用平皿打孔法，均勻塗布HP於兔血培養基上，用直徑5.5mm的角膜環鑽打孔，將上述不同濃度的被試藥物直接加入孔中。微需氧環境，39℃培養92h。測定抑菌圈直徑，求出抑制率和最低抑菌濃度。
2.結果從實驗結果看，白首烏苯乙酮對HP在體外有一定的抑菌作用，最低抑菌濃度(MIC)為0.0156g/mL。
表6 白首烏苯乙酮體外對幽門螺旋桿菌(HP)的抑制作用(抑制率％)

與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01(七)白首烏苯乙酮對小鼠炎性疼痛的鎮痛作用。
1.方法昆明種小鼠，體重18～20g，雌雄各半，動物隨機分為27個實驗組，1個鹽酸派替啶組和1個空白對照組，每組10隻。實驗組ig 9個苯乙酮(10mg/kg，20mg/kg，40mg/kg)，白首烏總苯乙酮(50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg)，以上藥物用前均以5g/L羧甲基纖維素(carboxymethyl cellulose，CMC)溶液配成所需濃度。空白對照組ig相應體積的生理鹽水。各組動物連續ig給藥5d，每日1次，給藥體積均為0.2ml/10g體重。生理鹽水組與之相同。小鼠末次給藥後1h、鹽酸派替啶(20mg/kg)ig後0.5h，每隻小鼠ig 0.6％乙酸0.2mL，觀察並記錄注射乙酸20min內各鼠扭體次數，與陰性對照組比較，用t檢驗判斷有無統計學差異。
2.結果與生理鹽水組比較，鹽酸派替啶有良好的鎮痛作用，說明實驗可靠。苯乙酮大、中、小劑量組均對小鼠腹腔注射乙酸引起的疼痛(扭體反應)有明顯的抑制作用(P＜0.001)。
表9 白首烏苯乙酮抑制大鼠胃液和胃酸分泌的影響


與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01(八)白首烏苯乙酮抗小鼠乙醇致胃黏膜損傷的作用。
1.方法 Wister大鼠隨機分為乙醇模型組，白首烏苯乙酮組，正常對照組，每組10隻。白首烏苯乙酮組通過灌胃給予白首烏苯乙酮組100mg/kg，1次/天，共3天；乙醇模型組和正常對照組給予等量的水。實驗前禁食24h，禁水2h。第3天灌藥後2h，乙醇模型組和白首烏苯乙酮組用乙醇1ml/只灌胃，2h後處死大鼠，取胃。取潰瘍邊緣組織黏膜，用TBA螢光比色法測定胃黏膜脂質過氧化物(LPO)含量。
2.結果 各組測定值用均數±標準差(x±SD)表示，差異用t檢驗方法分析，P＜0.05為差異有顯著性。
乙醇模型組的胃黏膜LPO含量明顯高於正常對照組(P＜0.01)，而白首烏苯乙酮組的胃黏膜LPO含量明顯低於乙醇模型組(P＜0.01)。白首烏苯乙酮能夠對抗乙醇引起的胃黏膜LPO升高，對氧自由基導致的胃黏膜損傷具有保護作用。
表8 白首烏苯乙酮對大鼠胃黏膜LPO含量的影響


與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與乙醇模型組比較△P＜0.05，△△P＜0.01(九)白首烏苯乙酮抗巰基乙胺誘導的大鼠十二指腸潰瘍的作用1.方法雄性SD大鼠，體重200g，口飼鹽酸巰基乙胺280mg/kg，第一天給藥3次。將大鼠於第三天處死。將胃和十二指腸在10％的甲醛溶液中固定，石蠟包埋切片用蘇木精-伊紅染色，做組織學評價。
2.結果對十二指腸潰瘍的嚴重度進行評分(0-3)0＝無潰瘍；1＝淺表糜爛潰瘍；2＝淺度潰瘍常伴有透壁壞死；3＝潰瘍穿孔。各組測定值用均數±標準差(x±SD)表示，差異用t檢驗方法分析，P＜0.05為差異有顯著性。
表9 白首烏苯乙酮對巰基乙胺誘導的大鼠十二指腸潰瘍的影響


與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與法莫替丁組比較△P＜0.05，△△P＜0.01(十)白首烏苯乙酮促進大鼠胃排空率的作用1.方法清潔級Wistar大鼠，雌雄各半，體重200～300g。將大鼠隨機分組，每組8隻，分別進行造模。對照組正常哺養4周，其餘各組則每逢雙日正常進食，逢單日禁食，都自由飲水，水中加入鹽酸(每升水中加10mol/L鹽酸10ml)，連續4周。給藥組大鼠在餵養的第3、4周每天按1ml/100g進行灌胃給藥。正常對照組大鼠給予蒸餾水，陽性對照組給予0.1％嗎丁啉混懸液，共14天。
2.結果胃排空率測定。上述各組大鼠溼飼料(水與飼料的重量比按1.5∶1混合)適應性飼養3天，開始實驗。禁食不禁水20h後給予5g溼飼料，30min後處死動物，迅速剖開腹腔，結紮胃賁門和幽門，取胃，用濾紙拭乾後稱重，然後沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內容物並拭乾再稱重，以前、後兩次稱重的差值為胃內殘留物重量，食入飼料重量與胃內殘留物重量之差則為已排空的重量，計量已排空食物重量佔所食飼料重量的百分比即為胃排空率。
各組測定值用均數±標準差(x±SD)表示，差異用t檢驗方法分析，P＜0.05為差異有顯著性。
表10 白首烏苯乙酮對大鼠食後30min胃排空率影響


與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01(十一)白首烏苯乙酮促進大鼠腸蠕動的作用1.方法雌性昆明種小鼠100隻，根據體重將小鼠隨機分為10組，每組10隻。設陰性對照組、腸蠕動抑制模型對照組、白首烏苯乙酮組。動物自由進食、飲水。
2.觀察指標及結果於實驗第零天和第九天時稱量體重。墨汁推進率。於實驗開始後第九天，各組小鼠停食24h後，陰性對照組給予蒸餾水灌胃，其他各組小鼠給予複方地芬諾酯灌胃(5mgPkgBW)，在給予複方地芬諾酯30min後，各組小鼠分別給予墨汁灌胃，灌胃量均為014mLP20g BW，在灌胃25min後立即脫頸椎處死動物，打開腹腔分離腸繫膜，剪取上端自幽門、下端至回盲部的腸管，置於託盤上，輕輕將小腸拉成直線，測量腸管長度「小腸總長度」，從幽門至墨汁前沿為「墨汁推進長度」，計算墨汁推進率，計算公式如下墨汁推進率(％)＝墨汁推進長度(cm)/小腸總長度(cm)×100％表11 白首烏苯乙酮對小鼠墨汁推進率的影響


*，**表示與模型對照組相比差異有顯著性(*P＜0.05，**P＜0.01)；△，△△表示與空白對照組相比差異有顯著性(△P＜0.05，△△P＜0.01)。
(十二)白首烏苯乙酮抗大鼠淺表性胃炎的作用1.方法雄性Wister大鼠100隻，體重300g左右。將小鼠隨機分為10組。設陰性對照組、法莫替丁對照組、白首烏苯乙酮組。實驗前禁食24h。各組按規定劑量給予藥物，陰性對照組給予與給藥組等體積的蒸餾水。在清醒狀態下，分別用20mmol/L的阿司匹林溶液按100mg/kg經口灌服。4h後，將動物處死，剖檢，可見胃內急性瀰漫性炎症病變。
2.觀察指標及結果用解剖顯微鏡觀察胃黏膜出血灶的多少、大小及其分布部位。測定各個出血灶的長徑，求其總和，作為出血指數進行比較。數據以均數±標準差(x±SD)表示。根據所得每組出血指數，按胃出血抑制率的計算公式出血抑制率＝[(對照組指數-給藥組指數)/對照組指數]×100％；算出胃出血抑制率。各組間差異的比較採用t檢驗。
表12 ig 9個苯乙酮和白首烏總苯乙酮對大鼠淺表性胃炎的影響


與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01上述實驗證明本發明從白烏中提取的上述化合物以及混合物，對大鼠應激性急性胃潰瘍具有抑制作用，降低潰瘍發生率，使平均潰瘍面積減少；對大鼠幽門結紮型急性胃潰瘍具有抑制作用，降低潰瘍發生率，使平均潰瘍面積減少；對大鼠乙酸燒灼型慢性胃潰瘍具有抑制作用，降低潰瘍發生率，使平均潰瘍面積減少；對大鼠皮下注射利血平藥物誘發的胃潰瘍具有抑制作用，降低潰瘍發生率，使平均潰瘍面積減少；對大鼠胃液及胃酸的分泌具有抑制作用，減少胃液量及降低胃液酸度；對體外培養的幽門螺旋桿菌的生長抑制作用和殺滅作用；對大鼠強酸腹腔注射製造的炎性疼痛的鎮痛作用；在大鼠乙醇灌胃引起胃黏膜損傷中，能夠降低胃黏膜脂質過氧化物含量，對氧自由基所致胃黏膜損傷具有保護作用；對巰基乙胺誘導的大鼠十二指腸潰瘍具有抑制作用，降低潰瘍發生率，使平均潰瘍面積減少；具有促進大鼠胃排空率的作用，可以改善大鼠胃動力障礙性消化不良；具有促進大鼠腸蠕動的作用，可以改善大鼠腸蠕動障礙性消化不良；對大鼠淺表性胃炎具有改善作用。
因此，本發明提出的上述化合物可用於製備治療胃腸道疾病的藥物，尤其可用於製備治療胃潰瘍的藥物。而且，根據抗胃腸道疾病的有效量，與藥學上可接受的載體組成藥物組合物，製成各種製劑，包括片劑、顆粒劑、膠囊、口服液、滴丸、合劑、溶液劑、糖漿劑、酊劑或注射劑等。
具體實施例方式
實施例1製備白首烏總苯乙酮白首烏乾燥塊根10kg粉碎後，以90％乙醇回流3次，每次2小時，合併提取液，減壓回收溶劑，得乙醇提取物，該提取物用氯仿水浴加熱2小時，冷卻後過濾，減壓回收氯仿，得氯仿提取物，再將氯仿提取物傾入正己烷中，加熱回流2次，每次0.5小時，得正己烷不溶部分，即白首烏總苯乙酮。
本品為淡棕色粉末。
實施例2製備cynandione A白首烏乾燥塊根10kg粉碎後，以90％乙醇回流3次，每次2小時，合併提取液，減壓回收溶劑，得乙醇提取物，該提取物用氯仿水浴加熱2小時，冷卻後過濾，減壓回收氯仿，得氯仿提取物，再將氯仿提取物傾入正己烷中，加熱回流2次，每次0.5小時，得正己烷不溶部分。將正己烷不溶部分進行矽膠柱層析，以氯仿-乙醇進行梯度洗脫，用薄層層析檢查層析流分，具有相同單一斑點的流分合併，濃縮，分得流分1、2、3、4、5、6，將其中流分2經HPLC(MeOH∶H2O)分離、純化，得到cynandione A。
cynandione A，分子式C16H14O6，分子量302.28。經光譜數據分析和理化性狀測定與文獻報導(CHUN-NAN LIN.REVISED STRUCTURE FOR FIVE ACETOPHENONES FROMCYNANCHUM TAIWANIANUM.Phytochemistry，1997，44(7)1359-1363)的cynandione A完全一致。
實施例3製備cynandione B白首烏乾燥塊根10kg粉碎後，以90％乙醇回流3次，每次2小時，合併提取液，減壓回收溶劑，得乙醇提取物，該提取物用氯仿水浴加熱2小時，冷卻後過濾，減壓回收氯仿，得氯仿提取物，再將氯仿提取物傾入正己烷中，加熱回流2次，每次0.5小時，得正己烷不溶部分。將正己烷不溶部分進行矽膠柱層析，以氯仿-乙醇進行梯度洗脫，用薄層層析檢查層析流分，具有相同單一斑點的流分合併，濃縮，分得流分1、2、3、4、5、6，將其中流分2經HPLC(MeOH:H2O)分離、純化，得到cynandione B。
cynandione B，黃色結晶，分子式C32H24O9，分子量552.53。經光譜數據分析和理化性狀測定與文獻報導(Chun-Nan Lin，Stereochemistry and biological activities ofconstituents from Cynanchum taiwanianum.Biochimica et Biophysica Acta 1380(1998)115-122)的cynandione B完全一致。
實施例4製備cynandione C白首烏乾燥塊根10kg粉碎後，以90％乙醇回流3次，每次2小時，合併提取液，減壓回收溶劑，得乙醇提取物，該提取物用氯仿水浴加熱2小時，冷卻後過濾，減壓回收氯仿，得氯仿提取物，再將氯仿提取物傾入正己烷中，加熱回流2次，每次0.5小時，得正己烷不溶部分。將正己烷不溶部分進行矽膠柱層析，以氯仿-乙醇進行梯度洗脫，用薄層層析檢查層析流分，具有相同單一斑點的流分合併，濃縮，分得流分1、2、3、4、5、6，將其中流分3經HPLC(MeOH:H2O)分離、純化，得到cynandione C。
cynandione C，黃色結晶，分子式C32H24O9，分子量552.53。經光譜數據分析和理化性狀測定與文獻報導(Chun-Nan Lin，Stereochemistry and biological activities ofconstituents from Cynanchum taiwanianum.Biochimica et Biophysica Acta 1380(1998)115-122)的cynandione C完全一致。
實施例5製備cynandione D白首烏乾燥塊根10kg粉碎後，以90％乙醇回流3次，每次2小時，合併提取液，減壓回收溶劑，得乙醇提取物，該提取物用氯仿水浴加熱2小時，冷卻後過濾，減壓回收氯仿，得氯仿提取物，再將氯仿提取物傾入正己烷中，加熱回流2次，每次0.5小時，得正己烷不溶部分。將正己烷不溶部分進行矽膠柱層析，以氯仿-乙醇進行梯度洗脫，用薄層層析檢查層析流分，具有相同單一斑點的流分合併，濃縮，分得流分1、2、3、4、5、6，將其中流分4經HPLC(MeOH:H2O)分離、純化，得到cynandione D。
cynandione D，黃色結晶，分子式C32H24O9，分子量552.53。經光譜數據分析和理化性狀測定與文獻報導(Chun-Nan Lin，Stereochemistry and biological activities ofconstituents from Cynanchum taiwanianum.Biochimica et Biophysica Acta 1380(1998)115-122)的cynandione D完全一致。
實施例6製備cynanchone A
白首烏乾燥塊根10kg粉碎後，以90％乙醇回流3次，每次2小時，合併提取液，減壓回收溶劑，得乙醇提取物，該提取物用氯仿水浴加熱2小時，冷卻後過濾，減壓回收氯仿，得氯仿提取物，再將氯仿提取物傾入正己烷中，加熱回流2次，每次0.5小時，得正己烷不溶部分。將正己烷不溶部分進行矽膠柱層析，以氯仿-乙醇進行梯度洗脫，用薄層層析檢查層析流分，具有相同單一斑點的流分合併，濃縮，分得流分1、2、3、4、5、6，將其中流分5經HPLC(MeOH:H2O)分離、純化，得到cynanchone A。
cynanchone A，黃色結晶，分子式C17H16O6，分子量316.31。經光譜數據分析和理化性狀測定與文獻報導(YUN-LIAN LIN.REVISED STRUCTURE FOR FOUR ACETOPHENONESFROM CYNANCHUM TAIWANIANUM.Phytochemistry，199745(5)1057-1061)的cynanchone A完全一致。
實施例7製備cynantetrone白首烏乾燥塊根10kg粉碎後，以90％乙醇回流3次，每次2小時，合併提取液，減壓回收溶劑，得乙醇提取物，該提取物用氯仿水浴加熱2小時，冷卻後過濾，減壓回收氯仿，得氯仿提取物，再將氯仿提取物傾入正己烷中，加熱回流2次，每次0.5小時，得正己烷不溶部分。將正己烷不溶部分進行矽膠柱層析，以氯仿-乙醇進行梯度洗脫，用薄層層析檢查層析流分，具有相同單一斑點的流分合併，濃縮，分得流分1、2、3、4、5、6，將其中流分6經HPLC(MeOH:H2O)分離、純化，得到cynantetrone。cynantetrone，黃色無定形粉末，分子式C66H44O20，分子量1157.04。經光譜數據分析和理化性狀測定與文獻記載(Pao-Lin Huang.A Cytotoxic Acetophenone with a Novel Skeleton，Isolated from Cynanchum taiwanianum.Helvetica Chimica Acta，1999(82)1716)的cynantetrone完全一致。
實施例8製備2，4-dihydroxyacetophenone白首烏乾燥塊根10kg粉碎後，以90％乙醇回流3次，每次2小時，合併提取液，減壓回收溶劑，得乙醇提取物，該提取物用氯仿水浴加熱2小時，冷卻後過濾，減壓回收氯仿，得氯仿提取物，再將氯仿提取物傾入正己烷中，加熱回流2次，每次0.5小時，得正己烷不溶部分。將正己烷不溶部分進行矽膠柱層析，以氯仿-乙醇進行梯度洗脫，用薄層層析檢查層析流分，具有相同單一斑點的流分合併，濃縮，分得流分1、2、3、4、5、6，將其中流分2經HPLC(MeOH:H2O)分離、純化，得到2，4-dihydroxyacetophenone。
2，4-dihydroxyacetophenone，黃色結晶，分子式C8H8O3，分子量152.15。
實施例9製備2，5-dihydroxyacetophenone白首烏乾燥塊根10kg粉碎後，以90％乙醇回流3次，每次2小時，合併提取液，減壓回收溶劑，得乙醇提取物，該提取物用氯仿水浴加熱2小時，冷卻後過濾，減壓回收氯仿，得氯仿提取物，再將氯仿提取物傾入正己烷中，加熱回流2次，每次0.5小時，得正己烷不溶部分。將正己烷不溶部分進行矽膠柱層析，以氯仿-乙醇進行梯度洗脫，用薄層層析檢查層析流分，具有相同單一斑點的流分合併，濃縮，分得流分1、2、3、4、5、6，將其中流分4經HPLC(MeOH:H2O)分離、純化，得到2，4-dihydroxyacetophenone。
2，5-dihydroxyacetophenone，黃色結晶，分子式C8H8O3，分子量152.15。
實施例10製備4-hydroxyacetophenone白首烏乾燥塊根10kg粉碎後，以90％乙醇回流3次，每次2小時，合併提取液，減壓回收溶劑，得乙醇提取物，該提取物用氯仿水浴加熱2小時，冷卻後過濾，減壓回收氯仿，得氯仿提取物，再將氯仿提取物傾入正己烷中，加熱回流2次，每次0.5小時，得正己烷不溶部分。將正己烷不溶部分進行矽膠柱層析，以氯仿-乙醇進行梯度洗脫，用薄層層析檢查層析流分，具有相同單一斑點的流分合併，濃縮，分得流分1、2、3、4、5、6，將其中流分6經HPLC(MeOH:H2O)分離、純化，得到2，4-dihydroxyacetophenone。
4-hydroxyacetophenone，黃色結晶，分子式C8H8O2，分子量136.15。
實施例11取cynandione A100mg，用適量注射用水溶解，加甘露醇200mg，按照常規凍幹工藝凍幹，即得注射用凍乾粉。用於治療胃腸道疾病。
實施例12將白首烏總苯乙酮用適量注射用水分散，噴霧乾燥或真空乾燥，得白首烏總苯乙酮乾粉，取聚乙二醇400，加入白首烏總苯乙酮乾粉，邊加邊攪拌至勻，採用壓製法，製成軟膠囊。用於治療胃腸道疾病。
實施例13取白首烏總苯乙酮100g，用適量注射用水分散，加入輔料適量，混勻，製成顆粒，乾燥，壓製成1000片，包糖衣即得白首烏總苯乙酮片。用於治療胃腸道疾病。
權利要求
1.一種從白首烏中提取得到的總苯乙酮及苯乙酮類化合物在製備治療胃腸疾病藥物中的應用，該苯乙酮化合物分別為cynandione A，cynandione B，cynandione C，cynandione Dcynanchone A，cynantetrone，2，4-dihydroxyacetophenone，2，5-dihydroxyacetophenone，4-hydroxyacetophenone，該總苯乙酮為包含這9種苯乙酮之任一種或幾種而且苯乙酮類化合物的重量含量≥50％的混合物；9種苯乙酮的化學結構如下所示 。
2.根據權利要求1所述的化合物在製備治療胃腸道疾病藥物中的應用，其特徵在於將所述化合物與藥學上可接受的載體組成藥物組合物，製成各種製劑，包括片劑、顆粒劑、膠囊、口服液、滴丸、合劑、溶液劑、糖漿劑、酊劑、注射劑。
全文摘要
本發明公開了一類治療胃腸道疾病的化合物，該化合物是指從白首烏中分離的9種苯乙酮以及包含有這9種苯乙酮且苯乙酮化合物總含量≥50％的混合物被定名為白首烏總苯乙酮。研究證明這些化合物對大鼠應激性急性胃潰瘍、幽門結紮型急性胃潰瘍、大鼠淺表性胃炎等均具有抑制作用，能夠降低潰瘍和出血發生率，使平均潰瘍面積和出血面積減少；對大鼠胃液及胃酸的分泌具有抑制作用；對體外培養的幽門螺旋桿菌具有抑制作用；在大鼠乙醇灌胃引起胃黏膜損傷中，能夠降低胃黏膜脂質過氧化物含量，對氧自由基所致胃黏膜損傷具有保護作用；並能夠促進大鼠胃排空率和大鼠腸蠕動。可用於製備治療胃炎、胃和十二指腸潰瘍、預防潰瘍復發、改善胃腸道動力的藥物。
文檔編號A61P1/00GK1723880SQ20051002707
公開日2006年1月25日 申請日期2005年6月23日 優先權日2005年6月23日
發明者張衛東, 單磊, 蘇娟, 張川, 柳潤輝, 徐希科 申請人:中國人民解放軍第二軍醫大學