大棗及山楂有效部位在降血脂及抗氧化活性藥物方面應用的製作方法

2023-05-13 08:53:56

專利名稱：：大棗及山楂有效部位在降血脂及抗氧化活性藥物方面應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及了一種從大棗水溶性部位和山楂的醇溶性部位提取製備降血脂有效部位，即由大棗降血脂有效部位與山楂降血脂有效部位組成的降血脂藥物，同時還涉及大棗降血脂有效部位與山楂降血脂有效部位協同作用製備降血脂及抗氧化活性藥物方面的應用。
背景技術：
：大棗是鼠李科植物棗(ziziphusJujubeMill)的成熟果實，性溫，味甘，無毒。主治心腹邪氣，安中，養脾氣，平胃氣，通九竅，助十二經，補少氣，少津液，身中不足，大驚四肢重，和百藥，久服輕身延身。大棗味美甘甜，其含糖量居各類果品之首，鮮棗含糖量20°/。以上，幹棗含糖60%—80%。大棗中的可溶性糖包括果糖，葡萄糖，鼠裡糖，山梨糖醇，蔗糖。果糖和葡萄糖是大棗糖中主要的糖，而山梨糖醇的量很少。大棗多糖多為水溶性的中性多糖(JDP-N)和酸性多糖(JDP-A)，它是由多種單糖組成的。與蛋白質和核酸相比，大棗多糖分子結構較複雜，其分子量為63000263000。大棗多糖能有效清除人體內的氧自由基、減輕衰老模型小鼠免疫器官的萎縮及腦的老化、抑制腫瘤細胞深入。進一步的藥理研究表明，大棗多糖具有明顯的止咳、祛痰、行血、止血和通經活絡之功效，同時具有明顯的抗補體活性和促進淋巴細胞增殖的作用，並且能有效增強機體免疫力。目前，好多研究都發現大棗多糖具有抗氧化作用，而對於其降血脂作用未見報導。山楂為薔薇科植物山楂Crataegwsp/""afzyWaBimge、山裡紅Crataegusp/"waft)WaBungevar.majorN.E.Br.禾口野山楂Gartog^scw"eatoSiebetZucc.的乾燥成熟果實。性微溫，味酸甘，入脾、胃、肝經，有消食健胃、活血化淤、收斂止痢之功能。山楂中含有黃酮類、三萜類、有機酸等化學成分，具有降壓、降血脂、保護心腦血管等作用；現在有很多文獻對山楂降血脂作用進行了研究，但是研究範圍比較淺，只是對其水提物、醇提物或總黃酮類進行研究。高脂血症(Hyperlipaemia，HLP)主要是指血清總膽固醇(TC)或甘油3三酯(TG)水平過高和(或)血清高密度脂蛋白一膽固醇(HDL-C)水平過低。高脂血症是中老年的常見病和多發病，隨著人們生活水平的提高和生活習慣的改變，該病的發病率明顯增加，發病的年齡也有所提前。高脂血症所引起的動脈粥樣硬化是造成冠心病、高血壓和腦血管疾病的主要原因，嚴重危害到了人類生命健康。目前，西藥調節血脂雖有肯定的療效，但有不同程度的副作用，且作用靶點單一。目前公認為調脂最有效並廣泛應用的西藥是他汀類，但費用高，且有肝臟和肌肉毒性等副作用。近年來，中藥調血脂以其療效好、副作用小的優勢而成為研究的熱點。
發明內容本發明的目的在於提供一種大棗降血脂有效部位和山楂降血脂有效部位在製備降血脂及抗氧化活性藥物方面的應用。同時，本發明的目的還在於提供一種由大棗水溶性部位和山楂的醇溶性部位組成的降血脂的藥物。為了實現上述目的，本發明的技術方案採用了一種大棗降血脂有效部位和山楂降血脂有效部位在製備降血脂及抗氧化活性藥物方面的應用。進一步，本發明的技術方案還採用了一種降血脂的藥物，由大棗降血脂有效部位和山楂降血脂有效部位聯合製備而成。所述大棗降血脂有效部位的提取方法為大棗先經乙醇脫脂後，再用水提，再脫去蛋白即得；所述大棗降血脂有效部位的提取方法具體包括以下步驟將大棗去核，用90%食用乙醇按體積與大棗質量比5:1，重複冷浸3次，每次7天，過濾，將濾渣風乾，將濾渣用水煮三次，每次15min,將提取液合併濃縮，烘乾得大棗粗多糖；然後將大棗粗多糖以30%的三氯乙酸脫蛋白，靜置，離心，上清液以鹼液調Pt^7，減壓濃縮，濃縮液對水透析，透析後的濃縮液加入無水乙醇使其含醇量為70%,靜置，離心，收集沉澱物，即得大棗降血脂有效部位即大棗多糖DW。所述的山楂降血脂有效部位的提取方法為山楂的乙醇提取物過大孔樹脂柱的40%乙醇衝洗部分。所述山楂降血脂有效部位的提取方法具體為；取山楂的成熟果實，用乙醇按l:5(m:v，山楂與乙醇的比值)的比例浸泡6—8天，每天攪拌1次，取其濾液，濃縮，濾渣按按食用乙醇體積與去核山楂質量比為1:5的比例浸泡3天，每天攪拌1次，連續提取2次，取其濾液、濃縮，合併濃縮物即得浸膏;將山楂乙醇浸膏用20%的乙醇稀釋上AB-8大孔樹脂柱，先用20%乙醇衝洗雜質，然後用40%的乙醇衝洗，將衝洗液合併蒸乾即得山楂降血脂有效部位SC。所述的乙醇為食用級別。本發明中大棗降血脂有效部位即大棗多糖具有較好的抗氧化活性，體內實驗也表明大棗多糖能降低高脂血症小鼠的血清總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇，且可通過氧化途徑(升高超氧化物岐化酶SOD、降低脂質過氧化產物—丙二醛MDA)來降低血脂水平。對大棗多糖有效部位進行進一步開發，發揮其多靶點協同預防和治療高血脂等疾病的作用。另外，經過實驗證明，大棗降血脂部位DW和山楂降血脂部位SC在調節高脂血症方面兩者配伍的協同增效作用明顯，在抗脂質過氧化方面兩者配伍的協同增效作用也較為明顯。由體內外實驗可知，DW、SC以及DW+SC在體外具有一定的抗氧化活性，同時在體內可以提升高脂血症小鼠血清中SOD水平，降低MDA水平，可以說體內外是一致的；同時兩者在體外抗氧化具有正協同作用，在體內的抗脂質過氧化和調血脂均有正協同作用，體內外也是一致的。所以說SC和DW具有協同調血脂和抗氧化作用。圖1為大棗降血脂有效部位DW與山楂降血脂有效部位SC對ABTS自由基的清除作用示意圖。具體實施例方式實施例1本實施例為大棗降血脂有效部位和山楂降血脂有效部位在製備降血脂及抗氧化活性藥物方面的應用。體外抗氧化試驗材料與試劑大棗多糖(DW)、SC均由實驗室製備提供。二苯代苦味肼基自由基DPPH(日本東京化成工業株式會社);Trolox(Aldrich);ABTS[2，2'-連氨-(3-乙基苯並噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽](Fluka);BHT(Acrosorganics);甲醇，醋酸鈉，FeCl3*6H20，冰醋酸，過二硫酸鉀均為分析純。主要儀器UV-2000型紫外可見分光光度計(尤尼可上海儀器有限公司)，電子天平(梅特勒-託利多儀器有限公司)，旋轉蒸發儀(東京理化)，電熱套(北京中興偉業儀器有限公司)，超聲波清洗器(崑山市超聲儀器有限公司)。試驗方法1)本實驗採用清除二苯代苦味肼基自由基(DPra*)和清除ABTS自由基二種方法，並以BHT作為陽性對照，來研究DW和SC的抗氧化活性。結果見表l2)本實驗採用清除ABTS自由基方法來研究DW和SC兩者之間的協同抗氧化活性。數據處理採用響應曲面法(RSM)對協同數據進行分析。結果如下(1)單獨樣品的抗氧化活性ABTS測定結果表示樣品抗氧化能力的順序為SC>BHT>DW;DPPH測定結果SOBHT〉DW。(2)DW和SC的協同抗氧化活性採用RSM對表4中試驗結果進行分析，得到響應方程及等高線見圖1P=—0.82+592.57X!+502.65X2+1280.42X2—7916.66X!2—150.19X22(r2=0.9613)響應方程中，e卩P2>0，表明SC+DW濃度的增大皆有助於複合抗氧化活性的提高；P12>0,表明SC+DW具有正協同作用；由於P!2〉e,〉P2，所以各因素對SC+DW組合的抗氧化活性的影響程度SC+DW的協同作用〉SC>DW。表l樣品的抗氧化活性tableseeoriginaldocumentpage6注ICs。為半數抑制率，指清除率為50%時所需抗氧化劑的濃度(ug/ml)。a:為陽性對照品；b:濃度為2mg/ml的百分抑制率，因為樣品濃度達到最大時，而抑制率小於50%,所以無法計算其IC5o。表2DW與SC對ABTS自由基的清除作用tableseeoriginaldocumentpage6tableseeoriginaldocumentpage7體內降血脂試驗動物昆明小鼠，空腹體重為23士2g，全部雄性。由河南省醫學動物實驗中心提供。材料與試劑大棗多糖、SC由河南大學天然藥物研究所製備提供。決明子降脂片，吉林吉春製藥有限公司批號070501。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)測定試劑盒，南京建成生物工程研究所提供。總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測定試劑盒，北京中生生物工程高技術公司提供。試驗方法高脂乳劑的配製豬油20%、膽固醇10%、丙硫氧嘧啶1%、2%膽鹽(配成10%溶液)、丙二醇2%和吐溫801%。動物分組與處理取60隻小鼠，平均體重23士2g，按實驗要求分為正常對照組，高脂模型組，給藥組(包括大棗多糖組、SC組、大棗多糖+SC配伍合用組)，陽性對照組。正常對照組動物上午ig(灌胃)給於蒸熘水，下午ig0.5%CMC-Na，高脂模型組均於每天上午ig給於高脂乳劑(0.2ml/10g'd)，下午ig0.5%CMC-Na，給藥組分別於每天上午ig給於高脂乳劑(0.2ml/10g*d)，下午ig給藥，給藥量見表3。IO天后，各組小鼠均禁食12h，眼底靜脈叢取血，離心分離血清用於血脂及SOD、MDA的測定。表2動物分組與處理組別動物數(只)上午(0.2ml/10g)下午(0.2ml/10g)給藥量Cmg/kg)空白組10蒸餾水0.5%CMC-Na——模型組10高脂乳劑0.5%CMC-Na——陽性對照組10高脂乳劑決明子降脂片120DW組10高脂乳劑大棗多糖200SC組高脂乳劑40%的乙醇部分400DW+SC組10高脂乳劑各自用量的一半100+200指標測定方法TC，TG，LDL-C，HDL-C，MDA，SOD的測定按試劑盒說明方法進行數據處理實驗數據X士S表示，實驗統計採用SpsslO.O統計軟體進行單因素方差分析，協同作用採用Burgi公式法。結果如下(1)DW、SC以及DW+SC對高脂血症小鼠血脂的影響，結果見表3。DW、SC以及DW+SC均可明顯的降低高脂血症小鼠血清中TC、TG和LDL-C水平，並且可明顯升高HDL-C水平。並且DW和SC在這兩個劑量時，兩者效應基本一樣，同時在實驗中各取兩者劑量的一半進行配伍作用，配伍的效果均好於單獨用藥的效果，Q>1，所以說DW和SC在調節高脂血症方面兩者配伍的協同增效作用明顯。(2)DW、SC以及DW+SC對高脂血症小鼠抗氧化能力的測定，結果見表3.DW、SC以及DW+SC均可明顯的提升高脂血症小鼠血清中SOD的水平，並且DW+SC還可降低小鼠血清中MDA的水平，但對於肝重比，則沒有太大影響。並且DW和SC在這兩個劑量時，兩者效應基本一樣，同時在實驗中各取兩者劑量的一半進行配伍作用，配伍的結果均好於單獨用藥的結果，Q>1，所以說DW和SC在抗脂質過氧化方面兩者配伍的協同增效作用明顯。表3DW、SC以及DW+SC對營養性高脂血症小鼠血脂及抗氧化能力的影響(x士s)組別TCTGLDLHDLSODMDA肝重比空白3.3135±1.4947i0.86261,3579184.72229駕432.41360,7237*"0.4030土0.3535'**土0.2564*土29.9488"土1.2372土4.273(f"組模型7.3840土1.5344土5.18620.7263±131.8230土7.756746.84242,0192AAA0.5178Jl2.8385AA0.2351A32,0695AA±1.1397土5.8571蟲組△陽性3.0333土0.8326土1.53162.0283152.0000i9.4048土42.84241.0064卞0.3306*土0.7529被'±1.0325**36.03101.4225土5.8571對照組DW3.7921±0.8027土2.6462t1.6481土169.9444土6馬448.51901.4185***0.2921'1.0015**0.5826":26.7222"土1.7768i5.5703組sc組3.9700i0.8643土2.7381土1.6513179.7963i6.6667±53.83281.5097***0.1852'1.2783**±0.2377**39.8665**1.1309±7.1750DW+3.7391±0.7156±2.47631.6636201.4156土5.777847.88681.3948"*0.1685**土1.6582'^土0.595(T27.1423"*土1.4693土7麓4sc組注與正常對照組比較A代表顯著性差異，AA代表非常顯著性差異，AAA代表極顯著性差異；與高脂模型組比較*代表顯著性差異，**代表非常顯著性差異，***代表極顯著性差異。由體內外實驗可知，DW、SC以及DW+SC在體外具有一定的抗氧化活性，同時在體內可以提升高脂血症小鼠血清中SOD水平，降低MDA水平，可以說體內外是一致的；同時兩者在體外抗氧化具有正協同作用，在體內的抗脂質過氧化和調血脂均有正協同作用，體內外也是一致的。所以說SC和DW具有協同調血脂和抗氧化作用。實施例2本實施例的降血脂藥物，由大棗降血脂有效部位和山楂降血脂有效部位聯合製備而成。其中，大棗降血脂有效部位的提取方法為將大棗去核，用90%食用乙醇按體積比與大棗質量5:l重複冷浸3次，每次7天，過濾，將濾渣風乾，將濾渣用水煮三次，每次15min,將提取液合併濃縮，烘乾得大棗粗多糖；然後將大棗粗多糖以30%的三氯乙酸脫蛋白，靜置，離心，上清液以鹼液調PH-7，減壓濃縮，濃縮液對水透析，透析後的濃縮液加入無水乙醇使其含醇量為70%，靜置，離心，收集沉澱物，即得大棗降血脂有效部位即大棗多糖DW。山楂降血脂有效部位的提取方法具體為；取山楂的成熟果實，用食用級乙醇按l:5(m:V，山楂與乙醇的比值)的比例浸泡7天，每天攪拌1次，取其濾液，濃縮，濾渣按食用乙醇體積與去核山楂質量l:5的比例浸泡3天，每天攪拌1次，連續提取2次，取其濾液、濃縮，合併濃縮物即得浸膏；將山楂乙醇浸膏用20%的乙醇稀釋上AB-8大孔樹脂柱，先用20%乙醇衝洗雜質，然後用40%的乙醇衝洗，將衝洗液合併蒸乾即得山楂降血脂有效部位SC。最後所應說明的是以上實施例僅用以說明，而非限制本發明的技術方案，儘管參照上述實施例對本發明進行了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解依然可以對本發明進行修改或者等同替換，而不脫離本發明的精神和範圍的任何修改或局部替換，其均應涵蓋在本發明的權利要求範圍當中。權利要求1、一種大棗降血脂有效部位和山楂降血脂有效部位大棗及山楂有效部位體內協同在製備降血脂及抗氧化活性藥物方面的應用。2、一種降血脂的藥物，其特徵在於由大棗降血脂有效部位和山查降血脂有效部位聯合製備而成。3、根據權利要求2所述的降血脂的藥物，其特徵在於；所述大棗降血脂有效部位的提取方法為大棗先經乙醇脫脂後，再用水提，再脫去蛋白即得；4、根據權利要求3所述的降血脂的藥物，其特徵在於所述大棗降血脂有效部位的提取方法具體包括以下步驟將大棗去核，用90%食用乙醇按體積比5:1(食用乙醇體積與去核大棗質量)重複冷浸2—4次，每次6—8天，過濾，將濾渣風乾，將濾渣用水煮三次，每次15min,將提取液合併濃縮，烘乾得大棗粗多糖；然後將大棗粗多糖以30%的三氯乙酸脫蛋白，靜置，離心，上清液以鹼液調PH-7，減壓濃縮，濃縮液對水透析，透析後的濃縮液加入無水乙醇使其含醇量為70%，靜置，離心，收集沉澱物，即得大棗降血脂有效部位即大麥多糖DW。5、根據權利要求2所述的降血脂的藥物，其特徵在於所述的山楂降血脂有效部位的提取方法為山楂的乙醇提取物過大孔樹脂柱的40%乙醇衝洗部分。6、根據權利要求5所述的降血脂的藥物，其特徵在於所述山楂降血脂有效部位的提取方法具體為；取山楂的成熟果實，用乙醇按l:5(m:v，山楂與乙醇的比值)的比例浸泡6—8天，每天攪拌1次，取其濾液，濃縮，濾渣按按食用乙醇體積與去核山楂質量1:5的比例浸泡3天，每天攪拌1次，連續提取2次，取其濾液、濃縮，合併濃縮物即得浸膏；將山楂乙醇浸膏用20%的乙醇稀釋上AB-8大孔樹脂柱，先用20%乙醇衝洗雜質，然後用40%的乙醇衝洗，將衝洗液合併蒸乾即得山楂降血脂有效部位SC。7、根據權利要求6所述的降血脂的藥物，其特徵在於所述的乙醇為食用級別。全文摘要本發明涉及了一種從大棗水溶性部位和山楂的醇溶性部位提取製備降血脂有效部位，即由大棗降血脂有效部位與山楂降血脂有效部位組成的降血脂藥物，同時還涉及大棗降血脂有效部位與山楂降血脂有效部位協同作用製備降血脂及抗氧化活性藥物方面的應用。經過實驗證明，大棗降血脂部位DW和山楂降血脂部位SC在調節高脂血症方面兩者配伍的協同增效作用明顯，在抗脂質過氧化方面兩者配伍的協同增效作用也較為明顯。由體內外實驗可知，DW、SC以及DW+SC在體外具有一定的抗氧化活性，同時在體內可以提升高脂血症小鼠血清中SOD水平，降低MDA水平，可以說體內外是一致的；同時兩者在體外抗氧化具有正協同作用，在體內的抗脂質過氧化和調血脂均有正協同作用，體內外也是一致的。所以說SC和DW具有協同調血脂和抗氧化作用。文檔編號A61K36/185GK101618095SQ200810140470公開日2010年1月6日申請日期2008年7月3日優先權日2008年7月3日發明者康文藝,李曉梅,郭曙光申請人:河南大學