一項鐵線蓮阿拉貝拉組織培養快繁技術的製作方法

2023-05-14 05:56:36

專利名稱：一項鐵線蓮阿拉貝拉組織培養快繁技術的製作方法
技術領域：
本發明涉及鐵線蓮『阿拉貝拉』組織培養快繁技術。
背景技術：
鐵線蓮『阿拉貝拉，(Clematis『Arabella，)隸屬於毛茛科(Ranunculaceae)鐵 線蓮屬(Clematis L.),是鐵線蓮 Clematis ' Integrifolia'與 Clematis iLanujinosa'的
雜交品種，原產自英國。該品種植物花型、花序多樣，花色豐富，花期長，園藝用途廣泛，觀賞 價值頗高。『阿拉貝拉』作為垂直綠化材料，不僅應用於園林領域，而且廣泛用於盆栽，切花寸。鐵線蓮『阿拉貝拉』觀賞價值較高，應用前景廣，但卻因其種子繁殖困難，推廣速度 慢。目前我國還沒有研究出它的快繁技術，該品種仍需從國外大量進口，限制了 『阿拉貝拉』 在我國的推廣和應用，同時也消耗掉我國大量外匯。所以，研究『阿拉貝拉』快繁技術極其必要。鐵線蓮品種豐富，但至今對於鐵線蓮的組織培養研究並不多，澤仁旺姆利用甘青 鐵線蓮的種子長出的幼苗進行了不定芽和不定根的生成；張啟香找出了 『Multi-Blue』的 最佳外植體為莖尖；而張濤誘導出重瓣鐵線蓮的愈傷，但沒有誘導不定芽。本技術利用鐵 線蓮『阿拉貝拉』當年新生枝條帶芽莖段，進行組織培養，誘導腋芽的發生，促進不定芽的生 成，再誘導其生根。通過人工配製不同營養成分和激素調控，在保留『阿拉貝拉』母體花色 豔麗，花型大等特點的基礎上，形成成千上萬小植株，短時間內獲得大量試管苗，獲得的幼 苗存可放在人工控制的培養室內，可實現一年四季工廠化無性系育苗。因此利用組織培養 技術繁殖鐵線蓮『阿拉貝拉』，不僅為推廣鐵線蓮『阿拉貝拉』提供了一個快速的途徑，也為 其工廠化生產提供幫助，應用前景遠大。

發明內容
本發明的目的是提供一種可以實現快速和大量繁殖鐵線蓮『阿拉貝拉』的組織培 養技術。本發明提供的鐵線蓮『阿拉貝拉』組織培養快繁技術，包括以下幾個步驟1、腋芽誘導將當年新生枝條帶芽莖段，接種到誘導培養基，該培養基含有1/4MS、1/2MS、MS常 規基本培養基、2，4_ 二氯苯氧乙酸1. 0毫克/升、吲哚丁酸0. 1毫克/升、蔗糖30克/升。 培養20天後，待培養物誘導出芽原基後，進入以下第2步。2、不定芽增殖將第1步所得的培養物轉移到增殖培養基上，增殖培養基含有MS常規基本培養 基、6-苄基嘌呤0. 5-1. 5毫克/升、吲哚丁酸0. 05-0. 15毫克/升、蔗糖20-40克/升。培 養20天左右，待小苗長到常規生根程序所需高度時，進入以下第3步。3、生根
將第2步所得的無根小苗齊根取下，轉至常規生根培養基中，生根基本培養基含 有1/4MS，1/2MS，MS常規基本培養基、萘乙酸0. 05毫克/升，培養20天左右，待小苗根部長 出短根，即可進行根的伸長，根伸長培養基含有1/2MS常規基本培養基、萘乙酸0-1. 0毫克 /升或吲哚丁酸0. 03-1. 0毫克/升、蔗糖30克/升。35天左右，小苗長出4-5根主根時， 進入以下第4步。4、移栽與煉苗先把封口膜打開，在培養室內煉苗1周左右，取出小苗，洗淨小苗根部的瓊脂，移 栽到珍珠巖與泥炭以1 3混合的基質內，放入溫室大棚進一步煉苗10-15天。其間需要 噴灑1/10MS大量元素營養液以利於緩解蒸騰失水，並補充植物營養。本發明利用帶腋芽的莖段做外植體進行直接器官的發生，大大提高了組織培養的 快繁速率，同時用基本培養基添加微量激素進行腋芽的誘導，能夠快速誘導腋芽，並促使其 伸長。腋芽誘導後，不宜在原培養基上長期培養，否則誘導出的芽容易伸長生長，因此要轉 接MS+6-苄基嘌呤0. 5毫克/升+吲哚丁酸0. 1毫克/升+蔗糖30克/升培養基上，以利 於不定芽的分化和伸長。生根階段，本發明採用了先誘導再促進伸長的方法，首先，把伸長 到適合常規生根高度的小苗，轉移到1/2MS+萘乙酸0. 03毫克/升培養基中，誘導不定根的 生成，再轉移到促進根伸長1/2MS+萘乙酸0. 04毫克/升培養基中，此方法大大提高了根誘 導和伸長的速率。因此採用此發明的培養基有如下優點腋芽誘導啟動快，芽分化係數高，苗伸長 快、生長一致且健壯，生根率高、根長且壯，生長周期短，基本無畸形苗。
四

圖12，4_D和IBA誘導產生的腋芽圖沈-BA和IBA激素處理後的增殖芽圖3NAA誘導產生的根
五具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步說明。實施例1、取材以鐵線蓮『阿拉貝拉』當年生嫩枝作為外植體進行培養，要求新生枝生長 健壯，葉片具有母本的優良性狀，而且有飽滿而未萌發的腋芽。2、材料消毒方法除掉多餘的葉片，只保留莖段，用酒精脫脂棉輕輕擦洗去除外植 體上的絨毛，流水衝洗1小時。在無菌條件下，用75%酒精浸泡30秒，0. 升汞處理3-5 分鐘，無菌水衝洗5 6次。3、接種在超淨工作檯內，無菌濾紙吸取殘餘水分後，將莖段兩頭切去一小段，以 減少升汞的毒害。然後將其切成1 1.5cm長的莖段，然後接種到外植體誘導培養基。誘 導培養基組成為MS+2，4- 二氯苯氧乙酸1. 0毫克/升+吲哚丁酸0. 1毫克/升+蔗糖30
克/升。4、不定芽叢增殖將帶腋芽莖段接種到誘導培養基上20天後就可看到腋芽萌發 長高(圖1)，然後將其轉移到增殖培養基上。增殖培養基組成為MS+6-苄基嘌呤0. 5毫克
4/升+吲哚丁酸0. 1毫克/升+蔗糖30克/升。5、生根當分化出的叢生芽(圖幻長到常規生根所需高度時，用剪刀單個剪下，接 種到生根培養基中。生根培養基的組成為1/2MS+萘乙酸0. 03毫克/升。為使誘導出的根能更好的伸長生長，將生根小苗轉移到根伸長培養基中，根伸長 培養基的組成為1/2MS+萘乙酸0. 04毫克/升(圖3)。培養溫度及光照條件溫度為25士 1°C ；光照為2000勒克斯，16小時/天。6、移栽與煉苗生根小苗生長35天左右後，根系比較發達，一般會長出4-5條主根 時，即可進行移栽。先把封口膜打開，在培養室內煉苗1周左右，取出小苗，洗淨小苗根部的瓊脂，移 栽到珍珠巖與泥炭以1 3混合的基質內，放入溫室大棚進一步煉苗10-15天。其間需要 噴灑1/10MS大量元素營養液以利於緩解蒸騰失水，並補充植物營養，以防止葉片發黃。
權利要求
1.一項鐵線蓮『阿拉貝拉』組織培養快繁技術，其特徵在於以下四個部分組成(1)腋芽誘導將當年新生枝條帶芽無菌莖段，接種到誘導培養基，該培養基含有 1/4MS、1/2MS、MS常規基本培養基、2，4- 二氯苯氧乙酸1. 0毫克/升、吲哚丁酸0. 1毫克/ 升、蔗糖30克/升，培養20天後，待培養物誘導出芽原基，即可開始下一步驟的培養；(2)不定芽增殖將第1步所得的培養物轉移到增殖培養基上，增殖培養基含有MS常 規基本培養基、6-苄基嘌呤0. 5-1. 5毫克/升、吲哚丁酸0. 05-0. 15毫克/升、蔗糖20-40 克/升，培養20天左右，進入以下第3步；(3)生根將第2步所得的無根小苗齊根取下，轉至常規生根培養基中，生根基本培養 基含有1/4MS，1/2MS，MS常規基本培養基、萘乙酸0. 03毫克/升，培養20天左右，待小苗根 部長出短根，即可進行根的伸長，根伸長培養基為1/2MS常規基本培養基、萘乙酸0-1. 0毫 克/升或吲哚丁酸0. 03-1. 0毫克/升、蔗糖30克/升，35天左右，即可移栽長成正常的鐵 線蓮植株；(4)移栽與煉苗待第3步小苗長出4-5根主根時，先把封口膜打開，在培養室內煉苗 1周左右，取出小苗，洗淨小苗根部的瓊脂，移栽到珍珠巖與泥炭以1 3混合的基質裡，放 入溫室大棚進一步煉苗10-15天，其間需要噴灑1/10MS大量元素營養液以利於緩解蒸騰失 水，並補充植物營養。
2.按權利要求1所述的鐵線蓮『阿拉貝拉』組織培養快繁過程中的腋芽誘導，其特徵在 於所述的誘導培養基為1/4MS、1/2MS、MS常規基本培養基、2，4-二氯苯氧乙酸1. 0毫克/ 升、吲哚丁酸0. 1毫克/升、蔗糖30克/升。
3.按權利要求1所述的鐵線蓮『阿拉貝拉』組織培養快繁過程中的不定芽增殖，其特 徵在於所述的增殖培養基為MS常規基本培養基、6-苄基嘌呤0. 5-1. 5毫克/升、吲哚丁酸 0. 05-0. 15毫克/升、蔗糖20-40克/升。
4.按權利要求1所述的鐵線蓮『阿拉貝拉』組織培養快繁過程中的生根，其特徵在於所 述的生根培養基為1/2MS常規基本培養基、萘乙酸0-1. 0毫克/升或吲哚丁酸0. 03-1. 0毫 克/升、蔗糖30克/升。
5.按權利要求1所述的鐵線蓮『阿拉貝拉』組織培養快繁過程中的移栽與煉苗，其特徵 在於所述的移植基質為珍珠巖泥炭=1 3。
全文摘要
「一項鐵線蓮『阿拉貝拉』組織培養快繁技術」屬於鐵線蓮「阿拉貝拉」組織培養快繁技術領域。該技術以當年新生枝條帶芽莖段為外植體，建立了鐵線蓮「阿拉貝拉」的再生體系。研究發現，腋芽誘導的最佳培養基是MS+2，4-二氯苯氧乙酸1.0毫克/升+吲哚丁酸0.1毫克/升+蔗糖30克/升，分化率達100％；不定芽增殖的最佳培養基為MS+6-苄基嘌呤0.5毫克/升+吲哚丁酸0.1毫克/升+蔗糖30克/升，增殖係數為3.98；適宜的生根培養基是1/2MS+萘乙酸0.04毫克/升，生根率達89.3％。經過5～7天的開瓶煉苗，以珍珠巖∶泥炭＝1∶3為基質，20天後調查，其移栽成活率達90％。上述發明技術可應用於鐵線蓮「阿拉貝拉」的高效快速繁殖，並能實現其工廠化育苗。
文檔編號A01H4/00GK102144543SQ20111000071
公開日2011年8月10日 申請日期2011年1月5日 優先權日2011年1月5日
發明者仵丹丹, 季孔庶 申請人:南京林業大學