抗-cd100抗體和其使用方法

2023-05-16 19:03:36 2

專利名稱：抗-cd100抗體和其使用方法
技術領域：
本發明涉及CD100中和抗體，如人源化單克隆抗體，所述抗體的使用方法，和治療 CD100表達細胞相關病症和疾病的方法。發明概述提供治療CD100相關疾病的組合物和方法，包括某些類型的自身免疫病、炎性疾病、癌症和侵襲性血管新生。具體說，已經開發了抗-CD100單克隆抗體來中和CD100。小鼠MAb67在體外顯示出阻斷CD100活性的能力，並在小鼠模型中減輕實驗性變應性腦脊髓炎(EAE)、膠原誘導性關節炎(CIA)和癌症的臨床徵象的嚴重性。MAb 2503是人源化的MAb 67，已證明它與人和鼠⑶100的親和力提高，並且與MAb 67具有相似的⑶100阻斷活性。在一個實施方式中，本發明提供分離的結合分子，其與選自2503、67或76的參比單克隆抗體相同的CD100表位特異性結合。在另一實施方式中，本發明提供特異性結合CD100的分離的結合分子，所述結合分子競爭性抑制選自2503、67或76的參比單克隆抗體特異性結合CD100。在另一實施方式中，本發明提供特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，所述抗體或其片段是單克隆抗體2503、67或76。在某些實施方式中，本發明所述特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區(VH)，該重鏈可變區的胺基酸序列與SEQ ID N0:9、SEQ ID NO :10或SEQ ID NO :25至少90%相同。在本發明的另一方面，所述抗體或其片段的VH包含除20個或更少保守性胺基酸取代外，與SEQ IDNO :9、SEQ ID NO 10或SEQ ID NO 25相同的胺基酸序列。在本發明的另一方面，所述抗體或其片段的VH包含胺基酸序列SEQ ID N0:9、SEQ ID NO :10或SEQ ID N0:25，或由其組成。在某些實施方式中，本發明所述特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段包含輕鏈可變區(VL)，該輕鏈可變區的胺基酸序列與SEQ ID N0:17、SEQ ID NO :18或 SEQ ID NO : 至少90%相同。在本發明的另一方面，所述抗體或其片段的VL包含除20個或更少保守性胺基酸取代外，與SEQ IDNO 17,SEQ ID N0:18或SEQ ID NO : 相同的胺基酸序列。在本發明的另一方面，所述抗體或其片段的VL包含胺基酸序列SEQ ID NO 17,SEQ
12ID NO :18 或 SEQ ID N0:29，或由其組成。在另一實施方式中，本發明提供特異性結合CDlOO的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的VH包含以下CDR中至少一個除2個或更少胺基酸取代夕卜，與SEQ ID NO 6相同的Chothia-Kabat重鏈互補決定區_1 (VH-CDRl)胺基酸序列；除 4個或更少胺基酸取代外，與SEQ ID NO 7相同的Kabat重鏈互補決定區_2 (VH-⑶R2)胺基酸序列；或者除2個或更少胺基酸取代外，與SEQ ID NO 8相同的Kabat重鏈互補決定區-3(VH-raR;3)胺基酸序列。在另一實施方式中，本發明提供特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的VL包含以下CDR中至少一個除4個或更少胺基酸取代外，與 SEQ ID NO 14相同的Kabat輕鏈互補決定區_1 (VL-⑶Rl)胺基酸序列；除2個或更少胺基酸取代外，與SEQ ID NO 15相同的Kabat輕鏈互補決定區_2 (VL-OTM)胺基酸序列；或者除2個或更少胺基酸取代外，與SEQ ID NO: 16相同的Kabat輕鏈互補決定區-3 (VL-⑶R3) 胺基酸序列。在另一方面，本發明抗體或其片段的VH包含VH-⑶R1、VH_⑶R2和VH-⑶R3胺基酸序列，在一個或多個所述VH-CDR中，除2個或更少胺基酸取代外，它們分別包含SEQ ID NO 6、7和8。另一方面，所述VH-CDRl、VH-CDR2和VH-CDR3胺基酸序列分別是SEQ ID NO :6、7 禾口 8。在另一方面，本發明抗體或其片段的VL包含VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3胺基酸序列，在一個或多個所述VL-CDR中，除2個或更少保守性胺基酸取代外，它們分別包含SEQ ID NO 14,15和16。另一方面，所述VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3胺基酸序列分別是SEQ ID NO 14,15 和 16。在另一實施方式中，本發明提供特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的VH包含以下CDR中至少一個除2個或更少胺基酸取代外，與 SEQ ID NO 26相同的Kabat重鏈互補決定區_1 (VH-⑶Rl)胺基酸序列；除4個或更少胺基酸取代外，與SEQ ID NO 27相同的Kabat重鏈互補決定區_2 (VH-⑶R2)胺基酸序列；或者除2個或更少胺基酸取代外，與SEQ ID NO 28相同的Kabat重鏈互補決定區_3 (VH-⑶R3) 胺基酸序列。在另一實施方式中，本發明提供特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的VL包含以下CDR中至少一個除4個或更少胺基酸取代外，與 SEQ ID NO 30相同的Kabat輕鏈互補決定區_1 (VL-⑶Rl)胺基酸序列；除2個或更少胺基酸取代外，與SEQ ID NO 31相同的Kabat輕鏈互補決定區_2 (VL-OTM)胺基酸序列；或者除2個或更少胺基酸取代外，與SEQ ID NO 32相同的Kabat輕鏈互補決定區_3 (VL-⑶R3) 胺基酸序列。在另一方面，本發明抗體或其片段的VH包含VH-⑶R1、VH_⑶R2和VH-⑶R3胺基酸序列，在一個或多個所述VH-CDR中，除4個或更少胺基酸取代外，它們分別包含SEQ ID NO 26、27和28。另一方面，所述VH-CDRl、VH-CDR2和VH-CDR3胺基酸序列分別是SEQ ID NO 26,27 和 28。在另一方面，本發明抗體或其片段的VL包含VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3胺基酸序列，在一個或多個所述VL-CDR中，除4個或更少胺基酸取代外，它們分別包含SEQ ID NO30、31和32。另一方面，所述VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3胺基酸序列分別是SEQ ID NO 30,31 和 32。在另一方面，本發明抗體或其片段結合人和鼠CD100。在另一方面，本發明抗體或其片段特異性結合CD100多肽或其片段或者CD100變體多肽的親和力特徵是解離常數(Kd) 不大於 5Χ1(Τ2Μ、1(Τ2Μ、5Χ1(Γ3Μ、1(Γ3Μ、5Χ1(Γ4Μ、1(Γ4Μ、5Χ1(Γ5Μ、1(Γ5Μ、5Χ1(Γ6Μ、1(Γ6Μ、5Χ1(ΓΜ、 10_7M,5x10_8MU0_8M,5X10_9MU0_9M,5X10_10MU0_1°M,5X10_11MU0_11M,5X10_12M,5. 7Χ1(Γ12Μ、 8. 4χ1(Γ12Μ、10 Μ、5Χ10 Μ、10 Μ、5Χ1(Γ14Μ、1(ΓμΜ、5Χ1(Γ15Μ 或 10 Μ。在某些方面，所述 CD100多肽或其片段或者CD100變體多肽是人或鼠的。在其它方面，CD100多肽或其片段或者⑶100變體多肽是人的，所述Kd為約切10_1至6x10—^。在另一方面，⑶100多肽或其片段或者⑶100變體多肽是鼠的，所述Kd為約1x10_9M至在另一方面，本發明抗體或其片段是人源化的、靈長化的或嵌合的。在另一實施方式中，本發明提供包含本發明抗體或其片段以及運載體的組合物。在另一實施方式中，本發明提供一種分離的多核苷酸，其包含編碼本發明抗體VH 或VL多肽的核酸。在另一方面，本發明多核苷酸包含編碼本發明抗體或其片段的核酸或者由其組成。另一方面，本發明提供包含本發明多核苷酸的載體。在另一方面，本發明提供包含本發明載體的宿主細胞。在另一方面，本發明提供一種產生本發明抗體的方法。在另一實施方式中，本發明提供一種在需要治療的動物中治療自身免疫病症或炎性疾病的方法，所述方法包括給予所述動物一種組合物，該組合物包含本發明的分離的抗體或其片段和藥學上可接受的運載體。在其它實施方式中，所述自身免疫病或炎性疾病是多發性硬化或關節炎。在另一實施方式中，本發明提供一種在需要治療的動物中治療癌症的方法，所述方法包括給予所述動物一種組合物，該組合物包含本發明的分離的抗體或其片段和藥學上可接受的運載體。在另一實施方式中，本發明提供一種在需要治療癌症的動物中抑制血管新生的方法，所述方法包括給予所述動物一種組合物，該組合物包含本發明的分離的抗體或其片段和藥學上可接受的運載體。另一方面，本發明抗體或其片段抑制⑶100與⑶100受體的結合。在本發明的另一方面，所述⑶100受體是叢蛋白-Bi。附圖簡要說明

圖1.⑶100阻斷實驗圖示。⑶100-組氨酸顯示與表達叢蛋白Bl的穩定細胞系 (四3/叢蛋白)細胞表面上叢蛋白Bl的結合。用生物素偶聯的抗-組氨酸標籤特異性單克隆抗體和鏈黴親和素-APC檢測結合於叢蛋白Bl的CD100-組氨酸。經流式細胞術檢測，能夠阻斷⑶100-組氨酸與叢蛋白Bl結合的抗-⑶IOOMAb產生的與四3/叢蛋白細胞相關的螢光較低。圖2.顯示在圖1所示的⑶100阻斷實驗中檢測兔抗-組氨酸+鏈黴親和素-APC (Rb 抗-組氨酸 +sAPC)、小鼠 CD100 (只有 muCDIOO)、小鼠 CD100+0. 625 μ g/ml MAb (MAb 67、MAb 76 禾口 mlgG 同種型)和小鼠 CD100+0. 156 μ g/ml MAb (MAb 67、MAb 76 禾口 mlgG同種型)的流式細胞分析結果。單克隆抗體67和76阻斷小鼠CD100與叢蛋白Bl受體的結合。
圖3. MAb 67 (67-2)和76 (76-1)的吸光度比同種型對照增加說明，單克隆抗體67 和76阻斷小鼠⑶100介導的四3/叢蛋白B細胞從纖連蛋白包被平板上解離。圖4.臨床評分降低說明，與小鼠IgG對照的治療相比，在SJL小鼠中用30mg/kg 抗-CDlOOMAb 76 (IX/周或2X/周)或MAb 67 (IX/周或2X/周)治療能減輕復發緩解型 EAE(4A)。通過各個MAb治療的小組平均分(GMS)的降低百分數在第21天和研究結束之間的比較，進一步說明該結果GB)。圖5.臨床評分降低說明，與小鼠IgG對照的治療相比，在SJL小鼠中用30mg/kg 抗-⑶IOOMAb 76 (IX/周)或MAb 67 (IX/周)治療能減輕復發緩解型EAE (5A)。通過兩個 MAb治療的小組平均分(GMS)的降低百分數在第18天和研究結束之間，，進一步說明該結果 (5B)。圖6.臨床評分降低說明，與小鼠IgG對照的治療相比，在SJL小鼠中從免疫後第 7天開始用30mg/kg抗-CDlOOMAb 67 (IX/周)治療能減輕復發緩解型EAE。圖7. ELISA結果顯示由於MAb 2503、MAb 67或IgG對照的競爭性結合，生物素化的67與人CD100(7A)或小鼠CD100(7B)結合的阻斷百分數(％ )。圖8.顯示在圖1所示的⑶100阻斷實驗中檢測的鏈黴親和素-APC(只有sAPC)、 人 CD100 (huCDIOO)、狨 CD100 (marmCDIOO)、小鼠 CD100 (muCDIOO)、1. 0 μ g 同種型和 1. 0 μ g MAb (67或2503)的流式細胞分析結果。MAb 67和MAb2503阻斷人CD100 (8A)、狨(8B)或小鼠(8C)⑶100與叢蛋白Bl受體的結合。圖9.顯示由於MAb 67、MAb 2503和IgG對照中和⑶100，⑶100造成吸光度降低被阻斷。抗-CD100 MAb 67和MAb 2503阻斷人CD100 (9A)和狨CD100 (9B)介導的四3/叢蛋白細胞從纖連蛋白包被平板上解離。圖10.顯示將50，000個CD6結腸腫瘤細胞注射入小鼠腿部肌肉後，野生型Balb/ c小鼠和⑶100-/-小鼠的腫瘤體積變化(mm3)。圖11.顯示將50，000個CD6腫瘤細胞注射入小鼠腿部肌肉後，用ImgMAb 67或 Img對照小鼠IgG治療的野生型Balb/c小鼠和⑶100-/-小鼠(「K0")的平均腿體積變化(mm3)。圖12.膠原誘導型關節炎(CIA)總體治療方案的示意圖。圖13.顯示在600 μ g MAb 67治療組中，CIA模型中關節炎疾病發展減緩。600 μ g MAb 67治療小鼠的關節炎指數(Al)與600 μ g陰性對照(IgGl)和600 μ g陽性對照依那西普(Enbrel )治療小鼠的AI在第20天開始治療時的比較(13A)。在第20天或AI彡3時開始治療時，比較MAb 67治療與陰性對照(IgGl)和陽性對照依那西普(Embrel )治療的關節炎指數(Al)結果(13B)。圖14.用鋁(氫氧化鋁/氫氧化鎂)沉澱的(4-羥基-3-硝基苯基)乙醯基偶聯的雞Y球蛋白(「NP-CGG")對Balb/c小鼠進行初次免疫(14A)和二次免疫(14B)後， 600 μ g MAb 67治療降低脾臟(SP)和淋巴結(LN)中生發中心(GC)B細胞(「B220+CD38 低PNA+〃 )的數量。也顯示了使用或不用NP-CGG免疫的⑶100-/-小鼠和Balb/c小鼠的結果。圖15.顯示將50，000個CD6結腸腫瘤細胞注射入小鼠腿部肌肉後，野生型Balb/ c小鼠的腫瘤體積變化(mm3)。顯示從第1天開始每周注射Img MAb 67的小鼠與注射IgG
15對照的小鼠相比的結果。該研究進行至腫瘤生長延遲結束。圖16.顯示將50，000個BCA34成纖維細胞腫瘤細胞皮下注射到小鼠腹部區域後， 野生型BalbA^j、鼠和CDlOO-/-小鼠(〃 SEMA4D-/-")的腫瘤體積變化(mm3) (16A)。顯示將50，000個BCA34成纖維細胞腫瘤細胞注射入小鼠腿部肌肉後，用Img MAb 67或Img 對照小鼠IgG治療的野生型Balb/c小鼠的平均大腿體積變化(mm3) (16B)。圖17.顯示將50，000個EMT6小鼠乳腺癌腫瘤細胞注射入小鼠腿部肌肉後，野生型 BalbAHnI^PCD 100-/-小鼠(「SEMA4D-/-")的腫瘤體積變化(mm3)。圖18.顯示在無胸腺裸小鼠中，向小鼠的脅部肌肉內皮下注射兩個HN12頭頸腫瘤後的腫瘤體積變化(mm3)。顯示從移植後第1天開始每周注射ImgMAb 2503的小鼠與注射 IgG4對照的小鼠相比的結果。圖19.顯示在無胸腺裸小鼠中，向小鼠的腿部肌肉內皮下注射兩個HN6HIFla mODD頭頸腫瘤後的腫瘤體積變化(mm3)。顯示從移植後第1天開始每周注射Img MAb 2503 的小鼠與注射IgG4對照的小鼠相比的結果(19A)。來自IgG4對照和MAb 2503治療的小鼠的代表性腫瘤照片(19B)。圖20.大鼠中進行的MAb2503單次靜脈內注射飽和分析的飽和百分數結果。通過靜脈內單次注射將 0、0. 01,0. 1,1. OUO 和 100mg/kg 劑量 MAb 2503 給予 Sprague-Dawley 大鼠。對雄性(20A)和雌性(20B)大鼠在不同時間點的裂解全血進行基於流式細胞術的飽和實驗，以確定細胞靶點(SEMA4D)被MAb 2503飽和的百分數。圖21.獼猴中進行的MAb2503單次靜脈內注射飽和分析的飽和百分數結果。通過單次靜脈內注射將0、0.01、0. 1、1.0、10和100mg/kg劑量的MAb 2503給予獼猴。在對不同時間點的裂解全血進行基於流式細胞術的飽和實驗，以確定細胞靶點(SEMA4D)被MAb 2503飽和的百分數(雄性和雌性數據合併)。發明詳述I.定義需要注意，術語「一個」或「一種」物質指一種或多種該物質；例如，「一種抗-⑶100 抗體」應理解為代表一種或多種抗-⑶100抗體。例如，術語「一個」(或「一種」)、「一個或多個」和「至少一個」在本文中可以互換使用。本文所用術語「腫瘤」是指無論惡性或良性的所有成瘤性細胞生長和增殖，以及所有的癌和癌前的細胞和組織。「侵襲性血管新生」指支持病理狀況，包括惡性和非惡性腫瘤的血管形成以及黃斑變性中新血管的異常形成。術語「癌症」和「癌」是用於描述哺乳動物的生理病症，其典型特徵是細胞生長失控。癌症的例子包括但不限於癌、淋巴瘤和白血病。本文所用術語「多肽」包括單數形式和複數形式，涵蓋醯胺鍵(也稱肽鍵)線性連接的單體(胺基酸)所組成的分子。術語「多肽」指兩個或多個胺基酸的任何一條鏈或多條鏈，而非具體長度的產物。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、「蛋白質」、「胺基酸鏈」或其它任何用於指兩個或多個胺基酸的一條或多條鏈的術語均包含於「多肽」的定義內，術語「多肽」可與這些術語替代或互換使用。術語「多肽」還指多肽表達後修飾的產物，這些修飾包括但不限於糖基化，乙醯基化，磷酸化，醯胺化，通過已知保護/封閉基團衍生化，蛋白酶切割或非天然胺基酸修飾。多肽可能由天然生物來源衍生或由重組技術產生，但不一定由標明的核酸序列翻譯而來。可以任何方式產生多肽，包括化學合成。本發明多肽的大小可以是約3個或更多個、5個或更多個、10個或更多個、20個或更多個、25個或更多個、50個或更多個、75個或更多個、100個或更多個、200個或更多個、 500個或更多個、1，000個或更多個或者2，000個或更多個胺基酸。多肽可具有確定的三維結構，但它們不一定具有這種結構。具有確定三維結構的多肽稱為摺疊多肽，不具有確定的三維結構、但可採用大量不同構象的多肽稱為非摺疊多肽。本文所用術語「糖蛋白」指偶聯於至少一個糖部分的蛋白質，所述糖部分通過某些胺基酸殘基，如絲氨酸殘基或天冬醯胺殘基的含氧或含氮側鏈連接於蛋白質。「分離的」多肽或其片段、變體或衍生物指不在其天然環境中的多肽。不要求特定的純化水平。例如，可從其自然或天然環境中取出分離多肽。根據本發明目的，在宿主細胞中表達的重組產生的多肽和蛋白質被認為是分離的，通過任何合適技術分離、分級、部分或基本上純化的天然或重組多肽也是如此。本發明多肽也包括上述多肽的片段、衍生物、類似物或變體，及其任何組合。提到本發明抗-CD100抗體或抗體多肽時，術語「片段」、「變體」、「衍生物」和「類似物」包括保持相應的本發明抗體或本發明抗體多肽的至少一部分抗原結合特性的任何多肽。除本文其它部分討論的具體抗體片段外，本發明多肽的片段還包括蛋白酶水解片段，以及缺失片段。本發明抗-CD100抗體和抗體多肽的變體包括上述片段，以及具有因胺基酸取代、缺失或插入而改變胺基酸序列的多肽。變體可以是天然產生的或非天然產生的。可使用本領域所知的誘變技術產生非天然變體。變體多肽可包含保守的或非保守的胺基酸取代、缺失或添加。多肽變體本文中也稱作「多肽類似物」。本文所用抗-CD100抗體或抗體多肽的「衍生物」指具有由官能性側鏈基團反應化學衍生的一個或多個殘基的對象多肽。「衍生物」還包括那些含有一個或多個20種標準胺基酸的天然胺基酸衍生物的肽。例如，4-羥基脯氨酸可取代脯氨酸；5-羥基賴氨酸可取代賴氨酸；3-甲基組氨酸可取代組氨酸；高絲氨酸可取代絲氨酸； 鳥氨酸可取代賴氨酸。本發明抗-CD100抗體和抗體多肽的衍生物可包括經改變具有本發明參比抗體或抗體多肽上不存在的額外特徵的多肽。術語「多核苷酸」包括單個核酸和多個核酸，指分離的核酸分子或構建物，例如信使RNA(mRNA)或質粒DNA (pDNA)。多核苷酸可包含常規磷酸二酯鍵或非常規鍵(如醯胺鍵， 如肽核酸(PNA)中的醯胺鍵)。術語「核酸」指多核苷酸中存在的任何一種或多種核酸區段，如DNA或RNA片段。「分離的」核酸或多核苷酸指從其天然環境中取出的核酸分子，DNA 或RNA。例如，根據本發明目的，包含在載體中的編碼抗-CD100結合分子，如抗體或其抗原結合片段的重組多核苷酸被認為是分離的。分離的多核苷酸的其它例子包括保持於異源宿主細胞的重組多核苷酸或純化(部分或基本上純化)在溶液中的多核苷酸。分離的RNA分子包括本發明多核苷酸的體內或體外RNA轉錄物。根據本發明，分離的多核苷酸或核酸還包括合成產生的此類分子。此外，多核苷酸或核酸可以是或可包括調控元件，如啟動子、核糖體結合位點或轉錄終止子。本文所用術語「編碼區」指由翻譯成胺基酸的密碼子組成的核酸部分。雖然「終止密碼子」(TAG、TGA或TAA)不翻譯成胺基酸，但它可被認為是編碼區的一部分，而任何側接序列，如啟動子、核糖體結合位點、轉錄終止子、內含子等均不是編碼區的一部分。本發明的兩個或多個編碼區可安置在同一多核苷酸構建物中，例如在同一載體上，或者在單獨的多核苷酸構建物中，例如在單獨(不同)載體上。而且，任何載體可包含單個編碼區，或者可包含兩個或多個編碼區，例如，單一載體可單獨編碼免疫球蛋白重鏈可變區和免疫球蛋白輕鏈可變區。此外，本發明的載體、多核苷酸或核酸可編碼與抗-CD100抗體或其片段、變體或衍生物的編碼核酸融合或不融合的異源編碼區。異源編碼區包括但不限於專用的元件或基序，如分泌信號肽或異源功能結構域。在某些實施方式中，所述多核苷酸或核酸是DNA。當指DNA時，包含多肽編碼核酸的多核苷酸通常包含啟動子和/或其它轉錄或翻譯控制元件，這些元件與一個或多個編碼區可操作地連接。可操作地連接指，當基因產物如多肽的編碼區與一個或多個調控序列以此方式連接時，將使該基因產物的表達受到該調控序列的影響或控制。如果啟動子功能的誘導使編碼所需基因產物的mRNA轉錄，且如果兩個DNA片段間連接的屬性不幹擾表達調控序列指導基因產物表達或不幹擾轉錄DNA模板的能力，則兩個DNA片段(如多肽編碼區及其相連的啟動子)「可操作地連接」。因此，如果啟動子能夠影響核酸的轉錄，則啟動子區域與多肽編碼核酸可操作地連接。啟動子可以是僅在預先確定的細胞中指導DNA實質轉錄的細胞特異性啟動子。啟動子以外的其它轉錄控制元件如增強子、操縱子、阻抑物和轉錄終止信號，可與多核苷酸可操作地連接以指導細胞特異性轉錄。本文公開了合適的啟動子和其它轉錄控制區。許多轉錄控制區是本領域技術人員已知的。它們包括但不限於在脊椎動物細胞中發揮作用的轉錄控制區，例如但不限於，來自巨細胞病毒(立即早期啟動子，與內含子-A 聯用)、猿病毒40 (早期啟動子)和逆轉錄病毒(如勞氏肉瘤病毒)的啟動子和增強子區段。其它轉錄控制區包括衍生自脊椎動物基因，例如肌動蛋白、熱激蛋白、牛生長激素和兔 β-珠蛋白的那些，以及能夠在真核細胞中控制基因表達的其它序列。其它合適的轉錄控制區包括組織特異性啟動子和增強子，以及淋巴因子誘導型啟動子(如幹擾素或白介素誘導的啟動子)。類似地，本領域普通技術人員了解各種翻譯控制元件。它們包括但不限於核糖體結合位點、翻譯起始和終止密碼子以及衍生自小核糖核酸病毒的元件(特別是內部核糖體進入位點或IRES，也稱為CITE序列)。在其它實施方式中，本發明多核苷酸是RNA，例如，信使RNA(mRNA)形式。本發明的多核苷酸和核酸編碼區可與編碼指導本發明多核苷酸編碼多肽分泌的分泌或信號肽的其它編碼區聯合。根據信號假說，哺乳動物細胞分泌的蛋白質具有信號肽或分泌前導序列，一旦生長的蛋白質鏈向粗面內質網外的輸出過程啟動，就將這些序列從成熟蛋白質上切掉。本領域普通技術人員了解，脊椎動物細胞分泌的多肽通常具有融合於所述多肽N末端的信號肽，它們從完整或「全長」多肽上切掉後產生分泌或「成熟」形式的多肽。在某些實施方式中，使用天然信號肽，例如免疫球蛋白重鏈或輕鏈信號肽，或者使用仍然能夠指導與其操作性相連的多肽分泌的該序列的功能衍生物。或者，可採用異源哺乳動物信號肽或其功能衍生物。例如，野生型前導序列可以用人組織纖溶酶原激活物(TPA)或小鼠葡糖醛酸糖苷酶的前導序列代替。廣義來說，本發明"結合分子"或"抗原結合分子"指特異性結合抗原決定簇的分子。在一個實施方式中，所述結合分子特異性結合CD100，如大約150kDa的跨膜CD100多肽或大約120kDa的可溶性⑶100多肽(通常稱為s⑶100)。在另一實施方式中，本發明結合分子是抗體或其抗原結合片段。在另一個實施方式中，本發明結合分子包括抗體分子的至少一個重鏈或輕鏈CDR。在另一個實施方式中，本發明結合分子包括來自一種或多種抗體分子的至少兩個CDR。在另一個實施方式中，本發明結合分子包括來自一種或多種抗體分子的至少三個CDR。在另一個實施方式中，本發明結合分子包括來自一種或多種抗體分子的至少四個CDR。在另一個實施方式中，本發明結合分子包括來自一種或多種抗體分子的至少五個CDR。在另一個實施方式中，本發明結合分子包括來自一種或多種抗體分子的至少六個 CDR。本發明涉及某些抗-CD100抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物。除非特別提到完整大小的抗體，如天然產生的抗體，術語「抗-⑶100抗體」包括完整大小的抗體以及這種抗體的抗原結合片段、變體、類似物或衍生物，例如天然產生的抗體或免疫球蛋白分子，或以類似於抗體分子的方式結合抗原的工程改造的抗體分子或片段。本文所用術語「人」或「完全人」抗體包括具有人免疫球蛋白的胺基酸序列的抗體，包括分離自人免疫球蛋白文庫的抗體或不表達內源性免疫球蛋白的一種或多種人免疫球蛋白的轉基因動物，如下文所述，例如，Kucherlapati等的美國專利5，939，598。「人」或 「完全人」抗體也包括至少包含重鏈可變區或至少包含重鏈和輕鏈可變區的抗體，其中所述可變區具有人免疫球蛋白可變區的胺基酸序列。「人」或「完全人」抗體還包括如上所述包含本文所述抗體分子(如VH區和/或VL 區)的變體(包括衍生物)或基本由其組成或由其組成的「人」或「完全人」抗體，所述抗體或其片段免疫學特異性結合於CD100多肽或其片段或變體。可利用本領域技術人員已知的標準技術在編碼人抗-CD100抗體的核苷酸序列中引入突變，包括但不限於，導致胺基酸取代的定點誘變和PCR介導的誘變。優選地，相對於參比VH區、VHCDRU VHCDR2、VHCDR3、VL 區、VIXDRl、VIXDR2或VIXDR3，該變體(包括衍生物)編碼少於50個胺基酸取代、少於40 個胺基酸取代、少於30個胺基酸取代、少於25個胺基酸取代、少於20個胺基酸取代、少於 15個胺基酸取代、少於10個胺基酸取代、少於5個胺基酸取代、少於4個胺基酸取代、少於 3個胺基酸取代或少於2個胺基酸取代。在某些實施方式中，胺基酸取代是保守性胺基酸取代，如下詳述。或者，也可沿所有或一部分編碼序列隨機引入突變，例如通過飽和誘變引入，可篩選所得突變體的生物學活性，以鑑定保持活性(例如，結合CD100多肽，如結合人CD100、鼠CD100或同時結合人和鼠CD100的能力)的突變體。「人」或「完全人」抗體的這類變體(或其衍生物)也可稱為 「優化」或「為抗原結合所優化」的人或完全人抗體，包括與抗原親和力提高的抗體。術語「抗體」和「免疫球蛋白，，在本文中可互換使用。抗體或免疫球蛋白至少包括重鏈可變區，通常至少包括重鏈和輕鏈的可變區。脊椎動物系統中的基本免疫球蛋白結構是眾所周知的。參見例如，Harlow等(1988) Antibodies :ALaboratory Manual (《抗體實驗室手冊》)(第2版；冷泉港實驗室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press))。正如下文中詳細討論的，術語「免疫球蛋白」包括可通過生化性質區分的各種類型的多肽。本領域技術人員應理解，重鏈分為gamma、mu、alpha、delta或印silon(Y，μ，α， δ，O，其中還有一些小類(如Υ1-Υ4)。該鏈的特性決定抗體分「類」為IgG、IgM、IgA、 IgG或IgE。免疫球蛋白小類(同種型)如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl等已被良好表徵，
19且已知能產生特殊功能特性。根據本文公開內容，本領域技術人員不難區分這些類和同種型的修飾形式，因此，它們涵蓋在本發明範圍內。所有免疫球蛋白類型明顯屬於本發明範圍，以下討論通常論及免疫球蛋白分子的IgG類。在IgG中，標準的免疫球蛋白分子包括分子量約為23，000道爾頓的兩個相同的輕鏈多肽和分子量為53，000-70, 000的兩個相同的重鏈多肽。這四條鏈通常通過二硫鍵結合起來形成「Y」構型，其中輕鏈從Y的口部開始夾叉重鏈，並延續通過可變區。輕鏈分類為kappa或lambda (κ、λ)。各重鏈類可與κ或λ輕鏈結合。通常， 通過雜交瘤、B細胞或遺傳工程改造的宿主細胞產生免疫球蛋白時，輕鏈和重鏈互相共價結合，兩條重鏈的「尾部」通過共價二硫鍵或非共價連接互相結合。在重鏈中，胺基酸序列從 Y構型的分叉末端的N末端走向每條鏈底部的C末端。輕鏈和重鏈都可以分成結構和功能同源的區域。術語「恆定」和「可變」從功能角度使用。在這方面，應理解輕鏈(VL或VK)和重鏈(VH)部分的可變區決定抗原識別和特異性。相反，輕鏈(CL)和重鏈(CH1、CH2或CH3)的恆定區產生重要的生物學特性，例如分泌、 跨胎盤移動、Fc受體結合、補體結合等。通常，恆定區結構域的編號越大，離抗體的抗原結合位點或氨基末端越遠。N-末端部分是可變區，C-末端部分是恆定區；CH3和CL結構域實際上分別包括重鏈和輕鏈的羧基末端。如上所述，可變區允許抗體選擇性識別和特異性結合抗原上的表位。也就是說，抗體的VL和VH結構域、或這些可變區內的互補決定區(CDR)亞組組合形成確定三維抗原結合位點的可變區。在Y的每條臂末端形成的這種四聯抗體結構構成抗原結合位點。更具體說，所述抗原結合位點由各VH和VL鏈帶有的三個CDR決定。在一些情況下，例如在衍生自羊駝或根據羊駝免疫球蛋白工程改造的某些免疫球蛋白分子中，完整的免疫球蛋白分子可僅由重鏈構成而不含輕鏈。參見例如，Hamers-Casterman等，Nature 363 :446-448 (1993)。在天然產生的抗體中，每個抗原結合域上出現的六個「互補決定區」或「⑶R」是短的非毗連胺基酸序列，隨著抗體在水性環境中確定其三維構型時，它們特別定位以形成抗原結合域。抗原結合域中的其餘胺基酸稱為「構架」區，該區域的分子間變化較小。構架區主要採用片層構象，⑶R形成環連接β-片層結構，並在某些情況下構成β-片層結構的部分。因此，構架區通過鏈間非共價相互作用形成支架為CDR提供正確定位。通過定位的CDR形成的抗原結合域能確定與免疫反應性抗原上表位互補的表面。這種互補表面促進抗體與其關聯表位的非共價結合。本領域普通技術人員不難鑑定任何給定的重鏈或輕鏈可變區中包含CDR和構架區的胺基酸，因為它們已被精確定義(見下)。除非另有明確說明，在本領域使用和/或接受某術語的兩種或多種定義的情況下，本文所用的該術語的定義應包括所有這些含義。具體例子是使用術語「互補決定區」(CDR)描述在重鏈和輕鏈多肽的可變區內發現的非毗連抗原結合位點。這一特定區域的描述可參見通過引用全文納入本文的Kabat等(198 美國健康和公共服務部 (U. S. Dept. of Health and Human Services), Sequences of Proteins of Immunological Interest ( 「具有免疫學重要性的蛋白質序列」)，Chothia和Lesk, J. Mol. Biol. 196 901-917(1987) 0，互相比較時，所述定義包括重疊的胺基酸殘基或胺基酸殘基亞組。儘管如此，應用任一定義指代抗體或其變體的CDR均應落入本文所定義和使用的術語的範圍。 合適胺基酸殘基包括上文引用的各參考文獻中定義的CDR，如下表1所示以作比較。包括特定CDR的準確殘基編號取決於CDR的序列和大小。在給定抗體的可變區胺基酸序列的情況下，本領域技術人員可常規確定哪些殘基包括哪個具體⑶R。表1.CDR 定義權利要求
1.一種分離的結合分子，其特異性結合與選自2503或67的參比單克隆抗體相同的 CD100表位。
2.一種特異性結合CD100的分離的結合分子，所述結合分子競爭性抑制選自2503或 67的參比單克隆抗體與⑶100的特異性結合。
3.如權利要求1或2所述的結合分子，其特徵在於，包括抗體或其抗原結合片段。
4.一種特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，所述抗體或其片段是單克隆抗體2503或67。
5.一種特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的重鏈可變區(VH)包含與SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 10至少90%相同的胺基酸序列。
6.一種特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的輕鏈可變區(VL)包含與SEQ ID N0:17或SEQ ID NO 18至少90%相同的胺基酸序列。
7.一種特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的 VH包含除20個或更少保守性胺基酸取代外，與SEQ ID NO :9或SEQ ID N0:10相同的胺基酸序列。
8.一種特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的 VL包含除20個或更少保守性胺基酸取代外，與SEQ ID NO 17或SEQ ID NO 18相同的胺基酸序列。
9.如權利要求5所述的抗體或其抗原結合片段，其特徵在於，所述抗體或其片段的VH 包括胺基酸序列SEQ ID NO 9或SEQ ID NO :10。
10.如權利要求6所述的抗體或其抗原結合片段，其特徵在於，所述抗體或其片段的VL 包括胺基酸序列SEQ ID NO 17或SEQ ID NO :18。
11.一種特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的VH和VL包含分別與SEQ ID NO 9和SEQ ID NO :10，或分別與SEQ ID NO 17和SEQ ID NO 18至少90%相同的胺基酸序列。
12.—種特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的VH和VL包含除各自的20個或更少保守性胺基酸取代外，分別與SEQ ID NO 9和SEQ ID NO :10，或分別與SEQ ID N0:17和SEQ IDNO 18相同的胺基酸序列。
13.如權利要求11所述的分離的抗體或其抗原結合片段，其特徵在於，所述抗體或其片段的VH和VL包含分別與SEQ ID NO 9禾口 SEQ ID NO 10，或者分別與SEQ ID N0:17禾口 SEQ ID NO: 18相同的胺基酸序列。
14.一種特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的VH包含Chothia-Kabat重鏈互補決定區_1 (VH-⑶Rl)胺基酸序列，該胺基酸序列除兩個或更少的胺基酸取代外，與SEQ ID NO :6相同。
15.如權利要求14所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述VH-CDRl胺基酸序列是SEQ ID NO :6。
16.一種特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的VH包含Kabat重鏈互補決定區_2 (VH-⑶R2)胺基酸序列，該胺基酸序列除4個或更少的胺基酸取代外，與SEQ ID N0:7相同。
17.如權利要求16所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述VH-CDR2胺基酸序列是SEQID NO :7。
18.一種特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的VH包含Kabat重鏈互補決定區_3 (VH-⑶R3)胺基酸序列，該胺基酸序列除2個或更少的胺基酸取代外，與SEQ ID NO :8相同。
19.如權利要求18所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述VH-CDR3胺基酸序列是SEQ ID NO :8。
20.一種特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的VL包含Kabat輕鏈互補決定區_1 (VL-⑶Rl)胺基酸序列，該胺基酸序列除4個或更少的胺基酸取代外，與SEQ ID N0:14相同。
21.如權利要求20所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述VL-CDRl胺基酸序列是SEQ ID NO :14。
22.—種特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的VL包含Kabat輕鏈互補決定區_2 (VL-CDR2)胺基酸序列，該胺基酸序列除2個或更少的胺基酸取代外，與SEQ ID NO: 15相同。
23.如權利要求22所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述VL-CDR2胺基酸序列是SEQ ID NO :15。
24.一種特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的VL包含Kabat輕鏈互補決定區_3 (VL-CDR3)胺基酸序列，該胺基酸序列除2個或更少的胺基酸取代外，與SEQ ID NO: 16相同。
25.如權利要求M所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述VL-CDR3胺基酸序列是SEQ ID NO :16。
26.一種特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的VH包含VH-CDRl、VH-CDR2和VH-CDR3胺基酸序列，在一個或多個所述VH-CDR中，除4個或更少胺基酸取代外，它們分別包含SEQID NO :6、7和8。
27.如權利要求26所述的分離的抗體，其特徵在於，所述VH-⑶R1、VH-⑶R2和VH-⑶R3 胺基酸序列分別是SEQ ID NO :6、7和8。
28.一種特異性結合CD100的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其片段的VL包含VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3胺基酸序列，在一個或多個所述VL-CDR中，除4個或更少胺基酸取代外，它們分別包含SEQID NO 14,15和16。
29.如權利要求28所述的分離的抗體，其特徵在於，所述VL-⑶R1、VL-⑶R2和VL-⑶R3 胺基酸序列分別是SEQ ID NO 14,15和16。
30.如權利要求4、6、8、11至13中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述VH構架區具有5個或更少的胺基酸取代。
31.如權利要求5、7、9和10至13中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述VL 構架區具有5個或更少的胺基酸取代。
32.如權利要求3-31中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，其結合線性表位。
33.如權利要求3-31中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，其結合非線性構象表位。
34.如權利要求3-33中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，它具有多特異性。
35.如權利要求34所述的抗體或其片段，其特徵在於，它具有雙特異性。
36.如權利要求3-35中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，它是Fab片段。
37.如權利要求3-35中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，它是F(ab)2片段。
38.如權利要求3-35中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，它是Fv片段。
39.如權利要求3-35中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，它是單鏈抗體。
40.如權利要求3-35中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，它是多價的且包含至少兩條重鏈和至少兩條輕鏈。
41.如權利要求3-35、39和40中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，其包含選自人κ恆定區和人λ恆定區的輕鏈恆定區。
42.如權利要求3-35和39-41中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，其包含重鏈恆定區或其片段。
43.如權利要求42所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述重鏈恆定區或其片段是人 IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAU IgA2、IgE 或 IgD0
44.如權利要求3-43中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，其結合人和鼠 CDlOOo
45.如權利要求3-44中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，其特異性結合CDlOO 多肽或其片段或者⑶100變體多肽的親和力的特徵是解離常數(Kd)不大於5X10-2M、10l、5x101、1(Γ9Μ、5χ1(Γ10Μ、IO^10M,5χ10_11Μ, 1(ΓηΜ、5χ1(Γ12Μ、5· 7χ1(Γ12Μ、8· 4χ1(Γ12Μ、1(Γ12Μ、 5叉10 ] 、10 ]\1、5110-14]\1、10-14]\1、5110-1%或 1(Γ15Μ。
46.如權利要求45所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述CD100多肽或其片段或者 ⑶100變體多肽是人或鼠的。
47.如權利要求46所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述CD100多肽或其片段或者 ⑶100變體多肽是人的，且所述Kd約為hlO_9M至6x10—1。
48.如權利要求46所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述CD100多肽或其片段或者 ⑶100變體多肽是鼠的，且所述KD約為IxlO-9M至MlO-^L
49.如權利要求3-48中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，其抑制CDlOO與 ⑶100受體結合。
50.如權利要求49所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述CDlOO受體是叢蛋白Bi。
51.如權利要求3-50中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述抗體或其片段是人源化、靈長化或嵌合的。
52.如權利要求51所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述抗體或其片段是人源化的。
53.如權利要求3-52中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，其還包含與其融合的異源多肽。
54.如權利要求3-53中任一項所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述抗體或其片段偶聯於選自下組的藥劑細胞毒劑、治療劑、細胞生長抑制劑、生物毒素、前藥、肽、蛋白質、 酶、病毒、脂質、生物反應修飾劑、藥物、淋巴因子、異源抗體或其片段、可檢測標記、聚乙二醇(PEG)和任何上述藥劑中兩種或多種的組合。
55.如權利要求M所述的抗體或其片段，其特徵在於，所述細胞毒劑選自放射性核素、生物毒素、酶活性毒素或任何所述細胞毒劑中兩種或多種的組合。
56.如權利要求M所述的抗體或其片段，其特徵在於、所述可檢測標記選自酶、螢光標記、化學發光標記、生物發光標記、放射性標記或任何所述可檢測標記中兩種或多種的組I=I ο
57.一種組合物，其包含權利要求1-56中任一項所述的抗體或其片段和運載體。
58.如權利要求57所述的組合物，其特徵在於，所述運載體選自鹽水、緩衝鹽水、右旋糖、水、甘油和其組合。
59.一種分離的多核苷酸，其包含編碼抗體VH多肽的核酸，其中所述VH多肽的胺基酸序列與SEQ ID NO 19或SEQ ID NO 20至少90%相同；且包含所述VH多肽的抗體或其抗原結合片段特異性結合CD100。
60.如權利要求59所述的多核苷酸，其特徵在於，優化編碼所述VH多肽的核苷酸序列以提高表達而不改變所述VH多肽的胺基酸序列。
61.如權利要求60所述的多核苷酸，其特徵在於，所述優化包括鑑定和除去剪接供體和剪接接受體位點。
62.如權利要求60所述的多核苷酸，其特徵在於，所述優化包括根據表達所述多核苷酸的細胞優化密碼子使用。
63.如權利要求59-62中任一項所述的多核苷酸，其特徵在於，所述核酸包含含有SEQ ID NO 19或SEQ ID NO 20的核苷酸序列。
64.如權利要求63所述的多核苷酸，其特徵在於，所述核酸包含由SEQIDN0:19或SEQ ID NO 20組成的核苷酸序列。
65.一種分離的多核苷酸，其包含編碼抗體VL多肽的核酸，其中所述VL多肽的胺基酸序列與SEQ ID NO :21或SEQ ID NO 22至少90%相同；且包含所述VL多肽的抗體或其抗原結合片段特異性結合CD100。
66.如權利要求65所述的多核苷酸，其特徵在於，優化編碼所述VL多肽的核苷酸序列， 以提高表達而不改變所述VL多肽的胺基酸序列。
67.如權利要求66所述的多核苷酸，其特徵在於，所述優化包括鑑定和除去剪接供體和剪接接受體位點。
68.如權利要求66所述的多核苷酸，其特徵在於，所述優化包括根據表達所述多核苷酸的細胞優化密碼子使用。
69.如權利要求65-68中任一項所述的多核苷酸，其特徵在於，所述核酸包含含有SEQ ID NO 21或SEQ ID NO 22的核苷酸序列。
70.如權利要求69所述的多核苷酸，其特徵在於，所述核酸包含由SEQIDN0:21或SEQ ID NO :22組成的核苷酸序列。
71.一種分離的多核苷酸，其包含編碼抗體VH多肽的核酸，其中所述VH多肽的胺基酸序列除20個或更少的保守性胺基酸取代外，與SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 10相同；且包含所述VH多肽的抗體或其抗原結合片段特異性結合CD100。
72.—種分離的多核苷酸，其包含編碼抗體VL多肽的核酸，其中所述VL多肽的胺基酸序列除20個或更少的保守性胺基酸取代外，與SEQ ID N0:17或SEQ ID N0:18相同；且包含所述VL多肽的抗體或其抗原結合片段特異性結合CD100。
73.一種分離的多核苷酸，其包含編碼VH-CDRl胺基酸序列的核酸，所述胺基酸序列除兩個或更少的胺基酸取代外，與SEQ ID NO :6相同；其中包含所述VH-CDRl的抗體或其抗原結合片段特異性結合CD100。
74.如權利要求73所述的多核苷酸或其片段，其特徵在於，所述VH-CDRl胺基酸序列是 SEQ ID NO:6。
75.一種分離的多核苷酸，其包含編碼VH-CDR2胺基酸序列的核酸，所述胺基酸序列除 4個或更少的胺基酸取代外，與SEQ ID N0:7相同；其中包含所述VH-CDR2的抗體或其抗原結合片段特異性結合CD100。
76.如權利要求75所述的多核苷酸或其片段，其特徵在於，所述VH-CDR2胺基酸序列是 SEQ ID NO :7。
77.一種分離的多核苷酸，其包含編碼VH-CDR3胺基酸序列的核酸，所述胺基酸序列除兩個或更少的胺基酸取代外，與SEQ ID N0:8相同；其中包含所述VH-CDR3的抗體或其抗原結合片段特異性結合CD100。
78.如權利要求77所述的多核苷酸或其片段，其特徵在於，所述VH-CDR3胺基酸序列是 SEQ ID NO:8。
79.一種分離的多核苷酸，其包含編碼VL-CDRl胺基酸序列的核酸，所述胺基酸序列除 4個或更少的胺基酸取代外，與SEQ ID NO :14相同；其中包含所述VL-CDRl的抗體或其抗原結合片段特異性結合CD100。
80.如權利要求79所述的多核苷酸或其片段，其特徵在於，所述VL-CDRl胺基酸序列是 SEQ ID NO :14。
81.一種分離的多核苷酸，其包含編碼VL-CDR2胺基酸序列的核酸，所述胺基酸序列除 2個或更少的胺基酸取代外，與SEQ ID N0:15相同；其中包含所述VL-CDR2的抗體或其抗原結合片段特異性結合CD100。
82.如權利要求81所述的多核苷酸或其片段，其特徵在於，所述VL-CDR2胺基酸序列是 SEQ ID NO :15ο
83.一種分離的多核苷酸，其包含編碼VL-CDR3胺基酸序列的核酸，所述胺基酸序列除 2個或更少的胺基酸取代外，與SEQ ID Ν0:16相同；其中包含所述VL-CDR3的抗體或其抗原結合片段特異性結合CD100。
84.如權利要求83所述的多核苷酸或其片段，其特徵在於，所述VL-CDR3胺基酸序列是 SEQ ID NO :16。
85.一種分離的多核苷酸，其包含編碼抗體VH多肽的核酸，其中所述VH多肽包含 VH-⑶Rl、VH-⑶R2和VH-⑶R3胺基酸序列，所述胺基酸序列分別含有SEQ ID NO :6、7和8 ； 其中抗體或其抗原結合片段特異性結合CD100。
86.一種分離的多核苷酸，其包含編碼抗體VL多肽的核酸，其中所述VL多肽包含 VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3胺基酸序列，所述胺基酸序列分別含有SEQ ID NO :14、15和 16 ；其中抗體或其抗原結合片段特異性結合CD100。
87.如權利要求59-64、71、73-78和85中任一項所述的多核苷酸，其特徵在於，還包含編碼融合於抗體VH多肽的信號肽的核酸。
88.如權利要求65-69、72、79-84和86中任一項所述的多核苷酸，其特徵在於，還包含編碼融合於抗體VL多肽的信號肽的核酸。
89.如權利要求59-64、71-78、85和87中任一項所述的多核苷酸，其特徵在於，還包含編碼融合於抗體VH多肽的重鏈恆定區CHl結構域的核酸。
90.如權利要求59-64、71-78、85、87和89中任一項所述的多核苷酸，其特徵在於，還包含編碼融合於抗體VH多肽的重鏈恆定區CH2結構域的核酸。
91.如權利要求59-64、71-78、85、87、89和90中任一項所述的多核苷酸，其特徵在於， 還包含編碼融合於所述VH多肽的重鏈恆定區CH3結構域的核酸。
92.如權利要求59-64、71-78、85、87和89-91中任一項所述的多核苷酸，其特徵在於， 還包含編碼融合於所述VH多肽的重鏈絞鏈區的核酸。
93.如權利要求91-92中任一項所述的多核苷酸，其特徵在於，所述重鏈恆定區是人 IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAU IgA2、IgE 或 IgD0
94.如權利要求65-70、72、79-84、86和88中任一項所述的多核苷酸，其特徵在於，還包含編碼融合於所述VL多肽的輕鏈恆定區結構域的核酸。
95.如權利要求94所述的多核苷酸，其特徵在於，所述輕鏈恆定區是人κ。
96.如權利要求59-95中任一項所述的多核苷酸，其特徵在於，所述抗體或其抗原結合片段特異性結合人和鼠CD100。
97.一種包含權利要求59-96中任一項所述多核苷酸的載體。
98.如權利要求97所述的載體，其特徵在於，所述多核苷酸操作性連接於啟動子。
99.一種包含權利要求97或98所述載體的宿主細胞。
100.一種產生特異性結合CD100的抗體或其片段的方法，其包括培養權利要求99所述的宿主細胞，和回收所述抗體或其片段。
101.一種通過權利要求100所述方法產生的分離的多肽。
102.一種分離的多肽，其中所述多肽由權利要求59-96中任一項所述的多核苷酸編碼。
103.一種分離的抗體或其片段，其包含權利要求101或102所述的多肽。
104.一種組合物，其包含分離的VH編碼多核苷酸和分離的VL編碼多核苷酸，其特徵在於，所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸包含編碼分別與SEQ ID NO 9和SEQ ID NO :17、或者分別與SEQ ID NO 10和SEQID NO 18至少90%相同的胺基酸序列的核酸；並且其中所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段特異性結合CD100。
105.如權利要求104所述的組合物，其特徵在於，所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸包含編碼分別由SEQ ID NO 9和SEQ ID NO 17，或者分別由SEQ ID NO 10禾口 SEQ ID NO :18組成的胺基酸序列的核酸。
106.一種組合物，其包含分離的VH編碼多核苷酸和分離的VL編碼多核苷酸，其特徵在於，所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸包含編碼除少於20個保守性胺基酸取代夕卜，分別與 SEQ ID NO 9 和 SEQ ID NO 17、或者分別與 SEQ ID NO 10 和 SEQ ID NO 18 相同的胺基酸序列的核酸；並且其中所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段特異性結合CDlOOo
107.如權利要求106所述的組合物，其特徵在於，所述VH和VL胺基酸序列分別是SEQ ID NO 9 和 SEQ ID NO :17，或者分別是 SEQ ID NO 10 和 SEQ ID NO :18。
108.一種包含分離的VH編碼多核苷酸和分離的VL編碼多核苷酸的組合物，其特徵在於，所述VH編碼多核苷酸編碼含有VH-⑶Rl、VH-⑶R2和VH-⑶R3胺基酸序列的VH多肽，這些胺基酸序列分別由SEQ ID N0:6、7和8組成；其中所述VL編碼多核苷酸編碼包含 VL-CDRl、VL-CDR2和VL-CDR3胺基酸序列的VL多肽，這些胺基酸序列分別由SEQ ID NO 14、 15和16組成；且其中所述VH和VL編碼多核苷酸編碼的抗體或其片段特異性結合CD100。
109.如權利要求104-108中任一項所述的組合物，其特徵在於，所述VH編碼多核苷酸還包含編碼融合於所述抗體VH多肽的信號肽的核酸。
110.如權利要求104-108中任一項所述的組合物，其特徵在於，所述VL編碼多核苷酸還包含編碼融合於所述抗體VL多肽的信號肽的核酸。
111.如權利要求104-110中任一項所述的組合物，其特徵在於，所述VH編碼多核苷酸還包含編碼融合於所述VH多肽的重鏈恆定區CHl結構域的核酸。
112.如權利要求104-111中任一項所述的組合物，其特徵在於，所述VH編碼多核苷酸還包含編碼融合於所述VH多肽的重鏈恆定區CH2結構域的核酸。
113.如權利要求104-112中任一項所述的組合物，其特徵在於，所述VH編碼多核苷酸還包含編碼融合於所述VH多肽的重鏈恆定區CH3結構域的核酸。
114.如權利要求104-113中任一項所述的組合物，其特徵在於，所述VH編碼多核苷酸還包含編碼融合於所述VH多肽的重鏈絞鏈區的核酸。
115.如權利要求113或114所述的組合物，其特徵在於，所述重鏈恆定區是人IgGl、 IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAU IgA2、IgE 或 IgD0
116.如權利要求104-115中任一項所述的組合物，其特徵在於，所述VL編碼多核苷酸還包含編碼融合於所述VL多肽的輕鏈恆定區結構域的核酸。
117.如權利要求116所述的組合物，其特徵在於，所述輕鏈恆定區是人κ。
118.如權利要求104-117中任一項所述的組合物，其特徵在於，所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸位於單一載體上。
119.如權利要求104-117中任一項所述的組合物，其特徵在於，所述VH編碼多核苷酸位於第一載體而所述VL編碼多核苷酸位於第二載體，所述第二載體與所述第一載體不同。
120.如權利要求118或119所述的組合物，其特徵在於，所述VH編碼多核苷酸操作性連接於第一啟動子而所述VL編碼多核苷酸操作性連接於第二啟動子。
121.如權利要求120所述的組合物，其特徵在於，所述第一和第二啟動子是同一個啟動子的拷貝。
122.如權利要求120所述的組合物，其特徵在於，所述第一和第二啟動子不同。
123.如權利要求118-122中任一項所述的組合物，其特徵在於，所述第一載體和所述第二載體包含於單一宿主細胞中。
124.如權利要求118-122中任一項所述的組合物，其特徵在於，所述第一載體和所述第二載體包含於單獨的宿主細胞中。
125.如權利要求104-124中任一項所述的組合物，其特徵在於，所述抗體或其抗原結合片段特異性結合人和鼠CD100。
126.如權利要求118所述的載體。
127.如權利要求119所述的第一載體。
128.如權利要求119所述的第二載體。
129.如權利要求1 所述的載體，其特徵在於，所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸框內融合，由操作性相連的單一啟動子共同轉錄，並共同翻譯成單鏈抗體或其抗原結合片段。
130.如權利要求1 所述的載體，其特徵在於，所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸由操作性相連的單一啟動子共同轉錄，但單獨翻譯。
131.如權利要求1 所述的載體，其特徵在於，所述載體還包含位於所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸之間的IRES序列。
132.如權利要求1 所述的載體，其特徵在於，所述VH編碼多核苷酸和所述VL編碼多核苷酸是單獨轉錄的，各自操作性連接於單獨的啟動子。
133.—種產生特異性結合CD100的抗體或其片段的方法，其包括培養權利要求121所述的宿主細胞，和回收所述抗體或其片段。
134.一種產生特異性結合CD100的抗體或其片段的方法，其包括共同培養權利要求 123所述的單獨的宿主細胞，和回收所述抗體或其片段。
135.—種產生特異性結合CD100的抗體或其片段的方法，其包括單獨培養權利要求 124所述的單獨的宿主細胞、合併所述VH和VL編碼多肽和回收所述抗體或其片段。
136.—種宿主細胞，其包含權利要求1 或129-132中任一項所述的載體、權利要求 127所述的第一載體或權利要求1 所述的第二載體。
137.—種產生特異性結合CD100的抗體或其片段的方法，其包括培養權利要求136所述的宿主細胞，和回收所述抗體或其片段。
138.—種由權利要求137所述方法產生的特異性結合CD100的抗體或其片段。
139.—種在動物內中和CD100的方法，包括將包含以下成分的組合物給予所述動物a)權利要求3-56、103和138中任一項所述的分離的抗體或其片段；和b)藥學上可接受的運載體。
140.一種在需要治療的動物中治療自身免疫病症或炎性疾病的方法，所述方法包括給予所述動物一種組合物，該組合物包含a)權利要求3-56、103和138中任一項所述的分離的抗體或其片段；和b)藥學上可接受的運載體。
141.如權利要求140所述的方法，其特徵在於，所述自身免疫病或所述炎性疾病是多發性硬化。
142.如權利要求140所述的方法，其特徵在於，所述自身免疫病或所述炎性疾病是關節炎。
143.如權利要求142所述的方法，其特徵在於，所述自身免疫病或所述炎性疾病是類風溼性關節炎。
144.一種在需要治療的動物中治療癌症的方法，所述方法包括給予所述動物一種組合物，該組合物包含a)權利要求3-56、103和138中任一項所述的分離的抗體或其片段；和b)藥學上可接受的運載體。
145.—種在需要治療癌症的動物中抑制血管新生的方法，所述方法包括給予所述動物一種組合物，該組合物包含a)權利要求3-56、103和138中任一項所述的分離的抗體或其片段；和b)藥學上可接受的運載體。
146.如權利要求139-145中任一項所述的方法，其特徵在於，所述抗體或其片段抑制 ⑶100與⑶100受體的結合。
147.如權利要求146所述的方法，其特徵在於，所述⑶100受體是叢蛋白-Bi。
148.如權利要求139-147中任一項所述的方法，其特徵在於，所述動物是哺乳動物。
149.如權利要求148所述的方法，其特徵在於，所述哺乳動物是人。
全文摘要
本發明提供治療CD100相關疾病，包括某些自身免疫病、炎性疾病和癌症的組合物和方法。具體說，已經開發了抗-CD100單克隆抗體來中和CD100。
文檔編號A61K39/395GK102458468SQ201080029914
公開日2012年5月16日 申請日期2010年5月7日 優先權日2009年5月8日
發明者E·S·史密斯, T·L·費希爾 申請人:瓦西尼斯公司