大蒜總多糖的抗癌用途、製備方法及組合物的製作方法

2023-05-25 08:11:41

專利名稱：大蒜總多糖的抗癌用途、製備方法及組合物的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫藥領域，涉及一種多糖的應用，具體涉及大蒜總多糖及其藥物組合物在製備抗腫瘤藥物中的應用，還涉及該大蒜總多糖的製備方法。
背景技術：
腫瘤是當今社會危害人類健康的重大疾病之一，已成為僅次於心腦血管疾病的世界第二大死因疾病。惡性腫瘤治療方案一般採取手術方法，並配合放化療治療，但化療藥物有一定的毒副作用。相比之下，中藥抗腫瘤藥具有獨特的優勢，有祛邪、扶正或增效、減毒的作用，所以中藥抗腫瘤藥物一直是腫瘤藥研究的熱點。大蒜的主要成分為含硫有機化合物、胺基酸類、酶類、糖類、脂類、皂苷類、維生素和微量元素等。現代藥理研究表明，大蒜有抗菌、消炎、降血脂、降血壓、抗血栓、抗腫瘤、抗衰老、抗氧化以及增強機體免疫力等多種功效。大蒜防癌抗癌的歷史悠久，其主要治療作用集中在含硫化合物成分上，研究和應用較多的是大蒜的脂溶性成分大蒜油和大蒜油的主要有效成分二烯丙基三硫(合成品名為大蒜素)和二烯丙基二硫。目前已有大蒜油、大蒜素藥品和保健品面市。大蒜多糖作為大蒜水溶性成分的重要組成部分，其化學結構和藥理作用近幾年有較多的研究報導，但大蒜多糖在預防和治療腫瘤方面功效未能得到充分、有效地利用。大蒜多糖近幾年來已成為大蒜研究和應用的熱點。對於大蒜多糖的結構和理化性質，不同的研究者依據不同的材料，獲得的研究結果有很大差異。一般認為，大蒜多糖為果聚雜多糖，具有類菊糖作用，能夠增強免疫力，對肝損傷有保護作用，對實驗性小鼠病毒性心肌炎具治療作用，能夠抑制紫外線誘發的晶狀體損傷，可作為乳酸菌發酵的碳源，具有抗氧化抗病毒等多種生物活性(王文玲等，大蒜多糖的研究綜述.廣州食品工業科，2004， 20(4) :144-148)。現將大蒜多糖的主要生理活性列舉如下1、抗凝血活性大蒜多糖C具有明顯的抗凝血活性，大蒜多糖B的抗凝血活性較弱(汪新亮等，大蒜多糖對凝血系統及血小板聚集的影響.江蘇中醫藥，2008，40 (6) :80-81)。2、抗氧化、清除氧自由基能力不同產地大蒜均具有一定的抗氧化性能(回瑞華等，不同產地大蒜抗氧化性能的研究.鞍山師範學院學報，2008，1(K2) :15-18)；大蒜多糖能促進正常PC12細胞增殖，且對 H2O2誘導PC12細胞損傷具有保護作用，其作用機制可能與提高PC12細胞的抗氧化能力有關(鄭穎等，大蒜多糖抗氧化活性及其對PC12細胞增殖的影響.暨南大學學報(醫學版)， 2008,29(2) :110-112)；大蒜多糖具有清除超氧陰離子自由基和羥基自由基的能力，且在較高濃度下強於大蒜素(李朝陽等，大蒜多糖的酶法提取及其抗氧化性研究.食品科學， 2008，29(1) 17)。3、抗B肝病毒及保肝作用大蒜多糖A、B、C在培養2215細胞中可抑制B肝病毒標誌HBsAg的分泌，並隨藥物濃度的增加而增高抑制率(鄭敏等，大蒜多糖體外抗B型肝炎病毒作用研究.中藥藥理與臨床，2005，21 (3) 29-30)；大蒜多糖A、B、C均可顯著阻抑肝損傷小鼠的肝ALT、AST的下降及血清ALT、AST的升高，三種大蒜多糖對肝損傷均有良好的保護作用，其中以大蒜多糖C 作用最佳，且安全無毒(鄭敏等，大蒜多糖對肝損傷小鼠血清和肝組織ALT、AST的影響及其急性毒性實驗.成寧學院學報(醫學版)，2003,17( :85-88)；大蒜多糖能夠促進肝糖原的合成和儲存，對小鼠免疫性肝損傷有良好的保護作用(張霞等，大蒜多糖對ConA致小鼠肝損傷保護作用組織學觀察.中獸醫醫藥雜誌，2009,6:19-21)；大蒜多糖C能全面抑制免疫性肝損傷小鼠的免疫功能，並促使其機體建立新的免疫平衡，從而對免疫性肝損傷產生保護作用(趙驥等，大蒜多糖C對免疫性肝損傷小鼠外周血淋巴細胞亞群的影響.中藥藥理與臨床，2007，23 (5) :96-97)。4、對病毒性心肌炎的治療作用大蒜多糖對實驗性小鼠病毒性心肌炎具有治療作(蔡飛等，大蒜多糖對病毒性心肌炎小鼠心肌酶的影響.成寧學院學報(醫學版)，2003，17(1) 1-3)；大蒜多糖可能通過抑制脂質過氧化反應及一氧化氮的產生，起到治療病毒性心肌炎的作用(李彩蓉等，大蒜多糖對小鼠病毒性心肌炎脂質過氧化及一氧化氮的影響.現代中西醫結合雜誌，2003， 12(24) =2636-2638)；大蒜多糖能夠拮抗阿黴素(ADR)引起的自由基脂質過氧化，從而保護心肌細胞(餘薇等，大蒜多糖對阿黴素所致心肌細胞損傷的保護作用.中國藥理學通報， 2005,21(9) 1104)；大蒜多糖能拮抗阿黴素所致的小鼠中毒性心肌炎，其作用機制與增強心肌SOD活力和抗心肌脂質過氧化有關(餘薇等，大蒜多糖對阿黴素所致小鼠心臟毒性的拮抗作用.中國藥理學通報，2005，21(1) :96 99)；大蒜多糖還具有抗心肌細胞凋亡的作用(餘薇等，大蒜多糖對乳鼠心肌細胞缺氧/復氧損傷的保護作用.中國藥理學通報， 2010,26(5) 697 699)。5、抗柯薩奇病毒B3 (CVB3)作用大蒜多糖B和C在體外通過抑制柯薩奇病毒B3 (CVB3)生物合成而發揮抗CVB3的作用(鄭敏等，大蒜多糖體外抗柯薩奇病毒B3作用.中國現代應用藥學雜誌，2005，22(1) 4-6)。6、減少腫瘤藥物的毒性能減輕周期非特異性治療腫瘤藥物的毒性作用；ADR為蒽環類抗生素，臨床上廣泛應用於治療多種惡性腫瘤，ADR在治療腫瘤的同時，存在著劑量依賴性心臟毒性，因而限制了其臨床應用；大蒜多糖能夠拮抗ADR所致心肌細胞凋亡，起到減毒作用(餘薇等，大蒜多糖對阿黴素所致小鼠心臟毒性的拮抗作用.中國藥理學通報，2005，21(1) :96 99)。此外，目前有多篇專利文獻也涉及大蒜總多糖，例如，專利2007100171321公開了一種從大蒜深加工廢水中提取大蒜多糖的方法，屬於多糖的提取、分離領域，該方法採用超濾技術及噴霧乾燥技術回收提取大蒜深加工廢水中的大蒜多糖，其包括以下步驟a、收集大蒜深加工廢水，過濾除雜；b、濾液經截留均分子量60000 80000的超濾裝置截留濃縮， 得固體物含量為6% 10%的大蒜多糖濃縮液CWl ；C、大蒜多糖濃縮液CWl經過噴霧乾燥塔乾燥，得到粉狀大蒜多糖APS1。與現有技術相比，該方法具有成本低、流程簡單、易於實現等特點，實施後能夠最大限度地回收大蒜深加工廢水中的大蒜多糖，降低企業生產成本及汙染治理成本。
專利200610033685公開了一種用超臨界(X)2從鮮蒜中同時提取大蒜油和大蒜多糖的方法，屬大蒜有效成分的提取技術，包括下述步驟(1)把新鮮大蒜去皮後放入萃取釜中，通入二氧化碳，通過高壓泵把壓力升高到10 35MPa，溫度設定為32 50°C，靜態萃取 0 3h ;(2)開動高壓泵進行動態萃取1 4h，萃取壓力10 35MPa ；萃取溫度32 50°C; 一級分離釜壓力5 12MPa ；—級分離釜溫度30 50°C ；二級分離釜壓力4 7MPa ；二級分離溫度30 50°C ;(3)萃取完畢後，從二級分離釜中放出大蒜油；(4)從萃取釜的放液口放出含有大蒜多糖的水液，經過乾燥，即得到固體大蒜多糖。該方法具有工藝流程短、 大蒜的綜合利用率高的優點。專利CN1239719涉及大蒜多糖的提取方法，尤其是從大蒜中提取大蒜多糖的方法。取大蒜去皮清洗乾淨，將其搗成大蒜泥；加水蒸煮，用蒸汽除臭；將大蒜泥在95-100°C 條件下蒸煮後保溫；所得蒸煮水，高速離心、薄膜濃縮超濾，氨水調至PH8，加CaCl2溶液，攪拌，再次高速離心；所得清液，乾燥得大蒜多糖(APQ白色粉末。該方法操作簡單易行，且產品純度較高。專利200310117625. 8屬於天然產物的提取、分離和純化領域，公開了一種以新鮮大蒜或脫水大蒜為原料聯合製備蒜氨酸與大蒜多糖的方法。通過洗滌去雜、蒜氨酸酶的滅活、破碎取汁等步驟，得大蒜粗提液；精製後的大蒜粗提液經離子交換樹脂處理，洗脫得大蒜多糖粗提液，再精製獲得大蒜多糖產品；從再次洗脫液中製取蒜氨酸粗品，再精製獲得蒜氨酸產品。該方法利用同一批原料生產蒜氨酸和大蒜多糖兩種有價值的生物活性物質，更充分地利用了大蒜資源；降低了製造成本，減輕了生產單一產品時造成的環境汙染，可使採用該技術的生產企業比單獨生產蒜氨酸或大蒜多糖的效益翻番。專利2003101176M. 3屬於天然產物的提取、分離和純化領域，公開了一種以鮮大蒜為原料聯合製備大蒜精油與大蒜多糖的方法。通過浸泡、洗滌、打漿、酶解、裝料、蒸餾、精油分離等步驟，取出油相為大蒜精油粗品，水相為大蒜多糖粗品，再精製得到大蒜精油產品和大蒜多糖產品。該方法利用同一批原料生產大蒜精油和大蒜多糖兩種有價值的產品，充分地利用了大蒜資源；降低了生產成本，減輕了生產單一產品時造成的環境汙染，尤其減少了生產大蒜精油造成的空氣和水資源汙染，可使生產企業比單獨生產大蒜精油或大蒜多糖的效益翻番。綜上所述，專利報導的均為大蒜總多糖的製備方法，對大蒜多糖的應用沒有涉及；事實上減少腫瘤藥物的毒性和增強機體免疫力與抗腫瘤有著密切關係，但現有技術中僅報導了大蒜多糖能減輕周期非特異性治療腫瘤藥物ADR所致心肌細胞凋亡，起到減毒作用(餘薇等，大蒜多糖對阿黴素所致小鼠心臟毒性的拮抗作用.中國藥理學通報， 2005，21(1) :96 99)，但並未闡述大蒜多糖是否具有對腫瘤細胞的抑制作用；此外，專利 CN1239719認為大蒜多和牛膝膝多糖一樣的具有增強免疫的作用，但並沒有給出大蒜多糖增強正常鼠或荷瘤小鼠的免疫功能的實驗數據。因此，目前現有技術中對大蒜多糖抗腫瘤、 增強荷瘤動物免疫功能的開發應用還不夠深入和全面，需要加強大蒜多糖在抗腫瘤防治領域和大蒜應用領域的研究。

發明內容
為了解決上述技術問題，本發明的一個目的是提供一種大蒜總多糖在製備抗腫瘤藥物中的應用，本發明的另一個目的是提供一種大蒜總多糖的製備方法，本發明的再一個目的是提供一種根據所述製備方法製得的大蒜總多糖及其藥物組合物。本發明的目的是通過以下技術方案實現的一方面，本發明提供了一種大蒜總多糖在製備用於預防和/或治療癌症的藥物、 保健品和/或食品中的應用。進一步，所述大蒜總多糖為雜多糖，其水解後的成分包括果糖、葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖和甘露糖。進一步，所述腫瘤選自胃癌、直/結腸癌、膀胱癌、前列腺癌、肺癌、鼻咽癌、肝癌、 骨癌、食道癌、乳腺癌、宮頸癌、胰腺癌、腦瘤、皮膚癌、白血病、淋巴癌和黑色素瘤等癌症。進一步，所述抗腫瘤藥物選自以下劑型注射劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、軟膠囊劑、 滴丸、口服液、膜齊 、散劑、外用膏齊 、栓劑和丸劑等劑型。另一方面，本發明提供了一種大蒜總多糖的製備方法，其包括以下步驟1)根據現有技術(專利ZL200510083951. 0)提供的方法進行大蒜雙提，即將大蒜粉碎，加水保溫酶解，水蒸氣蒸餾提取，得揮髮油、藥液和藥渣；2)保留藥液；3)水提藥渣，得水提液；4)將步驟幻所得水提液與步驟2、保留的藥液合併，減壓回收水，得濃縮液；5)加醇醇沉所得濃縮液，過夜，離心，得沉澱；6a)將步驟幻所得沉澱進行乾燥，得淺黃色大蒜總多糖。或者6b)溶解步驟幻所得沉澱，離心，上清液過樹脂柱，得流出液，減壓濃縮，乾燥，得乳白色大蒜總多糖。需要說明的是通過步驟6a)得到的淺黃色大蒜總多糖的有效成分含量比通過步驟6b得到的乳白色大蒜總多糖的有效成分含量低。進一步，步驟1)中，所述雙提為1-2次，每次加3-9倍水，每次0. 5_池。進一步，步驟幻中，所述水提為1-2次，每次加3-9倍水，每次0. 5-池。進一步，步驟4)中，所述減壓回收是在溫度不高於80°C下進行的；所述濃縮液， 以大蒜(g)藥液(mL)為單位計，濃度為1 0.8-1. 2，使藥液在60°C下的相對密度為 0. 9-1. 10。進一步，步驟幻中，所述醇為乙醇，其在濃縮液中的含量為70-80% (體積百分含
量)O進一步，步驟6a)和步驟6b)中，所述乾燥為減壓乾燥、噴霧乾燥或冷凍乾燥。進一步，步驟6b)中，所述溶解沉澱的溶劑為熱的去離子水；所述樹脂為D316、 HPD300L、D900、D318或D941型樹脂；所述減壓濃縮是在溫度不高於80°C下進行的。再一方面，本發明提供了一種根據所述的方法製備的大蒜總多糖。進一步，所述的大蒜總多糖為雜多糖，其水解後的成分包括果糖、葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖和甘露糖。又一方面，本發明還提供了一種包含所述大蒜總多糖的藥物組合物。本發明的有益效果如下
本發明提供的大蒜總多糖能製成抗腫瘤藥物，具有良好的抗腫瘤活性和增強免疫的功能，且急毒實驗結果表明其無毒，能夠滿足防癌抗癌和治療保健的需求，應用前景廣闊。本發明提供的大蒜總多糖的製備方法充分利用了提取大蒜油之後的大蒜藥渣，且具有操作簡單、產品提取率高、質量可控以及可產業化的優點。


以下，結合附圖來詳細說明本發明的實施例，其中圖1為實施例3的葡萄糖標準曲線(標準曲線方程y = 12. 97x-0. 078，相關係數0. 9990)；圖2為實施例4的標準溶液色譜圖；圖3為實施例4的樣品分離譜圖。
具體實施例方式下面結合具體的實施例，並參照數據進一步詳細描述本發明。應理解，這些實施例只是為了舉例說明本發明，而非以任何方式限制本發明的範圍。在以下的實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規方法。 所用試劑的來源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現時標明，其後所用相同試劑如無特殊說明，均以首次標明的內容相同。實施例1 大蒜總多糖的製備大蒜200kg，粉碎至直徑為0. 5-lcm的顆粒，雙提1次，水提2次，分別加5倍、4倍和4倍水，每次lh，藥液減壓回收水(溫度<80°C)，濃縮(60°C相對密度1.05)，水濃縮液加乙醇醇沉，使含醇量達到80% (體積比)，放置過夜，離心，得淺黃色大蒜總多糖，出膏率 12. 89%。實施例2 大蒜總多糖的製備大蒜^g，粉碎至直徑0. 5cm左右，雙提1次，水提1次，分別加7倍和5倍水，每次提取0.證，藥液減壓回收水(溫度< 80°C )，濃縮(60°C相對密度1. 08)，水濃縮液加乙醇醇沉，使含醇量達到75% (體積比)，放置過夜，離心，得上清液，過D900樹脂柱，得乳白色大蒜總多糖，出膏率3. 95%。實施例3 採用紫外-可見分光光度法測定大蒜總多糖的含量一、儀器與試劑1.儀器8453紫外-可見分光光度計(美國，安捷倫)；HW · SYll-K數顯恆溫水浴鍋(北京市長風儀器儀表公司)；CX-250超聲波清洗機(天海雙龍醫療設備有限公司)2.試劑5% (重量體積比)苯酚溶液(分析純，天津市福晨化學試劑廠)；濃硫酸和95% (體積比)乙醇溶液(均為分析純，北京化工廠)；D-無水葡萄糖對照品(供含量測定用，中國藥品生物製品檢定所，批號110833-200503)。二、樣品測定1.對照品溶液製備精密稱取無水葡萄糖對照品約lang，置25mL量瓶中，加蒸餾水溶解並定容，即得。
2.標準曲線的製備精密量取對照品溶液1. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. OmL分別置於25mL量瓶中，蒸餾水定容。分別精密量取上述對照品溶液5份各ImL於IOmL具塞試管中，分別加5%苯酚溶液 1. OmL，搖勻後加入濃硫酸5. OmL，搖勻後沸水浴lOmin，取出置於冰水浴中冷卻放置至室溫。以試劑空白為參比在485nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度(mg/mL)為橫坐標，繪製標準曲線，如圖1所示。3.樣品溶液的製備精密稱取大蒜總多糖樣品(來自實施例1)約30mg，置於IOmL離心管中，加入濃度為80% (體積比)的乙醇溶液8mL，超聲振蕩60min，以3000rpm的轉速離心15min，棄去上清液，殘渣用濃度為80% (體積比)的乙醇洗滌2 3次，加入SmL沸水於離心管中，超聲振蕩溶液樣品60min，冷卻後轉移至IOmL量瓶中，少量蒸餾水洗滌離心管，洗滌液合併至量瓶中，蒸餾水定容至10mL。搖勻過濾，取續濾液lmL，至25mL量瓶中，加水定容，即為供試樣品溶液，按標準曲線製備項下操作，由標準曲線計算供試品中大蒜總多糖含量。三、測定結果樣品中以葡萄糖計大蒜總多糖的含量為48. 45% (n = 2)。t施例4 : 用離子盧Λ普(ICS 3000)測丨定大蒜總多糖水解單糖的含量及_成比仿U取大蒜總多糖樣品(來自實施例1)101^，加入21^濃度為211101/1的三氟乙酸溶液，密閉後，80°C下水解4h，水解液溫度降至室溫後，靜置lh，精密量取上清液lmL，置於50mL茄形瓶中，50°C下減壓蒸乾，殘餘物加50mL去離子水，超聲振蕩lOmin，溶解後過 0. 22 μ m濾膜及RP色譜柱，進樣分析，上述溶液再稀釋10倍，供測定含量。表1離子色譜(ICS 3000)測定大蒜總多糖水解單糖結果
權利要求
1.大蒜總多糖在製備用於預防和/或治療癌症的藥物、保健品和/或食品中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於，所述大蒜總多糖為雜多糖，其水解後的成分包括果糖、葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖和甘露糖。
3.根據權利要求1或2所述的應用，其特徵在於，所述腫瘤選自胃癌、直/結腸癌、膀胱癌、前列腺癌、肺癌、鼻咽癌、肝癌、骨癌、食道癌、乳腺癌、宮頸癌、胰腺癌、腦瘤、皮膚癌、 白血病、淋巴癌和黑色素瘤。
4.根據權利要求1 3任一項所述的應用，其特徵在於，所述藥物選自以下劑型注射齊IJ、片劑、顆粒劑、膠囊劑、軟膠囊劑、滴丸、口服液、膜劑、散劑、外用膏劑、栓劑和丸劑。
5.一種用於製備大蒜總多糖的方法，其特徵在於，所述方法包括以下步驟1)大蒜雙提，得揮髮油、藥液和藥渣，優選地，所述雙提包括將大蒜粉碎，加水保溫酶解並以水蒸氣蒸餾提取；2)保留藥液；3)水提藥渣，得水提液；4)將步驟幻所得水提液與步驟幻保留的藥液合併，減壓回收水，濃縮，得濃縮液；5)加醇醇沉所得濃縮液，過夜，離心，得沉澱；6a)將步驟幻所得沉澱進行乾燥，得淺黃色大蒜總多糖。或者6b)溶解步驟幻所得沉澱，離心，上清液過樹脂柱，得流出液，減壓濃縮，乾燥，得乳白色大蒜總多糖。
6.根據權利要求5所述的方法，其特徵在於，步驟1)中，所述雙提為1-2次，每次加3-9 倍水，每次0. 5-池。
7.根據權利要求5所述的方法，其特徵在於，步驟幻中，所述水提為1-2次，每次加3-9 倍水，每次0. 5-池。
8.根據權利要求5所述的方法，其特徵在於，步驟4)中，所述減壓回收是在溫度不高於80°C下進行的；所述濃縮液，以大蒜(g)藥液(mL)為單位計，濃度為1 0. 8-1. 2，使藥液在60°C下的相對密度為0. 9-1. 10。
9.根據權利要求5所述的方法，其特徵在於，步驟幻中，所述醇為乙醇，其在濃縮液中的含量為70-80% (體積百分含量)。
10.根據權利要求5所述的方法，其特徵在於，步驟6a)和步驟6b)中，所述乾燥為減壓乾燥、噴霧乾燥或冷凍乾燥。
11.根據權利要求5 10任一項所述的方法，其特徵在於，步驟6b)中，所述溶解沉澱的溶劑為熱的去離子水；所述樹脂為D316、HPD300L、D900、D318或D941型樹脂；所述減壓濃縮是在溫度不高於80°C下進行的。
12.根據權利要求5 11任一項所述的方法製備的大蒜總多糖。
13.根據權利要求12所述的大蒜總多糖，其特徵在於，所述大蒜總多糖為雜多糖，其水解後的成分包括果糖、葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖和甘露糖。
14.一種藥物組合物，其特徵在於，所述藥物組合物包含權利要12或13所述的大蒜總多糖。
全文摘要
本發明提供了一種大蒜總多糖在製備抗腫瘤藥物中的應用。本發明還提供了一種大蒜總多糖的製備方法，該製備方法充分利用了大蒜提取蒜油之後的藥渣，成本低廉，操作簡單，產品提取率高，質量可控，能夠產業化。本發明又提供了一種用該方法製備的大蒜總多糖及其藥物組合物，具有良好的抗腫瘤活性和增強免疫的功能，安全無毒，能製成抗腫瘤藥物。
文檔編號A61P35/00GK102552644SQ20101061712
公開日2012年7月11日 申請日期2010年12月31日 優先權日2010年12月31日
發明者劉麗梅, 張立石, 柏冬, 王瑞海, 薛欣, 趙宏豔, 鞠大宏 申請人:中國中醫科學院中醫基礎理論研究所