抗貓變態反應的疫苗肽組合的製作方法

2023-05-14 00:45:16 1

專利名稱：：抗貓變態反應的疫苗肽組合的製作方法
技術領域：
：本發明涉及包含用於預防或治療對貓的變態反應的肽的組合物，並且尤其涉及肽的最佳組合。
背景技術：
：T細胞抗原識別需要呈遞抗原細胞(APC)以與主要組織相容性複合體(MHC)分子聯合在它們的細胞表面呈遞抗原片段(肽)。T細胞利用它們的抗原特異性T細胞受體(TCR)以識別由APC呈遞的抗原片段。這種識別作為對免疫系統的觸發產生一系列應答以清除已經被識別的抗原。通過生物例如人的免疫系統的外部抗原的識別在某些情況下可導致疾病，稱為特應性病況。後者的實例是變應性疾病包括哮喘、特應性皮炎和變應性鼻炎。在這一組疾病中，B淋巴細胞產生結合外部來源的抗原的IgE類抗體(在人類中)，就這一點而言所述抗原被認為是變應原，因為這些分子引起變應性應答。變應原特異性IgE的產生依賴於也被變應原活化(對變應原特異)的T淋巴細胞。變應原特異性IgE抗體藉助細胞例如嗜鹼性粒細胞和肥大細胞的對IgE的表面受體的表達結合至這些細胞的表面。表面結合的IgE分子通過變應原的交聯導致這些效應細胞的脫粒而引起炎性介質例如組胺、5-羥色胺和脂質介質諸如硫醚白三烯(sulphidoleukotriene)的釋放。除了IgE依賴性事件，一些變應性疾病例如哮喘以非IgE依賴性事件為特徵。變應性的IgE介導的疾病目前用提供症狀的緩解或預防的劑治療。這種劑的實例是抗組胺、32激動劑和糖皮質激素。此外，一些IgE介導的疾病通過包括變應原成分或提取物的周期性注射的脫敏操作來治療。脫敏治療可誘導與IgE競爭變應原的IgG應答，或者它們可誘導阻斷抗變應原的IgE的合成的特異性抑制T細胞。這一形式的治療並不總是有效的並且具有激起嚴重的副作用，尤其是一般的過敏性休克的風險。這可以是致命的，除非被立即識別並用腎上腺素治療。降低或消除不需要的對特定變應原的變應性免疫應答而不改變對其他外來抗原的免疫反應性或不觸發自身變應性應答的治療性治療對變應性個體來說將非常有益。世界上大約10%的人口是對貓(家貓)變應性的並且高達67%的哮喘患者對貓變應原敏感。由貓產生的主要變應原是糖蛋白Feldl，其在患有貓變態反應的90-95%的患者中引起應答。治療性或預防性治療將因此對患有貓變態反應或具有患有貓變態反應的風險的人來說非常有益。發明概述本發明人已經公開了Feldl蛋白的肽片段的一些組合在使個體對Feldl變應原脫敏中是尤其有用的。已經針對本發明的多肽組合與許多II類MHC的分子結合併且導致伴隨最小的組胺釋放的T細胞增殖的能力而對它們進行選擇。本發明的組合物、產物、載體和製劑因此可被提供給個體用以通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應。本發明的多肽最初作為潛在的T細胞表位通過使用肽-MHC結合測定來選擇。參見例如圖1，其證實來自Feldl鏈1和2的一系列的肽在II類MHC結合測定中與多種DR類型結合的能力。之後為了在免疫耐受作用中的可能的使用而對這些候選多肽進一步篩選。與以肽免疫為基礎的脫敏作用的方法有關的困難在於如何選擇變應原適合的大小和區域作為有待被用於免疫的肽的基礎。選擇的肽的大小是關鍵。如果肽太小，疫苗在誘導免疫應答方面將無效。如果肽太大或者將全抗原引入個體，就有引入可能致命的不良反應例如過敏反應的危險。本發明的多肽已經被選擇為保留T細胞特異性同時在尺寸上足夠小而不會具有使得它們保留整個分子的IgE結合表位的構象的顯著的三級結構。本發明的多肽因此沒有在細胞例如肥大細胞和嗜鹼性粒細胞上誘導相鄰特異性IgE分子的顯著交聯並且因此不會導致顯著的組胺釋放。本發明的肽是有優勢的，因為在對T細胞樣品施用時它們導致T細胞增殖同時產生最少的組胺釋放。這在實施例2中被證實。本發明的多肽能夠在貓變應性的個體中誘導晚期應答。包含這些多肽或能夠表達這些多肽的多核苷酸的本發明的組合物、產物和製劑因此在對這一變應原敏感的個體中減少對Feldl變應原的超敏感性有用並有效。本發明的又一個優點是肽對廣泛的靶主要組織相容性複合體(MHC)分子的結合的能力。T細胞受體(TCR)在它們的特異性上是高度可變的。可變性與抗體分子一樣通過細胞中的基因重組事件而產生。TCR識別與由主要組織相容性複合體(MHC)的基因編碼的分子結合的短肽形式的抗原。這些基因產物是與導致在移植中所使用的「組織類型」的分子相同的分子並且也被稱為人類白細胞抗原分子(HLA)(這些術語可互換使用)。個別的MHC分子具有肽結合槽，其因為它們的形狀和電荷而僅能夠結合有限組的肽。被一個MHC分子結合的肽可不必然被其他MHC分子結合。當蛋白分子例如抗原或變應原被呈遞抗原細胞例如B淋巴細胞、樹突細胞、單核細胞和巨噬細胞所接受時，分子在細胞內被酶促降解。降解的過程產生分子的肽片段，如果它們具有合適的大小、電荷和形狀，之後可在一些MHC分子的肽結合槽中結合併且隨後被呈現在呈遞抗原細胞的表面上。如果肽/MHC複合體在呈遞抗原細胞表面上以足夠的數目呈遞，那麼它們之後可活化攜帶適合的肽/MHC特異性T細胞受體的T細胞。由於MHC的多態性質，遠系繁殖的群體例如人中的個體將在他們的細胞表面上表達不同的MHC分子的組合。因為不同的MHC分子可基於肽的大小、電荷和形狀結合來自同一分子的不同的肽，不同的個體將呈現出結合至它們的MHC分子的不同的肽譜。一般的MHC結合肽表位的鑑定在遠系繁殖群體例如人中比在近親繁殖的動物(例如一些品系的實驗室小鼠)中更困難。基於個體間不同的MHC表達和肽結合中的固有差異以及這一差異帶來的呈遞，鑑定在人類中具有脫敏治療的用途的單一的肽是不可能的。然而本發明的肽組合通過靶向群體的MHC中的大多數來提供在人群中的廣泛覆蓋效力。例如，不必將患者或個體分型以確定他或她具有哪種II類MHC分子以便決定那種肽或肽的組合將是有效的。用本發明的肽配製的疫苗將因此具有廣泛的功用。發明人的工作已經生產了具有下列特徵的肽組合-組合與許多不同的II類MHC分子結合(參見圖2，其顯示沒有與許多不同的MHC分子結合的大量組合)-組合產生與整個變應原相同或更少的組胺釋放和/或具有與整個變應原相當的細胞因子釋放概況_組合的肽是可溶的。相應地，本發明提供在通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應中使用的組合物，其包含a)選自SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的四種或更多種多肽，以及任選地b)具有下列特徵的一種、兩種或三種多肽⑴包含與a)中未選的SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種中的至少9個或更多個連續的胺基酸具有至少65%序列同一性的序列，並且(ii)長度上為9至30個胺基酸。優選地，本發明的組合物包含(i)對一組HLA分子中的每個成員都表現出強結合的至少兩種肽和表現出中等結合的至少一種肽；或者(ii)對HLA分子的所述組中每個成員都表現出強結合的至少一種肽和表現出中等結合的至少兩種肽；其中HLA分子的組包括由在至少80%的遠系繁殖的人群中具有累計頻率的不同的等位基因編碼的至少七種不同的HLA分子；和/或(iii)其中組合物能在來自貓變應性個體的樣品中以一定水平誘導組胺釋放，所述水平高出來自同樣個體的樣品中由完整的Feldl變應原誘導的組胺釋放的不超過5%；和/或(iv)其中組合物在來自貓變應性個體的PBMC樣品中誘導細胞因子釋放概況，其與在來自同樣個體的樣品中由完整的Feldl變應原誘導的細胞因子釋放概況相當。通常，遠系繁殖的人群是白種人(Caucasian)，和/或HLA分子的組包括至少HLA-DR1、DR3、DR4、DR7、DR11、DR13和DR15；並且任選地還包括HLA-DRB4和DRB5。附圖描述圖1-測試來源於Feldl鏈1和2的肽在II類MHC結合測定中與多種DR類型結合的能力。選擇顯示出混雜的結合特徵的肽並將其組合以產生與大量II類MHC類型結合的肽的混合物。圖2-顯示與大量II類MHC類型結合的組合的肽混合物的圖示。圖3-增殖應答者百分比和應答的質量。圖3概括了對肽和抗原的增殖應答。以黑柱顯示具有可檢測的增殖應答的個體的百分比。灰柱(弱)、白柱(中等)和散列柱(強)提供這些應答的質量的分析。質量主要由刺激指數(SI抗原/肽存在時的計數除以只有培養基時的計數的比率)定義。因此對於肽l(MLAOl)來說，12%的受治療者產生增殖應答並且其中92%是弱的，沒有中等的而有8%是高的。對單種肽/抗原的增殖應答是可變的(黑柱)。92%的受治療者對陽性對照抗原PPD具有正的增殖應答。這些大部分是強應答(散列柱)。75%的受治療者對貓的皮屑提取物應答，其中59%(即75%中的59%)的應答是弱的。對7種優選的肽(SEQIDN0:1至7)的混合物的應答與對貓的皮屑提取物(CAT)的應答幾乎一樣。圖4-經由細胞因子的應答者的百分比。圖4概括經由所測量的三種細胞因子的產生具有對肽/抗原中的每一種的可檢測的應答的個體的百分比。陽性對照抗原PPD在幾乎所有個體中引發細胞因子產生(IFN-y:91%,IL-13:97%和IL-1096%)0完整的貓變應原和7種肽的混合物在約80%或更多的受治療者中引發細胞因子應答。單種的肽引發不同頻率的應答。通常，細胞因子產生看起來是比增殖應答提供陽性細胞因子應答具有更大的個體百分比的更敏感的檢測應答的方法。在大多數情況下，在最多數的受治療者中檢測到IL-10分泌而且最少檢測到IFN-Y。圖5-使用肽/抗原的細胞培養後產生IFN-Y的個體的百分比和應答強度的百分比。在26-44%的對單種肽應答的受治療者中檢測到IFN-y應答。這些應答主要是非常低的至低的至中等的。複合體抗原誘導更頻繁的應答(肽混合物80%、貓皮屑79%、PPD91%)0這些應答是低的至中等的至高的。PPD應答尤其高(89個PPD應答在100pg/ml以上)。圖6-使用肽/抗原的細胞培養後產生IL-13的個體的百分比和應答強度的百分比。在33-68%的對單種肽應答的受治療者中檢測到IL-13應答。這些應答主要是非常低的至低的，儘管檢測到顯著數目的中等應答。這可能反應了在這些受治療者中Th2的變應性致敏特徵。複合體抗原誘導更頻繁的應答(肽混合物85%、貓皮屑93%、PPD97%)。這些應答是低的至中等的至高的。圖7-使用肽/抗原的細胞培養後產生IL-10的個體的百分比和應答強度的百分比。在46-75%的對單種肽應答的受治療者中檢測到IL-10應答。這些應答主要是非常低的至低的。複合體抗原誘導更頻繁的應答(肽混合物93%、貓皮屑96%、PPD96%)。這些應答是低的至中等的。觀察到非常少的「高的」IL-10應答。圖8-顯示對本發明的肽的優選混合物的臨床試驗的12.Onmol小組中所有八個患者的治療之前和之後的平均LPSR面積的代表性圖。本文提到的序列的描述SEQIDNO:1至16提供本發明的多肽序列。SEQIDNO:1至16分別對應於實施例禾口圖1中的肽MLA01、MLA03、MLA04、MLA05、MLA07、MLA12、MLA14、MLA02、MLA06、MLA11、MLA15、MLA16、MLA08、MLA09、MLA10禾口MLA13。發明詳述本發明提供在通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應中使用的組合物，其包含a)選自SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的四種或更多種多肽，以及任選地b)具有下列特徵的一種、兩種或三種多肽⑴包含與a)中未選的SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種中的至少9個連續的胺基酸具有至少65%序列同一性的序列，並且(ii)長度上為9至30個胺基酸。本發明還提供包含本發明的多肽的產物和製劑以及包含能夠表達在通過免疫耐受作用預防或治療貓變態反應中使用的本發明多肽的多核苷酸的組合物、產物和載體。Feldl蛋白的肽片段由家養的貓家貓(Feliscatus)(家貓(Felisdomesticus))產生的主要變應原是糖蛋白Feldl。這一39kDa的蛋白是由兩個17kDa的亞基形成的，每個亞基由兩個二硫鍵連結的肽(Feldl鏈1和鏈2)組成。Feldl的胺基酸序列公開於WO91/06571中。儘管也在唾液腺和肛腺檢測到表達，但Feldl蛋白的主要來源是皮脂腺。儘管Feldl蛋白可能是信息素結合蛋白，但Feldl蛋白的主要功能目前未知。本發明的肽來源於Feldl。術語「肽」和「多肽」本文可交替使用。Feldl本文也被稱為「變應原」。本發明的組合物包含選自SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的四種或更多種多肽。任選地，組合物可包含一種、兩種或三種另外的多肽。這些另外的多肽涉及(即通常與其同源和/或是其片段)其他的序列即不在已經選擇的四種或更多種多肽中的SEQIDN0:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。一種、兩種或三種另外的多肽可與SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種相同。組合物因此可包含如SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種所提供的四、五、六或七種不同的多肽。然而，任選的一種、兩種或三種另外的多肽不需要與SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種100%相同。它們優選地與沒有被選為四種或更多種多肽的SEQIDN0:U2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種中的至少9個或更多個連續的胺基酸至少65%相同。也就是說，本發明提供在通過免疫耐受作用預防或治療貓變態反應中使用的組合物，其包含a)四種或更多種多肽，其選自下列胺基酸序列中的任一種CPAVKRDVDLFLT(SEQIDNO1)；EQVAQYKALPVVLENA(SEQIDNO2)；KALPVVLENARILKNCV(SEQIDNO3)；RILKNCVDAKMTEEDKE(SEQIDNO4)；KENALSLLDKIYTSPL(SEQIDNO5)；TAMKKIQDCYVENGLI(SEQIDNO6)；SRVLDGLVMTTISSSK(SEQIDNO7)；LFLTGTPDEYVEQVAQY(SEQIDNO8)；KMTEEDKENALSLLDK(SEQIDNO9)；LTKVNATEPERTAMKK(SEQIDNO:10)；ISSSKDCMGEAVQNTV(SEQIDNO:11)；AVQNTVEDLKLNTLGR(SEQIDNO:12)以及任選地，組合物可包含b)—種、兩種或三種另外的多肽，其具有下列特徵(i)包含與a)中未選的上文的SEQIDNO1至12中的任一種中的至少9個或更多個連續的胺基酸具有至少65%序列同一性的序列；並且(ii)長度上為9至30個胺基酸。本發明還提供產物，其包含a)四種或更多種多肽，其選自下列胺基酸序列中的任一種CPAVKRDVDLFLT(SEQIDNO1)；EQVAQYKALPVVLENA(SEQIDNO2)；KALPVVLENARILKNCV(SEQIDNO3)；RILKNCVDAKMTEEDKE(SEQIDNO4)；KENALSLLDKIYTSPL(SEQIDNO5)；TAMKKIQDCYVENGLI(SEQIDNO6)；SRVLDGLVMTTISSSK(SEQIDNO7)；LFLTGTPDEYVEQVAQY(SEQIDNO8)；KMTEEDKENALSLLDK(SEQIDNO9)；LTKVNATEPERTAMKK(SEQIDNO:10)；ISSSKDCMGEAVQNTV(SEQIDNO:11)；AVQNTVEDLKLNTLGR(SEQIDNO:12)以及任選地，產物可包含b)—種或多種另外的多肽，其具有下列特徵(i)包含與a)中未選的上文的SEQIDNO1至12中的任一種中的至少9個或更多個連續的胺基酸具有至少65%序列同一性的序列；並且(ii)長度上為9至30個胺基酸。其中每種不同的多肽用於在通過免疫耐受作用預防或治療貓變態反應中同時、分別或順序使用。因此更具體地，本發明提供用於在通過免疫耐受作用預防或治療貓變態反應中同時、分別或順序使用的產物，其包括(a)選自SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的多肽；(b)選自上文(a)中未選的SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的多肽；(c)選自上文(a)或(b)中未選的SEQIDN0:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的多肽；(d)選自上文(a)、(b)或(c)中未選的SEQIDN0:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的多肽；以及任選地(e)具有下列特徵的多肽⑴包含與上文a)、b)、c)或d)中未選的SEQIDNO:1至12中的任一種中的至少9個或更多個連續的胺基酸具有至少65%序列同一性的序列，並且(ii)長度上為9至30個胺基酸；以及任選地(f)具有下列特徵的Feldl蛋白的多肽片段(i)包含與上文a)、b)、c)、d)或e)中未選的SEQIDNO1至12中的任一種中的至少9個或更多個連續的胺基酸具有至少65%序列同一性的序列，並且(ii)長度上為9至30個胺基酸；以及任選地(g)具有下列特徵的Feldl蛋白的多肽片段(i)包含與上文a)、b)、c)、d)、e)或f)中未選的SEQIDNO1至12中的任一種中的至少9個或更多個連續的胺基酸具有至少65%序列同一性的序列，並且(ii)長度上為9至30個胺基酸。因此，本發明的組合物或產物可包含SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的變體。根據本發明的肽片段可通過截短例如通過從多肽的N和/或C端末端除去一個或多個胺基酸來得到。只要構成T細胞表位的核心的9個胺基酸基本沒有被破壞，片段還可通過一個或多個內部的缺失產生。例如，SEQIDNO1的變體可包含SEQIDNO1的片段即較短的序列。這可包括來自SEQIDNO1的N端末端或來自SEQIDNO:1的C端末端的一個、兩個、三個或四個胺基酸的缺失。這種缺失可來自SEQIDNO1的兩個末端。SEQIDNO1的變體可包括延伸至SEQIDNO:1末端之外的另外的胺基酸(例如來自貓Feldl蛋白序列)。變體可包括上文討論的缺失和增加的組合。例如，可在SEQIDNO:1的一個末端缺失胺基酸，但來自全長Feldl蛋白序列的另外的胺基酸可被添加在SEQIDNO:1的另一末端。與上文變體的相同的討論也適用於SEQIDNO:2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12。變體肽可包含來自SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12或者其片段中的任一種的胺基酸序列的一個或多個胺基酸取代。變體肽可包含與SEQIDN0:l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種中的至少9個或更多個連續的胺基酸具有至少65%序列同一性的序列。更優選地，適合的變體可包含與SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種中的至少9個連續的胺基酸至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%的胺基酸同一性。這一水平的胺基酸同一性可發生在肽的任何部分，儘管其優選地為核心區域。胺基酸同一性的水平超過至少9個連續的胺基酸但是取決於所對比的肽的大小，它可以是至少10、11、12、13、14、15個或至少16個或17個胺基酸。相應地上文特定的同一性水平中的任一個可以是跨越整個序列長度的。與胺基酸序列有關，「序列同一性」是指當使用具有以下參數的ClustalW(Thompson等人，1994，如上)評估時具有規定值的序列雙序列比對參數-方法精確的，矩陣PAM，空位開放罰分10.00，空位延伸罰分0.10；多序列比對參數矩陣PAM、空位開放罰分10.00，延遲的百分比同一性30，末端空位罰分打開，空位間隔距離0，負矩陣無，空位延伸罰分0.20，殘基特異性空位罰分打開，親水性空位罰分打開，親水性殘基GPSNDQEKR。位於特定殘基的序列同一性旨在包括已經被簡單衍生的相同的殘基。變體肽可包含來自SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的1、2、3、4、5或更多個或者多達10個胺基酸的取代。取代變體優選地包括用相同數目的胺基酸代替一個或多個胺基酸並形成保守的胺基酸取代。例如，胺基酸可由具有相似特性的可選擇的胺基酸取代，例如，另一種鹼性胺基酸、另一種酸性胺基酸、另一種中性胺基酸、另一種帶電荷的胺基酸、另一種親水性胺基酸、另一種疏水性胺基酸、另一種極性胺基酸、另一種芳香族胺基酸或另一種脂肪族胺基酸。可被用來選擇適合的取代基的20種主要胺基酸的一些特性如下Ala脂肪族、疏水、中性Met疏水、中性Cys極性、疏水、中性Asn極性、親水、中性Asp極性、親水、帶㈠電荷Pro疏水、中性Glu極性、親水、帶㈠電荷Gin極性、親水、中性11tableseeoriginaldocumentpage12另外的變體包括其中對出現在序列中的胺基酸的天然存在的胺基酸的取代是其結構類似物的變體。如果肽的功能沒有受到顯著的不良影響，那麼序列中使用的胺基酸也可被修飾，例如被標記。當肽具有從SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12或者其片段中的任一種的序列變化而來的序列時，取代可發生在跨越所述序列的全長，在SEQIDNO1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的序列中或在SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的序列外部。例如，本文描述的變化，例如增加、缺失、取代和修飾，可在SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的序列中發生。變體肽可包含或主要由SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的胺基酸序列組成，其中形成一個、兩個、三個、四個或更多的胺基酸取代。變體肽可包含比SEQIDN0:l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種更大的Feldl的片段。在這一實施方案中，本文描述的變化例如取代和修飾，可在SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的序列內和/或外部發生。本發明的變體肽在長度上為9至30個胺基酸(包括9和30個)。優選地，它們在長度上可以是從9至20個或更優選地13至17個胺基酸。肽可與SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種中的肽序列具有相同的長度。肽可以化學來源於多肽變應原，例如通過蛋白水解切割，或者可以在智力意義上來源於多肽變應原，例如通過利用多肽變應原的胺基酸序列並以序列為基礎合成肽。可使用本領域內熟知的方法合成肽。術語「肽」不僅包括其中胺基酸殘基通過肽(-C0-NH-)鍵連接的分子也包括其中肽鍵是相反的分子。可使用本領域內已知的方法例如在Meziere等人(1997)J.Immunol.159，3230-3237中描述的那些製得這種逆-反式肽模擬物。這種方法包括製得含有涉及主鏈而不涉及側鏈定向的變化的偽肽。Meziere等人(1997)顯示至少對於II類MHC和T輔助細胞應答來說，這些偽肽是有用的。逆-反肽含有NH-CO鍵而不是CO-NH肽鍵，其對蛋白水解耐受得多。相似地，只要使用保留胺基酸殘基的碳原子之間的間隔的適當的連接體部分，可完全不用肽鍵；如果連接體部分與肽鍵具有大致上相同的電荷分布和大致上相同的平面性，那麼其是尤其優選的。還應理解的是肽可在其N-端或C-端被很方便地封閉以便幫助減少對外切蛋白水解(exoproteolytic)消化的敏感性。例如，肽的N-端氨基基團可通過與羧酸反應而被保護而肽的C-端羧基基團可通過與胺反應而被保護。修飾的其他實例包括糖基化和磷酸化。另一種可能的修飾是在R或K的側鏈胺上的氫可被亞甲基基團代替(-NH2—-NH(Me)或-N(Me)2)。根據本發明的肽的類似物還可包括增加或減少肽的體內半衰期的肽變體。根據本發明使用的能夠增加肽的半衰期的類似物的實例包括肽的擬肽類似物、肽的D-胺基酸衍生物和肽_擬肽雜合體。根據本發明使用的變體多肽的另外的實施方案包括多肽的D-胺基酸形式。使用D-胺基酸而不是L-胺基酸製備多肽大大降低經由正常代謝過程的這種劑的任何不必要的斷裂，除了降低其施用的頻率以外，還降低需要被施用的劑的量。由本發明提供的肽可來源於由對編碼Feldl鏈的初始轉錄物的可選擇的剪接所產生的mRNA所編碼的Feldl的剪接變體。肽也可來自胺基酸突變體、糖基化變體和至少保留變應原的MHC結合特性的Feldl的其他共價衍生物。示例性的衍生物包括其中本發明的肽使用不是天然存在的胺基酸的部分通過取代、化學的、酶促的或其他適合的方法被共價修飾的分子。另外還包括在不同的貓中發現的Feldl的天然存在的變體。這些變體可由等位基因變體編碼或代表可選擇的剪接變體。上文所描述的變體可在肽的合成期間或通過生產後修飾或當肽為使用了定向誘變、隨機誘變或酶切割和/或核酸的連接的已知技術的重組形式時被製備。依照本發明，組合物可包含的另外的一種、兩種或三種肽優選地是SEQIDNO=U2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的功能變體。也就是說，肽優選地能夠誘導免疫應答。特別地，它們能夠在貓變應性個體中誘導晚期應答。這可通過肽在T細胞的樣品中誘導T細胞增殖的能力來檢測。檢測T細胞增殖的誘導的方法是本領域內熟知的並且在實施例2中示例性說明了一種這樣的方法。優選地，一種或多種另外的肽能夠在至少20%的T細胞樣品中導致T細胞增殖，其中每個樣品都是從群體中不同的貓變應性個體獲得的。本發明的組合物優選地能夠在30%或更多的從一組貓變應性個體獲得的T細胞樣品中誘導T細胞增殖。更優選地，組合物能夠在35%或更多、40%或更多、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%或90%或更多的從一組敏化的個體獲得的樣品中誘導T細胞增殖。一組貓變應性個體中個體的數目可以是大於一的任何數目，例如至少2、3、5、10、15、20、30、50,80個或至少100個個體。如果肽導致T細胞增殖但不導致來自敏化個體的富集的嗜鹼性粒細胞或肥大細胞製劑的組胺的釋放，那麼其是優選的。可能有一些組胺釋放，但是優選地，組合物不導致比包含SEQIDNO:1至7中顯示的7種不同的多肽的組合物明顯更多的組胺釋放。能夠與TCR結合的適合的變體可以是經驗來源的或是根據已知的標準選擇的。在單一的肽中，有對MHC抗原結合槽中的結合有貢獻的一些殘基和與T細胞受體的超變區相互作用的其他殘基(Allen等人(1987)Nature327:713_5)。在對T細胞受體相互作用有貢獻的殘基中，已經證實了在給定的肽殘基取代時與T細胞活化的依賴性有關的序位。使用已經具有用不同的胺基酸取代的一個或更多T細胞受體接觸殘基的肽，已經證實一些基團在T細胞活化的過程中的重要作用。Evavold&Allen(1991)Nature252:1308_10證實T細胞增殖和細胞因子產生分離。在這一體外模型中，將對血紅蛋白的64-76殘基特異的T細胞克隆(在I-Ek的背景下)用其中進行了天冬氨酸對穀氨酸的保守取代的肽類似物攻擊。這一取代沒有顯著影響類似物與I-Ek結合的能力。T細胞克隆用這一類似物的體外攻擊之後，儘管維持了IL-4分泌但沒有檢測到增殖，克隆對輔助B細胞應答的能力也未檢測到。在隨後的研究中，相同組證實了T細胞介導的細胞溶解與細胞因子產生的分離。在這種情況下，前者保持不變而後者減少。改變的肽配體的體內效力最初在EAE(實驗性變應性腦脊髓炎)的鼠模型中被McDevitt和同事們(Smilek等人(1991)ProcNatlAcadSciUSA88:9633_9637)所證實。在這一模型中，EAE通過與MBP(髓鞘鹼性蛋白)的致腦炎肽Acl-Il的免疫作用而被誘導。丙氨酸殘基在位置四(賴氨酸)的取代產生與其限制性元件(AauAiiu)結合的很好的肽，但是其在易感染的PL/JxSJLFl品系中是非免疫原的，並且其還在與致腦炎肽的免疫之前或之後被施用時預防EAE的發作。因此，可在肽中鑑定影響肽誘導T細胞的不同功能的能力的殘基。有利地，肽可被設計以有利於T細胞增殖和脫敏的誘導，Metzler和Wraith已經證實其中已經進行了增加肽-MHC親和力的取代的肽的改進的致耐受能力(Metzler&ffraith(1993)IntImmunol1159-65)。Sloan-Lancaster等人(1993)Nature363156-9已經證實改變的肽配體可導致克隆的T細胞中的長期並且顯著的無反應性。本發明的組合物能夠在對Feldl變應原敏感的個體中誘導晚期應答。術語「晚期應答」包含如在AllergyandAllergicDiseases(變態反應和變應性疾病)(1997)A.B.Kay(編輯)，BlackwellScience，第1113-1130頁中所解釋的含義。晚期應答可以是任何晚期應答(LPR)。優選地，肽能夠誘導晚期哮喘應答(LAR)或晚期鼻炎應答，或者晚期皮膚應答或晚期眼部應答。可使用本領域內熟知的方法確定特定的肽是否能夠引起LPR；特別優選的方法描述於Cromwell0,DurhamSR，ShawRJ,MackayJ禾ΠKayAB,Provocationtestsandmeasurementsofmediatorsfrommastcellsandbasophilsinasthmaandallergicrhinitis(來自哮喘和變應性鼻炎中的肥大細胞和嗜鹼性粒細胞的介質的激發試驗和測量)，在HandbookofExperimentalImmunology(實驗免疫學手冊)(4)第127章，編輯WeirDM,BlackwellScientificPublications，1986中。因此，優選地，本發明的個別肽能夠在已經對Feldl變應原敏化的個體中誘導LPR0可用熟知的操作例如使用變應原提取物溶液的皮膚針刺試驗、皮膚LPR的誘導、臨床史、變應原攻擊和用於變應原特異性IgE的測量的放射變應原吸附試驗(RAST)測定個體是否已經對變應原敏化。可以例如這些檢測為基礎由醫生確定特定的個體是否有望從治療中-M-ΛΛ犾。使個體對Feldl變應原脫敏或免疫耐受意味著在適當敏化的個體中抑制或阻止由Feldl誘導的變應性組織反應。已經顯示可選擇性的活化T細胞，並且之後使其無應答。而且這些T細胞的無變應化或消除導致患者對特定變應原的脫敏。脫敏顯示其本身在變應原或變應原來源的肽的第二次和另外的施用時，對變應原或變應原來源的肽的應答的減少或優選地這種應答的消除。第二次施用可在適當的時間段後進行以允許脫敏發生；其優選為一天和幾周之間的任何時間段。約兩周的間隔是優選的。儘管本發明的組合物能夠在貓變應性個體中誘導LPR，但應當理解的是當組合物被用來治療患者時，優選的是，使用足夠低濃度的組合物以使沒有可觀察的UR發生，但應答足以部分地將T細胞脫敏以使得可給予下一個(優選地更高的)劑量等等。這樣，劑量被逐步增加以產生充分的脫敏作用但通常不會在患者中再誘導LPR。但是組合物或肽能夠在比所施用的濃度更高的濃度做到這些。本發明的組合物優選地能夠在50%或更多的來自群體的一組貓變應性個體中誘導晚期應答。更優選地，組合物能夠在55%或更多、60%或更多、65%或更多、70%或更多、75%或更多、80%或更多、85%或更多或者90%或更多的一組敏化的個體中誘導LPR。可通過本領域內熟知的方法確定組合物是否能夠在一定百分比的一組受治療者中誘導LPR。肽組合的特性MHC結合優選的肽的組合通常與大量不同的HLA分子結合。這是有利的，因為群體中大部分的個體將通過組合而被免疫耐受。因此優選的組合包括(iii)對一組HLA分子中的每個成員都表現出強結合的至少兩種肽和表現出中等結合的至少一種肽；或者(iv)對所述組的HLA分子中的每個成員都表現出強結合的至少一種肽和表現出中等結合的至少兩種肽；其中HLA分子的組包括由在至少80%、或至少85%、90%、95%或99%的遠系繁殖的人群中具有累計頻率的不同的等位基因編碼的至少七種不同的HLA分子。MHC結合的強度可通過任何適當的方法評估。優選的方法包括競爭性抑制測定，其中相對於參考肽測量結合。參考肽通常是已知為給定的MHC分子的強結合劑的肽。在這樣的測定中，如果肽對給定的HLA分子具有比參考肽低超過100倍的IC50，那麼它是給定的HLA分子的弱結合劑。對給定的HLA分子具有比參考肽低超過20倍但小於100倍的IC50的肽是中等結合劑。如果肽對給定的HLA分子具有比參考肽低小於20倍的IC50，那麼它是強結合劑。遠系繁殖的人群可以是任何群體，通常是白種人群體。HLA分子的組通常包括至少HLA-DR1、DR3、DR4、DR7、DR11、DR13和DR15；以及任選地，還包括HLA-DRB4和DRB5。對於這些HLA分子來說適合的參考肽是DR1(DRB1*0101等位基因)HA306_318(PKYVKQNTLKLAT)；DR3(DRB1*0301等位基因)MT216(AKTIAYDEEARRGLE)；DR4(DRB1*0401等位基因)HA306_318(PKYVKQNTLKLAT)；DR7(DRB1*0701等位基因)YKL(AAYAAAKAAALAA)；DR11(DRB1*1101等位基因)HA306_318(PKYVKQNTLKLAT)；DR13(DRB1*1301等位基因)B121-36(TERVRLVTRHIYNREE)；DR15(DRB1*1501等位基因)A3152-166(EAEQLRRAYLDGTGVE)；DRB4(DRB4*0101等位基因)E2/E7(AGDLLAIETDKATI)；和DRB5(DRB5*0101等位基因):HA306-318(PKYVKQNTLKLAT)。組胺釋放優選的肽的組合通常在來自含有嗜鹼性粒細胞或肥大細胞的貓變應性個體的樣品中誘導組胺釋放，其比在來自相同個體或個體的群體的樣品中由整個Feldl變應原誘導的組胺釋放超過不高於5%、6%、7%、8%、9%或10%。最優選地，組合誘導組胺釋放，其比在來自相同個體或個體的群體的樣品中由包含SEQIDNO:1至7中所示的7種不同的多肽的組合物誘導的組胺釋放超過不高於5%、6%、7%、8%、9%或10%。來自貓變應性個體的樣品通常是外周血單核細胞(PBMC)樣品，其可如本領域中的標準方法製備。適合的方法的實例包括從獲得自受治療者的肝素化血樣品分離PBMC。通常通過密度梯度分離從這樣的樣品中分離PBMC。組胺釋放可通過任何適當的方法例如ELISA測量。大量適當的測定試劑盒可由商業獲得以檢測來自對任何給定的組胺釋放劑應答的細胞的組胺釋放水平。通常，將約5XIO5至5XIO6的PBMC的樣品與給定濃度的給定的組胺釋放劑孵育。在孵育結束時測量孵育培養基或孵育培養基樣品中的組胺濃度。孵育通常為37°C下30分鐘。當組胺釋放劑是肽或肽的組合時，其通常以與期望體內存在的濃度範圍相當的一定濃度範圍內的大量不同的稀釋被施用。例如進入5升血量的IOmg劑量的單一的肽將產生2ng/ml(2X10_6mg/ml)的血液濃度。因此對肽或肽的組合來說適合的濃度範圍通常是10mg/ml至lng/ml。將在所述範圍的每個所檢測的稀釋進行單一、二重或三重的測量。每次測量通常需要約5X105PBMC。還將在可由技術人員很容易地確定的適當的濃度檢測適合的陽性對照。適合的陽性對照包括整個Feldl變應原或適合的替代物例如商業可獲得的完整的貓皮屑提取物。還可將未用組胺釋放劑處理的細胞樣品的自發的組胺釋放作為陰性對照/背景組胺釋放的指示劑進行測量。當肽/變應原製劑的兩個或更多的稀釋產生背景之上10%或更多的組胺釋放時，或當在所檢測的最高濃度獲得背景之上10%或更多的單一值時，其通常被認為是「正的組胺釋放」。任何樣品的孵育培養基中的組胺濃度通常通過ELISA測量。適合的ELISA測定通常包括向孵育培養基的樣品連同適合的緩衝液中加入組胺醯化劑。醯化的組胺比組胺更穩定並且這樣處理的樣品可在分析前儲存的更久。分析通常包括加入軛合抗醯基組胺試劑的鹼性磷酸酶，之後加入適當的生色鹼性磷酸酶底物。通過測量吸收和與對已知的組胺濃度校準的標準曲線比較而確定組胺濃度。細胞因子釋放優選的肽的組合通常在來自貓變應性個體的含有T細胞的樣品中誘導細胞因子釋放概況，其與在來自相同的個體或個體的群體的樣品中由整個Feldl變應原誘導的細胞因子釋放概況相當。最優選地，組合在來自貓變應性個體或個體的群體的含有T細胞的樣品中誘導細胞因子釋放概況，其與在來自相同的個體或群體的樣品中由包含SEQIDNO:1至7中所示的7種不同的多肽的組合物誘導的細胞因子釋放概況相當。來自貓變應性個體或群體的樣品通常是外周血單核細胞(PBMC)樣品，其可如本領域中的標準方法製備。可通過任何適合的方法評估細胞因子釋放概況。適合的方法包括在獨立的測定中測量樣品中釋放的一種、兩種、三種或更多不同的細胞因子的水平。適合的測定包括ELISA和Luminex測定。當在兩個樣品中所產生的一些特異細胞因子的水平相似時，認為在一個樣品中誘導的細胞因子釋放概況與不同樣品的細胞因子釋放概況相當。更具體地，當一個樣品中所產生的IL-IO和IL-13的水平與第二個樣品中產生的IL-IO和IL-13的水平相差不超過5%、6%、7%、8%、9%或10%時，認為兩個不同樣品的細胞因子釋放概況相當。因此優選的肽組合以與在來自相同個體或個體的群體中由整個Feldl變應原誘導的IL-10和IL-13水平相差不超過10%的水平誘導IL-10和IL-13的產生。典型的細胞因子釋放測定如下將250μ1200μg/ml的適當抗原或肽濃度的溶液的分配至適當的例如48孔板的孔中。之後將板在加溼的5%CO2的培養箱中於37°C孵育最多4小時。之後向每個孔加入250μ15XIO6細胞/ml的PBMC懸浮液並將板返回培養箱5天。之後將培養上清液的樣品收集為多個等份以便在ELISA測定中使用。樣品可在分析前被冷凍和儲存。一個等份檢測一種細胞因子的存在。通常細胞因子的存在依照本領域的實踐標準通過使用ELISA測定來確定。樣品中的細胞因子濃度通常通過在相同測定中生成的標準曲線的內插來確定。核酸和載體組成本發明的組合物和產物的單種的肽可被直接施用或可通過來自編碼序列的表達而被間接施用。例如可提供編碼本發明的肽例如上文討論的肽中的任一種的多核苷酸。因此本發明的肽可從編碼其並且能夠表達其的多核苷酸產生或以編碼其並且能夠表達其的多核苷酸的形式遞送。本文任何對本發明的肽的使用、遞送或施用的引用旨在包括這種肽經由編碼其的多核苷酸的表達的間接使用、遞送或施用。相應地，本發明提供在通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應中使用的含四種或更多種多核苷酸序列的組合物，所述多核苷酸序列表達時引起在通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應中使用的組合物的產生，其包含a)選自SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的四種或更多種多肽；以及任選地b)具有下列特徵的一種、兩種或三種多肽⑴包含與a)中未選的SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種中的至少9個或更多個連續的胺基酸具有至少65%序列同一性的序列；並且(ii)長度上為9至30個胺基酸。本發明還提供在通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應中使用的產物，其包含a)能夠表達選自SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的不同多肽的四種或更多種多核苷酸，以及任選地b)能夠表達具有下列特徵的不同多肽的一種、兩種或三種多核苷酸⑴包含與a)中未選的SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種中的至少9個或更多個連續的胺基酸具有至少65%序列同一性的序列；並且(ii)長度上為9至30個胺基酸，其中每種不同的多肽用於在人類中預防或治療對貓的變態反應中同時、分別或順序使用。術語「核酸分子」和「多核苷酸」本文可交替使用並且是指任何長度的核苷酸(脫氧核糖核酸或核糖核酸)或者其類似物的聚合物的形式。多核苷酸的非限制性實例包括基因、基因片段、信使RNA(mRNA)、cDNA、重組多核苷酸、質粒、載體、任何序列的分離的DNA、任何序列的分離的RNA、核酸探針和引物。本發明的多核苷酸可以分離或純化的形式提供。「編碼」所選擇的多肽的核酸序列是當處於適當的調節序列的控制下時在體內被轉錄(DNA的情況下)並翻譯(mRNA的情況下)為多肽的核酸分子。編碼序列的界限是由5』(氨基)端的起始密碼子和3』(羧基)端的翻譯終止密碼子確定的。為了本發明的目的，這種胺基酸序列可包括但不限於來源於病毒、原核或真核mRNA的cDNA、來自病毒或原核DNA或RNA的基因組序列以及甚至合成的DNA序列。轉錄終止序列可位於編碼序列的3』。本發明的多核苷酸可依照本領域熟知的方法被合成，如以Sambrook等人(1989，MolecularCloning-alaboratorymanual(分子克隆-實驗室手冊)；ColdSpringHarborPress)中的實例所描述的。可以以表達盒的形式提供本發明的多核苷酸分子，所述表達盒包括可操作地連接至插入序列的控制序列，由此允許本發明的肽在靶向的受治療者中體內表達。通常在適於用作用於核酸免疫的試劑的載體(例如，質粒或重組病毒載體)中依次提供這些表達盒。這一表達盒可被直接施用於宿主受治療者。可選擇地，包含本發明的多核苷酸的載體可被施用於宿主受治療者。優選地，使用遺傳載體製備和/或施用多核苷酸。適合的載體可以是能夠攜帶足夠量的遺傳信息並且允許本發明的肽的表達的任何載體。本發明因此包括包含這種多核苷酸序列的表達載體。因此本發明提供用於在通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應中使用的載體，其包含編碼本發明的不同多肽的四種或更多種多核苷酸序列和任選地編碼本文所定義的不同多肽的一種或多種其他多核苷酸序列。載體可包含編碼本發明的不同多肽的4、5、6、7、8、9、10、11或12種多核苷酸序列。而且，可以理解的是本發明的組合物和產物可包含多肽和多核苷酸的混合物。相應地，本發明提供如本文所定義的組合物或產物，其中代替任何一種多肽的是能夠表達所述多肽的多核苷酸。在分子生物學領域中常規構建表達載體，並且其可以例如包括質粒DNA和可能是必需的並以正確的方向放置的適當的起始密碼子、啟動子、增強子和其他元件例如諸如多聚腺苷化信號的使用，以便允許表達本發明的肽。其他適合的載體對本領域的技術人員來說是明顯的。作為就這一點而言另外的實例，我們引用Sambrook等人。因此可通過向細胞遞送這樣的載體並允許來自所述載體的轉錄的發生來提供本發明的多肽。優選地，在載體中的本發明的多核苷酸或用於本發明的多核苷酸被可操作地連接至能夠通過宿主細胞提供編碼序列的表達的控制序列，即載體是表達載體。「可操作地連接」是指元件的排列，其中所描述的組分被設置以便執行它們通常的功能。因此，當存在適當的酶時，可操作地連接至核酸序列的給定的調控序列，例如啟動子，能夠影響該序列的表達。只要啟動子起到指導序列表達的作用，啟動子無需與序列相鄰。因此，例如，插入的已經轉錄但未翻譯的序列可存在於啟動子序列和核酸序列之間而啟動子序列仍被認為與編碼序列「可操作地連接」。許多表達系統已經在本領域中被描述，其每一種通常由包含可操作地連接至表達控制序列的感興趣的基因或核苷酸序列的載體組成。這些控制序列包括轉錄啟動子序列和轉錄起始和終止序列。本發明的載體可以是由複製起點、任選地用於表達所述多核苷酸的啟動子和任選地啟動子的調節子提供的例如質粒、病毒或噬菌體載體。「質粒」是染色體外遺傳元件形式的載體。載體可包含一種或多種可選擇的標誌物基因，例如細菌質粒的情況下的氨苄青黴素抗性基因或用於真菌載體的抗性基因。載體可體外使用，例如用於DNA或RNA的產生或用於轉染或轉化宿主細胞，例如，哺乳動物宿主細胞。載體還可適於體內使用，例如允許多肽的體內表達。「啟動子」是起始並調控編碼多肽的多核苷酸的轉錄的核苷酸序列。啟動子可包括可誘導的啟動子(其中可操作地連接至啟動子的多核苷酸序列的表達是由分析物、輔因子、調控蛋白等誘導的)、可抑制的啟動子(其中可操作地連接至啟動子的多核苷酸序列的表達被分析物、輔因子、調控蛋白等抑制)和組成型啟動子。預期術語「啟動子」或「控制元件」包括全長啟動子區和這些區的功能(例如控制轉錄或翻譯)片段。根據本發明的多核苷酸、表達盒或載體可另外包含信號肽序列。信號肽序列通常以與啟動子可操作的連接的形式被插入以便信號肽被表達並促進由也與啟動子可操作的連接的編碼序列編碼的多肽的分泌。通常，信號肽序列編碼10至30個胺基酸例如15至20個胺基酸的肽。通常胺基酸主要是疏水的。在典型的情況下，信號肽將具有信號肽的增長的多肽鏈靶向表達細胞的內質網。信號肽在內質網上被切下，允許經由高爾基體的多肽的分泌。因此，本發明的肽可通過來自個體內細胞的表達和來自這些細胞的分泌而被提供給個體。可選擇地，本發明的多核苷酸可以適當的方式被表達以允許本發明的肽通過抗原呈遞細胞表面上的II類MHC分子呈遞。例如，本發明的多核苷酸、表達盒或載體可被靶向呈遞抗原細胞，或者編碼的肽的表達可在這些細胞中優先被激發或誘導。可在本發明的肽的產生中體外、離體或體內使用感興趣的多核苷酸。這種多核苷酸可被施用於或用於通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應。用於基因遞送的方法是本領域已知的。參見例如美國專利第5，399，346、5，580，859和5，589，466號。核苷酸分子可被直接引入接受的受治療者中，例如通過標準的肌肉內或皮內注射、經皮的顆粒遞送、吸入、局部地或通過口服、鼻內或黏膜方式的施用。可將分子可選擇地離體引入已經從受治療者中移出的細胞中。例如，本發明的多核苷酸、表達盒或載體可被離體引入個體的APC中。包含感興趣的核酸分子的細胞被再次引入受治療者中以便能夠產生抗由核酸分子編碼的肽的免疫應答。在這種免疫作用中使用的核酸分子本文通常被稱為「核酸疫苗」。本發明的多肽、多核苷酸、載體或細胞可以以大致上分離的形式存在。它們可與不會影響它們所期望的用途的載體或稀釋劑混合併仍被認為是大致上分離的。它們還可以以大致上純化的形式存在，在這樣的情況下它們通常包含製劑的乾重的至少90%，例如至少95%、98%或99%的蛋白、多核苷酸、細胞。呈遞抗原細胞(APC)本發明包括產生在它們的表面上呈遞本發明的肽的APC的群體的方法的體外使用，其隨後可被用於治療。這種方法可在獲得自患者的細胞樣品上離體進行。以這種方法產生的APC因此形成可在通過免疫耐受作用治療或預防貓變態反應中使用的藥劑。細胞應當可被個體的免疫系統接受，因為它們來自該個體。因此以這種方法產生的細胞向最初獲得它們的個體的遞送形成本發明的實施方案。製劑和組合物可單獨或以組合形式向個體提供本發明的肽、多核苷酸、載體或細胞。可以以分離的、大致上分離的、純化的或大致上純化的形式向個體提供本發明的每種分子或細胞。例如可向個體提供基本上不含其它肽的本發明的肽。雖然以未加工的形式提供根據本發明的肽、多核苷酸或組合物是可能的，但優選的是將它們作為藥學製劑提供。因此，根據本發明的另外的方面，本發明提供在通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應中使用的藥學製劑，其含有連同一種或多種藥學上可接受的載體或稀釋劑一起的本發明的組合物、載體或產物，以及任選的一種或多種其他治療成分。載體必須是在與製劑的其他成分相容的意義上來說「可接受的」並且不會對其接受者有害。通常用於注射的載體和最終的製劑是滅菌並且無熱原的。可使用對比較熟練的技術人員來說很容易獲得的標準的藥物配製化學和方法學進行包含本發明的肽、多核苷酸或細胞的組合物的配製。例如，含有本發明的一種或多種分子或細胞的組合物可與一種或多種藥學上可接受的賦形劑或載體組合。輔助物質例如潤溼劑或乳化劑、PH緩衝物質以及類似物可存在於賦形劑或載體中。這些賦形劑、載體和輔助物質通常是不會在接受組合物的個體中誘導免疫應答並且可被施用而不具有過度的毒性的藥劑。藥學上可接受的賦形劑包括但不限於液體例如水、鹽水、聚乙二醇、透明質酸、甘油和乙醇。其中還可包括藥學上可接受的鹽，例如無機酸鹽諸如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽以及類似物；以及有機酸的鹽例如醋酸鹽、丙酸鹽、丙二酸鹽、苯甲酸酸鹽以及類似物。藥學上可接受的賦形劑、載體和輔助物質的詳盡的討論可在Remington'sPharmaceuticalSciences(雷明頓藥物科學)(MackPub.Co.，NJ.1991)中獲得。可以以適於推注施用或連續施用的形式製備、包裝或銷售這種組合物。可以以單位劑型，例如在安瓿中或在含有防腐劑的多劑量容器中製備、包裝或銷售可注射的組合物。組合物包括但不限於油性或水性媒介物中的懸浮液、溶液、乳液、糊劑和可植入的持續釋放或可生物降解的製劑。這種組合物可另外包括一種或多種另外的成分，另外的成分包括但不限於懸浮劑、穩定劑或分散劑。在用於腸胃外施用的組合物的一個實施方案中，以在腸胃外施用重新形成的組合物之前與適合的載體(例如滅菌無熱原水)重新形成的乾燥(例如粉末或小顆粒)的形式提供活性成分。可以以無菌可注射水性或油性懸浮液或溶液的形式製備、包裝或銷售藥物組合物。這一懸浮液或溶液可根據本領域已知的方法配製並且可包括除了活性成分之外的另外的成分，例如本文描述的分散劑、潤溼劑或懸浮劑。例如，這種無菌可注射的製劑可使用無毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑例如水或1，3_丁二醇來製備。其他可接受的稀釋劑或溶劑包括但不限於林格氏溶液、等滲的氯化鈉溶液和混合的油例如合成的單甘油酯或雙甘油酯。其他可腸胃外施用的有用的組合物包括含有微晶形式的、脂質體製劑中的或作為生物可降解的聚合物系統的組分的活性成分的那些。用於持續釋放或植入的組合物可包括藥學上可接受的聚合的或疏水的物質例如乳液、離子交換樹月旨、微溶聚合物或微溶的鹽。可選擇地，可用顆粒載體將本發明的肽或多核苷酸裝入膠囊、吸附或結合。適合的顆粒載體包括衍生自聚甲基丙烯酸甲酯聚合物的那些，以及衍生自聚(丙交脂)和聚(丙交脂-共-乙交酯)的PLG微粒。參見Jeffery等人(1993)Pharm.Res.10:362_368。其他顆粒系統和聚合物也可被使用，例如聚合物，諸如聚賴氨酸、聚精氨酸、聚鳥氨酸、精胺、亞精胺、以及這些分子的軛合物。本文提及的肽、多核苷酸或細胞中的任一種的製劑將取決於例如物質的性質和遞送的方法的因素。任何一種這樣的物質可以以多種劑型被施用。其可被口服地(例如作為片劑、含片、錠劑、水性或油性懸浮液、可分散的粉末或小顆粒)、腸胃外地、皮下地、通過吸入、皮內地、靜脈內地、肌肉內地、胸骨內地、經皮地、或通過輸注技術施用。物質還可被作為栓劑施用。醫生能夠決定對於每個特定的個體來說所需要的施用途徑。本發明的製劑的組合物將包含有效但不導致不良作用的適合的濃度的每種肽/多核苷酸/細胞。通常，組合物中每種肽的濃度將在0.03至200nmOl/ml的範圍內。更優選地,在0.3至200nmol/ml、3至180nmol/ml、5至75nmol/ml或10至50nmol/ml的範圍內。組合物或製劑將具有高於95%或98%的純度或至少99%的純度。治療的方法和有待治療的個體本發明涉及能夠使人類個體對Feldl變應原脫敏或免疫耐受並且因此被用於預防或治療貓變態反應的肽、多核苷酸、載體和細胞。本發明提供用於通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應的組合物、產物、載體和製劑。本發明還提供使貓變應性的個體免疫耐受或脫敏的方法，其包括單獨或組合施用如上文所述的本發明的多肽/多核苷酸/細胞。有待治療或被提供本發明的組合物或製劑的個體優選地是人類。應當理解的是有待治療的個體可以是已知對Feldl變態反應敏感的、處於敏感的風險中或疑為敏感的。可使用本領域中熟知的和如本文所描述的技術檢測個體的敏感性。可選擇地，個體可具有對貓的變態反應的家族史。檢測個體對Feldl的敏感性不是必須的，因為個體接近貓時可表現出變態反應的症狀。接近意指離貓10米或更近、5米或更近、2米或更近、1米或更近或者0米。變態反應的症狀可包括眼部發癢、流鼻涕、呼吸困難、皮膚紅癢或發疹。有待治療的個體可以是任何年齡的。然而，優選地，個體可以是1至90、5至60、10至40或更優選地18至35年齡組。可能從治療中獲益的個體的組是例如貓主人、獸醫或其他貓馴化者。優選地，有待治療的個體來自具有在白種人群體的代表性的頻率範圍內的MHC等位基因頻率的群體。11個常見的DRBl等位基因家族的參考群體等位基因頻率示於實施例2的表3中(數據來自HLAFactsBook(HLA概況)，ParhamandBarber)。參考頻率可通過分析報導頻率的多種研究來獲得並且所顯示的數字是平均值。因此優選地，有待治療的個體是來自具有對於表3提到的等位基因來說(例如對於等位基因中的至少1、2、3、4、5種或全部來說)與參考群體相當的MHC等位基因頻率(例如在這些數字加上或減去1%、2%、3%、5%、10%、15%或20%的範圍內)的群體。優選地，個體來自其中下列DRBl等位基因的等位基因頻率是如下的群體4-至少9%7-至少10%11-至少8%。個體可已經患有對貓的變態反應至少2周、1個月、6個月、1年或5年。個體可患有由變態反應導致的發疹、鼻塞、流鼻涕和/或咳嗽。個體可以已經或可以沒有被施用治療貓變態反應的其他組合物/化合物。個體可生活在包括每人類居住者至少0.1隻貓的群體中。診斷方法
技術領域：
：本發明還提供檢測個體是否具有病症或處於發展病症的風險中的方法，其中病症包括對貓變應原應答的變應性症狀。個體通常是哺乳動物，優選地是人類。在本發明的方法中待測試的個體優選地在1歲和80歲的年齡之間、更優選地在1歲和60、50、40、30或20歲的年齡之間，並且最優選地在1歲和16歲的年齡之間。個體可被診斷或被懷疑為患有被歸類為原發性的或非變應性的病症例如原發性的或非變應性的哮喘。個體可能缺少對貓變應原應答的可檢測的抗體，尤其是對貓變應原應答的IgE。適於檢測IgE的測定包括PharmaciaCAP系統。使用這一系統，個體通常得分0或0/1。在缺少可確認的觸發的情況下，個體可以是患有或被診斷為患有通常與變態反應有關的症狀例如眼部發癢、流鼻涕、呼吸困難、皮膚紅癢或發疹的患者。這些症狀的第一次出現或診斷可發生在個體大於15歲的年齡時。例如當通常與變態反應相關的變態反應的症狀第一次出現或診斷時，個體可以是至少15、16、17、18、20、22、24、26、28或30歲的年齡。本發明的方法涉及確定個體是否具有對貓變應原，尤其是主要的貓變應原Feldl的T細胞應答。這種T細胞應答將存在於貓變應性個體中。不希望被任何假設所束縛，發明人認為原發性的或非變應性的病症事實上也可由T細胞驅動的、IgE非依賴性的免疫應答導致。相應地，這些病症也具有變應原觸發，但是其沒有產生變應原特異性的IgE。在一定程度上，其產生可由T細胞增殖或細胞因子釋放表徵的T細胞應答。例如，所釋放的細胞因子可包括IL-5，其與嗜酸性粒細胞的募集有關。相應地，T細胞應答可驅動個體中嗜酸性粒細胞的反應的誘導。個體是否具有對Feldl的T細胞應答是通過測量個體是否具有對根據本發明的肽或肽的組合的T細胞應答來測定的。個體是否具有這樣的應答可通過任何適合的方法來測定，適合的方法通常是可被用來檢測經歷變應原的T細胞的增殖或由經歷變應原的T細胞釋放的細胞因子的存在的方法。患者T細胞對本發明的肽或組合的正應答表明患者在對變應原的應答中具有或更可能發展變態反應樣症狀。負應答表明患者具有不是由貓變應原導致的變態反應樣症狀，或在對貓變應原的應答中至少不太可能發展變態反應樣症狀。在本發明的方法中對肽或組合應答的T細胞通常是在體內已經被對變應原預敏化的T細胞。這些經歷過變應原的T細胞通常存在於個體的外周血中，即在個體中的外周血單核細胞(PBMC)的群體中。T細胞可以是CD4和/或CD8T細胞。在本發明的方法中，T細胞可在來自個體的樣品中與本發明的肽或組合體外或體內，優選地體外接觸。通常，在本發明的方法中被接觸的T細胞取自個體血液樣品中，儘管含有T細胞的其他類型的樣品也可被使用。樣品可被直接加至測定或可首先被處理。通常處理可包括標準技術例如梯度離心以分離T細胞，並以適當的體積重懸。可選擇地，處理可包括樣品的稀釋，例如用水、緩衝液或介質。樣品可被稀釋1.5至100倍，例如2至50或5至10倍。處理可包括樣品組分的分離。通常將單核細胞(MC)從樣品中分離。MC將包含T細胞和呈遞抗原細胞(APC)。因此，在本發明的方法中，在分離的MC中存在的APC可將肽呈遞至T細胞。在另一個實施方案中，只有T細胞，例如只有⑶4T細胞可被從樣品純化。可使用本領域已知的技術從樣品分離PBMC、MC和T細胞。優選地，用於測定的T細胞是未處理的或稀釋的樣品的形式、是新鮮分離的T細胞(例如以新鮮分離的MC或PBMC的形式)(其被直接離體使用，即它們在被用於本發明的方法前未被培養)或是解凍的細胞(其之前被冷凍)。然而，T細胞可在使用前被培養，例如在變應原以及通常外源生長促進細胞因子存在的情況下。在培養期間，變應原通常被呈遞在APC的，例如用於本發明的方法的APC的表面上。T細胞的預培養可導致本發明的方法的敏感性的增加。因此，T細胞可被轉化為細胞系，例如短期細胞系。在本發明的方法中通常存在的APC可來自與T細胞相同的個體或來自不同的個體。APC可以是天然存在的APC或人工的APC。APC是能夠將抗原呈遞至T細胞的細胞。通常是B細胞、樹突細胞或巨噬細胞。其通常可從與T細胞相同的樣品分離並且通常與T細胞共純化。因此APC可存在於MC或PBMC中。APC通常是新鮮分離的離體細胞或培養的細胞。其可以是細胞系例如短期的或永生化細胞系的形式。APC可在其表面上表達空的II類MHC分子。在一個實施方案中，本發明的肽或組合被直接加至含有T細胞和APC的測定中。如上文討論的，這樣的測定中的T細胞和APC可以是MC的形式。在一個實施方案中，在缺少T細胞的情況下對APC提供肽或肽的組合。之後APC通常在被允許在其表面上呈遞變應原之後被提供給T細胞。肽或肽的組合可被接納在APC的內部並且被呈遞或簡單的接納在表面上而不進入APC的內部。通常IO5至107，優選地2.5XIO5至IO6的PBMC被加至每個測定。在其中肽或肽的組合被直接加至測定的情況下，其通常作為具有從IiT1至103μg/ml，優選地0.5至50μg/ml或1至10μg/ml的濃度的肽被加入。通常T細胞與肽或組合孵育的時間的長度是對於效應T細胞來說從4至24小時(優選地5至18小時)或對於中央記憶細胞來說24小時。當使用離體PBMC時，已發現5.OXlO6的PBMC可在10μg/ml的肽中於37°C孵育5小時。可通過任何適合的方法來測量孵育的T細胞的增殖。例如通過在用肽孵育之後流式細胞測量摻入的螢光化合物CFSE或通過在用肽孵育後測量摻入的放射性標記的化合物3H-胸腺嘧啶核苷。後一種方法的典型的實例如下將100μ1適當的肽濃縮物分配至96孔板的適當的孔中。之後將板放置在加溼的5%CO2的設置在37°C的培養箱中最多4小時。於室溫將如本領域的標準所分離的PBMC在完全培養基中製備為2XIO6細胞/ml的濃度。之後將100μ1細胞溶液分配至含有抗原/肽的96孔板的每個孔中。之後將板孵育6至8天。通過向每個孔加入10μ1的氚化胸腺嘧啶核苷儲液(1.85MBq/ml於無血清的RPMI培養基中)用氚化胸腺嘧啶核苷溶液使培養物產生脈衝。之後將板返回培養箱8至16小時之間。之後將培養物收集在濾墊上並且用適合的β閃爍計數器對乾燥的濾墊計數。將來自含有肽的孔的計數與只含有培養基的孔進行統計比較(每組12孔)。只有培養基的孔和肽刺激的孔之間的統計學上顯著的差異被認為是肽或肽的組合對PBMC的正刺激。如上文描述的，細胞因子釋放可通過任何適合的方法例如ELISA測定來測量。這些方法是本領域中熟知的。組合免疫治療因為許多個體是變應性的或可能需要對一些多肽抗原脫敏，本發明還提供了使對多種抗原變應性的個體脫敏的方法。在個體中誘導對第一種多肽抗原或變應原的「耐受性」可在個體中產生「致耐受性的(tolergeneic)環境」，其中對其他抗原的不適當的免疫應答可被下調以便提供對其他抗原的耐受性。這一發現意味著對多種變應原變應性的個體可在顯著減少的時間段內被治療，並且對某些變應原(例如花生)嚴重變應性但對其他變應原(例如貓皮屑)較溫和地變應性的個體可從治療中受益，其中建立了對較溫和的變應原的耐受性，並且之後這一致耐受性環境被用於提供對其他更極端的變應原的耐受性。此外，另外對不相關的抗原或變應原敏感的(或不同方式免疫的)患有自身免疫病症的個體可從治療方案中受益，其中首先建立對不相關的抗原或變應原的耐受性，而之後這一致耐受性環境被用於對與自身免疫病症相關的自身抗原提供耐受性。因此，提供了一種用於使貓變應性個體對Feldl抗原和一種或多種另外的不同的多肽抗原脫敏的方法。方法需要，在第一步，對個體施用如本文描述的根據本發明的組合物/產物/製劑(第一組合物)，並且其中施用以足以產生抗Feldl抗原的低應答狀態的方式進行。一旦建立了對Feldl抗原的低應答狀態或至少發生向脫敏的轉變，方法需要施用含有個體有待對其敏化的第二種不同的多肽抗原的第二組合物。第二組合物的施用以便於利用通過使用第一組合物建立的致耐受性環境的方法進行，此時建立對第二種不同的多肽抗原的耐受性是可能的。第二組合物可與第一種第一組合物或Feldl的更大的片段共施用。「共施用」意指同時(simultaneous)或同時發生(concurrent)的施用，例如當兩種存在於同一組合物中或在分離的組合物中在幾乎相同的時間但是在不同的部位施用，以及在分離的組合物中在不同時間的多肽抗原的遞送。例如，第二組合物可在第一組合物(或Feldl的更大的片段)遞送之前或隨後在相同或不同的部位被遞送。遞送之間的計時可在相隔約幾秒至相隔約幾分鐘、相隔幾小時甚至相隔幾天的範圍內。而且，可使用不同的遞送方法。第二多肽抗原優選地是與Feldl變應原不同的變應原。當然可使用已知的方法獲得和/或生產在本發明的方法中使用的適合的變應原。適合的變應原的種類包括但不限於花粉、除了貓皮屑的動物皮屑、草、黴菌、灰塵、抗生素、蜇刺昆蟲的毒液和各種環境的(包括化學的和金屬的)、藥物和食物變應原。常見的樹木變應原包括來自棉白楊、白楊、白蠟樹、樺樹、楓樹、櫟樹、榆樹、山胡桃樹和美洲山核桃樹的花粉；常見的植物變應原包括來自艾屬、豚草屬、長葉車前草(Englishplantain)、酸模和藜的那些；植物接觸性變應原包括來自毒櫟、毒葛和蕁麻的那些；常見的草變應原包括黑麥草、貓尾草、蔣森草、百慕達草、羊茅和蘭草變應原；常見的變應原還可從黴菌或真菌例如鏈格孢屬、鐮刀菌屬、著色芽生菌屬、麴黴菌屬、小多孢菌屬、毛黴菌屬和嗜熱放線菌屬獲得；表皮變應原可從室內灰塵或有機灰塵(通常是真菌起源的)、從節肢動物例如屋塵蟎(屋塵蟎(Dermatophagoidespteronyssinus))或從動物源例如羽毛和犬皮屑獲得；常見的食物變應原包括牛奶和奶酪(乳品)、蛋、小麥、堅果(例如花生)、海鮮(例如貝類)、豌豆、豆類和麩質變應原；常見的環境變應原包括金屬的(鎳和金)、化學的(甲醛、三硝基苯酚和松節油)、乳膠、橡膠、纖維(棉花或木材)、粗麻布、染髮劑、化妝品、洗滌劑和香料變應原；常見的藥物變應原包括局部麻醉和水楊酸鹽變應原；抗生素變應原包括青黴素、四環素、磺胺藥物變應原；以及常見的昆蟲變應原包括蜜蜂、黃蜂和螞蟻毒液以及蟑螂萼變應原。特別良好表徵的變應原包括但不限於DerρI變應原的主要和隱蔽表位(Hoyne等人，(1994)Immunology83190-195)、蜜蜂毒液磷脂酶A2(PLA)(Akdis等人(1996)J.Clin.Invest.巡1676-1683)、樺樹花粉變應原Betνl(Bauer等人(1997)Clin.Exp.Immunol.107536~541)以及多表位重組草變應原rKBG8.3(Cao等人(1997)Immunology迎46_51)。這些和其他適合的變應原是可商業獲得的和/或可按照已知技術容易地製備為提取物。優選地，第二多肽變應原選自下文變應原序列和資料庫登錄號(NCBIEntrez登錄號)的列表。NCBI是美國國家生物技術信息中心並且是美國國家衛生研究院的一個部門。進入可查詢的資料庫的NCBI站點是www.ncbi.nlm.nih.gov八變應原序列和資料庫登錄號(NCBIEntrez登錄號)屋塵蟎屋塵蟲葡(Dermatophagoidespteronyssinus)DerpiMKIVLAIASLLALSAVYARPSSIKTFEEYKKAFNKSYATFEDEEAARKNFLESVKYVQSNGGAINHLSDLSLDEFKNRFLMSAEAFEHLKTQFDLNAETNACSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGCGSCffAFSGVAATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQHNGVVQESYYRYVAREQSCRRPNAQRFGISNYCQIYPPNVNKIREALAQTHSAIAVIIGIKLDAFRHYDGRTIIQRDNGYQPNYHAVNIVGYSNAQGVDYWIVRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEEYPYVVILDerp2MMYKILCLSLLVAAVARDQVDVKDCANHEIKKVLVPGCHGSEPCIIHRGKPFQLEAVFEANQNTKTAKIEIKASIDGLEVDVPGIDPNACHYMKCPLVKGQQYDIKYTWNVPKIAPKSENVVVTVKVMGDDGVLACAIATHAKIRDDerp3MIIYNILIVLLLAINTLANPILPASPNATIVGGEKALAGECPYQISLQSSSHFCGGTILDEYffILTAAHCVAGQTASKLSIRYNSLKHSLGGEKISVAKIFAHEKYDSYQIDNDIALIKLKSPMKLNQKNAKAVGLPAKGSDVKV⑶QVRVSGWGYLEEGSYSLPSELRRVDIAVVSRKECNELYSKANAEVTD匪ICG⑶VANGGKDSCQGDSGGPVVDVKNNQVVGIVSWGYGCARKGYPGVYTRVGNFIDWIESKRSQDerp4KYXNPHFIGXRSVITXLMEDerp5MKFIIAFFVATLAVMTVSGEDKKHDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQEQINHFEEKPTKEMKDKIVAEMDTIIAMIDGVRGVLDRLMQRKDLDIFEQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEVDerp6AIGXQPAAEAEAPFQISLMKDerp7MMKLLLIAAAAFVAVSADPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDPMKVPDHSDKFERHIGIIDLKEGLDMRNIQVRGLKQMKRVGDANVKSEDGVVKAHLLVGVHDDWSMEYDLAYKLGDLHPNTHVISDIQDFWELSLEVSEEG匪TLTSFEVRQFANVVNHIGGLSILDPIFAVLSDVLTAIFQDTVRAEMTKVLAPAFKKELERNNQDerp9IVGGSNASP⑶AVYQIAL粉塵蟲茜(Dermatophagoidesfarinae)DerflMKFVLAIASLLVLTVYARPASIKTFEFKKAFNKNYATVEEEEVARKNFLESLKYVEANKGAINHLSDLSLDEFKNRYLMSAEAFEQLKTQFDLNAETSACRINSVNVPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCffAFSGVAATESAYLAYRNTSLDLSEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQQNGVVEERSYPYVAREQRCRRPNSQHYGISNYCQIYPPDVKQIREALTQTHTAIAVIIGKDLRAFQHYDGRTIIQHDNGYQPNYHAVNIVGYGSTQGDDYWIVRNSWDTTWGDSGYGYFQAGNNLMMIEQYPYVVIMDerf2MISKILCLSLLVAAVVADQVDVKDCANNEIKKVMVDGCHGSDPCIIHRGKPFTLEALFDANQNTKTAKIEIKASLDGLEIDVPGIDTNACHFMKCPLVKGQQYDIKYTWNVPKIAPKSENVVVTVKLI⑶NGVLACAIATHGKIRDDerf3MMILTIWLLAANILATPILPSSPNATIVGGVKAQA⑶CPYQISLQSSSHFCGGSILDEYffILTAACVNGQSAKKLSIRYNTLKHASGGEKIQVAEIYQHENYDSMTIDNDVALIKLKTPMTLDQTNAKPVPLPAQGSDVKV⑶KIRVSGWGYLQEGSYSLPSELQRVDIDVVSREQCDQLYSKAGADVSE匪ICG⑶VANGGVDSCQ⑶SGGPWDVATKQIVGIVSWGYGCARKGYPGVYTRVGNFVDWIESKRSQDerf4AVGGQDADLAEAPFQISLLKDerf7MMKFLLIAAVAFVAVSADPIHYDKITEEINKAIDDAIAAIEQSETIDPMKVPDHADKFERHVGIVDFKGELAMRNIEARGLKQMKRQGDANVKGEEGIVKAHLLIGVHDDIVSMEYDLAYKLGDLHPTTHVISDIQDFVVALSLEISDEGNITMTSFEVRQFANVVNHIGGLSILDPIFGVLSDVLTAIFQDTVRKEMTKVLAPAFKRELEKN另外的蟎變應原序列(NCBIentrez登錄)1170095；1359436；2440053；666007；487661；1545803；84702；84699；625532；404370；1091577；1460058；7413；9072；387592。貓貓屬序列(NCBIentrez登錄)539716；539715；423193；423192；423191；423190；1364213；1364212；395407；163827；163823；163825；1169665；232086；1169666。ILI2三葉膠樹序列HevblMAEDEDNQQGQGEGLKYLGFVQDAATYAVTTFSNVYLFAKDKSGPLQPGVDIIEGPVKNVAVPLYNRFSYIPNGALKFVDSTVVASVTIIDRSLPPIVKDASIQVVSAIRAAPEAARSLASSLPGQTKILAKVFYGENHevb3MAEEVEEERLKYLDFVRAAGVYAVDSFSTLYLYAKDISGPLKPGVDTIENVVKTVVTPVYYIPLEAVKFVDKTVDVSVTSLDGVVPPVIKQVSAQTYSVAQDAPRIVLDVASSVFNTGVQEGAKALYANLEPKAEQYAVITWRALNKLPLVPQVANVVVPTAVYFSEKYNDVVRGTTEQGYRVSSYLPLLPTEKITKVF⑶EAS另外的三葉膠樹序列(NCBIentrez登錄)3319923；3319921；3087805；1493836；1480457；1223884；3452147；3451147；1916805；232267；123335；2501578；3319662；3288200；1942537；2392631；2392630；1421554；1311006；494093；3183706；3172534；283243；1170248；1708278；1706547；464775；266892；231586；123337；116359；123062；2213877；542013；2144920；1070656；2129914；2129913；2129912；100135；82026；1076559；82028；82027；282933；280399；100138；1086972；108697；1086976；1086978；1086978；1086976；1086974；1086972；913758；913757；913756；234388；1092500；228691；1177405；18839；18837；18835；18833；18831；1209317；1184668；168217；168215；168213；168211；168209；348137。黑壽草黑麥草屬序列126385LolpiMASSSSVLLWALFAVFLGSAHGIAKVPPGPNITAEY⑶KWLDAKSTWYGKPTGAGPKDNGGACGYKNVDKAPFNGMTGCGNTPIFKDGRGCGSCFEIKCTKPESCSGEAVTVTITDDNEEPIAPYHFDLSGHAFGSMAKKGEEQNVRSAGELELQFRRVKCKYPDDTKPTFHVEKASNPNYLAILVKYVDGDGDVVAVDIKEKGKDKWIELKESffGAVWRIDTPDKLTGPFTVRYTTEGGTKSEFEDVIPEGWKADTSYSAK126386Lolp2aAAPVEFTVEKGSDEKNLALSIKYNKEGDSMAEVELKEHGSNEWLALKKNGDGVWEIKSDKPLKGPFNFRFVSEKGMRNVFDDVVPADFKVGTTYKPE126387Lolp3TKVDLTVEKGSDAKTLVLNIKYTRPGDTLAEVELRQHGSEEWEPMTKKGNLWEVKSAKPLTGPMNFRFLSKGGMKNVFDEVIPTAFTVGKTYTPEYN2498581Lolp5aMAVQKYFVALFLRRGPRGGPGRSYAADAGYTPAAAATPATPAATPAGGWRE⑶DRRAEAAGGRQRLASRQPWPPLPTPLRRTSSRSSRPPSPSPPRASSPTSAAKAPGLIPKLDTAYDVAYKAAEAHPRGQVRRLRHCPHRSLRVIAGALEVHAVKPATEEVLAAKIPTGELQIVDKIDAAFKIAATAANAAPTNDKFTVFESAFNKALNECTGGAMRPTSSSPPSRPRSSRPTPPPSPAAPEVKYAVFEAALTKAITAMTQAQKAGKPAAAAATAAATVATAAATAAAVLPPPLLVVQSLISLLIYY2498582Lolp5bMAVQKHTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPATPAAPATAATPATPATPATPAAVPSGKATTEEQKLIEKINAGFKAAVAAAAVVPPADKYKTFVETFGTATNKAFVEGLASGYADQSKNQLTSKLDAALKLAYEAAQGATPEAKYDAYVATLTEALRVIAGTLEVHAVKPAAEEVKVGAIPAAEVQLIDKVDAAYRTAATAANAAPANDKFTVFENTFNNAIKVSLGAAYDSYKFIPTLVAAVKQAYAAKQATAPEVKYTVSETALKKAVTAMSEAEKEATPAAAATATPTPAAATATATPAAAYATATPAAATATATPAAATATPAAAGGYKV455288Lolρ同種型9MAVQKHTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPATPAAPATAATPATPATPATPAAVPSGKATTEEQKLIEKINAGFKAAVAAAAVVPPADKYKTFVETFGTATNKAFVEGLASGYADQSKNQLTSKLDAALKLAYEAAQGATPEAKYDAYVATLTEALRVIAGTLEVHAVKPAAEEVKVGAIPAAEVQLIDKVDAAYRTAATAANAAPANDKFTVFENTFNNAIKVSLGAAYDSYKFIPTLVAAVKQAYAAKQATAPEVKYTVSETALKKAVTAMSEAEKEATPAAAATATPTPAAATATATPAAAYATATPAAATATATPAAATATPAAAGGYKV1582249LolpllDKGPGFVVTGRVYCDPCRAGFETNVSHNVEGATVAVDCRPFDGGESKLKAEATTDKDGWYKIEIDQDHQEEICEVVLAKSPDKSCSEIEEFRDRARVPLTSNXGIKQQGIRYANPIAFFRKEPLKECGGILQAY另外的黑麥草屬序列(NCBIentrez登錄)135480；417103；687261；687259；1771355；2388662；631955；542131；542130；542129；100636；626029；542132；320616；320615；320614；100638；100634；82450；626028；100639；283345；542133；1771353；1763163；1040877；1040875；250525；551047；515377；510911；939932；439950；2718；168316；168314；485371；2388664；2832717；2828273；548867.橄欖樹橄欖樹序列416610OleelEDIPQPPVSQFHIQGQVYCDTCRAGFITELSEFIPGASLRLQCKDKENGDVTFTEVGYTRAEGLYSMLVERDHKNEFCEITLISSGRKDCNEIPTEGWAKPSLKFKLNTVNGTTRTVNPLGFFKKEALPKCAQVYNKLGMYPP匪牆草屬牆草屬序列2497750ParjP2MRTVSMAALVVIAAALAWTSSAEPAPAPAPGEEACGKVVQDIMPCLHFVKGEEKEPSKECCSGTKKLSEEVKTTEQKREACKCIVRATKGISGIKNELVAEVPKKCDIKTTLPPITADFDCSKIQSTIFRGYY1352506ParjP5MVRALMPCLPFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGPQRVHACECIQTAMKTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTVGVVPRQPQLPVSLRHGPVTGPSDPAHKARLERPQIRVPPPAPEKA1532056ParjP8MRTVSMAALVVIAAALAWTSSAELASAPAPGEGPCGKVVHHIMPCLKFVKGEEKEPSKSCCSGTKKLSEEVKTTEQKREACKCIVAATKGISGIKNELVAEVPKKCGITTTLPPITADFDCSKIESTIFRGYY1532058ParjP9MRTVSAPSAVALVVIVAAGLAWTSLASVAPPAPAPGSEETCGTVVRALMPCLPFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGLQRVHACECIQTAMKTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTLGVVPRQPQLPVSLRHGPVTGPSDPAHKARLERPQIRVPPPAPEKA2497749ParjP9MRTVSARSSVALVVIVAAVLVWTSSASVAPAPAPGSEETCGTVVGALMPCLPFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGPQRVHACECIQTAMKTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTLGVLHYKGN1086003Parj1MVRALMPCLPFVQGEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGPQRVHACECIQTAMKTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTVGVVPRQPQLPVSLRHGPVTGPSRSRPPTKHGWRDPRLEFRPPHRKKPNPAFSTLG另外的牆草屬序列(NCBIentrez登錄)543659；1836011；1836010；1311513；1311512；1311511；1311510；1311509；240971。貓尾草梯牧草屬序列PhlpiMASSSSVLLVWLFAVFLGSAYGIPKVPPGPNITATY⑶KWLDAKSTWYGKPTGAGPKDNGGACGYKDVDKPPFSGMTGCGNTPIFKSGRGCGSCFEIKCTKPEACSGEPVVVHITDDNEEPIAPYHFDLSGHAFGAMAKIffiDEQKLRSAGELELQFRRVKCKYPEGTKVTFHVEKGSNPNYLALLVKYVNGDGDVVAVDIKEKGKDKWIELKESWGAIffRIDTPDKLTGPFTVRYTTEGGTKTEAEDVIPEGWKADTSYESKPhlpiMASSSSVLLWALFAVFLGSAHGIPKVPPGPNITATY⑶KWLDAKSTWYGKPTAAGPKDNGGACGYKDVDKPPFSGMTGCGNTPIFKSGRGCGSCFEIKCTKPEACSGEPVWHITDDNEEPIAAYHFDLSGIAFGSMAKKGDEQKLRSAGEVEIQFRRVKCKYPEGTKVTFHVEKGSNPNYLALLVKFSGDGDVVAVDIKEKGKDKWIALKESWGAIffRIDTPEVLKGPFTVRYTTEGGTKARAKDVIPEGWKADTAYESKPhlp2MSMASSSSSSLLAMAVLAALFAGAWCVPKVTFTVEKGSNEKHLAVLVKYEGDTMAEVELREHGSDEWVAMTKGEGGVWTFDSEEPLQGPFNFRFLTEKGMKNVFDDVVPEKYTIGATYAPEEPhlp5ADLGYGGPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINDGFKAALAAAAGVPPADKYKTFVATFGAASNKAFAEGLSAEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDSAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNNAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAFTAMSEAQKAAKPATEATATATAAVGAATGAATAATGGYKVPhlp5ADLGYGGPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINDGFKAALAAAAGVPPADKYKTFVATFGAASNKAFAEGLSAEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDSAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNNAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAKPATEATATATAAVGAATGAATAATGGYKVPhlp5bAAAAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAAAAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKVPhlp5aADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAGADAAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALAGAGVQPADKYRTFVATFGPASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDEIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAKPAAAATATATAAVGAATGAATAATGGYKVPhlp5MAVQKYTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVSYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKVPhlp5MAVQKYTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEDPAffPKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTATGAASGAATVAAGGYKVPhlp5ADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKVPhlp5SVKRSNGSAEVHRGAVPRRGPRGGPGRSYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKVPhlp5MAVHQYTVALFLAVALVAGPAGSYAADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAGAEPAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALAAAAGVPPADKYRTFVATFGAASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATVSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAAAAAATATATAAVGAATGAATAATGGYKVPhlp5ADLGYGGPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINDGFKAALAAAAGVPPADKYKTFVATFGAASNKAFAEGLSAEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDSAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNNAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAFTAMSEAQKAAKPATEATATATAAVGAATGAATAATGGYKVPhip5bAAAAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAAAAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYK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TFQEIVING⑶GIIIWGSSSDVNSLSKCKRLQDYLLTVLGPIAINVTEAVN549194變應原VESVI5KVNYCKIKCLKGGVHTACKYGTSTKPNCGKMVVKAYGLTEAEKQEILKVHNDFRQKVAKGLETRGNPGPQPPAKNMNNLVWNDELANIAQVWASQCNYGHDTCKDTEKYPVGQNIAKRSTTAALFDSPGKLVKMWENEVKDFNPNIEWSKNNLKKTGHYTQMVffAKTKEIGCGSVKYVKDEWYTHYLVCNYGPSGNFRNEKLYEKK另外的黃胡蜂屬序列(NCBIentrez登錄)549193；549192；549191；549190；549189；117414；126761；69576；625255；627189；627188；627187；482382；112561；627186；627185；1923233；897645；897647；745570；225764；162551。樹木變應原序列(主要地樺樹的)序列114922BetvlMGVFNYETETTSVIPAARLFKAFILDGDNLFPKVAPQAISSVENIEGNGGPGTIKKISFPEGFPFKYVKDRVDEVDHTNFKYNYSVIEGGPI⑶TLEKISNEIKIVATPDGGSILKISNKYHTK⑶HEVKAEQVKASKEMGETLLRAVESYLLAHSDAYN130975Betv2MSWQTYVDEHLMCDIDGQASNSLASAIVGHDGSVWAQSSSFPQFKPQEITGIMKDFEEPGHLAPTGLHLGGIKYMVIQGEAGAVIRGKKGSGGITIKKTGQALVFGlYEEPVTPGQCNMWERLiiDYLIDQGL1168696Betv3MPCSTEAMEKAGHGHASTPRKRSLSNSSFRLRSESLNTLRLRRIFDLFDKNSDGIITVDELSRALNLLGLETDLSELESTVKSFTREGNIGLQFEDFISLHQSLNDSYFAYGGEDEDDNEEDMRKSILSQEEADSFGGFKVFDEDGDGYISARELQMVLGKLGFSEGSEIDRVEKMIVSVDSNRDGRVDFFEFKDMMRSVLVRSS809536Betv4MADDHPQDKAERERIFKRFDANGDGKISAAELGEALKTLGSITPDEVKHMMAEIDTDGDGFISFQEFTDFGRANRGLLKDVAKIF543675QueaI—白櫟(Quercusalba)=櫟樹(片段)GVFTXESQETSVIAPAXLFKALFL543509CarbI-歐洲鵝耳櫪(Carpinusbetulus)=鵝耳櫪樹(片段)GVFNYEAETPSVIPAARLFKSYVLDGDKLIPKVAPQAIXK543491AlngI-歐洲赤楊(Alnusglutinosa)=赤楊樹(片段)GVFNYEAETPSVIPAARLFKAFILD⑶KLLPKVAPEAVSSVENI1204056核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶VQCMQVWPPLGLKKFETLSYLPPLSSEQLAKEVDYLLRKNLIPCLEFELEHGFVYREHNRSPGYYDGRYWTMWKLPMFGCNDSSQVLKELEECKKAYPSAFIRIIGFDDK另外的樹木變應原序列(NCBIentrez登錄號)131919；128193；585564；1942360；2554672；2392209；2414158；1321728；1321726；1321724；1321722；1321720；1321718；1321716；1321714；1321712；3015520；2935416；464576；1705843；1168701；1168710；1168709；1168708；1168707；1168706；1168705；1168704；1168703；1168702；1842188；2564228；2564226；2564224；2564222；2564220；2051993；1813891；1536889；534910；534900；534898；1340000；1339998；2149808；66207；2129477；1076249；1076247；629480；481805；81443；1361968；1361967；1361966；1361965；1361964；1361963；1361962；1361961；1361960；1361959；320546；629483；629482；629481；541804；320545；81444；541814；629484；474911；452742；1834387；298737；298736；1584322；1584321；584320；1542873；1542871；1542869；1542867；1542865；1542863；1542861；1542859；1542857；1483232；1483230；1483228；558561；551640；488605；452746；452744；452740；452738；452736；452734；452732；452730；452728；450885；17938；17927；17925；17921；297538；510951；289331；289329；166953。花生花生序列1168391ArahiMRGRVSPLMLLLGILVLASVSATHAKSSPYQKKTENPCAQRCLQSCQQEPDDLKQKACESRCTKLEYDPRCVYDPRGHTGTTNQRSPPGERTRGRQPGDYDDDRRQPRREEGGRWGPAGPREREREEDWRQPREDWRRPSHQQPRKIRPEGREGEQEWGTPGSHVREETSRNNPFYFPSRRFSTRYGNQNGRIRVLQRFDQRSRQFQNLQNHRIVQIEAKPNTLVLPKHADADNILVIQQGQATVTVANGNNRKSFNLDEGHALRIPSGFISYILNRHDNQNLRVAKISMPVNTPGQFEDFFPASSRDQSSYLQGFSRNTLEAAFNAEFNEIRRVLLEENAGGEQEERGQRRWSTRSSENNEGVIVKVSKEHVEELTKHAKSVSKKGSEEE⑶ITNPINLREGEPDLSNNFGKLFEVKPDKKNPQLQDLDMMLTCVEIKEGALMLPHFNSKAMVIVVVNKGTGNLELVAVRKEQQQRGRREEEEDEDEEEEGSNREVRRYTARLKEGDVFIMPAAHPVAINASSELHLLGFGINAENNHRIFLA⑶KDNVIDQIEKQAKDLAFPGSGEQVEKIIKNQKESHFVSARPQSQSQSPSSPEKESPEKEDQEEENQGGKGPLLSILKAFN豚草豚草屬序列113478AmbalMGIKHCCYILYFTLALVTLLQPVRSAEDLQQILPSANETRSLTTCGTYNIIDGCWRGKADWAENRKALADCAQGFAKGTIGGKDGDIYTVTSELDDDVANPKEGTLRFGAAQNRPLffIIFARDMVIRLDRELAINNDKTIDGRGAKVEIINAGFAIYNVKNIIIHNIIMHDIVVNPGGLIKSHDGPPVPRKGSDGDAIGISGGSQIWIDHCSLSKAVDGLIDAKHGSTHFTVSNCLFTQHQYLLLFWDFDERGMLCTVAFNKFTDNVDQRMPNLRHGFVQVVNNNYERWGSYALGGSAGPTILSQGNRFLASDIKKEVVGRYGESAMSESINWNWRSYMDVFENGAIFVPSGVDPVLTPEQNAGMIPAEPGEAVLRLTSSAGVLSCQPGAPC113479Amba2MGIKHCCYILYFTLALVTLVQAGRLGEEVDILPSPNDTRRSLQGCEAHNIIDKCWRCKPDWAENRQALGNCAQGFGKATHGGKWGDIYMVTSDQDDDVVNPKEGTLRFGATQDRPLffIIFQRDMIIYLQQEMVVTSDKTIDGRGAKVELVYGGITLMNVKNVIIHNIDIHDVRVLPGGRIKSNGGPAIPRHQSDGDAIHVTGSSDIWIDHCTLSKSFDGLVDVNWGSTGVTISNCKFTHHEKAVLLGASDTHFQDLKMHVTLAYNIFTNTVHERMPRCRFGFFQIVNNFYDRWDKYAIGGSSNPTILSQGNKFVAPDFIYKKNVCLRTGAQEPEWMTWNWRTQNDVLENGAIFVASGSDPVLTAEQNAGMMQAEP⑶MVPQLTMNAGVLTCSPGAPC113477Ambal.3MGIKQCCYILYFTLALVALLQPVRSAEGVGEILPSVNETRSLQACEALNIIDKCWRGKADffENNRQALADCAQGFAKGTYGGKffGDVYTVTSNLDDDVANPKEGTLRFAAAQNRPLffIIFKNDMVINLNQELVVNSDKTIDGRGVKVEIINGGLTLMNVKNIIIHNINIHDVKVLPGGMIKSNDGPPILRQASDGDTINVAGSSQIWIDHCSLSKSFDGLVDVTLGSTHVTISNCKFTQQSKAILLGADDTHVQDKGMLATVAFNMFTDNVDQRMPRCRFGFFQVVNNNYDRWGTYAIGGSSAPTILCQGNRFLAPDDQIKKNVLARTGTGAAESMAWNWRSDKDLLENGAIFVTSGSDPVLTPVQSAGMIPAEPGEAAIKLTSSAGVFSCHPGAPC113476Ambal.2MGIKHCCYILYFTLALVTLLQPVRSAEDVEEFLPSANETRRSLKACEAHNIIDKCWRCKADWANNRQALADCAQGFAKGTYGGKHGDVYTVTSDKDDDVANPKEGTLRFAAAQNRPLffIIFKRNMVIHLNQELVVNSDKTIDGRGVKVNIVNAGLTLMNVKNIIIHNINIHDIKVCPGGMIKSNDGPpILRQQSD⑶AINVAGSSQIWIDHCSLSKASDGLLDITLGSSHVTVSNCKFTQHQFVLLLGADDTHYQDKGMLATVAFNMFTDHVDQRMPRCRFGFFQVVNNNYDRWGTYAIGGSSAPTILSQGNRFFAPDDIIKKNVLARTGTGNAESMSWNWRTDRDLLENGAIFLPSGSDPVLTPEQKAGMIPAEPGEAVLRLTSSAGVLSCHQGAPC113475Ambal.1MGIKHCCYILYFTLALVTLLQPVRSAEDLQEILPVNETRRLTTSGAYNIIDGCffRGKADWAENRKALADCAQGFGKGTVGGKDGDIYTVTSELDDDVANPKEGTLRFGAAQNRPLffIIFERDMVIRLDKEMVVNSDKTIDGRGAKVEIINAGFTLNGVKNVIIHNINMHDVKVNPGGLIKSNDGPAAPRAGSD⑶AISISGSSQIWIDHCSLSKSVDGLVDAKLGTTRLTVSNSLFTQHQFVLLFGAGDENIEDRGMLATVAFNTFTDNVDQRMPRCRHGFFQVVNNNYDKWGSYAIGGSASPTILSQGNRFCAPDERSKKNVLGRHGEAAAESMKWNWRTNKDVLENGAIFVASGVDPVLTPEQSAGMIPAEPGESALS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組合物也可被局部地施用於皮膚或黏膜組織，例如經鼻地、經氣管內地、經腸地、經直腸地或經陰道地，或者被提供為適於呼吸或肺部施用的精細分散的噴霧。施用的其他方式包括口服施用、栓劑、舌下施用和主動或被動的經皮遞送技術。當本發明的肽被施用時，優選的將肽施用在身體中能夠接觸到適合的呈遞抗原細胞並且它或者它們有機會接觸個體的T細胞的部位。當APC有待被施用時，優選的是將APC施用至身體中能夠接觸並且活化個體的適當的T細胞的部位。遞送方案如上文描述的，肽/多核苷酸/細胞(例如含有多種肽的組合物)的施用可通過任何適當的方法。肽的適合的量可以是經驗確定的但通常在下文給定的範圍內。每種肽的單次施用可以是足以具有對患者的有益作用的，但應當理解的是，如果肽被施用超過一次，其中在這種情況下典型的施用方案可以是例如每6個月2-4周每周一次或兩次，或者每四至六個月一周一天一次，它可以是有益的。應理解每種肽或多核苷酸或肽和/或多核苷酸的組合可被單獨或組合施用於患者。施用的劑量將取決於許多因素，包括組合物的性質、施用的途徑和施用方案的安排和計時。本發明的分子或分子組合的適合的劑量可為每次施用多達lOi!g、多達15i!g、多達20i!g、多達25i!g、多達30i!g、多達35i!g、多達50iig、多達lOOiig、多達500iig或更多的級別。適合的劑量可小於15iig，但至少lng、或至少2ng、或至少5ng、或至少50ng、或至少lOOng、或至少500ng、或至少1yg、或至少g。對於本發明的一些分子或組合來說，使用的劑量可更高，例如多達lmg、多達2mg、多達3mg、多達4mg、多達5mg或更高。可以以液體製劑的形式，以允許通過所選擇的途徑施用的適當體積的適合的濃度提供這些劑量。應理解上文的劑量是指在分子的組合的情況下的總劑量。例如，「多達35yg」是指在含有多於一種肽的組合的組合物中總的肽濃度多達35yg。試劑盒本發明還涉及本文描述的適合用於本發明的治療的組分的組合，其以試劑盒的形式被包裝在容器中。這種試劑盒可包括一系列組分以允許本發明的治療。例如，一種試劑盒可包含四種更多種不同的本發明的肽、多核苷酸和/或細胞，或四種或更多種本發明的肽、多核苷酸或細胞，以及適於同時施用或順序或分別施用的一種或多種另外的治療劑。試劑盒可任選地包含其他適當的試劑或說明書和類似物。通過下列實施例示例性的說明本發明。實施例1用於MHC結合特徵的肽混合物的篩選結合測定月太研究下列含有Feldl的序列的肽與九種HLA-DR分子DR1、DR3、DR4、DR7、DR11、DR13、DR15、B4和B5結合的能力。SEQIDNOMLA1|H2NlEICPAVKRDVDLFLTGT|COOH|來源於FelDl鏈111MLA2HaNLFLTGTPDEYVEQVAQYCOOH來源於FelDl鏈18MLA3F^NEQVAQYKALPWLENACOOH來源於FelDl鏈1_2MLA4H2NpVLPWLENARILKNCVCOOH耒源於FelDl鏈13MLA5HgNRILKNCVDAKMTEEDKECOOH來源於FelDl鏈1一4MLA6HgNKMTEEDKENALSLLDKCOOH來源於FelDl鏈10~『MLA7HgNKENALSVLDKIYTSPLCOOH來源於FelDl鏈1「「5MLA8*H^NVKMftETCPIFyDVFFACOOH來源於feldlm2~13mla9*HinICPIFYDVFFAVANGNEL\cOOH\來源於feldl鏈2.14一mla10*h9nlgnelllklsltkvnatCOOH_來源於feldlm215MLA11H>NLTKVNAfEPERTAMKKlCOOH來源於Fel.Dl鏈210MLA12HaNTAMKKIQDCYVENGLICQOH來源於I^elDl鏈26mla13*hj^\cyvenglisrvldglvCOOH來源於feldlm216MLA14^ΝSRVLDGLVMTTISSSKGOOH來源於FelDlΜ27—MLA15HaN^ISSSKDCMGEftVQNTVCOOH來源子FelDl11_MLA16Ih2NIavqntvedlklntlgrIcoohI來源於FeiDim|12*評估了斜體字顯示的肽的結合，但由於相對差的溶解度而在這些實驗中未被進一步考慮。MHC結合測定的結合條件EBV純合細胞系被用作人II類HLA分子的來源(表4)。使用與蛋白A瓊脂糖CL4B凝膠(Pharmacia,France)偶聯的單態MabL243(ATCC,Rockville,USA)通過親和層析純化HLA-DR分子。簡單的說，將細胞以溶於含有NonidetP40(NP40)、10mg/l抑肽酶、5mMEDTA和IOmMPMSF的150mMNaClUOmMTrisHClpH=8.3的緩衝液的5X108細胞/ml在冰上溶解。以IOOOOOg離心1小時後，將上清液用於瓊脂糖4B和蛋白A-瓊脂糖4B柱並且之後用於特異性親和柱。將HLA-DR分子用1.ImM正十二烷基b-D-麥芽糖苷(DM)、500mMNaCl和500mMNa2C03pH=11.5洗脫。立即用2MTrisHClpH=6.8的緩衝液將各級分中和至PH=7，並對ImMDM、150mMNaClUOmM磷酸鹽pH=7的緩衝液大量透析。對於批號40之外的HLA-DR分子，用ImMNOGP代替透析緩衝液中的ImMDM。將HLA-DR分子稀釋在含有適當的生物素化的肽和系列稀釋的競爭肽的IOmM磷酸鹽、150mMNaClUmMDM、IOmM檸檬酸鹽、0.003%乙基汞硫代水楊酸鈉緩衝液中。每種分子的結合條件詳見表4。將樣品(每孔100μ1)在96孔聚丙烯板(Nunc，Denmark)中於37°C孵育24h至72h。用50μ1450mMTrisHClpH=7.5、0.003%乙基汞硫代水楊酸鈉、0.3%BSA，ImMDM緩衝液中和後，將樣品用於預先用10mg/mlL243Mab包被並用IOOmMTrisHClpH=7.5,0.3%BSA,0.003%乙基汞硫代水楊酸鈉緩衝液浸透的96孔maxisorpELISA板(Nunc，Denmark)。將它們與抗體包被的板於室溫結合2小時。可通過孵育鏈黴抗生物素-鹼性磷酸酶軛合物(Amersham，U.K.)並且清洗後通過加入4-甲基傘形酮磷酸鹽底物(Sigma，France)來檢測結合的生物素化的肽。當在WallacVictor21420多標記計數螢光計(PerkinElmer)上在365nm處激發時，於450nm測量發射的螢光。通過將生物素化的肽與MHCII分子在缺少競爭劑的情況下孵育測定最大結合。通過加入過量非生物素化的肽評估結合特異性。背景與通過孵育不含MHCII分子的生物素化的肽獲得的結合沒有顯著差異。數據被表示為抑制50%的標記的肽的結合的肽濃度(IC50)。之後相對已知的強結合對照(參考)肽評估結合能力。在這些實驗中適合於所檢測的HLA等位基因的參考肽是DR1(DRB1*0101等位基因):HA306-318(PKYVKQNTLKLAT)；DR3(DRB1*0301等位基因)MT216(AKTIAYDEEARRGLE)；DR4(DRB1*0401等位基因)HA306-318(PKYVKQNTLKLAT)；DR7(DRB1*0701等位基因)YKL(AAYAAAKAAALAA)；DRB1*1101HA306-318(PKYVKQNTLKLAT)；DR13(DRB1*1301等位基因)B121_36(TERVRLVTRHIYNREE)；DR15(DRB1*1501等位基因)A3152-166(EAEQLRRAYLDGTGVE)；DRB4(DRB4*0101等位基因)E2/E7(AGDLLAIETDKATI)禾口DRB5(DRB5*0101等位基因)HA306-318(PKYVKQNTLKLAT)。結果如文獻(Southwood等人(1998).JImmunol160:3363;Geluk等人(1998)ProcNatlAcadSciUSA95:10797)中通常所描述的，首先以較高的lOOOnM閾值為基礎區分結合和非結合的肽，但是通過與參考肽的比較進行另外的評估。參考肽選自每種給定的HLA分子的最佳結合的肽中。相對於參考肽，如果對於給定的HLA分子來說，一種肽具有低於參考肽超過100倍的IC50，那麼它是給定的HLA分子的弱結合劑。如果對於給定的HLA分子來說，一種肽具有低於參考肽超過20倍但小於100倍的IC50，那麼它是中等結合劑。如果對於給定的HLA分子來說，一種肽具有低於參考肽小於20倍的IC50，那麼它是強結合劑。優選的肽混合物的分析用於這些實驗的九種HLA等位基因涵蓋了高比例的白種人群體(群體中HLA等位基因的參考頻率在實施例2的表3中提供)。相應地，評估肽的組合以確定哪一種將產生對不同HLA分子的最廣闊的覆蓋。因此混合物的目標標準被如下定義對於給定的HLA分子，混合物必須含有2種強結合肽和1種中等結合肽，或者1種強結合肽和3種中等結合肽。優選的混合物對於所有九種測試的HLA類型來說都達到這些標準。因為發現具有相應於SEQIDNO13至16的序列的肽差的溶解性，因此在這一分析中只考慮具有相應於SEQIDNO1至12的序列的肽。有來自SEQIDN0:1至12的超過3000種的可能肽的組合，其可能有潛力滿足上文設定的目標標準。為了能夠將這些組合形象化，對於每種HLA類型使用了雙重評分系統，當肽的組合達到上文標準中的一個時，記入「1」的得分，並且當沒有滿足標準時，記入「0」的得分。之後將所有HLA類型的得分相加，以致對任何一種HLA類型來說都不滿足標準的混合物得分0，而對所有9種HLA類型來說都滿足標準的混合物得分9。每種肽組合的得分在圖1A至Q中標出。下文所示的10種混合物獲得了最高的九分圖1A點16MLA01、02、03、04、05、12、14圖1B點272MLA01、03、04、05、07、12、14圖1C點472MLA02、03、04、05、06、12、14圖1C點482MLA02、03、04、05、07、12、14圖1C點488MLA02、03、04、05、11、12、14圖1C點494MLA02、03、04、05、12、14、15圖1C點495MLA02、03、04、05、12、14、16圖1D點699MLA03、04、05、07、12、14、15圖1D點700MLA03、04、05、07、12、14、16圖1G點1271MLA02、03、04、05、12、14因此這些混合物是在疫苗中使用的優選的肽的組合。實施例2橫斷式篩查貓變應性受治療者的經由來源於Feldl的MHC表徵的T細胞肽表位的T細胞應答和嗜鹼性粒細胞組胺釋放1.引言1.1組胺釋放測定這一測定的目的是鑑定在治療過程中能夠活化血液嗜鹼性粒細胞(作為組織肥大細胞的替代)產生能夠導致變應性反應的組胺釋放的單種的肽。誘導組胺釋放的肽或肽的組合物常常被認為不適於被包含在肽疫苗中。組胺釋放需要嗜鹼性粒細胞的表面上鄰近的特異性IgE分子的交聯。被評估的肽是小的(長度上為13至17個胺基酸)，並且因此應當不具有能夠使它們保留整個分子的IgE結合表位的構象的顯著的三級結構。而且，溶液中的肽單體，即便它們被IgE結合，應當不能夠交聯鄰近的IgE分子。但應當注意的是，肽中的一些包含可導致混合物中單一的肽之間以及不同的肽之間二硫鍵形成的半胱氨酸殘基。因此，可產生可能具有IgE交聯潛力的肽的二聚體。在本分析中，在肽製劑中沒有使用賦形劑以阻止或減少通過二硫鍵的二聚體形成。評估了來自貓變應性個體的新鮮的外周全血的組胺釋放。外周血嗜鹼性粒細胞被用作對測定來說不實用的組織肥大細胞的替代。將血液與來自主要貓變應原Feldl的序列的9種單種的肽(MLA01、03、04、05、07、12、14、15和16)體外孵育。這些肽在如實施例1中所講解的肽-MHC結合測定後被選作可能的T細胞表位。此外，分析了對實施例1中鑑定的7種肽的混合物的優選的混合物的應答。測試的優選的7種肽的混合物由肽MLA01、03、04、05、07、12、14(SEQIDN0:1至7)組成。對完整的貓皮屑變應原提取物的應答中的組胺釋放作為陽性對照。1.2增殖測定增殖測定的目的是確定對每種單種的肽/後備肽和優選的7種肽的混合物應答的群體的百分比。1.3細胞因子測定細胞因子測定的目的是兩重的，(1)確定對每種單種的肽和優選的7種肽的混合物應答的群體的百分比，以及(2)鑑定具有在用於變應性疾病的肽疫苗中所不期望的固有的誘導Th2(IL-13)特徵的單種的肽，並且還鑑定具有對於用於變應性疾病的肽疫苗來說可能有益的固有的誘導IL-10特徵的單種的肽。2.材料和方法2.1外周血單核細胞的分離將外周血單核細胞(PBMC)從獲得自受治療者的肝素化血液樣品分離。通過Ficoll-Hypaque密度梯度分離來分離PBMC。一旦被分離，細胞被用於細胞增殖測定、組胺釋放和ELISA測定以及細胞因子釋放測定中。2.2組胺釋放測定和組胺ELISA測定在PBMC(其含有嗜鹼性粒細胞)上進行。在組胺釋放測定中將每種肽和肽的組合與整體變應原分子相比較。通過ELISA測量組胺濃度。測定需要每受治療者3X106PBMC。使用Immunotech組胺釋放免疫測定試劑盒根據製造商的說明書進行測定。組胺釋放測定後，通過組胺ELISA檢測醯化的樣品。組胺ELISA使用由組胺釋放測定產生的100iU醯化樣品中的50iU。通過於-20°C冷凍來保留剩餘的50iU樣品直到完成ELISA數據分析部分。一旦結果被分析並以令人滿意的方式進行了ELISA，就可丟棄樣品。在5個loglO範圍(10iig/ml至lng/ml)測定肽的誘導組胺釋放的能力。以可在治療期間達到的肽的理論體內劑量為基礎選擇測定的濃度範圍。例如將10yg劑量的肽加入5升血量中將產生2ng/ml(2X10_6mg/ml)的血液濃度，在組胺釋放測定劑量範圍的較低端。完整的貓皮屑提取物(C.B.F.LETI)被用作稍稍較高濃度範圍(lOOyg至lOng/ml)的釋放的陽性對照。對每個稀釋進行單一測量(即不是二重或三重的)。測定一個重複的血液樣品的自發組胺釋放，並且從所有肽/變應原結果減去這些樣品的平均值。完成組胺ELISA之後，通過對ELISA測定中產生的標準曲線的內插確定個體組胺水平。調整來自樣品的結果以顧及到樣品的任何稀釋。當肽/變應原製劑的兩種或多種稀釋引起背景之上10%或更多的組胺釋放時，或當在檢測的最高濃度獲得高於背景10%或更多的單一值時，其被認為是「正的組胺釋放」。2.3細胞增殖測定在PBMC(對於所有待測參數來說需要140X106的細胞)上進行細胞增殖測定。通過摻入放射性標記的化合物3H-胸腺嘧啶核苷來測量增殖。更具體地，100U1適當的抗原或肽濃縮物被分配至96孔板中適當的孔中。之後將板放置在加溼的5%C02的設置在37°C的培養箱中最多4小時。於室溫將如上文描述的分離的PBMC在完全培養基中製備為2X106細胞/ml濃度。之後將100u1細胞溶液分配至含有抗原/肽的96孔板的每個孔中。之後將板孵育6至8天。通過向每個孔加入10yl的氚化的胸腺嘧啶核苷儲液(1.85MBq/ml於無血清的RPMI培養基中)用氚化的胸腺嘧啶核苷溶液使培養物產生脈衝。之後將板返回培養箱8至16小時。之後使用CanberraPackardFilterMate196孔採集器收集培養物。用適合的0閃爍計數器將乾燥的濾墊計數。將來自含有肽的孔的計數與只含有培養基的孔統計比較(每組12孔)。使用了非參數Marm-Whitney檢驗。對所有受治療者使用相同的統計學檢驗。只有培養基的孔和肽刺激的孔之間的統計學上顯著的差異被認為是肽對PBMC的正刺激。2.4細胞因子釋放測定分析來自PBMC的對肽刺激應答的細胞因子分泌概況。使用ELISA測定檢測來自細胞因子釋放測定的上清液的3種細胞因子IFN-y、IL-10和IL-13的存在。細胞因子釋放測定需要每位受治療者40X106的PBMC。更具體的，將250u1適當的抗原或肽濃縮物的200ug/ml溶液分配至48孔板的適當的孔中。之後將板在加溼的5%C02的設置在37°C的培養箱中孵育最多4小時。之後向每個孔加入250yl的5X106細胞/mlPBMC懸浮液，並將板返回培養箱5天。刺激後，將培養上清液的樣品收集為3等份並冷凍直到能夠進行ELISA測定。對一個等份檢測一種細胞因子的存在(因此對3種細胞因子的檢測需要總共3等份)。通過也是在測定中產生的標準曲線的內插來確定樣品中細胞因子的水平。3.結果結果綜述3.1組胺釋放表1-組胺釋放綜述受治療者陽拄對照(釋放基線以上10%)單種的肽(釋氣基線以上10%)肽混合物(釋tt線以上10%)2種或更多種稀釋僅最高浪度2種或更多種稀釋僅最高濃度2種或更多種稀釋僅最高濃度顯示釋放的受治療者的百分比70.47.417.318.52.52.5顯示每組組胺釋放的總百分比77.830.9*5*在一些受治療者中，一些肽在2種或更多濃度導致釋放而其他的僅在最高劑量導致釋放。因此當兩個數目代表貓皮屑提取物和肽混合物時兩個數目不能簡單地相加。相似地，單種的肽釋放的值不能加上肽的混合物的值，因為具有對混合物的組胺釋放的受治療者中的2個也具有對單種的肽的釋放。在對陽性對照和肽的應答中都觀察到來自外周血嗜鹼性粒細胞的組胺釋放。表1顯示其中發生組胺釋放(如通過公認的標準所定義的)的個體的百分比。對一種或多種單種的肽的組胺釋放常常發生，但這很少轉變為來自7種優選的肽的混合物的組胺釋放。然而在對肽混合物的應答中總共5%的個體顯示組胺釋放。引發組胺釋放的肽混合物的連續劑量的劑量和數目的細節與這些結果的解釋相關，並且在下文更詳細的討論。表2-單種的肽的組胺釋放綜述MLA01MLA03MLA04MLA05MLA07MLA12MLA14MLA15MLA16(與SEQ(SEQID(SEQID(SEQID(SEQID(SEQID(SEQIDIDNO1NO2)NO3)NO4)NO5)NO6)NO7)相關的)4661662711表2顯示其中在對每種單種的肽的應答中檢測到組胺釋放的個體的數目。MLA1551和MLA16最常釋放組胺。3.2增殖測定綜述圖3概括了對肽和抗原的增殖應答。以黑柱顯示具有可檢測的增殖應答的個體的百分比。灰柱(弱)、白柱(中等)和散列柱(強)提供這些應答的質量的分析。質量主要由刺激指數(Si抗原/肽存在時的計數除以只有培養基時的計數的比率)定義。因此對於肽I(MLAOl)來說，12%的受治療者產生增殖應答，並且其中92%是弱的，沒有中等的，而有8%是高的。對單種肽/抗原的增殖應答是可變的(黑柱)。92%的受治療者對陽性對照抗原PPD具有正的增殖應答。這些大部分是強應答(散列柱)。75%的受治療者對貓的皮屑提取物應答，其中59%(即75%的59%)的應答是弱的。對7種優選的肽(SEQIDNO1至7)的混合物的應答與對貓的皮屑提取物(CAT)的應答幾乎一樣。肽MLA15和MLA16誘導比優選的肽中的四種更頻繁的應答。然而，MLA15和MLA16誘導最頻繁的嗜鹼性粒細胞組胺釋放應答(參見3.1節)。幾乎沒有單種肽如所期望的誘導強的增殖應答(肽特異性前體T細胞的低前體頻率)。3.3細胞因子測定綜述圖4概括經由所測量的三種細胞因子的產生具有對肽/抗原中的每一種的可檢測的應答的個體的百分比。黑柱代表IFN-γ的產生、灰柱代表IL-13而白柱代表IL-10。陽性對照抗原PPD在幾乎所有個體中引發細胞因子產生(IFN-Y91%,IL-13:97%和IL-1096%)0完整的貓變應原和7種肽的混合物在約80%或更多的受治療者中引發細胞因子應答。單種的肽引發不同頻率的應答。通常，細胞因子產生看起來是具有比增殖應答產生陽性細胞因子應答更大的個體百分比的更敏感的檢測應答的方法。在大多數情況下，在最大數目的受治療者中檢測到IL-10分泌，而且最少檢測到IFN-γ。3.4組織分型表3tableseeoriginaldocumentpage52進行組織分型以便確保研究群體(主要為白種人)是代表將使用疫苗的普通白種人群體。顯示了十一種常見DRBl等位基因家族。顯示了102個分型的研究受治療者中的等位基因頻率，而不是表達等位基因的個體的百分比，因為每個個體具有兩個DRBl等位基因，並且一些個體對特定的等位基因來說是純合的。參考群體等位基因頻率也被顯示以便比較(數據來自HLAFactsBook，Parham&Barber)。參考頻率通過對報導頻率的多種研究的分析來獲得，並且所顯示的數字是平均值。在目前的分析中檢測的所有頻率都在參考數據報導的範圍內。因此在目前的研究中檢測的群體代表白種人群體。tableseeoriginaldocumentpage53tableseeoriginaldocumentpage54tableseeoriginaldocumentpage55tableseeoriginaldocumentpage56tableseeoriginaldocumentpage57tableseeoriginaldocumentpage58具有10%和20%之間的自發釋放的這些測定示於表4中。所有其他測定具有小於10%的自發釋放值。大約78%的所測定的受治療者顯示對致敏的變應原的正的組胺釋放。現有文獻報導10-20%的變應性個體是抗變應原誘導的嗜鹼性粒細胞組胺釋放的。如果(a)肽的最高濃度單獨誘導總釋放值的10%或更多的釋放或者(b)如果兩個連續的值是總釋放的10%或更多，那麼組胺釋放被認為是正的。大約31%(25/81)的受治療者顯示對一種或多種單種的肽的組胺釋放。這些之中，6/81(7.4%)對完整的貓變應原提取物不具有陽性對照釋放。在兩個個體中，除了一些單種的肽之外，7種肽的混合物也誘導組胺釋放。在兩個另外的個體中，只有7種肽的混合物誘導釋放。因此，4/81的個體(約5%)顯示伴隨肽的混合物的組胺釋放。受治療者044僅在肽的最高濃度(10ug/ml)顯示釋放(總釋放的28%)。受治療者055僅在0.lug/ml(總釋放的72%)和lug/ml(總釋放的47%)顯示釋放。受治療者056在0.01ug/ml(ll%)、0·lug/ml(12%)U.Oug/ml(17%)和lOug/ml(lOug/ml)顯示釋放。受治療者103僅在肽的最高濃度(lOug/ml)顯示組胺釋放(33%)。4.2增殖測定對於增殖測定來說，分析了所有受治療者和所有肽濃度的個體增殖數據。總結了100個受治療者的整個群體的對每種肽/抗原的刺激指數。複合體抗原例如貓皮屑提取物和PPD在整個群體中誘導顯著的增殖應答。誘導顯著應答的肽是在較大百分比的群體中引起增殖應答的那些。當在含有肽的孔中的計數低於只含有培養基的那些時產生小於1的刺激指數。這種作用可歸因於當加入在酸性溶液中製備的肽時PH上的輕微變化。之後缺少對肽的增殖應答將導致計數稍微低於僅有培養基的孔中的那些。4.3細胞因子釋放測定圖4至6顯示對每種肽/抗原來說，產生任何可檢測的量的應答(即產生可檢測的IFN-γ、IL-13或IL-10)的個體的百分比。這些應答的強度之後被分為細胞因子產生的四個水平。例如，研究群體的35%可產生IFN-Y應答。這35%的個體中，一半(50%)產生非常弱的應答，20%弱應答，15%中等應答和15%強應答(給出全部100%的應答者)。每個細胞因子水平的界限以ELISA測定的檢測範圍為基礎特意設定。因為IFN-Y和IL-IO的檢測範圍大約是l-100pg/ml，而IL-13測定的範圍大約是0.5-50pg/ml,IFN-y/IL-IO和IL-13之間界限是不同的。4.3.1幹擾素-Y產生圖4顯示使用肽/抗原的細胞培養後產生IFN-γ的個體的百分比和應答強度的百分比。在26-44%的對單種肽應答的受治療者中檢測到IFN-Y應答。這些應答主要是非常低至低至中等的。複合體抗原誘導更頻繁的應答(肽混合物80%、貓皮屑79%、PPD91%)。這些應答是低至中等至高的。PPD應答尤其高(89個PPD應答在100pg/ml以上)。4.3.2IL-13產生圖5顯示使用肽/抗原的細胞培養後產生IL-13的個體的百分比和應答強度的百分比。在33-68%的對單種肽應答的受治療者中檢測到IL-13應答。這些應答主要是非常低至低的，儘管檢測到顯著數目的中等應答。這可能反應了在這些受治療者中Th2類型的變應性致敏。複合體抗原誘導更頻繁的應答(肽混合物85%、貓皮屑93%、PPD97%)。這些應答是低至中等至高的。[1013]4.3.3IL-10產生圖6顯示使用肽/抗原的細胞培養後產生IL-10的個體的百分比和應答強度的百分比。在46-75%的對單種肽應答的受治療者中檢測到IL-10應答。這些應答主要是非常低至低的。複合體抗原誘導更頻繁的應答(肽混合物93%、貓皮屑96%、PPD96%)。這些應答是低至中等的。觀察到非常少的「高的」IL-10應答。5.討論5.1組胺釋放測定解釋組胺釋放結果時，重要的是考慮與測定設計有關的幾點1)將在治療期間達到的估計的肽的血液劑量位於在測定中使用的劑量應答曲線的底部。例如，進入5升血量的IOug劑量的肽將產生2ng/ml(2X106mg/ml；假定沒有肽降解，但其是不可能的)的血液濃度。這一濃度僅僅在測定的較低的劑量限制(lng/ml)之上。用於測定的肽的2種最低的濃度大約相當於5μg(lng/ml)和50μg(10ng/ml)的注射劑量。因此，測定被設計以在用於治療的肽的劑量或之上檢測組胺釋放。僅在3個實例中，組胺釋放與最低的兩種(10%以上的連續的值)肽濃度有關。在這些實例的兩個中，值小於11%。7種肽的混合物在最低的兩種肽濃度沒有顯示任何釋放。因此，儘管對單種的肽或混合物的應答的組胺釋放相對常見，但在治療期間達到的肽的濃度，其通常並未被看到。2)由於費用和複雜性的問題，測定了單一的孔的肽的每種濃度。這增加了任何一個值可以是假的的風險。其尤其與為正的結果定義的第二條件相關聯；僅僅肽/抗原的最高濃度顯示總釋放的10%或更多的釋放。對單種的肽的組胺釋放的幾個實例僅與肽的單一的最高濃度有關並，且這對於2/4的具有由7種肽的混合物觸發的組胺釋放的個體來說也是真實的。3)在一些實例中，來自肽的組胺釋放與來自貓皮屑提取物的組胺釋放無關(缺少陽性對照)。4)之前顯示具有半胱氨酸殘基的肽(MLA01、MLA04、MLA05、MLA12和MLA15)能夠改變同源二聚化的程度。儘管沒有正式的定量，這些肽在混合時可能同樣形成異源二聚體(即，在SEQIDN0:1至7混合物中)。二聚體可足以在產生組胺釋放的肥大細胞和嗜鹼性粒細胞表面上交聯IgE分子。在這一研究中沒有使用減少同源或異源肽之間的二硫鍵形成的賦形劑。疫苗的臨床製品將包含硫代甘油以防止二硫鍵形成。大約78%的所測定的受治療者顯示對致敏的變應原的正的組胺釋放。這比表明10-20%的變應性個體是抗變應原誘導的嗜鹼性粒細胞組胺釋放的文獻中所報導的稍低。30.9%的受治療者顯示對一種或多種單種的肽的組胺釋放。還在5%(4/81)的受治療者中檢測到對7種肽的混合物(SEQIDNO:1至7;可能的疫苗候選物)的組胺釋放。這4個個體中的兩個顯示對單種的肽的釋放而2個沒有顯示。在顯示對單種的肽的組胺釋放的一些受治療者(6/81；7.4%)中，釋放僅僅隨肽MLA15或MLA16發生，其沒有被包括在SEQIDNO:1至7混合物中。MLA16是與組胺釋放相關最頻繁的肽。調整對於單種的肽的釋放的值以僅將這些肽包括在優選的7種疫苗候選物中，23.5%的受治療者顯示對疫苗的單種的組分的組胺釋放。5.2增殖測定測定了對具有3種濃度的單種的肽、7種肽(通過MHC結合測定選擇的)的混合物和完整的貓皮屑變應原提取物的培養物應答的PBMC的增殖。還測定了作為正的回憶應答的標誌物的對單一濃度的PPD的應答。PPD應答92%的受治療者具有對PPD的可檢測的增殖應答。應答很大程度上取決於之前使用BCG的疫苗接種。非應答者可來自於其中BCG並不是義務性的國家(例如美國)或可因為其他原因沒有接受免疫。大部分應答(92%)產生大於10的SI。這些被特意設定為「強的」應答。貓皮屑變應原提取物應答75%的受治療者具有對貓皮屑變應原提取物的可檢測的增殖應答。通過強調測定活化的多種參數對確定反應性的重要性的細胞因子的測量檢測到更頻繁的應答。儘管觀察到顯著數量的中等(SI5-10；24%)和強(SI10+；17%)的應答，但大部分應答是弱的(SI2-5；59%)。肽混合物(P1-7)與對貓皮屑變應原提取物相似，71%的受治療者具有對肽混合物的應答。觀察到相似百分比的弱(52%)、中等(34%)和強(14%)的應答。對貓皮屑變應原提取物和肽混合物的增殖應答緊密相關，表明T細胞對貓皮屑的主要反應性可通過肽混合物中包含的表位來解釋。單種肽的應答對單種肽的增殖應答通常是弱至中等的。大部分肽在弱的類別中產生它們的70-80%的應答，以及中等類別中的20-30%的應答。幾乎沒有肽產生強的應答。比對複合體抗原或肽的混合物弱的對單種肽的應答是所期望的來自對個別的表位特異的T細胞的較低的前體頻率的結果。對單種肽的最強的增殖應答是對來自Feldl鏈2的P12(43%),而最弱的是對來自鏈1的P4(6%)。然而，檢測到對所有肽的細胞因子應答比增殖應答更頻繁。5.3細胞因子測定細胞因子測量被證實是測量對肽的應答的最敏感的方法。通常與可測量的增殖應答相比，較高的百分比的受治療者顯示可測量的細胞因子應答。三種細胞因子中的每一種的產生隨IL-10變化，IL-10通常由與IL-13和IFN-y相比更多的比例的受治療者產生。用IFN-Y檢測應答的最低頻率。這些受治療者的特應性變應性狀態可能意味著記憶T細胞對Feldl和其表位的應答可能主要是Th2應答，其可以解釋較小頻率的Thl(IFN-y)應答。高頻率的IL-10應答是個意外。IL-10被認為是鼠系統中的Th2細胞因子，但在人系統中並沒有充分確立。IL-10通常被認為是調控/免疫抑制的細胞因子。之前的報導已經表明一些肽序列可具有固有的IL-10誘導特性。本研究中沒有觀察這種肽。這種應答在其他系統中的檢測可能僅僅反映了引發整個變應原的T細胞的性質，其通過記憶T細胞與肽一起的培養被恢復。因此，IL-10的產生可能是回憶應答，而不是肽的固有的IL-10誘導的特徵的結果。沒有單一的肽誘導特定的細胞因子的優先產生。因此，沒有一種所篩選的肽誘導已經被認為對於被包含在肽疫苗中來說是不期望的特定的不良的Th2(IL_13)應答。5.4組織分型組織分型的結果顯示在這一研究中測定了代表性的群體。[1036]6.結論6.1組胺釋放測定單種肽在一些個體中誘導組胺釋放。優選的肽SEQIDNO1至7的混合物在4個個體中誘導組胺釋放，儘管這些釋放中的兩個是在單一點(最高濃度)被檢測的。MLA16產生最頻繁的釋放但是不在SEQIDNO:1至7中。在缺少來自完整的貓皮屑的「陽性對照釋放」的情況下，用肽觀察到一些正的釋放。測定被設計以檢測約為治療劑量和治療劑量以上的肽濃度的組胺釋放。相當於治療劑量的肽濃度的組胺釋放是非常少見的(只有一個明顯的實例)，並且僅隨單種肽而不隨SEQIDNO:1至7發生。體外組胺釋放測定的結果有可能過度表現了疫苗的組胺釋放潛能，因為沒有採用將肽之間的二硫鍵形成最小化的步驟。當完整的貓皮屑提取物存在的情況下，通過來自大多數個體的嗜鹼性粒細胞釋放組胺。在許多受治療者中，與隨肽的釋放相比，組胺釋放以劑量依賴的形式發生，所述隨肽的釋放常常在劑量範圍的中間的濃度發生。在通過肽釋放組胺的個體中，在提取物的較低劑量時對貓皮屑提取物的敏感度通常是明顯的。6.2增殖測定如所期待的，對肽的增殖應答比對肽混合物或複合體蛋白抗原的弱。大多數單種的肽在少於20%的個體中引起增殖應答。在肽之間觀察到相當大的變化，但是沒有單一肽不能在至少一些受治療者中引起增殖應答，儘管優選的7種肽中的一種即MLA04在誘導增殖方面比較差。肽MLA15和MLA16在誘導增殖方面比優選的7種肽中的幾種更有潛力，但是產生最高的組胺釋放。6.3細胞因子測定在本研究中對於檢測對肽的應答來說，細胞因子產生是比增殖更敏感的方法。沒有獲得證據支持某些肽可具有誘導特定模式的細胞因子產生的固有能力的觀點。沒有單獨的肽優選地引發Thl、Th2或Treg(IL-lO)應答。IFN-y應答往往沒有IL-13和IL-10常見。細胞因子測定數據沒有表明優選的肽混合物中的任一種被取代或任何單獨的肽或混合物將優選地在體內誘導Th2應答。實施例3優選的組合的臨床試驗由肽MLA01、03、04、05、07、12、14(SEQIDNO1至7)組成的7種肽的優選的混合物已經在隨機、安慰劑對照、盲法臨床試驗中被測試。評估了這一混合物在減少變應性症狀上的功效。臨床試驗的研究設計依照良好的臨床實踐規範。使用在研究藥物施用前6和8天之間發生的基線攻擊建立所有受治療者的對貓變應原的基線皮膚應答。將0.010HEP(組胺當量點刺)單位的商業上可獲得的標準貓變應原(由LaboratoriesLeti，Spain提供)間隔30分鐘的時間間隔兩次皮內注射，分別施用至左前臂和右前臂的手掌表面。受治療者被評估以確保它們經歷對整個貓變應原的晚期皮膚應答(LPSR)以及如下記錄基線反應的量每次注射之後8小時，將任一晚期應答的輪廓用原子筆畫在皮膚上。測量每個應答的最長和垂直的直徑並記錄，並計算每臂上的應答的面積。之後計算每個受治療者兩臂上應答的平均面積以提供基線反應。產生適當基線反應的受治療者被設定為給藥組，隨機選擇並進入治療期。[1049]治療期是由每個受治療者21天的時間段組成。在這一時間段中，在第一天的治療期第1次隨訪時，一組受治療者接受一次優選混合物(每劑量每種肽0.03,0.3、3、12nmol)或稀釋的安慰劑皮內注射。一小組8個受治療者在每個劑量水平接受治療(6個接受優選的混合物，2個接受安慰劑)。皮內組的第一小組接受混合物中的0.03nmol的每種肽，並且組中每個接著的小組接受下一個較高的劑量水平。向左前臂的屈肌表面進行皮內注射。對所有注射來說注射的總體積是60PL。治療後，在第21天(士3天)的治療期第2次隨訪時，重新測量受治療者對整體變應原的皮膚應答。通過如上文所述的皮內施用0.010HEP(組胺當量點刺)單位的商業上可獲得的標準貓變應原(由LaboratoriesLeti，Spain提供)之後8小時測量晚期應答來評估對貓變應原的皮膚應答。之後如前文所描述的計算每個受治療者的兩臂的應答的平均面積。然後，將這一治療後的平均LPSR面積與每個受治療者的基線LPSR面積相比較。之後評估每小組中所有8個患者的LPSR面積上的總體變化。這一分析的結果示於下文的表中。進行這一分析而未將數據除盲化。tableseeoriginaldocumentpage63圖8是顯示12.Onmol小組中所有八個患者的治療之前和之後的平均LPSR面積的代表性圖。總的來說，這些數據表明優選的肽的混合物在減少貓變應性個體中對完整的變應原的LPSR上是有效的。權利要求一種用於通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應的組合物，其包含a)獨立地選自SEQIDNO1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的四種或更多種多肽；以及任選地b)具有下列特徵的一種、兩種或三種多肽(i)包含與a)中未選的SEQIDNO1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種中的至少9個或更多個連續的胺基酸具有至少65％序列同一性的序列；並且(ii)長度上為9至30個胺基酸。2.如權利要求1所述的組合物，其中(a)中選擇的肽包含下列序列或由下列序列組成i)SEQIDNO:1、2、3、4、5、6和7；或ii)SEQIDNO:2、3、4、10、6和7；或iii)SEQIDNO:2、3、4、5、6、7和11；或iv)SEQIDNO:2、3、4、5、6、7和12；或v)SEQIDNO:8、2、3、4、6和7；vi)如(v)中的序列與選自SEQIDNO:1、5、9、11或12的一種另外的肽；以及任選地，其中所述組合物不包含其他的肽。3.如前述權利要求中的任一項所述的組合物，其含有如b)中所定義的至少一種多肽，其中所述多肽能夠導致至少20%的T細胞樣品中的T細胞增殖，其中每個樣品是從群體中不同的貓變應性個體獲得的。4.如前述權利要求中的任一項所述的組合物，其含有如b)中所定義的至少一種多肽，其中所述多肽能夠在貓變應性個體中誘導晚期應答，和/或其中所述組合物被用於在MHC等位基因未知的個體中預防或治療對貓的變態反應。5.如前述權利要求中的任一項所述的組合物，其中所述組合物能夠在所述群體中使一組貓變應性個體中的至少50%或至少60%免疫耐受。6.如前述權利要求中的任一項所述的組合物，其含有如b)中所定義的至少一種多肽，其中所述多肽在長度上是9至20個或13至17個胺基酸，和/或其中所述多肽與SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種具有至少70%序列同一性。7.如前述權利要求中的任一項所述的組合物，其中如b)中所定義的所述多肽與a)中未選的SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種中的胺基酸序列中的至少一組、兩組或更多不同組的9個連續的胺基酸具有至少70%、80%、90%、95%或99%的序列同一性，其中，所述9個連續的胺基酸任選地含有T細胞表位。8.如權利要求9所述的組合物，其中b)中的一種或多種多肽選自a)中未選的SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的胺基酸序列，和/或其中所述組合物被用於治療已經患有對貓的變態反應至少一年的個體。9.如前述權利要求中的任一項所述的組合物，其中a)和/或b)中的所述多肽中的一種或多種具有選自下列的一種或多種修飾(i)N端乙醯化；(ii)C端醯胺化；(iii)由亞甲基基團取代的精氨酸和/或賴氨酸側鏈胺上的一個或多個氫；(iv)糖基化；以及(v)磷酸化。10.如前述權利要求中的任一項所述的組合物，其中如權利要求1的a)或b)中所定義的每種多月太具有0.03nmol/ml至200nmol/ml、0.3nmol/ml至200nmol/ml或10nmol/ml至50nmol/ml範圍內的濃度。11.一種用於通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應的組合物，其包含在表達時導致如權利要求1至11中的任一項所定義的組合物的產生的四種或更多種不同的多核苷酸序列。12.如權利要求11所述的組合物，其中能夠表達不同的多肽的每種多核苷酸序列存在於相同或不同的多核苷酸載體中。13.一種用於通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應的載體，其包含編碼如權利要求la)中所定義的不同的多肽的四種或更多種多核苷酸序列，和任選地編碼如權利要求lb)中所定義的不同的多肽的一種或多種多核苷酸序列。14.一種用於通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應的載體，其包含不同的多核苷酸序列，其中每種多核苷酸序列編碼下列組合中所示的多肽中的一種i)SEQIDNO:1、2、3、4、5、6和7；或ii)SEQIDNO:2、3、4、10、6和7；或iii)SEQIDNO:2、3、4、5、6、7和11；或iv)SEQIDNO:2、3、4、5、6、7和12；或v)SEQIDNO:8、2、3、4、6和7；vi)如(v)中的序列與選自SEQIDNO:1、5、9、11或12的一種另外的肽。15.一種用於通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應的組合物，其含有三種或更多種多肽，所述多肽獨立地選自a)SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種；以及b)具有下列特徵的任何多肽⑴包含與a)中未選的SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種中的至少9個或更多個連續的胺基酸具有至少65%序列同一性的序列；並且(ii)長度上為9至30個胺基酸，其中所述組合物包含(i)對一組HLA分子中的每個成員都表現出強結合的至少兩種肽和表現出中等結合的至少一種肽；或者(ii)對所述組的HLA分子中的每個成員都表現出強結合的至少一種肽和表現出中等結合的至少兩種肽；其中HLA分子的所述組包括由在至少80%的遠系繁殖的人群中具有累計頻率的不同的等位基因編碼的至少七種不同的HLA分子；和/或(iii)其中所述組合物能在來自貓變應性個體的樣品中以一定水平誘導組胺釋放，所述水平高出來自同樣的個體的樣品中由完整的Feldl變應原誘導的組胺釋放不超過5%；和/或(iv)其中所述組合物在來自貓變應性個體的PBMC樣品中誘導細胞因子釋放概況，其與在來自同樣的個體的樣品中由完整的Feldl變應原誘導的細胞因子釋放概況相當。16.如權利要求15所述的組合物，其中所述遠系繁殖的人群是白種人，和/或其中HLA分子的所述組包括至少HLA-DR1、DR3、DR4、DR7、DR11、DR13和DR15；以及任選地也包括HLA-DRB4禾口DRB5。17.一種用於通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應的產物，其包含a)獨立地選自SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的四種或更多種多肽；以及任選地b)具有下列特徵的一種、兩種或三種多肽⑴包含與a)中未選的SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種中的至少9個或更多個連續的胺基酸具有至少65%序列同一性的序列；並且(ii)長度上為9至30個胺基酸，其中每種不同的多肽用於在人類中預防或治療對貓的變態反應中同時、分別或順序使用。18.一種用於通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應的產物，其包含a)能夠表達選自SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12的不同多肽的四種或更多種多核苷酸，以及任選地b)能夠表達具有下列特徵的不同多肽的一種、兩種或三種多核苷酸⑴包含與a)中未選的SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12中的任一種的胺基酸序列中的至少9個或更多個連續的胺基酸具有至少65%序列同一性的序列，並且(ii)長度上為9至30個胺基酸，其中每種不同的多核苷酸用於在人類中預防或治療對貓的變態反應中同時、分別或順序使用。19.一種用於通過免疫耐受作用預防或治療對貓的變態反應的藥物製劑，其包含如權利要求1至12或15至16中的任一項所述的組合物、如權利要求13或14中的任一項所述的載體、或如權利要求17或18中的任一項所述的產物以及藥學上可接受的載體或稀釋劑。20.如權利要求19所述的組合物、載體或產物，其經配製用於皮內施用、口服施用、鼻施用、皮下施用、舌下施用或通過吸入或通過注射施用。21.如權利要求1至12或15至16中的任一項中定義的組合物，或如權利要求17或18中所定義的所述產物，其另外包括用於使個體對另外的多肽變應原免疫耐受的另外的多肽變應原。22.一種確定個體是否具有病況或處於病況的風險中的體外方法，其中所述病況是由對貓變應原應答的變應性症狀表徵的，所述方法包括檢測個體是否具有對如權利要求1至12或15至16中的任一項所定義的組合物應答的T細胞，由此確定個體是否具有所述病況或處於所述病況的風險中。23.如權利要求22所述的方法，其中通過在允許所述組合物和T細胞相互作用的條件下使所述組合物與取自所述受治療者的樣品中的T細胞相接觸，並且通過確定T細胞中的任一種是否被激發並由此確定T細胞免疫應答是否存在或不存在來測量對所述組合物的T細胞免疫應答。全文摘要本發明涉及包含用於預防或治療對貓的變態反應的肽的組合物，並且尤其涉及肽的最佳組合。文檔編號A61P37/08GK101808660SQ200880101107公開日2010年8月18日申請日期2008年5月30日優先權日2007年6月1日發明者安東尼·巴林頓·凱伊,羅德裡克·彼得·哈夫納,馬克·拉爾什申請人:切爾卡西亞有限公司