一種點花黃精組織培養的快速繁殖方法
2023-05-16 09:24:06 1
一種點花黃精組織培養的快速繁殖方法
【專利摘要】本發明研究了一種點花黃精組織培養的快速繁殖方法，包括種子的消毒、無菌苗的獲得、芽的誘導、生根誘導等步驟。本發明方法為保護野生資源，滿足人們的需求，本發明對點花黃精的組織培養及無性系的建立展開了探索，確立了無菌苗的培育、腋芽誘導、生根的理想培養條件，最終成功建立了點花黃精植株的無性再生系，為實現對點花黃精野生資源的保護、栽培，對種苗的需求以及基因庫的建立奠定了技術基礎。
【專利說明】一種點花黃精組織培養的快速繁殖方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及點花黃精的組織培養，屬於生物【技術領域】。
【背景技術】
[0002]點花黃精，--?百合科，分布在印度、越南、不丹、錫金、尼泊爾以及中國大陸的廣東、雲南、貴州、四川、西藏、廣西等地，根狀莖呈連珠狀，直徑1-1.5釐米，密生肉質鬚根，莖高30-70釐米，通常具紫紅色斑點，有時上部生乳頭狀突起，葉互生，有時二葉可較接近，幼時稍肉質而橫脈不顯，老時厚紙質或近革質而橫脈較顯，常有光澤，卵形、卵狀矩圓形至矩圓狀披針形，長6-14釐米，寬1.5-5釐米，先端尖至漸尖，具短柄，花序具2-6花，常呈總狀，總花梗長5-12毫米，上舉而花後平展，花梗長2-10毫米，苞片早落或不存在，花被白色，全長7-9毫米，花被筒在口部稍縊縮而略呈壇狀，裂片長1.5-2毫米，花絲長0.5-1暈米,花葯長1.5-2暈米,子房長2-2.5暈米,花柱長1.5-2.5暈米,柱頭稍膨大，漿果紅色，直徑約7毫米，具8-10餘顆種子，花期4-6月，果期9-11月。點花黃精是一種藥用植物，性味辛，平，清熱解毒，外用於腫毒，疔瘡，生長於海拔1100米至2700米的地區，多生在巖石上、林下和附生樹上，尚未由人工弓I種栽培。
【發明內容】
[0003]本發明所要解決的技術問題是點花黃精組織培養的方法，本發明方法為保護野生資源，滿足人們的需求，本研究對點花黃精的組織培養及無性系的建立展開了探索，確立了無菌苗的培育、腋芽誘導、生根的理想培養條件，最終成功建立了點花黃精植株的無性再生系，為實現對點花黃精野生資源的保護、栽培，對種苗的需求以及基因庫的建立奠定了技術基礎。
[0004]為解決上述技術問題，本發明採用下列技術方案:
將點花黃精的種子放入500ml磨口廣口瓶中，先用自來水反覆震蕩洗滌15min，在超淨工作檯上先用75%乙醇震蕩滅菌2min，之後迅速用無菌水洗滌3次，再用0.05%的升汞溶液反覆震蕩滅菌lOmin，最後用無菌水洗滌5次，消毒處理過的點花黃精的種子接種到Zff+3.0mg/L6-BA+l.0mg/LNAA的培養基中進行無菌苗的培育，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，培養溫度2 5 ± 2 °C，光照強度3 5001X，光照時間12 h / d，誘導出來的無菌苗切去根部接入1/2MS+0.2-0.3mg/L6-BA+l.0-1.5mg/LNAA培養基中進行腋芽的誘導和繼代，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照30001x，光期12h/d，溫度25±2°C，將培養室培養的點花黃精拿到薄膜大棚中煉苗3天，打開瓶蓋，取出試管苗，洗淨培養基，種植於泥炭土:珍珠巖:椰糠=1:1:1的基質中，將基質置於塑料網篩中，每網篩中30株，網篩置於蔭棚中，加蓋塑料薄膜，蔭棚溫度25 °C，相對溼度90%。
[0005]採用本發明製備的點花黃精生根率高，利用率大，利於大規模種植。
[0006]下面將結合【具體實施方式】對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的範圍並不局限於下列實施方式。
【具體實施方式】
[0007]實施例1
將點花黃精的種子放入500ml磨口廣口瓶中，先用自來水反覆震蕩洗滌15min，在超淨工作檯上先用75%乙醇震蕩滅菌2min，之後迅速用無菌水洗滌3次，再用0.05%的升汞溶液反覆震蕩滅菌lOmin，最後用無菌水洗滌5次，消毒處理過的點花黃精的種子接種到Zff+3.0mg/L6-BA+l.0mg/LNAA的培養基中進行無菌苗的培育，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，培養溫度25±2°C，光照強度35001x，光照時間12h/d，誘導出來的無菌苗切去根部接入1/2MS+0.2mg/L6-BA+l.0mg/LNAA培養基中進行腋芽的誘導和繼代，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照30001x，光期12h/d，溫度25±2°C，將培養室培養的點花黃精拿到薄膜大棚中煉苗3天，打開瓶蓋，取出試管苗，洗淨培養基，種植於泥炭土:珍珠巖:椰糠=1:1:1的基質中，將基質置於塑料網篩中，每網篩中30株，網篩置於蔭棚中，加蓋塑料薄膜，蔭棚溫度25 °C，相對溼度90%，成活率89%。
[0008]實施例2
將點花黃精的種子放入500ml磨口廣口瓶中，先用自來水反覆震蕩洗滌15min，在超淨工作檯上先用75%乙醇震蕩滅菌2min，之後迅速用無菌水洗滌3次，再用0.05%的升汞溶液反覆震蕩滅菌lOmin，最後用無菌水洗滌5次，消毒處理過的點花黃精的種子接種到Zff+3.0mg/L6-BA+l.0mg/LNAA的培養基中進行無菌苗的培育，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，培養溫度25±2°C，光照強度35001x，光照時間12h/d，誘導出來的無菌苗切去根部接入1/2MS+0.3mg/L6-BA+l.5mg/LNAA培養基中進行腋芽的誘導和繼代，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照30001x，光期12h/d，溫度25±2°C，將培養室培養的點花黃精拿到薄膜大棚中煉苗3天，打開瓶蓋，取出試管苗，洗淨培養基，種植於泥炭土:珍珠巖:椰糠=1:1:1的基質中，將基質置於塑料網篩中，每網篩中30株，網篩置於蔭棚中，加蓋塑料薄膜，蔭棚溫度25 °C，相對溼度90%，成活率90%。
[0009]實施例3
將點花黃精的種子放入500ml磨口廣口瓶中，先用自來水反覆震蕩洗滌15min，在超淨工作檯上先用75%乙醇震蕩滅菌2min，之後迅速用無菌水洗滌3次，再用0.05%的升汞溶液反覆震蕩滅菌lOmin，最後用無菌水洗滌5次，消毒處理過的點花黃精的種子接種到Zff+3.0mg/L6-BA+l.0mg/LNAA的培養基中進行無菌苗的培育，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，培養溫度25±2°C，光照強度35001x，光照時間12h/d，誘導出來的無菌苗切去根部接入1/2MS+0.3mg/L6-BA+l.0mg/LNAA培養基中進行腋芽的誘導和繼代，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照30001x，光期12h/d，溫度25±2°C，將培養室培養的點花黃精拿到薄膜大棚中煉苗3天，打開瓶蓋，取出試管苗，洗淨培養基，種植於泥炭土:珍珠巖:椰糠=1:1:1的基質中，將基質置於塑料網篩中，每網篩中30株，網篩置於蔭棚中，加蓋塑料薄膜，蔭棚溫度25 °C，相對溼度90%，成活率91%。
【權利要求】
1.一種點花黃精組織培養的快速繁殖方法，包括種子的消毒、無菌苗的獲得、芽的誘導、生根誘導，其主要步驟如下: (1)取點花黃精的種子，進行消毒處理； (2)將步驟(I)消毒處理過的點花黃精的種子接種到ZW+3.0mg/L6-BA+l.0mg/LNAA的培養基中進行無菌苗的培育，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，培養溫度25±2°C，光照強度35001x，光照時間 12h/d ； (3)取步驟(2)誘導出來的無菌苗切去根部接入1/2MS+0.2-0.3mg/L6-BA+l.0-1.5mg/LNAA培養基中進行腋芽的誘導和繼代，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照30001x，光期 12h/d，溫度 25±2°C ； (4)將步驟(3)培養出來的叢生芽進行生根誘導。
2.按照權利要求1所述的一種點花黃精組織培養的快速繁殖方法，其特徵在於:步驟(O中所述點花黃精無菌種子的獲得為將點花黃精的種子放入500ml磨口廣口瓶中，先用自來水反覆震蕩洗滌15min，在超淨工作檯上先用75%乙醇震蕩滅菌2min，之後迅速用無菌水洗滌3次，再用0.05%的升汞溶液反覆震蕩滅菌lOmin，最後用無菌水洗滌5次。
3.按照權利要求1所述的一種點花黃精組織培養的快速繁殖方法，其特徵在於:步驟(4)中所述點花黃精生根誘導的方法為將培養室培養的點花黃精拿到薄膜大棚中煉苗3天，打開瓶蓋，取出試管苗，洗淨培養基，種植於泥炭土:珍珠巖:椰糠=1:1:1的基質中，將基質置於塑料網篩中，每網篩中30株，網篩置於蔭棚中，加蓋塑料薄膜，蔭棚溫度25°C，相對溼度90%。
【文檔編號】A01H4/00GK104304017SQ201410550616
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年10月17日 優先權日:2014年10月17日
【發明者】劉東鋒, 楊成東 申請人:南京帝道農業科技有限公司