不與麻黃鹼和偽麻黃鹼交叉反應的甲基苯丙胺單抗試劑盒的製作方法

2023-05-13 20:36:26

專利名稱：：不與麻黃鹼和偽麻黃鹼交叉反應的甲基苯丙胺單抗試劑盒的製作方法
技術領域：
：本發明涉及違禁藥品的檢測，尤其涉及甲基苯胺的酶聯免疫檢測。技術背景甲基苯丙胺，又稱甲基安非他明(Methamphtamine)、"冰毒"，是一種興奮劑新型毒品，非法濫用嚴重。隨著與甲基苯丙胺相關的刑事案件逐年上升和國家對甲基苯丙胺管理的日趨嚴格，本領域對甲基苯丙胺和濫用毒品者生物標本中甲基苯丙胺的檢測提出了更高的要求。目前，甲基苯丙胺的檢測主要是基於色譜分析方法，例如氣質聯用色譜分析(GC-MS)和高效液相色譜分析(HPLC)。這些色譜方法具有很好的靈敏度和特異性，但操作繁瑣，需要昂貴的儀器設備，且耗時長。特定的結合反應，例如抗原-抗體反應，已經廣泛用於檢測生物樣品中存在的各種物質的免疫測試中。其中，膠體金免疫層析技術是近年來發展起來的一種獨特的免疫診斷技術，具有免疫反應和色譜層析的特定，與GC-MS比較，膠體金層析技術具有特異性強、靈敏度高、簡單快速、易於操作、結果容易判讀、無需任何儀器設備等優點。國內外現有的甲基苯丙胺單抗免疫試劑盒均與的麻黃鹼和偽麻黃鹼成分發生交叉反應，產生假陽性的結果。麻黃鹼和偽麻黃鹼是感冒藥、止咳藥水等正常治療藥物中含有的主要成分，在毒品尿檢、徵兵體檢中經常發生當事人在正常服用上述含有麻黃鹼和偽麻黃鹼成分的藥物時被檢測出假陽性結果，嚴重影響了辦案工作，產生了嚴重的負面影響。因此，甲基苯丙胺單抗免疫試劑盒與麻黃鹼和偽麻黃鹼發生交叉反應的問題，是國內外長期為之研究的難題。因此，本領域迫切需要一種能夠更加快速、簡易、靈敏地檢測甲基苯丙胺，且與麻黃鹼和偽麻黃鹼沒有交叉反應的檢測方法和檢測試劑。本發明的目的正是提供一種快速、簡易、靈敏地檢測甲基苯丙胺且與麻黃鹼和偽麻黃鹼沒有交叉反應的檢測方法和檢測試劑。在本發明的第一方面中，提供了一種半抗原，所述半抗原具有式l所示的結構:式l。在本發明的第二方面中，提供了一種完全抗原，所述完全抗原具有式2所示的結構其中，X為蛋白質載體。在本發明的一個優選例中，所述蛋白質載體為選自下組中的任何一種蛋白質血藍蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白或Y球蛋白。在本發明的另一個優選例中，所述蛋白質載體是血藍蛋白或牛血清白蛋白。在本發明的第三方面中，提供了一種製備式2所述的完全抗原的方法，所述方法包括步驟(a)對甲基苯丙胺進行硝化，在其對位接入硝基基團，以形成對硝基-甲基苯丙(b)將對硝基-甲基苯丙胺中的硝基還原為氨基，以製得對氨基-甲基苯丙胺，即(c)將對氨基-甲基苯丙胺與蛋白質載體連接，以製得式2所示的完全抗原。在本發明的-一個優選例中，步驟(a)的條件如下反應溫度為-202(TC，優選-1010°C，更優選-5(TC;反應時間為1-24小時，優選2-12小時，更優選2-6小時。在另一優選例中，步驟(b)的條件如下反應溫度為室溫10(TC，優選50-70。C，更優選60。C;反應時間為5-24小時，優選8-12小時，更優選8小時。在另一優選例中，步驟(c)的條件如下反應溫度為0-4(TC，優選4-25。C，更優選2025。C;反應pH為3.0-6.0，優選4.0-5.0，更優選4.5;反應時間為3-24小時，優選6-12小時，更優選6小時。在本發明的第四方面中，提供了一種本發明前述的半抗原或完全抗原的用途，其用於製備甲基苯丙胺特異性免疫球蛋白。在本發明中，所述免疫球蛋白優選為甲基苯丙胺特異性的單克隆抗體。在本發明的第五方面中，提供了一種免疫球蛋白，所述免疫球蛋白特異性結合於甲基苯丙胺。在本發明的一個優選例中，所述免疫球蛋白由小鼠雜交瘤細胞系產生，優選所述雜交瘤細胞係為CCTCCNO.C200914(小鼠單抗雜交瘤細胞株，Metl，於2009年2月20日保藏在中國典型培養物保藏中心(CCTCC，中國，武漢，武漢大學))。在另一優選例中，所述的免疫球蛋白與甲基苯丙胺的結合效價大於l:4000，優選大於1:8000，更優選大於1:16000。在另一優選例中，所述甲基苯丙胺的效價為1:40001:16000，更優選l:80001:16000。在另一優選例中，所述的免疫球蛋白為單克隆抗體。在另一優選例中，所述的免疫球蛋白還結合於MDMA。在另一優選例中，所述的免疫球蛋白不結合於麻黃鹼或偽麻黃鹼。在本發明的第六方面中，提供了一種產生前述的免疫球蛋白的雜交瘤細胞系，所述雜交瘤細胞系是一種小鼠雜交瘤細胞系，優選所述細胞係為CCTCCNO.C2009"。在本發明的第七方面中，提供了一種前述的免疫球蛋白的用途，其用於製備檢測樣品中甲基苯丙胺的試劑、檢測板或試劑盒。在本發明的一個優選例中，所述樣品是生物樣品，且優選為血樣或尿樣。在本發明的第八方面中，提供了一種檢測生物樣品中是否存在甲基苯丙胺的方法，所述方法包括步驟(a)將樣品與前述的免疫球蛋白接觸；(b)檢測是否形成抗原-抗體複合物，其中形成複合物就表示樣品中存在甲基苯丙胺。在本發明的一個優選例中，所述免疫球蛋白帶有可檢測標記物。更佳地，所述的標記物選自下組膠體金標記物、有色標記物或螢光標記物。在本發明的一個優選例中，所述檢測方法為膠體金檢測法、比色檢測法、或螢光檢測法。在本發明的第九方面中，提供了一種檢測板，所述的檢測板包括基片(支撐板)和測試條，所述的測試條含有前述的免疫球蛋白。在另一優選例中，所述的測試條還含有完全抗原點樣區，所述的完全抗原點樣區含有固定化的式2所示的完全抗原。在另一優選例中，所述的測試條由濾樣紙、層析材料、硝酸纖維素膜和吸水紙依次搭接組成。在另一優選例中，所述層析材料預包被有經膠體金標記或有色標記的本發明的免疫球蛋白；所述硝酸纖維素膜上吸附有檢測線和質控線，所述的檢測線為式2所示的完全抗原；所述的質控線為羊抗鼠IgG多抗。所述層析材料預包被有濃度範圍為0.01-20.0mg/ml，優選0.1-10.0mg/ml，更優選為0.2-2.0mg/ml，最優選0.5-lmg/ml，且包被量為5-150y1/cm2，優選10-100n1/cm2，更優選20-70Ul/cm2的經膠體金標記或有色標記的本發明的免疫球蛋白。所述檢測線採用了濃度範圍為0.01-20.0mg/ml，優選0.1-10.0mg/ml，更優選為0.2-2.0mg/ml，且吸附量為0.01-100iU/cm2，優選0.5-50y1/cm2，更優選1-20"/cm2的式2所示的完全抗原。在本發明的第十方面中，提供了一種試劑盒，所述的試劑盒含有容器以及位於容器內的前述的免疫球蛋白，或者所述的試劑盒含有前述的檢測板和使用說明書。生物材料保藏說明本發明的小鼠單抗雜交瘤細胞株Met1，已於2009年2月20日保藏在中國典型培養物保藏中心(CCTCC，中國武漢，武漢大學)，保藏編號為CCTCCNO，C200914。圖l:甲基苯丙胺完全抗原製備示意圖。圖2:融合率測定示意圖。圖3:純化抗體經2-ME還原後的聚丙烯醯胺凝膠電泳圖譜。圖4:甲基苯丙胺抗血清的效價(滴度)測定。圖5:甲基苯丙胺單克隆抗體MA-CH1的效價測定。圖6:甲基苯丙胺單克隆抗體MA-CH1與BSA交叉反應的測定圖7:檢測板中試條組成示意圖。圖8:檢測板組裝原理示意圖。圖9:毒品單抗免疫快速檢測板判定結果示意圖。具體實施方式本發明人經過長期而深入的研究合成了甲基苯丙胺活化衍生物對氨基-甲基苯丙胺，並將其與適當的蛋白質載體連接產生了完全抗原，以此為免疫原免疫Balb/C小鼠，將其脾細胞與小鼠骨髓瘤SP20細胞融合，獲得特異性分泌抗甲基苯丙胺的單克隆細胞株，並製備並純化得到了甲基苯丙胺單克隆抗體，其後進一步用所述完全抗原和甲基苯丙胺抗體製備了具有高靈敏度和甲基苯丙胺的免疫檢測板，從而完成了本發明。半抗原甲基苯丙胺(Methamphtamine)分子量很小(149.24道爾頓)，是半抗原物質，只具備免疫反應性，沒有免疫原性，不能直接用於免疫動物而獲得抗體。因此，為了製備本發明的完全抗原，對甲基苯丙胺進行了活化並製得了本發明的半抗原。如本文所用，本發明的"半抗原"、"甲基苯丙胺活化衍生物"或"活化的小分子"是指經本發明的衍生反應得到的具有結構式1的對氨基-N-甲基苯丙胺(p-NH廠Methamphtamine):formulaseeoriginaldocumentpage9式1完全抗原通常，半抗原需要和大分子如KLH(血藍蛋白)或BSA(牛血清白蛋白)以共價鍵方式偶聯，成為既具有免疫反應性，又具有免疫原性的完全抗原。如本文所用，本發明的"完全抗原"是指本發明的半抗原與適當的蛋白質載體結合後的產物。如本文所用，本發明中的"蛋白質載體"是指任何在免疫學上可接受的用於形成完全抗原的蛋白質，其可為例如，血藍蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白或y球蛋白等。本發明用於甲基苯丙胺檢測及抗體製備的完全抗原的結構如式2所示式2其中，X為蛋白質載體，本發明中優選血藍蛋白(KLH)或牛血清白蛋白(BSA);與X載體共價交聯的部分為甲基苯丙胺的衍生物對氨基-甲基苯丙胺(p-NH2-Methamphtamine)。在本發明的一個優選的方案中，X為血藍蛋白，完全抗原為甲基苯丙胺-KLH，作為免疫用抗原，用於製備分泌抗甲基苯丙胺單克隆抗體的雜交瘤細胞。在本發明的另一個優選的方案中，X為牛血清白蛋白，完全抗原為甲基苯丙胺-BSA，作為檢測用抗原，用於製備檢測甲基苯丙胺的單克隆抗體免疫檢測板。本發明的完全抗原的製備包括如下步驟-步驟(b):步驟(C):。具體而言，在步驟(a)硝化反應中，對甲基苯丙胺進行硝化，即在其苯環上接入一個硝基基團；步驟(b)還原反應中將接上去的硝基還原為氨基，使其具有活潑的化學性質；步驟(C)偶聯反應中採用同源雙功能氨基偶聯劑將活化的甲基苯丙胺與大分子的KLH、BSA或OVA等蛋白偶聯，這樣就使甲基苯丙胺成為完全抗原所具有的免疫原性。其中所述的硝化和還原反應可以本領域技術人員已知的任何方法、任何適宜的條件進行。例如，本發明的硝化反應可在如下條件下進行反應溫度為-2020'C，優選-10l(TC，更優選-50。C;反應時間為1-24小時，優選2-12小時，更優選2-6小時；本發明的還原反應條件可在如下條件下進行為-202(TC，優選-1010°C，更優選-5(TC;反應時間為l-24小時，優選2-12小時，更優選2-6小時；本發明的載體連接反應可在如下條件下進行反應溫度為0-40°C，優選4-25。C，更優選2025。C;反應pH為3.0-6.0，優選4.0-5.0，更優選4.5;反應時間為3-24小時，優選6-12小時，更優選6小時。本領域普通技術人員可根據具體操作或對產物的要求對這些條件進行適當調整。本發明的半抗原和蛋白質載體的連接可使用本領域已知的任何連接方式。例如但不限於碳二亞胺法(EDC)、戊二醛法等。本發明製備的完全抗原，甲基苯丙胺-KLH以及甲基苯丙胺-KBSA等具有很好的免疫原性，能刺激小鼠產生強烈的免疫反應，經過l次基礎免疫、3次加強免疫，抗血清效價可達l:16000;完全抗原甲基苯丙胺-BSA很好的保留了甲基苯丙胺的免疫反應性。單克隆抗體的製備本文所用的術語"單克隆抗體"是指獲自基本上同源的抗體群的抗體，艮P，組成該群體的抗體個體都相同，除了可能存在少量可能的自發突變。因此，修飾語"單克隆的"是指該抗體的性質不是離散抗體的混合物。本發明的抗體可以通過本領域內技術人員已知的各種技術進行製備。例如，本發明完全抗原，可被施用於動物以誘導單克隆抗體的產生。對於單克隆抗體，可利用雜交瘤技術來製備(見Kohler等人，Nature256;495,1975;Kohler等人，Eur丄Imm腦l.6:511,1976;Kohler等人,Eur丄Imm函l.6:292,1976;Hammerling等人，InMonoclonalAntibodiesandTCellHybridomas,Elsevier,N.Y.，1981)或可用重組DNA法(美國專利號4，816，567)製備。代表性的骨髓瘤細胞是有效融合、通過選擇的抗體產生細胞支持抗體的穩定高水平產生、且對培養基(HAT培養基基質)敏感的那些骨髓瘤細胞，包括骨髓瘤細胞系，例如鼠類的骨髓瘤細胞系，包括衍生自MOPC-21和MPC-ll小鼠腫瘤的骨髓瘤細胞系(可購自SalkInstituteCellDistributionCenter,聖地牙哥，加利福尼亞，美國)以及SP-2、NZ0或X63-Ag8-653細胞(可購自AmericanTypeCultureCollection,洛克維爾，馬裡蘭，美國)。人骨髓瘤和小鼠-人雜合骨髓瘤細胞系也已被描述用於產生人單克隆抗體[Kozbor，J.Immunol.，133:3001(1984);Brodeur等，單克隆抗體的生產技術禾口應用(MonoclonalAntibodiesProductionTechniquesandApplications),51-63頁(MarcelDekker，Inc.，紐約，1987)]。對雜交瘤細胞生長於其中的培養基進行分析以檢測具有所需特異性的單克隆抗體的產生，如，通過體外結合分析例如，酶聯免疫吸附分析(ELISA)或放射免疫分析(RIA)。表達抗體的細胞的位置可用FACS進行檢測。然後，可將雜交瘤克隆通過有限稀釋步驟形成亞克隆(subcloned)，並通過標準方法生長(Goding，單克隆抗4本(MonoclonalAntibodies):原貝U禾口實踐(PrinciplesandPractice)，AcademicPress(1986)59-103頁)。為了達到這一目的而使用的適合的培養基包括，例如，DMEM或RPMI-1640培養基。此外，雜交瘤細胞可在動物體內作為腹水瘤生長。由亞克隆分泌的單克隆抗體從培養基、腹水或血清中通過常規的免疫球蛋白純化工藝適當地得到分離，這些純化工藝為例如，蛋白A-瓊脂糖法(proteinA-Sepharose)、羥基磷灰石層析、凝膠電泳、透析或親和層析。本發明提供了一種抗甲基苯丙胺的單克隆抗體MA-CH1，經鑑定為IgGl型，K(kappa)亞型。在一個實施方式中，完全抗原上的蛋白質載體為KLH，所述MA-CH1稱為MA-KLH-CHl(CCTCCNO.C200914)。在另一個實施方式中，完全抗原上的蛋白質載體為BSA，所述MA-CH1稱為MA-BSA-CH1。在本發明的一個優選的方案中，單克隆抗體MA-CH1採用培養雜交瘤細胞方法製備。取雜交瘤細胞培養的上清液，經飽和硫酸銨沉澱法粗提出IgG，再將粗提的抗體經親和層析柱(ProtdnG-Sephrose)純化。本發明的一個優選的方案中，單克隆抗體MA-CHl採用Balb/C小鼠腹水生產單克隆抗體的方法製備。將約106-107個雜交瘤細胞接種到致敏的小鼠腹腔內，2-4周內可見腹部明顯脹大。抽取腹水，經飽和硫酸銨沉澱法粗提出IgG，再將粗提的抗體經親和層析柱(ProteinG-Sephrose)純化。標記的本發明的單克隆抗體在本發明的一個優選例中，所述單克隆抗體帶有可檢測標記物。更佳地，所述的標記物選自下組膠體金標記物、有色標記物或螢光標記物。通過培養雜交瘤細胞或小鼠腹水方法生產單克隆抗體，生產的抗體用膠體金標記。具體方法見曾立波、陳連康等《關於建立度冷丁單克隆抗體的研究》第三屆全國毒物分析學術交流會論文選，289-294，中國人民公安大學出版社2000年9月；朱立平、陳學清《免疫學常用實驗方法》人民軍醫出版社2000年3月；EdHadow，DavidLane，UsingAntibodies:ALaboratoryManual.1999。膠體金標記可採用本領域技術人員已知的方法進行。在本發明的一個優選的方案中，抗甲基苯丙胺的單克隆抗體MA-CH1用膠體金標記，得到膠體金標記的MA-CHI單克隆抗體。本發明的抗甲基苯丙胺單克隆抗體MA-CH1有很好的特異性，與60種常見藥物、毒品(尤其是麻黃鹼或偽麻黃鹼)沒有交叉反應；MA-CHI與蛋白質載體沒有交叉反應。在一個優選實施方式中，本發明的單克隆抗體與甲基苯丙胺-BSA的載體BSA沒有交叉反應。在另一個優選實施方式中，本發明的單克隆抗體與甲基苯丙胺-KLH的載體KLH沒有交叉反應。本發明的單克隆抗體MA-CH1有很高的效價，在甲基苯丙胺-BSA包被的酶標板檢測中，效價達到l:2000，優選l:4000，更優選l:8000。檢測試劑盒本發明的檢測試劑盒是指含有本發明的免疫球蛋白或單克隆抗體並可用於甲基苯丙胺檢測的試劑盒。所述的試劑盒可根據需要包括容器、使用說明書、緩衝劑、免疫助劑等。本發明的檢測試劑盒可採用多種形式，例如檢測板、含有各種測試所需試劑的測試盒等。以下以檢測板為例對本發明的試劑盒進行說明，但不應理解為本發明僅限於檢測板，甲基苯丙胺檢測用膠體金標記-免疫檢測板檢測原理甲基苯丙胺的檢測採用競爭抑制法。本發明將甲基苯丙胺-BSA固定於硝酸纖維膜上的檢測區(固相抗原)，待檢樣品溶液中的甲基苯丙胺(游離抗原)與固相抗原甲基苯丙胺單抗(標記抗體)。待檢樣品中含有的甲基苯丙胺，將抑制標記抗體與固定抗原的結合，抑制在硝酸纖維素膜的檢測區形成色帶。測定後檢測區如果形成色帶，則結果為陰性，待測樣品不含甲基苯丙胺；反之，不形成色帶，則結果為陽性，檢測樣品含有甲基苯丙胺。通常，在檢測中設置內質控。本發明在硝酸纖維膜的檢測區臨近的質控區設置羊抗鼠IgG多抗，在層析載體玻璃纖維紙上預包有被膠體金標記或有色標記的甲基苯丙胺單克隆抗體。無論待檢樣品中是否含有甲基苯丙胺，層析載體玻璃纖維上預包被的膠體金標記或有色標記的甲基苯丙胺單克隆抗體總能與硝酸纖維素膜上的羊抗鼠IgG多抗結合形成一條有色質控帶，該條色帶是判定層析過程是否正常和檢測板是否變質的標準。檢測板本發明的檢測板可釆用本領域常用的檢測板材料，採用常規的檢測板製備方法製成。本發明檢測甲基苯丙胺的免疫檢測板，包括測試條和支撐測試條的支撐板，如可採用PVC聚脂膠板等；所述的測試條由濾樣紙、層析材料、硝酸纖維素膜和吸水紙依次搭接組成，搭接部位可以採用常規的方法，如膠帶等固定連接；其中層析材料預包被膠體金標記或有色標記的甲基苯丙胺單克隆抗體或多克隆抗體，優選被膠體金標記的甲基苯丙胺單克隆抗體(MA-CH1)，硝酸纖維素膜上吸附檢測線和質控線；所述的檢測線為完全抗原甲基苯丙胺，檢測線所在的區域為檢測區；所述的質控線為羊抗鼠多克隆抗體，質控線所在的區域為質控區；因此，測試條上的檢測物依次為預包被膠體金標記的甲基苯丙胺單克隆抗體(MA-CH1)、檢測線和質控線；在一個優選的方案中層析材料上預包被膠體金標記的甲基苯丙胺單克隆抗體，其濃度為0.01-20.0mg/ml，優選0.1-10.0mg/ml，更優選為0.2-2.0mg/ml，最優選0.5-1.5mg/ml，且包被量為5-150"1/cm2，優選IO-IOOy1/cm2，更優選20-70n1/cm2。在一個優選例中所述單克隆抗體為MA-CH1。硝酸纖維膜上吸附的本發明完全抗原是採用濃度為0.5lmg/ml的完全抗原胺溶液進行吸附的，吸附量為10iU/cm、優選的濃度為0.5或lmg/ml，10"1/cm2。在一個優選實施方式中，所述完全抗原中的蛋白質載體為BSA或KLH硝酸纖維膜上吸附的羊抗鼠IgG多抗是採用濃度為0.81.2mg/ml羊抗鼠IgG多抗溶液進行吸附的，吸附量為10"l/cm、優選的濃度為0.8或1.2mg/ml，10"l/cm2;檢測板的靈敏度在250ng300ng之間。免疫檢測板的性能本發明的膠體金標記甲基苯丙胺單抗免疫檢測板具有如下性能靈敏度高調節試劑條上預包被的膠體金標記的MA-CH1單抗溶液、本發明完全抗原的量，測試尿樣中含有的甲基苯丙胺，進行靈敏度測試。結果表明，本發明的膠體金標記的甲基苯丙胺單克隆抗體和完全抗原製備的檢測板，甲基苯丙胺的最低檢測量可達到250ng/ml。穩定性好:將膠體金標記的甲基苯丙胺單克隆抗體試劑條，靈敏度為1000ng/ml置於65。C下分別保溫0.5d、ld、1.5d、2d、2.5d、3d、4d、5d，然後按上述靈敏度試驗方法進行1000ng/ml的靈敏度測試。結果表明，膠體金標記的甲基苯丙胺單抗在65t:下能夠耐受5天，具有良好的穩定性。特異性佳用甲基苯丙胺單克隆抗體免疫檢測板檢測共60種毒品或藥品，結果僅甲基苯丙胺和MDMA為陽性，其它均為陰性。綜上所述，本發明的膠體金標記甲基苯丙胺單抗免疫檢測板與HPLC等色譜方法相比，本發明的檢測板簡單、輕便，易於攜帶，可以現場檢測，而且不需要昂貴的設備。使用本發明的檢測板檢測甲基苯丙胺，整個測試可在3-5min鍾內完成，檢測的靈敏度可達250-300ng，與60種常見藥物、毒品(尤其是麻黃鹼或偽麻黃鹼)沒有交叉反應。檢測方法與結果判定平放檢測板，將試樣滴在濾樣紙上，適量試樣(通常約120wl)，35min內觀察層析結果。根據出現的條紋位置來判斷結果，示意圖見圖9。陰性質控區、檢測區均出現明顯的色帶，示為陰性；陽性只在質控區出現明顯色帶，而在檢測區無色帶，示為陽性；無效質控區、檢測區無任何色帶或在質控區未出現色帶而在檢測區出現色帶，表明檢測方法錯誤或檢測板變質或失效，應重新換取檢測板檢測。如果檢測線較淺於質控線說明被測者吸食過此毒品但已代謝到末尾或用量較小，所以質控線也是檢測板判別吸毒狀況的標準。吸毒閾值設定用本發明的膠體金標記後的甲基苯丙胺單克隆抗體和完全抗原製備的檢測板，甲基苯丙胺的最低檢測量可達到250-300ng/mL。考慮到某些正常使用的藥物中也含有甲基苯丙胺成分，實際工作中為避免假陽性的出現，參照國際通行的濃度值，設定檢測板的閾值以1000ng/mL為好。調節試劑條上預包被的膠體金標記的MA-CH1單抗溶液、完全抗原的量，使得檢測板對甲基苯丙胺的最低檢測量為1000ng/ml。當尿液中的甲基苯丙胺濃度^2-Methamphtamine)。實施例2甲基苯丙胺-血藍蛋白(KLH)以及甲基苯丙胺-牛血清白蛋白(BSA)完全抗原的製備將對氨基-甲基苯丙胺(p-NH2-Methamphtamine)與血藍蛋白(KLH)或牛血清白蛋白(BSA)在EDC的作用下進行偶聯。稱取100mg對氨基一甲基苯丙胺，在攪拌下溶解於10ml雙蒸水中，然後緩慢加入400mg的EDC，邊加邊搖，用0.1M鹽酸將pH值調節至4.5，在室溫下(2025。C)繼續反應10分鐘。取100mg血藍蛋白(KLH)或牛血清白蛋白(BSA)溶於5ml雙蒸水中，加入到對氨基一甲基苯丙胺溶液中，室溫下(2025'C)繼續反應2-4小時。反應產物對0.01M磷酸鹽緩衝液^C進行透析。除去未反應的對氨基一甲基苯丙胺和EDC，更換緩衝液34次。獲得的反應產物即為甲基苯丙胺-KLH或甲基苯丙胺-BSA完全抗原。實施例3甲基苯丙胺單克隆抗體MA-KLH-CH1的製備及性質測定3.1Balb/C小鼠免疫操作3丄1試劑配製先將抗原與CPG佐劑乳化，把完全抗原甲基苯丙胺-KLH用PBS配製成lmg/mL的溶液，然後將完全抗原溶液與CPG佐劑等體積混合，用高速震蕩器震蕩形成均勻乳濁液，將此乳濁液用於動物的免疫。3.1.2小鼠免疫選擇8周齡的小鼠進行注射免疫。取8周齡的健康Balb/C小鼠12隻，在第O天，每隻腹腔注射CPG佐劑乳化抗原100uL。第14天，每隻小鼠腹腔再注射CPG佐劑乳化抗原100uL。第21天，以摘小鼠眼球法採血，用ELISA方法檢測血清中抗體效價(滴度)。第28天，再次腹腔注射CPG佐劑加甲基苯丙胺抗原100uL。在細胞融合反應前一周，用100ug/100uL抗原生理鹽水再次加強免疫。採血後經測定，所得抗血清效價在l:16000。3.2細胞融合操作3.2.1HAT培養基貯存液的製備3.2.1.110mM次黃嘌呤一16mM胸腺嘧啶核苷(100xHT)貯存液稱取次黃嘌呤136.1mg和胸腺嘧啶核苷38.8mg，溶於100mL506(TC的雙蒸水中；微孔濾膜過濾後按需要量分裝，一2(TC保存。3.2.1.24x10—5M氨基喋呤(100xA)貯存液稱取氨基喋呤1.76mg加入90mL雙蒸水，滴力PlNNaOH至氨基喋呤溶解。然後用lNHCl調節pH二7.5;用雙蒸水定容至100mL;過濾滅菌；分裝並避光於一2(TC保存。3.2.2培養液的製備3.2.2.1完全培養基DMEM(改良的Eagle，s培養基)或RPMI-1640培養基450mL;lOOmM丙酮酸鈉5mL;青-鏈黴素溶液(青黴素500IU/ml，鏈黴素5mg/mL)5mL;200mML-穀氨醯胺5mL;滅活的胎牛血清50mL，4。C保存。3.2.2.2HT培養基的製備每100mL完全培養基中，加入lmL100xHT貯存液即成。3.2.2.3HAT培養基的製備每100mL完全培養基中各加入lmLHT貯存液和lmLA貯存液(均為100xA)即成。3.2.350。/(w/v)PEG的配製將固體PEG(MW1500或4000)高壓滅菌，PEG即融化，冷卻至50。C(在此溫度下仍為液體)。加入等體積無血清的DMEM或RPMI-1640培養基。-20。C貯存。3.2.4細胞懸液的製備3.2.4.1小鼠脾細胞將免疫好的小鼠引頸處死，70%酒精消毒皮膚後，無菌條件取出脾臟，移到盛有5ml無血清RPMI-1640的培養皿中。將脾臟無菌研磨成單細胞懸液，將細胞吸至一無菌管中，靜置使組織塊沉降。將無團塊的脾細胞懸液吸入另一試管，800rpm/min離心5min。用無血清RPMI-1640培養基洗滌細胞2次。用Tris-NH4Cl裂解紅細胞。計算每mL懸液中的有核細胞數。每隻小鼠的脾臟可得108淋巴細胞。3.2.4.2小鼠腹腔巨噬細胞處死小鼠，消毒皮膚，向腹腔內注入DMEM完全培養基2-3mL，輕壓腹部使細胞混懸。提起腹膜中心，插入注射器針頭，吸出全部細胞懸液。3000rpm/min離心5min，用DMEM洗滌2次，再離心後計數。一隻小鼠可獲得3xl(^個細胞。用加有10%胎牛血清和抗生素的培養基製成1S/mL的細胞懸液。3.3融合步驟3.3.1準備將融合用器材全部滅菌，將胎牛血清、HT和A貯存液化凍，連同其它培養基成分和PEG溶液置於37。C水浴中預熱。3.3.2檢査選擇處於對數生長期的SP2/0小鼠骨髓瘤細胞進行融合。計數(密度範圍應在lS/ml)，通過臺盼藍染色計數，檢查細胞活力(應高於95。/。)後，懸浮於RPMI或DMEM培養基中。3.3.3操作將用RPMI-1640洗滌過的小鼠脾細胞和骨髓瘤細胞按5:l的比例混合，用10S脾細胞和2xlC^骨髓瘤細胞。1000rpm/min離心5min，吸盡上清液。輕彈離心管使細胞沉澱鬆散，lmin內邊搖蕩邊逐滴加入1.5mL的50。/。PEG4000溶液。用吸管將細胞懸液小心地混勻，隨後靜置lmin。然後，在2min內，邊輕搖試管邊緩慢滴加10mL無血清RPMI-1640培養基。靜置放置約3min，800rpm/min離心10min，棄上清液。用含HAT和20。/。胎牛血清的RPMI1640將細胞配成100mL懸液，將細胞均勻鋪10塊96孔培養板(預先加入腹腔巨噬細胞作飼養層)，將培養板置於37X:、5。/。C02的培養箱內培養。3.4融合細胞的選擇性培養3.4.1檢查細胞融合操作23天後檢查細胞融合情況，此時未融合細胞大量死亡，唯有融合細胞才能成活。3.4.2操作710天後加HT+完全培養基，每孔加入lmL。在814天間，就可以看到雜交細胞的克隆。當克隆約長到lmm直徑時，即可檢查孔中培養基的抗體含量。從培養孔取出lmL測定抗體，用甲基苯丙胺-BSA包被的酶聯板(ELISA法)來篩選出抗甲基苯丙胺的雜交瘤細胞。將選出的陽性孔中的細胞移至24孔培養板中培養，並進行排除交叉免疫反應的檢測工作，以進一步篩選陽性克隆。3.5雜交瘤克隆化(有限稀釋法)3.5.1操作於克隆前1天向96孔培養板中加入巨噬細胞飼養層，每孔加入0.1ml,在37X:C02培養箱中溫育。從陽性培養孔中吸取欲克隆的細胞，計數一次克隆化約需IOOO個細胞。多餘的細胞放回24孔板中。用完全培養基稀釋細胞成30個/mL，加入兩塊96孔板中，每孔加O.lmL(孔內已預加詞養層)，將剩下的細胞再度稀釋成10個/mL，然後再取兩塊鋪了飼養層的96孔板，每孔中加入O.lmL。再製備3個/mL的細胞懸液，加到另外兩塊板上。3.5.2培養將培養板置371CC02培養箱中培育，2—3周可出現可見單細胞集落形成。繼續培養，待培養板孔內液體顏色變為橙色。檢測上清液的抗體活性，選出陽性孔，再進行擴大培養和再克隆。3.5.3篩選吸取孔中液體，再以甲基苯丙胺-BSA包被的ELISA法酶標板來篩選出抗甲基苯丙胺的特異性雜交瘤細胞。經五次克隆後，得到一株能分泌專一性抗體的抗甲基苯丙胺單克隆細胞，命名為MA—KLH—CH1(即CCTCCNO.C200914),用於製備膠體金標記甲基苯丙胺單抗免疫試劑盒。3.6雜交瘤擴大培養當需要大量抗體時，釆用Balb/C小鼠腹水生產單克隆抗體蛋白。將約106一107個雜交瘤細胞接種到致敏的小鼠腹腔內。2—4周內可見腹部明顯脹大。抽取腹水離心，加0.02%的疊氮鈉，4"C或一2(TC冰箱保存。3.7抗體的純化(Sepharose-G蛋白親和層析法)3.7.1準備取lgCL—4BSepharose-蛋白G，懸浮於200mL的磷酸緩衝溶液(pH二8.0)中，至少吸脹30min。取約4mL裝柱，先後用pH二8.0的磷酸緩衝液100mL和pH二3的0.1M檸檬酸鈉100mL洗柱，然後用前一種緩衝液重新平衡。腹水或培養上清液對pH二8的磷酸緩衝液透析(先用飽和硫酸胺沉澱後，再透析效果更好)平衡。3.7.2上柱每mL膠可與20—25mg的IgG結合，控制過柱流速為0.5—lml/min。用5mL的10mM磷酸緩衝液(pH二8)洗柱，監測流出液的A280nm，按0.5ml級分收集流出液。開始幾管應該是沒有蛋白的，如果是強陽性，抗體就沒有與蛋白A結合；如果是弱陽性，可能是上樣過多了。再用上述緩衝液(不少於5mL)洗柱，大多數IgA、IgM、IgG3將在這一級分內流出。用5mL的0.1M檸檬酸鈉(pH二6)洗脫IgGl抗體。用5mL的0.1M檸檬酸鈉緩衝液(pt^4.5)洗脫IgG2a。用pH:3.5的同類緩衝液洗脫IgG2b。3.8抗體的測定3.8.1融合效率分析通過CFSE綠色螢光預標記淋巴細胞和抗小鼠B220PE標記的單克隆抗體預標記SP2/0細胞後融合，並經流式細胞儀測定分析雙螢光細胞比例測定，本實驗體系中脾細胞和SP2/0的最初融合效率約為35。/。。ELISA法測定陽性率為14.2%。3.9抗甲基苯丙胺單克隆抗體MA-CH1的鑑定3.9.1抗體的純化及型別測定將腹水先經飽和硫酸銨沉澱法粗提出IgG，再將粗提的抗體經親和層析柱(ProteinG-Sephrose)純化，經SDS-PAGE電泳後，考馬斯亮藍染色(見圖3)。3.9.2抗體經特異性抗體分型試劑盒以單克隆抗體分型試劑盒(Monoclonalantibodyisotypingkit,PIERCE)鑑定定後確定為IgGl型,K亞型。實施例4甲基苯丙胺單克隆抗體MA-BSA-CH1的製備製備方法同實施例3，所不同是採用了BSA作為載體蛋白。經檢測所得MA-BSA-CH1能與甲基苯丙胺特異性結合。實施例5抗體的效價測定抗血清的滴度測定將甲基苯丙胺-BSA包被的酶聯板用於測定此抗血清的滴度，包被抗原10ug/ml稀釋於pH9.6的0.05M碳酸鹽緩衝液中，100ul/孔加入到96-孔酶標板於4。C過夜。棄去包被液後用1。/。明膠/PBS在37。C封閉2小時，然後用PBS-Tween-20洗液洗板3遍，再加入稀釋後的甲基苯丙胺抗血清或單抗(MA-CH1)，置於37。C孵育1小時。用PBS-Tween-20洗液洗板3遍，加入1:2000的辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG多抗，37。C孵育l小時後用PBS-Tween-20洗液洗板3遍，加TMB/H2O2底物進行顯色10min，並用終止液(0.1N硫酸)終止顯色。在450nm光波長下測定吸收值(OD)，與空白對照孔的OD均值比較，採用計量資料的t檢驗，取P〈0.05的最低稀釋度作為此抗體的效價。經比色測定，所得甲基苯丙胺抗血清的效價為1:16000(見圖4)。甲基苯丙胺單克隆抗體滴度的測定按照上述方法測定抗體的滴度，MA-CH1單抗的效價為1:8000(見圖5)。實施例6單克隆抗體特異性的測定甲基苯丙胺單克隆抗體MA-BSA-CH1與BSA交叉反應的測定由於在製備膠體金快速試劑盒的過程中,所用的完全抗原是甲基苯丙胺-BSA，因此，如果單克隆抗體與BSA有交叉反應，將會導致嚴重的假陰性結果。所以，要確定甲基苯丙胺單克隆抗體MA-CH1與BSA沒有任何的交叉反應。分別用完全抗原甲基苯丙胺-BSA和BSA包被酶標板，以1:2000稀釋的甲基苯丙胺單克隆抗體MA-CH1與之結合，進行酶聯反應檢測，結果顯示甲基苯丙胺單克隆抗體MA-CHl可以檢測到50ng的甲基苯丙胺-BSA，而且與BSA沒有任何交叉反應。(見圖6)單克隆抗體與選用的60種毒品和藥品的交叉反應選用了如下60種毒品或藥品與單克隆抗體MA-KLH-CH1進行反應甲基苯丙胺，麻黃鹼、偽麻黃鹼、苯丙胺，MDMA，MDA，嗎啡，可待因，海洛因，福爾可定，二氫埃託菲，雷米替丁、哌替啶，芬太尼，曲馬多，右丙氧芬，納洛酮，納曲酮，烯丙嗎啡，可樂寧，洛非西丁，東莨菪鹼，益安口服液，正通寧片，撲熱息痛，阿斯匹林，布洛芬，阿米替林，丙米嗪，氯丙嗪，異丙嗪，水合氯醛，安定，三唑侖，阿普唑侖，巴比妥，速可眠，異戊巴比妥，咖啡因，氟哌酸，先鋒IV，黃連素，乳糖，普魯卡因，康復新膠囊，水合氯醛，奧復沙星，非那西丁，去痛片，氯胺酮，美沙酮，美沙酚，度冷丁，古柯鹼，蒂巴因，利多卡因，那可丁，丁丙諾啡，苯丙醇胺和苯乙胺。用上述60種檢測物質包被的酶標板與MA-KLH-CH1抗體反應進行ELISA測定，結果確定此抗體僅與甲基苯丙胺和MDMA發生免疫結合反應，而與上述其它毒品或藥品沒有交叉反應。實施例7膠體金標記甲基苯丙胺單克隆抗體免疫試劑盒的製備7.1膠體金(GoldColloidal)標記抗甲基苯丙胺的單抗7丄l膠體金(GoldColloidal)顆粒製備採用檸檬酸三鈉還原法製備。取247.5mL去離子水煮沸，溶解2.5mL的1%氯金酸溶液，90。C保溫2min，加入7.5mL的1。/。檸檬酸三鈉水溶液，繼續煮沸5min，冷卻至室溫後，採用分光光度計檢測顆粒均勻度及粒度大小，最大吸收峰在521nm，膠體金大小為30nm左右。7丄2膠體金一單抗結合物製備取上述膠體金IOOmL，緩慢滴加10mL的BB(硼酸緩衝液)，滴加完畢後在磁力快速攪拌下分別迅速加入l-2mg抗甲基苯丙胺抗體，繼續攪拌15min。分別加入2mL的10%的牛血清蛋白，再攪拌15min後，用高速離心機分別將其在12000rpm/min，4。C下離心30min,吸去上清液，用含少量穩定劑的BB緩衝液懸浮沉澱汲取保存。也可用蛋白濃縮儀洗去多餘抗體並將其體積濃縮。7.2膠體金一單抗結合物玻璃纖維條製備用含有表面活性劑和穩定劑的緩衝液將膠體金-單抗結合物稀釋至一定濃度後，均勻地塗在玻璃纖維素紙上，真空乾燥。7.3檢測線和質控線配製0.5lmg/mL濃度的甲基苯丙胺-BSA完全抗原和0.81.2mg/mL濃度的羊抗鼠IgG多抗，同時噴上在硝酸纖維膜上分別為檢測線和質控線，並至室溫乾燥。7.4測試條組裝將吸水紙放在貼板的下方凹槽中，然後將一段膜放在其上方。將膠板另一側的紙片撕開，依著貼板尺的邊緣將膠體金紙條貼在膜的上面，再將濾樣紙覆蓋在膠體金紙條上。將"MAX"箭頭膠帶貼在膠體金紙條與膜的結合部位，將膠體金紙條完全蓋住、壓緊，再將覆蓋膠帶貼在吸水紙一側，將吸水紙與膜的結合部完全蓋住、壓緊，將多餘的覆蓋膠帶用刀划去。用切刀切裁相應規格的試紙條，將試紙條裝入塑料卡中並用鋁箔袋封裝。試劑盒中試條組成示意圖(見圖7)。7.5試劑盒的組成本品系由完全抗原和SPA或羊抗鼠IgG分別固化在硝酸纖維素膜上，層析材料(載體)預包被膠體金標記抗甲基苯丙胺單抗，分別與濾樣紙、吸水紙、膠帶等材料貼在PVC聚脂膠板上，共同組裝成甲基苯丙胺免疫試劑盒，(見圖8)。7.6檢測原理與過程7.6.1檢測原理本試劑盒應用免疫競爭法原理，即尿液中的甲基苯丙胺與固相於硝酸纖維膜上的甲基苯丙胺競爭結合膠體金標記的抗甲基苯丙胺單抗，通過觀察窗檢測區有無色帶來判別測定結果。7.6.2檢測過程7.6.2.1在硝酸纖維膜的檢測區和質控區分別包被完全抗原和羊抗鼠IgG多抗，在層析載體玻璃纖維上包被膠體金標記的抗甲基苯丙胺單抗。當尿液中的甲基苯丙胺濃度〈1000ng/mL，膠體金標記抗甲基苯丙胺單抗通過層析作用，向上移動，與固相於硝酸纖維素膜上的完全抗原相結合，形成兩條色帶，此時檢測結果為陰性。當尿液中的甲基苯丙胺濃度〉1000ng/mL，膠體金標記的抗甲基苯丙胺單抗完全與尿液中的甲基苯丙胺相結合，不能與固相於硝酸纖維素膜上檢測區的完全抗原相結合，檢測區不能形成色帶，此時檢測結果為陽性。7.6.2.2無論尿液中是否含有甲基苯丙胺，膠體金標記的甲基苯丙胺單抗總能與固相於硝酸纖維素膜上的羊抗鼠IgG多抗結合形成一條有色質控帶，該條色帶是判定尿樣是否陽性和陰性、層析過程是否正常和試劑盒是否變質的標準。7.6.2.3如果檢測線較淺於質控線說明被測者吸食過此毒品但已代謝到末尾或用量較小，所以檢測線也是試劑盒判別吸毒狀況的標準。實施例8膠體金標記甲基苯丙胺單抗免疫試劑盒的靈敏度測試試劑配製根據測試要求，在空白尿樣中添加甲基苯丙胺，分別配製成含甲基苯丙胺濃度為1.00ng/mL、2.00ng/mL、3.00ng/mL、4.00ng/mL、5.00ng/mL、10.00ng/mL、20.00ng/mL、50.00ng/mL、100.00ng/mL、150.00ng/mL、200.00ng/mL、300.00ng/mL、500.00ng/mL、1000.00ng/mL、1500.00ng/mL和2000.00ng/mL的系列試樣。檢測與結果將上述系列濃度作定量梯度點樣，實施例7試劑盒的靈敏度試驗結果(見表1)。表l靈敏度試驗結果tableseeoriginaldocumentpage23注"+"表示陽性；"-"表示陰性。試驗結果表明，進行膠體金標記後的甲基苯丙胺單克隆抗體最低檢測量為300.00ng/mL，考慮到某些正常使用的藥物中也含有甲基苯丙胺成分，實際工作中為避免假陽性的出現，參照國際通行的濃度值將甲基苯丙胺的最低檢測量確定為1000.00ng/mL。實施例9膠體金標記甲基苯丙胺單抗免疫試劑盒的穩定性實驗將實施例7的膠體金標記的甲基苯丙胺單克隆抗體試劑條置於65t:下分別保溫0.5d(天)、ld、1.5d、2d、2.5d、3d、4d、5d，然後按上述靈敏度試驗方法進行1000.00ng/mL的靈敏度測試。上述條件下的測試結果見表2。表2穩定性實驗結果tableseeoriginaldocumentpage23實驗結果表明，膠體金標記的甲基苯丙胺單抗在65。C下能夠耐受5天，具有良好的穩定性。實施例io膠體金標記甲基苯丙胺單抗免疫試劑盒的特異性鑑定選用以下60種毒品和藥品與實施例7的試劑盒進行交叉反應測定甲基苯丙胺，麻黃鹼、偽麻黃鹼、苯丙胺，MDMA，MDA，嗎啡，可待因，海洛因，福爾可定，二氫埃託菲，雷米替丁、哌替啶，芬太尼，曲馬多，右丙氧芬，納洛酮，納曲酮，烯丙嗎啡，可樂寧，洛非西丁，東莨菪鹼，益安口服液，正通寧片，撲熱息痛，阿斯匹林，布洛芬，阿米替林，丙米嗪，氯丙嗪，異丙嗪，水合氯醛，安定，三唑侖，阿普唑侖，巴比妥，速可眠，異戊巴比妥，咖啡因，氟哌酸，先鋒IV，黃連素，乳糖，普魯卡因，康復新膠囊，水合氯醛，奧復沙星，非那西丁，去痛片，氯胺酮，美沙酮，美沙酚，度冷丁，古柯鹼，蒂巴因，利多卡因，那可丁，丁丙諾啡，苯丙醇胺和苯乙胺。檢測與結果將上述檢測物質配製成一定濃度的溶液進行檢測，結果表明用單克隆抗體生產的單抗免疫板僅與甲基苯丙胺及其衍生物MDMA發生免疫結合反應，而與上述其他毒品和藥品沒有交叉反應。結果表明製備的膠體金標記甲基苯丙胺單抗免疫試劑盒性能良好，專一性強。測試結果(見表3)。表3檢測板的特異性反應測試結果tableseeoriginaldocumentpage24tableseeoriginaldocumentpage25tableseeoriginaldocumentpage26實施例ll試劑盒與GC/MS檢測結果的比較以本發明實施例7中製得的試劑盒與GC/MS對相同的樣品進行測試，並比較兩者結果(見表4)。表4實施例7試劑盒與GC/MS檢測結果的比較tableseeoriginaldocumentpage26本實施例設定的閾值為1000.00ng/ml，試劑盒的敏感度為99.4%，準確度為99.8%，採用GC/MS檢測覆核，結果一致。實施例12試劑盒使用方法和結果判定從密封袋中取出試劑盒，標明被檢樣品或對照樣品。平放試劑盒，在點樣孔內滴入三滴試樣(約120uL)，35min內觀察層析結果。結果判定(1)陰性質控區(C)、檢測區(T)均出現明顯的色帶，即在觀察窗處出現兩條線，為陰性。(2)陽性只在質控區(C)出現明顯色帶，而在檢測區(T)無色帶，示為陽性。(3)無效質控區(C)、檢測區(T)無任何色帶或在質控區(C)未出現色帶而在檢測區(T)出現色帶，表明檢測方法錯誤或試劑盒變質或失效，應重新換取試劑盒檢測。檢測結果示意圖見圖9。在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之後，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本申請所附權利要求書所限定的範圍。權利要求1.一種半抗原，其特徵在於，所述半抗原具有式1所示的結構式1。2.—種完全抗原，其特徵在於，所述完全抗原具有式2所示的結構:imageseeoriginaldocumentpage2其中，x為蛋白質載體。3.—種製備式2所述的完全抗原的方法，其特徵在於，所述方法包括步驟(a)對甲基苯丙胺進行硝化，在其對位接入硝基基團，以形成對硝基-甲基苯丙胺；(b)將對硝基-甲基苯丙胺中的硝基還原為氨基，以製得對氨基-甲基苯丙胺；(c)將對氨基-甲基苯丙胺與蛋白質載體連接，以製得式2所示的完全抗原。4.一種權利要求1所述的半抗原或權利要求2所述的完全抗原的用途，其特徵在於，用於製備甲基苯丙胺特異性單克隆抗體。5.—種單克隆抗體，其特徵在於，它特異性結合於甲基苯丙胺。6.—種產生權利要求5所述的單克隆抗體的雜交瘤細胞系，其特徵在於，它是小鼠雜交瘤細胞系CCTCCNO.C200914。7.—種權利要求5所述的單克隆抗體的用途，其特徵在於，用於製備檢測樣品中甲基苯丙胺的試劑、檢測板或試劑盒。8.—種檢測生物樣品中是否存在甲基苯丙胺的方法，其特徵在於，包括步驟(a)將樣品與權利要求5所述的單克隆抗體接觸；(b)檢測是否形成抗原-抗體複合物，其中形成複合物就表示樣品中存在甲基苯丙胺。9.一種檢測板，其特徵在於，所述的檢測板包括基片(支撐板)和測試條，所述的測試條含有權利要求5所述的單克隆抗體。10.—種試劑盒，其特徵在於，所述的試劑盒含有容器以及位於容器內的權利要求5所述的單克隆抗體，或者所述的試劑盒含有權利要求9所述的檢測板和使用說明書。全文摘要本發明公開了用於甲基苯丙胺檢測及抗體製備的半抗原、完全抗原。本發明還公開了用該完全抗原製備的抗甲基苯丙胺單克隆抗體，以及膠體金標記甲基苯丙胺單抗免疫檢測板，以用於檢測藥品或尿樣等人體標本中的甲基苯丙胺。與HPLC等色譜方法相比，本發明的檢測板簡單、輕便，易於攜帶，可以現場檢測，而且不需要昂貴的設備。使用本發明的檢測板檢測甲基苯丙胺，整個測試可在3-5min內完成，檢測的靈敏度可達300ng，且與60種常見藥物、毒品，尤其是麻黃鹼和偽麻黃鹼，沒有交叉反應。文檔編號G01N33/577GK101597233SQ20091013501公開日2009年12月9日申請日期2009年4月15日優先權日2008年4月15日發明者曾立波申請人:曾立波;陳連康;胡小龍;張玉榮