防治海馬頭部潰爛病的藥物及組合物的製作方法

2023-05-14 02:42:51 1

本發明涉及水產養殖
技術領域：
，尤其涉及防治海馬頭部潰爛病的藥物及組合物。
背景技術：
：海馬為海龍科動物是刺魚目海龍科暖海生數種小型魚類的統稱。海馬作為一種名貴的中藥材，在我國使用的歷史悠久，早在《本草綱目》等多部醫藥著作中就有記載。海馬因具有極高的藥用和營養價值，享有「南方人參」之美譽，具有溫腎壯陽、消腫散節和婦人催生等功效。目前在熱帶和溫帶沿海的海草床、珊瑚礁、紅樹林和河口地區發現至少46個種的海馬。2012年，世界自然保護聯盟(iucn)將38種海馬列入瀕危物種。作為締約國，我國也已將海馬列為國家二級保護動物。為了拯救海馬這一瀕危物種，並滿足市場需求，除建立海馬自然保護區，改善海馬生存環境來保護海馬自然資源外，通過人工養殖海馬是海馬保護的重要手段之一。我國自1957年以來已經開始養殖海馬，然而目前海馬養殖產業在國內推廣並不是很好，限制其發展的主要瓶頸是養殖技術和病害。海馬養殖中，水質、水溫、光線、比重及餌料等環境因子變化往往較大，海馬由於不能適應這種環境的變化，病害發生較多，死亡率較高。據調查，海南省瓊海市某海馬種苗繁育基地，從2016年5月～8月，約30個養殖池幾乎全部死亡，給該養殖基地造成巨大的損失。在同一時期，廣東和福建沿海的養殖戶也出現大面積死亡，死亡率高達80％～90％。而引起海馬大規模死亡的重要原因之一是海馬的頭部潰爛病。海馬頭部潰爛病是由創傷弧菌(vibriovulnificus)導致的疾病，目前，針對海馬的頭部潰爛病的治療方法還是以使用抗生素類藥物為主，結合其他藥物，如土黴素和聚維酮碘等，而長期使用抗生素類藥物不但會使細菌產生抗藥性，而且會影響海馬健康和抗病害能力；藥物殘留不但會對環境產生危害，而且會產生嚴重的社會問題。近年來，從天然植物特別是藥用植物中尋找純天然抗生物藥物已成為研究熱點。技術實現要素：有鑑於此，本發明要解決的技術問題在於提供防治海馬頭部潰爛病的藥物及組合物。本發明提供的活性物質或組合物能夠通過抑制創傷弧菌達到防治海馬頭部潰爛病的作用。本發明提供了活性物質在製備抑制創傷弧菌的藥物中的應用；所述活性物質為茶多酚、沒食子酸、大蒜素、乳酸、聚賴氨酸中的至少一種。本發明實施例中，進行效果驗證的菌株為：創傷弧菌(vibriovulnificusdc1)。本發明還提供了活性物質在製備防治海馬頭部潰爛病的藥物中的應用；所述活性物質為茶多酚、沒食子酸、大蒜素、乳酸、聚賴氨酸中的至少一種。本發明實施例中，進行效果驗證的海馬為大海馬。海馬頭部潰爛病由創傷弧菌引起，本發明通過體外實驗證明，活性物質茶多酚、沒食子酸、大蒜素、乳酸、聚賴氨酸皆能夠具有抑制創傷弧菌的作用，抑菌圈直徑與大部分常用抗生素相當，且未表現出耐藥性。另有部分常見具有抑菌作用的活性物質(例如，nisin、姜辣素等)，未表現出對創傷弧菌的抑制作用。本發明還提供了一種抑制創傷弧菌的組合物，其特徵在於，由以下質量份的組分組成；茶多酚1～8份；沒食子酸1～3份；大蒜素1～5份；乳酸1～6份；聚賴氨酸2～10份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚0.5～5份；沒食子酸1份；大蒜素1～8份；乳酸1～3份；聚賴氨酸2～10份。經實驗驗證，本發明提供的組合物中，5種組分相互配合起到了良好的增效協同作用，在用量相當的條件下，組合物的抑菌圈直徑顯著大於單一組分的抑菌圈直徑(p<0.05)。而在適宜配比下，增效協同作用更加顯著，抑菌圈直徑可達單一組分的2倍。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚5份；沒食子酸1份；大蒜素2份；乳酸3份；聚賴氨酸8份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚0.5份；沒食子酸1份；大蒜素3份；乳酸8份；聚賴氨酸10份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚2.75份；沒食子酸1份；大蒜素2份；乳酸4.5份；聚賴氨酸10份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚5份；沒食子酸1份；大蒜素1份；乳酸1份；聚賴氨酸10份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚0.5份；沒食子酸1份；大蒜素3份；乳酸1份；聚賴氨酸10份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚5份；沒食子酸1份；大蒜素3份；乳酸8份；聚賴氨酸10份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚5份；沒食子酸1份；大蒜素3份；乳酸1份；聚賴氨酸10份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚0.5份；沒食子酸1份；大蒜素1份；乳酸1份；聚賴氨酸10份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚5份；沒食子酸1份；大蒜素1份；乳酸8份；聚賴氨酸10份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚2.75份；沒食子酸1份；大蒜素2份；乳酸4.5份；聚賴氨酸6份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚0.5份；沒食子酸1份；大蒜素2份；乳酸4.5份；聚賴氨酸6份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚2.75份；沒食子酸1份；大蒜素2份；乳酸8份；聚賴氨酸6份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚5份；沒食子酸1份；大蒜素2份；乳酸4.5份；聚賴氨酸6份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚2.75份；沒食子酸1份；大蒜素2份；乳酸1份；聚賴氨酸6份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚5份；沒食子酸1份；大蒜素3份；乳酸8份；聚賴氨酸2份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚2.75份；沒食子酸1份；大蒜素1份；乳酸4.5份；聚賴氨酸6份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚2.75份；沒食子酸1份；大蒜素3份；乳酸4.5份；聚賴氨酸6份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚5份；沒食子酸1份；大蒜素1份；乳酸8份；聚賴氨酸2份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚0.5份；沒食子酸1份；大蒜素3份；乳酸8份；聚賴氨酸2份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚2.75份；沒食子酸1份；大蒜素2份；乳酸4.5份；聚賴氨酸2份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚5份；沒食子酸1份；大蒜素1份；乳酸1份；聚賴氨酸2份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚5份；沒食子酸1份；大蒜素3份；乳酸1份；聚賴氨酸2份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚0.5份；沒食子酸1份；大蒜素1份；乳酸8份；聚賴氨酸2份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚0.5份；沒食子酸1份；大蒜素1份；乳酸1份；聚賴氨酸2份。本發明實施例中，組合物由如下質量份的組分組成：茶多酚5份；沒食子酸1份；大蒜素3份；乳酸1份；聚賴氨酸2份。本發明提供的組合物能夠用於防治由創傷弧菌引起的疾病，尤其適用於防治海馬的頭部潰爛病。本發明提供組合物用於防治海馬頭部潰爛病的質量-體積濃度為45mg/l～260mg/l。本發明還提供了防治海馬頭部潰爛病的藥物包括本發明所述的組合物和藥學上可接受的輔料。本發明提供的藥物以藥學上可接受的輔料製成各種劑型，以投放至飼養海馬的水體中經過口服及接觸防治海馬的頭部潰爛病。其劑型優選為：粉劑、片劑或膠囊劑。本發明還提供了一種防治海馬頭部潰爛病的飼料，包括本發明所述的組合物和海馬餌料。本發明實施例中，飼料中所述組合物的質量-體積濃度為45mg/l～260mg/l。所述體積為飼料總體積，本發明對海馬餌料成分沒有特殊要求，適宜海馬各階段自身的食性即可。本發明還提供了一種海馬的飼養方法，其特徵在於，每年5～8月，以本發明所述的飼料飼餵海馬，每天飼餵2次；其餘時間以未添加藥物的餌料飼餵海馬。本發明實驗表明，健康大海馬放入海馬頭部潰爛病原菌濃度為1×106cfu/ml的20l水體中，浸泡12h後，分別移入有效水體為70cm×50cm×50cm的玻璃缸中正常飼養和換水，連續觀察30d。實驗組採用本發明組合物，拌於餌料投喂，1天2次，對照組1採用等量土黴素，拌於餌料投餵；對照組2不採取措施，正常投喂，1天2次。對照組2第3d開始發病，海馬起初用頭部摩擦假水草，或者用頭部觸摸水族缸壁，頭頂和頸部皮膚開始發黃，然後在水缸中出現平遊和倒遊，開始沉底，最終頭部和頸部皮膚潰爛死亡。至第15d，對照組2海馬全部死亡。對照組1第8天才有發病症狀，至第30d海馬死亡率為50％。實驗組海馬在30d養殖期間，無發病現象。本發明提供了防治海馬頭部潰爛病的藥物及組合物，該組合物由具有抑制創傷弧菌功能的活性物質組成，本發明通過體外實驗證明，活性物質茶多酚、沒食子酸、大蒜素、乳酸、聚賴氨酸皆能夠具有抑制創傷弧菌的作用，抑菌圈直徑與大部分常用抗生素相當，且未表現出耐藥性。另有部分常見具有抑菌作用的活性物質(例如，nisin、姜辣素等)，未表現出對創傷弧菌的抑制作用。經實驗驗證，本發明提供的組合物中，5種組分相互配合起到了良好的增效協同作用，在用量相當的條件下，組合物的抑菌圈直徑顯著大於單一組分的抑菌圈直徑(p<0.05)。而在適宜配比下，增效協同作用更加顯著，抑菌圈直徑可達單一組分的2倍。而在同等抑菌效果下，組合物的絕對用量為單一組分的一半。並且，本發明藥物採用天然食藥用成分，將通過海馬代謝完全，無藥物殘留，無毒副作用，且不會產生抗藥性，也不會對海馬養殖水環境造成汙染。具體實施方式本發明提供了防治海馬頭部潰爛病的藥物及組合物，本領域技術人員可以借鑑本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
發明內容、精神和範圍內對本文的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。茶多酚：又名茶單寧、茶鞣質，是茶葉中多酚類物質的總稱，含黃烷醇類、花色苷類、黃酮類、黃酮醇類和酚酸類等成分，其中以屬兒茶素類化合物的黃烷醇類含量最高，佔茶多酚總量的60％-80％。茶多酚的抑菌譜廣，對有細胞壁和無細胞壁的革蘭氏陽性、陰性菌均有抑制作用，其對枯草桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、齲齒鏈球菌以及毛黴菌、青黴菌、赤黴菌、炭疽病菌、啤酒酵母菌有抑制作用。而且，茶多酚攝入人體後對人體有很好的生理效應；能清除人體內多餘的自由基，能改進血管的滲透性能，降低血壓，防止血糖升高，促進維生素c的吸收與同化，還有抗癌防齲、抗機體脂質氧化和抗輻射等作用。沒食子酸：又名五倍子酸、桔酸，為3,4,5－三羥基苯甲酸，為白色或淡黃色針狀結晶或粉末，通常以一水合物的狀態存在，是白色或微黃色針狀晶體，是一種天然的多酚類化合物，它以游離酸形式或形成酯類化合物存在於五倍子、茶、沒食子等植物中，是植物體中一類次生代謝產物，具有抗氧化、抑菌、防鍋齒等生物活性，可用於醫藥、有機合成和食品、農業、礦產等領域。沒食子酸是多種植物的抑菌成分，對於枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、嗜水氣單胞菌以及溫和氣單胞菌等都具有一定的抑菌作用。大蒜素：大蒜為百合科蔥屬多年生草本植物，可作調味品、食品添加劑、飼料添加劑及美容化妝品的原料。大蒜具有殺菌、抑菌、抗病毒等醫療、保健功能。大蒜素是大蒜瓣和蒜精油中含硫化合物的總稱，是大蒜的主要生物活性成分具有不同程度的抑菌作用，被譽為天然抑菌劑。蒜瓣被破碎、擠壓時，由蒜氨酸與蒜苷酶接觸，在磷酸吡哆醛催化下轉化形成一類抑菌力最強的烯丙基二硫和三硫化物(亦稱為大蒜新素)。乳酸：廣泛存在於食品特別是發酵食品中，如泡菜、醃菜、橄欖和某些肉、酸奶、奶酪及酸豆乳等發酵食品，多是採用乳酸菌種發酵所制。在乳酸菌發酵過程中，會產生許多有益於食品保藏的代謝產物，其中乳酸及少量醋酸是其中的主要代謝產物，它可以降低自身的ph值，從而有效抑制微生物的生長，達到抑菌和防腐效果。乳酸和乳酸鹽被美國食品與藥品管理局批准為「安全無毒物質(gras)」。乳酸和乳酸鹽能抑制多種致病微生物的生長，如金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、埃希氏大腸桿菌和枯草芽孢桿菌等。多聚賴氨酸：是一種由人體必須胺基酸l–賴氨酸的ε–氨基和另一l–賴氨酸的α–羧基形成ε–醯胺鍵連接而成的同聚物，是由一種白色鏈黴菌(streptomycesalbulus)發酵產生。多聚賴氨酸為陽離子表面活性物質，分子內部有疏水性的亞甲基，外部有親水性的羧基和氨基。在水溶液中，游離的氨基帶有正電荷，而正電荷有利於多聚賴氨酸與細菌細胞表面帶負電的位點結合，因此具有良好的抑菌效果。目前，多聚賴氨酸已廣泛應用到食品加工業的各個領域。下面結合實施例，進一步闡述本發明：實施例1將目前，常用的抗生素或具有抗菌功能的物質進行創傷弧菌的抑菌圈實驗。實驗採用藥物的體積為50μl。部分實驗結果如表1～2：表1常用抗生素抗創傷弧菌的效果註：s，敏感；i，中介；r，耐藥。表2常用活性物質的抑菌圈直徑(mm)結果表明，聚賴氨酸、茶多酚、沒食子酸、大蒜素和乳酸具有抑制創傷弧菌的作用，等濃度條件下，其效果與常用抗生素相當，甚至優於常用抗生素。而另一些常見具有抑菌功能的活性物質則未體現抑菌效果。實施例2按照表3配製組合物：表3:組合物配方序號茶多酚(mg)乳酸(mg)大蒜素(mg)多聚賴氨酸(mg)沒食子酸(mg)127.545206010227.510206010354520601045010102010527.580206010627.545206010750803020108510302010951030100101050452060101127.5452060101227.5452060101350103020101450801010010155080301001016501030100101727.545106010185803020101927.54520100102050801020102158030100102251010100102327.5452060102427.54520601025580101001026501010100102727.545202010285101020102927.5453060103027.54520601031580102010325020308010將表3組合物分別溶解至1l，各取50μl進行對創傷弧菌的抑菌圈實驗，每組實驗重複3次，測量結果取平均值結果如表4：表4各組合物抑菌圈直徑序號抑菌圈直徑(mm)序號抑菌圈直徑(mm)122.51721.52221820.53231927419.520215232127.5622.52226721.523248142424926252510232627112327201223.5281513192921.51425.530231526311916263226.0結果顯示，組合物效果顯著優於單一組分的效果(p<0.05)，例如，第1～3、5～7、9～12、14～17、19～26、29、30、32號組方的組合物，其效果皆顯著優於單一組分(p<0.05)，各組分的復配起到了增效協同作用。而不當的配比，僅能維持相似的抑菌效果，甚至降低對病原菌的抑制作用。效果最佳的組方為19號組方、第21號組方、第26號組方，其抑菌效果顯著優於其他組方。實施例3取健康大海馬放入海馬頭部潰爛病原菌(創傷弧菌dc1)濃度為1×106cfu/ml的20l水體中，浸泡12h後，分別移入有效水體為70cm×50cm×50cm的玻璃缸中正常飼養和換水，連續觀察30d。實驗組採用本發明組合物(分別給予第1～3、5～7、9～12、14～17、19～26、29、30、32號組方)，拌於餌料投喂，1天2次，對照組1採用等量土黴素，拌於餌料投喂，1天2次；對照組2不採取措施，正常投喂，1天2次。對照組2第3d開始發病，海馬起初用頭部摩擦假水草，或者用頭部觸摸水族缸壁，頭頂和頸部皮膚開始發黃，然後在水缸中出現平遊和倒遊，開始沉底，最終頭部和頸部皮膚潰爛死亡。至第15d，對照組2海馬全部死亡。對照組1第8天才有發病症狀，至第30d海馬死亡率為50％。各實驗組海馬在30d養殖期間，無發病現象。以上僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對於本
技術領域：
的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護範圍。當前第1頁12