含有腸內細菌的片劑的製作方法
2023-05-16 20:50:31 2
專利名稱：含有腸內細菌的片劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及含有腸內細菌的片劑。
背景技術：
近年來，雙尾菌為主的腸內細菌廣泛被應用於藥品、準藥品、食品等。但是，腸內細菌因溫度、溼度、光、pH值及製片時的打壓等各種原因容易失活，所以關於製劑化存在很多問題。特別是，對於片劑，已知因為製片時的打壓而使活菌的生存率下降。而且，片劑中的腸內細菌，在長期保存中容易失活。
發明內容
本發明者，克服上述以往存在的問題，成功開發了含有腸內細菌的片劑，製片時的菌體殘存率為20％以上，在40℃、75％RH(相對溼度)條件下保存6個月後的穩定性為20％以上。進而本發明者，通過潛心研究完成了本發明。
即，本發明涉及(1)一種含有腸內細菌的片劑，其特徵在於，製片時的菌體殘存率為20％以上，在40℃、75％RH條件下保存6個月後的穩定性為20％以上。
(2)根據前述(1)所述的片劑，其特徵在於，活菌數為1.0×105～2.0×1011CFU/g。
(3)根據前述(1)所述的片劑，其特徵在於，硬度為30～300N。
(4)根據前述(1)所述的片劑，其特徵在於，腸內細菌為由雙尾菌、乳酸桿菌、乳酸球菌及有孢子性乳酸菌構成的組中選擇的細菌。
具體實施例方式
本發明的片劑中含有的腸內細菌為在腸內生存的細菌類的總稱，具體來說，可以例舉例如，嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、乾酪乳桿菌(Lactobacillus casei)、加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)、胚芽乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp bulgaricus)、德氏乳桿菌乳亞種(Lactobacillus delbrueckii subsplactis)等乳酸桿菌(Lactobacillus)屬；例如，瑞士乳桿菌(Leuconostoc mesenteroides)、糞鏈(腸)球菌(Streptococcus(Enterococcus)faecalis)、屎鏈(腸)球菌(Streptococcus(Enterococcus)faecium)、海氏鏈(腸)球菌(Streptococcus(Enterococcus)hirae)、乳酸乳桿菌(Lactobacillus lactis)、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)等乳酸球菌；兩岐雙岐桿菌(Bifidobacterium bifidum)、長雙岐桿菌(Bifidobacterium Longum)、短雙岐桿菌(Bifidobacterium breve)、青春雙岐桿菌(Bifidobacteriumadolescentis)、嬰兒雙岐桿菌(Bifidobacterium infantis)、假長雙歧桿菌(Bifidobacterium pseudolongum)、嗜熱雙岐桿菌(Bifidobacteriumthermophirum)等雙岐桿菌(Bifidobacterium)屬(也稱為雙尾菌)；例如，凝結牙孢桿菌(Bacillus coagulans)等有孢子性乳酸菌；例如，脆弱類桿菌(fragilis)菌或產黑色素類桿菌等類桿菌(Bacteroides)屬；例如，エアロフアシエンス等真桿菌(Eubacterium)屬；例如，厭氧消化鏈球菌(P.anaerobius)等消化鏈球菌(Peptstreptcoccus)屬；例如，糞腸球菌(E.faecalis)等腸球菌(Enterococcus)屬；例如，產氣腸桿菌(E E.aerogenes)等腸桿菌(Enterobacter)屬；瘡皰丙酸桿菌(P.acnes)等丙酸桿菌(Propionibacterium)屬；例如，變異鏈球菌(S.mutans)等鏈球菌(Streptococcus)屬；例如，マルチアシダ菌等ミツオケラ(Mitsuokella)屬；例如，藤黃八疊球菌等八疊球菌(Sarcina)屬；例如，ブロ一ミ菌等瘤胃菌(Ruminococcus)屬；例如，小韋榮球菌(Veillonella parvula)等韋榮氏球菌(Veillonella)屬；例如，埃氏巨球菌(エルスデニ)等巨球菌(Megasphaera)屬的微生物。
本發明的片劑中含有的腸內細菌，優選具有整腸作用的腸內細菌。具體來說，優選例如，兩岐雙岐桿菌、長雙岐桿菌、短雙岐桿菌、青春雙岐桿菌、嬰兒雙岐桿菌、假雙歧桿菌、嗜熱雙岐桿菌等雙尾菌；例如，嗜酸乳桿菌、乾酪乳桿菌、加氏乳桿菌、胚芽乳桿菌、德氏乳桿菌保加利亞亞種、德氏乳桿菌亞種等乳酸桿菌屬；例如，瑞士乳桿菌、糞鏈(腸)球菌、屎鏈(腸)球菌、海氏鏈(腸)球菌、乳酸乳桿菌、嗜熱鏈球菌等乳酸球菌；例如，凝結牙孢桿菌等有孢子性乳酸菌，特別優選兩岐雙岐桿菌。
本發明所述的片劑，其特徵在於，製片時的菌體殘存率為約20％以上。製片時的菌體殘存率，優選為約20～95％，更加優選30～95％，特別優選為約50～95％。此時，製片時的菌體殘存率，可以通過下面式1菌體殘存率(％)＝(1g片劑中的活菌數/1g製片原料中的活菌數)×100算出。前式中「1g片劑中的活菌數」的測定，是將製片後的片劑立刻細碎成粉末，測定該粉末中的活菌數。「1g製片原料中的活菌數」，是通過測定製片前的製片原料的活菌數而求得。至於活菌數的測定，只要片劑中活菌數的測定與製片原料中活菌數的測定通過相同方法進行，則沒有特別的限定。前述活菌數的測定根據菌體的種類而不同，例如可以通過日本藥典外藥品成分規格中記載的各種菌體的定量方法容易地測定。
本發明所述的片劑，其特徵在於，在40℃、75％RH的條件下保存6個月後的穩定性為約20％以上。保存穩定性優選為約20～95％，更加優選為約30～95％，特別優選為約50～95％。此時，根據製片後片劑中的活菌數、及在40℃、75％RH的條件下保存6個月後片劑中的活菌數，通過下式2保存穩定性(％)＝(1g保存後的片劑中的活菌數/1g製片後的片劑中的活菌數)×100算出保存穩定性。至於活菌數的測定，只要保存後的片劑中的活菌數測定與製片後的片劑中的活菌數的測定通過相同方法進行，則沒有特殊的限定。如上所述可以通過例如日本藥典外藥品成分規格中記載的定量方法等，根據菌體的種類測定活菌數。
本發明所述片劑，優選活菌數為大約1.0×105～為大約2.0×1011CFU/g。更加優選活菌數為大約1.0×106～1.0×1011CFU/g，特別優選為大約1.0×107～1.0×1011CFU/g。片劑中的活菌數根據菌體種類通過日本藥典外藥品成分規格中記載的定量方法測定。
本發明所述的片劑，除了腸內細菌以外，也可以根據需要進一步含有製劑技術領域中通常使用的賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、抗凝劑等各種添加劑。作為前述賦形劑，可以例舉白糖、乳糖、甘露醇或葡萄糖等糖類；玉米澱粉、馬鈴薯澱粉或部分α化的澱粉等澱粉類；結晶纖維素；磷酸氫鈣；磷酸鈣等其他可以作為賦形劑使用的各種制酸劑等。作為前述粘合劑，可以例舉白糖、葡萄糖、麥芽糖醇等糖類或糖醇類；糊精、澱粉、藻酸鈉、角叉菜膠、愈瘡樹膠、阿拉伯樹膠或瓊脂等多糖類；黃蓍膠、明膠、或谷蛋白等天然高分子類；羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素或羧甲基纖維素鈉等纖維素衍生物；聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚乙二醇、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸或聚乙酸乙烯酯樹脂等合成高分子化合物等。作為崩解劑，可以例舉羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基澱粉鈉、玉米澱粉、羥丙基澱粉、部分α化的澱粉、低取代度羥丙基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮或交聯羧甲基纖維素鈉等。作為潤滑劑、抗凝劑，可以例舉滑石、硬酯酸鎂、硬酯酸鈣、矽膠、硬酯酸、輕質無水矽酸、蔗糖脂肪酸酯、蠟類、硬化油、聚乙二醇或安息香酸鈉等。上述添加劑的含量，只要是在製劑技術領域中常用範圍內則適合使用。賦形劑的含量優選為約10～99重量％，粘合劑的含量優選為約1～30重量％，崩解劑的含量優選為約0～20重量％，潤滑劑、抗凝劑的含量優選為約0.5～10重量％。
本發明所述的片劑，除了上述添加劑以外，可以適當含有例如腸內細菌的增殖因子、倍散劑、調味劑、香料、染料等。作為腸內細菌、特別是雙尾菌的增殖因子，可以例舉乳果糖、低聚乳果糖或低聚異麥芽糖等低聚糖類。作為倍散劑，可以例舉砂糖、葡萄糖、糊精、澱粉、脫脂澱粉、乳蛋白或天然物提取類等；作為調味劑，可以例舉抗壞血酸或檸檬酸；作為香料，可以例舉1-薄荷醇、酸奶粉香料或檸檬粉香料等；作為染料，可以例舉天然色素等。這些物質的含量沒有特別的限定，可以適當選擇。
本發明所述的片劑，也可以含有乳酸菌以外的其他藥理活性成分。作為其他藥理活性成分，沒有特別的限定，可以例舉(a)具有整腸作用的成分(例如食物纖維等)，(b)抑制胃酸分泌或中和胃酸而防止因胃酸使腸內細菌失活的成分(例如，碳酸氫鈉、氧化鎂等制酸劑；噻哌溴銨(timepidium bromide)或甲基硫酸N-甲基莨菪胺等抗膽鹼劑；胃潰寧等抗胃液劑；甲腈咪胍、雷尼替丁或法莫替丁等H2受體拮抗劑；奧美拉唑等質子泵抑制劑等)，(c)有關腸疾病(例如，潰瘍性大腸炎或節段性腸炎等炎症性腸炎、過敏性腸炎等)的治療預防藥，(d)色甘酸鈉等抗過敏劑，(e)普伐他汀鈉等高脂血症劑，(f)替加氟等抗癌藥，(g)伏格列波糖等糖尿病治療劑等。
本發明片劑的形態沒有特別的限定。例如，本發明的片劑可以是裸片，也可以是薄膜包衣片、咀嚼片、有核片、發泡片或多層片。
作為前述包衣片，可以例舉糖衣片或腸溶片等。通過這樣的包覆，可以防止服用之後胃酸導致的腸內細菌的失活。作為前述腸溶片，可以例舉在裸片表面形成由腸溶性高分子化合物構成的薄膜的片劑。前述腸溶性高分子化合物，只要是溶解於pH5以上水，且不溶於不足pH5的酸性溶液的薄膜形成性高分子化合物，則沒有特別的限定，可以使用通常在本領域中使用高分子化合物。作為這樣的腸溶性高分子化合物，可以例舉纖維素衍生物、聚乙烯衍生物、馬來酸-乙烯基共聚物或丙烯酸系共聚物。作為前述纖維素衍生物的具體例，有羧甲基乙基纖維素、鄰苯二甲酸醋酸纖維素、琥珀酸醋酸纖維素、鄰苯二甲酸甲基纖維素、鄰苯二甲酸羥甲基乙基纖維素、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、琥珀酸乙酸羥丙基甲基纖維素等。作為前述聚乙烯衍生物的具體例，有聚乙烯醇鄰苯二甲酸酯、聚丁酸乙烯酯鄰苯二甲酸酯、聚乙烯基醯基乙縮醛鄰苯二甲酸酯(ポリビニルアセトアセタ一ルフタレ一ト)等。另外，作為前述馬來酸-乙烯基共聚物的具體例，有乙酸乙烯酯-馬來酸酐共聚物、乙烯基丁基醚-馬來酸酐共聚物、苯乙烯-馬來酸單酯共聚物等。作為前述丙烯酸系共聚物的具體例，有丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、苯乙烯-丙烯酸共聚物、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸-丙烯酸辛酯共聚物、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物(例如オイドラギツト(商品名、レ一ム·フア一マ公司製造))等。其中，作為腸溶性高分子化合物，優選オイドラギツト。這些腸溶性高分子化合物，可以單獨使用一種，也可以組合兩種以上使用。
前述咀嚼片，是一種在口腔內溶解或嚼碎而服用的製劑。前述咀嚼片中，也包括在口腔內迅速崩解，優選60秒左右之內崩解的製劑。前述咀嚼片，優選含有選自水溶性粘合劑、水溶性賦性劑及崩解劑的至少一種以上的添加劑。作為前述水溶性粘合劑，優選使用纖維素系或乙烯基系高分子化合物，具體來說有聚乙烯基吡咯烷酮、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯醇、甲基纖維素、茁黴多糖、瓊脂、明膠或藻酸鈉等。作為水溶性賦形劑，有糖醇或糖等。作為糖醇，可以例舉赤蘚糖醇、木糖醇或甘露糖醇等；作為糖，可以例舉乳糖或葡萄糖等。作為崩解劑，可以例舉前述的物質。崩解劑也可與崩解助劑一起使用。作為崩解助劑，優選易揮發物質，例如具有升華性質的樟腦、尿烷、尿素、碳酸氫銨或安息香酸等。在咀嚼片中上述添加劑的含量沒有特別的限制，可以在該技術領域中使用的範圍內適當選擇。
作為前述多層片，可以例舉組合了崩解性不同的層的片劑、具有含有不同腸內細菌的片劑、具有含腸內細菌的層與含有腸內細菌以外成分的層的片劑等。作為組合了崩解性不同的層的片劑，可以例舉組合了緩釋性層和速釋性層的片劑等。前述緩釋性層可以利用公知的方法製造，例如將腸內細菌微膠囊化，或如上述將層的周圍實施塗布而得到。另外，前述速釋性層也可以利用公知的方法製造，可以通過降低製片壓力而得到。而且，前述速釋性層，與製造上述咀嚼片時一樣，也可以通過選擇添加水溶性粘合劑、水溶性賦性劑或崩解劑等添加劑的種類或含量而製造。在具有含有腸內細菌的層與含有腸內細菌以外成分的層的片劑中，作為腸內細菌以外的成分沒有特別的限定。可以例舉(a)維生素類(例如，維生素A、維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素B12、維生素C、維生素D、維生素E、維生素K、煙酸、泛酸、葉酸、生物素等)、(b)礦物質類(例如，鈉、鉀、鈣、鎂、碘、氯、磷、鐵、銅、錳、硒、鋅、鉻、鉬等)、(c)胺基酸(例如，色氨酸、蛋氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、穀氨醯胺、穀氨酸、L-半胱氨酸、酪氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬醯胺、天冬氨酸、脯氨酸、精氨酸、組氨酸或絲氨酸等)或(d)食物纖維(例如，纖維素、半纖維素、葡聚糖、木質素或角質素等不溶性食物纖維；糊精(難消化性)、果膠質、瓜爾豆膠、黃原膠或甘露聚糖等水溶性食物纖維)等具有營養價值的物質。作為腸內細菌以外的成分，可以例舉如上述的其他藥理活性成分或如上述腸內細菌的增殖因子等。
作為本發明的片劑的製造方法，例如，將適當的賦形劑、粘合劑、抗凝劑、著色劑、香味劑、甜味劑等添加劑預先造粒，在得到的造粒物中加入並混合腸內細菌的活菌粉末、潤滑劑等添加劑，將得到的混合物通過製片機進行製片的間接製片法。另外，也有將腸內細菌的活菌粉末及所需的適當賦形劑、粘合劑、抗凝劑、著色劑、香味劑、甜味劑等添加劑進行混合，將該混合物通過公知的製片機進行製片的直接製片法。
下面，詳細論述各個步驟。
腸內細菌的活菌粉末，可以通過噴霧乾燥、冷凍乾燥、流化床乾燥而製造。其中，在本發明中，腸內細菌的活菌粉末優選通過噴霧乾燥來製造。
作為利用噴霧乾燥製造腸內細菌的活菌粉末的方法，可以例舉將含有腸內細菌的溶液或懸濁液在暖風中噴霧並乾燥的方法。在前述含有腸內細菌的溶液中使用的溶劑，可以使用該技術領域中公知的溶劑，但是優選使用水。根據需要也可以加入乙醇。在前述含有腸內細菌的懸濁液中使用的懸濁介質，也可以使用該技術領域中公知的懸濁介質，但是優選使用水或添加了乙醇等的水溶液。懸濁時，也可以使用懸濁劑。作為懸濁劑，可以使用例如藻酸鈉或甲基纖維素等公知的物質。在上述含有腸內細菌的溶液或懸濁液中，也可以添加保護劑。保護劑可以使用該技術領域中常用的物質，例如，抗壞血酸等維生素類；例如，穀氨醯胺、穀氨酸、L-半胱氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、絲氨酸或蘇氨酸等胺基酸；例如，葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖、甘露醇或麥芽糖醇等糖類或糖醇類；例如，乳果糖或低聚乳果糖等低聚糖類、環糊精或糊精等多糖類；例如，從菜籽、大豆或花生等得到的高級脂肪酸類脂肪；例如，從牛奶或大豆等得到的蛋白質、或肽等蛋白質分解物；例如，硫酸鎂等無機類；或除此之外，例如，蔗糖脂肪酸酯、蘋果酸、核酸類、酵母提取物、脫脂奶粉、腖、明膠或丹寧酸等。該保護劑可以單獨使用上述物質，也可以任意組合兩種以上使用。而且，該保護劑的添加量大約為溼菌體重量的0.1～5.0倍左右，優選0.5～3.0倍左右。在上述含有腸內細菌的溶液或懸濁液中，也可以進一步以通常的配合比例添加例如賦形劑、粘合劑、崩解劑或防靜電劑等該技術領域中通常使用的添加劑。
將上述含有腸內細菌的溶液或懸濁液進行噴霧乾燥時，作為該噴霧乾燥中使用的噴霧乾燥裝置，優選使用具備可以形成單微米級噴霧液滴的微粒化裝置的噴霧乾燥裝置。噴霧液滴的粒徑非常小時，每單位重量噴霧液滴的表面積增大，與乾燥風有效接觸，可以有效抑制乾燥風的熱引起的菌死亡或損傷。在此，所謂單微米級的噴霧液滴，是指噴霧液滴的粒徑在小數點後一位四捨五入之後為1～10μm。作為噴霧乾燥裝置，具體來說，可以例舉，其微粒化裝置為利用旋轉霧化器(旋轉圓盤)、加壓噴嘴或壓縮氣體力的雙流道噴嘴或四流道噴嘴的噴霧乾燥裝置。在本發明中，不論其形式，都可以使用上述任一種噴霧乾燥裝置，但從可以得到微小噴霧液滴的角度考慮，優選使用具有四流道噴嘴的噴霧乾燥裝置。該噴霧裝置可以是公知的裝置(例如，日本專利2797080中記載的裝置)。在具有四流道噴嘴的噴霧乾燥裝置中，作為四流道噴嘴的結構，例如，使氣體流道與液體流道成為一個系統時，該系統在噴嘴邊緣對稱設置兩個系統，而作為流體流動面的斜面設置在噴嘴邊緣。
從上述微粒化裝置中噴霧的腸內細菌的噴霧液滴，在噴霧乾燥裝置的乾燥室中被暖風乾燥，可以得到腸內細菌的活菌粉末。乾燥風的乾燥室入口的溫度(以下稱為「入口溫度」)為約2～400℃，優選為約5～250℃，更加優選為約5～150℃。入口溫度即使為約200～400℃的高溫，由於水分蒸發的氣化熱，被乾燥物的溫度不會變得那麼高。而且，通過縮短在乾燥室內的滯留時間，可以有效抑制活菌的死亡或損傷。另外，乾燥風的乾燥室出口溫度(以下稱為「出口溫度」)，為約0～120℃，優選為約5～90℃，更加優選為約5～70℃。而且，乾燥室也可以減壓。通過減壓，可以提高幹燥效率，縮短乾燥時間。乾燥室減壓後的壓力因噴霧液滴的大小而不同，所以不能一概而論，例如低真空範圍的壓力，具體來說，可例舉大約1.0×103～7.0×103pa。
作為利用流化床乾燥製造腸內細菌的活菌粉末的方法，可以例舉，一邊在流化床中用暖風使粉體飛揚，一邊將含有腸內細菌的溶液噴霧，包附在粉體上的方法。此時使用的成為核的粉體稱為基材。作為基材，沒有特別的限定，可以例舉玉米渣、大豆粉(黃粉)、脫脂乳(造粒的脫脂奶粉)、米粉(上新粉、包含糯米粉)、小麥粉、維生素類或胺基酸類等，其中優選維生素類或胺基酸類。在含有腸內細菌的溶液中，可加入用於保護腸內細菌的保護劑。作為保護劑，可以使用與噴霧乾燥時使用的保護劑相同的物質，但優選糖類。作為糖類，可以例舉蔗糖、麥芽糖或乳糖等。作為在本發明中使用的保護劑，優選使用10～20重量％的蔗糖。
作為具體的製造方法，首先向流化床乾燥機投入基材。此時同時調整微粒化裝置。從流化床乾燥機的料罐下方供給暖風，使基材流動。暖風的溫度優選為約40～60℃，更加優選為約50～55℃。將含有腸內細菌的溶液在微粒化裝置中進行微粒化，噴附到流化床內的基材上。噴霧液滴附著在基材上的同時，噴霧液滴的水分蒸發，在基材表面上形成有腸內細菌和根據需要的保護劑構成的薄層，從而得到活菌粉末。
作為利用冷凍乾燥製造腸內細菌的活菌粉末的方法，可以將含有乳酸菌的溶液或懸濁液在0.008～0.8託、約-20～-60℃的低溫下進行乾燥而製造。在該製造方法中，為了防止乾燥或溶解時菌體死亡，優選在含有乳酸菌的溶液或懸濁液中添加保護劑。作為前述保護劑，可以使用公知的物質，例如，脫脂乳、穀氨酸鈉、明膠及蔗糖、苯丙氨酸、組氨酸、檸檬酸、琥珀酸、酒石酸及碳酸鹼、葡萄糖、海藻糖、脫脂奶粉、抗壞血酸鈉、蒟蒻粉中含有的多糖類的部分水解產物等。
利用直接製片法時，在通過如上所述製造的腸內細菌的活菌粉末中，根據需要可以混合適當的賦形劑、粘合劑、潤滑劑、凝固防止劑、著色劑、香味劑、甜味劑等添加劑，利用公知的製片機將該混合物進行製片。作為製片機沒有特別的限定，但優選具有優良生產率的旋轉製片機或單髮式製片機。製片時的製片壓力，為約1～100kN/cm2，優選為約5～50kN/cm2，更加優選為約10～40kN/cm2。在上述方法中，潤滑劑和腸內細菌的活菌粉末不進行混合，作為替代可以在製片用的衝及衝模中加入潤滑劑進行製片。
利用間接製片法時，加入適當的賦形劑、粘合劑、抗凝劑、著色劑、香味劑、甜味劑等添加劑而進行造粒，製造製片用的造粒物。造粒物的製造可以通過公知的方法進行，例如可以使用流化床造粒、攪拌造粒、旋轉造粒、旋轉流化床造粒、擠壓造粒或乾式造粒等公知的造粒機容易地進行。在得到的製片用的造粒物中，添加混合通過上述製造方法製造的腸內細菌的活菌粉末、潤滑劑等添加劑，利用製片機將得到的混合物進行製片。作為製片機沒有特別的限定，但是優選具有優良生產率的旋轉製片機或單髮式製片機。製片時的製片壓力為約1～100kN/cm2，優選為約5～50kN/cm2，更加優選為約10～40kN/cm2。在本方法中，潤滑劑和腸內細菌的活菌粉末不進行混合，作之以可以在製片用的衝及衝模中加入潤滑劑進行製片。
本發明的片劑為咀嚼片的形態時，除了利用通常方法製造之外，可以通過下述方法製造。可以例舉在PTP(擠壓包裝)的泡罩中注入腸內細菌、甘露醇等糖類及瓊脂等凝膠化劑的懸濁液，通過冷凍乾燥或減壓乾燥除去水分，在泡罩內形成片劑的方法。可以例舉將在腸內細菌的活菌粉末中添加了以糖類為主體的水溶性粘合劑的添加劑的粉體，在低壓條件下壓縮成形之後，將片劑放置在加溼環境中使其溼潤，再將其乾燥的方法。在腸內細菌的活菌粉末中添加聚乙二醇(ポリエリレングリコ一ル)等水溶性熔融性粘合劑的粉體，在低壓壓縮成形之後，在比水溶性熔融性粘合劑的熔點高的溫度條件下溶解前述粘合劑，之後將水溶性熔融性粘合劑再次凝固的方法。
本發明的片劑作為多層片的形態時，可以通過下述方法製造。作為第一種方法，有將構成各層的製片原料層狀重疊，將該物質製片而形成多層性片劑的方法。此時製片壓力優選為約5～50kN/cm2。作為第二種方法，有將構成各層的製片原料預先在低製片壓力(5～30kN/cm2)條件下進行製片時，將得到的片劑狀各層進行層壓，在比起初高的低製片壓力(10～50kN/cm2)條件下進行製片而形成多層性片劑的方法。為了在製片時降低對腸內細菌的影響，優選後一方法。多層片為三層以上時，優選含有腸內細菌的層存在於片劑外側。
本發明中含有腸內細菌的片劑，其用途沒有限定，可以在廣範圍內使用。例如，本發明的片劑可以作為藥品、食品或飼料使用。而且，也可以用作農作物的肥料或農藥。
例如，乳酸菌類作為有用的腸內細菌之一已被公知，對於健康具有重大影響。特別是對於雙尾菌、乳酸球菌或乳酸桿菌的生理學意義出現了許多報導，明確了在腸內產生乳酸或醋酸等有機酸而抑制有害菌的作用，維生素的產生及免疫力的賦活化等。從而，本發明的片劑，可以作為以人、家畜動物或寵物動物等的健康維持強化或疾病的預防或治療為目的的藥品、食品或飼料使用。
本發明的片劑，具有恢復腸黏膜，或腸管的酶電位在應力狀況下變化時，具有調節該電位的作用。而且，可以使腸內細菌群的功能正常化，促進維生素及蛋白質的合成、消化過程或酶過程及吸收過程，防止病原性微生物群的形成，也具有刺激免疫應答的作用。因此，本發明的片劑，例如可以用於腹瀉、便秘、高膽固醇血症、肝疾病、免疫力下降性疾病、腸炎(例如，胃腸炎或結腸炎等)的治療或預防；食品、藥劑、化學藥品或物理藥劑引起失調之後，或外科侵入、化療或接觸感染症後的腸的恢復；對於內毒素吸收的阻礙及對內因性毒物生成的拮抗作用。在前述用途中使用時，本發明的片劑中優選含有乳酸菌或雙尾菌。
本發明的片劑，可以作為點心類直接攝取，也可以添加在酸奶或奶酪等乳製品、點心類或飲料類等中。而且，乳酸菌類在豆醬、醬油、鹹菜或日本酒等食品的製造工序中，對於風味或保存性的提高或質量的維持具有重大意義。因此，本發明的片劑可以用於前述食品的製造。
實施例[實施例1]含腸內細菌片劑的製造[菌體的培養]將利用GAM培養基(日水製藥株式會社製造)預先增菌的兩岐雙岐桿菌的培養液，在同一種培養基中接種0.1重量％，在37℃條件下培養16小時。將其離心分離，得到的沉澱物作為溼菌體。
以甘露醇0.5M、穀氨酸鈉0.5M、精氨酸0.1M、琥珀酸鈉0.1M、硫酸鎂0.01M的濃度調製的水溶液中，以達到35重量％的標準加入糊精調製的分散介質中，將得到的溼菌體懸濁。
將如上述製造的菌懸濁液，使用具有四流道噴嘴(如日本專利2797080號記載)的噴霧乾燥機進行噴霧乾燥。也就是說，將從兩個液體流道以8mL/分(4mL/分/1mm噴嘴)的速度供給菌懸濁液，從兩個氣體流道以40NL/分(在20℃條件下換算的值)的速度供給壓縮氣體而產生的噴霧液滴，通過乾燥風進行乾燥，製造菌末。其中，乾燥風的入口溫度為100℃，以1.0m3/分的比例向乾燥室供給，出口溫度為67℃。
在乳糖造粒物中混合通過上述噴霧乾燥而得到的菌末及硬脂酸鎂，作為製片原料。相對於製片原料總量，菌末的重量比例為1重量％，硬脂酸鎂的重量比例為0.5重量％。將該製片原料使用D51型製片機(株式會社菊水製作所製造)，以10kN/cm2的製片壓力進行製片。使片劑的直徑為9mm，重量為300mg，硬度為49～68.6N(5～7kgf)。
製片原料及片劑中的活菌數的測定製片原料及片劑中的活菌數通過以下方法測定。對於片劑，輕輕碎成粉末，並均勻混合。將製片原料及成為粉末狀的片劑各自精確量取10.0g，並加入稀釋液，使總量達到100mL。之後強烈振蕩混合，在35～37℃條件下大約保溫30分鐘之後再次振蕩混合。準確量取1mL，重複進行加入到另外準確分液的稀釋液9mL中的操作，將達到1mL中含有20～200個左右活菌濃度的溶液作為試液。在三個陪替(petri)式培養皿中各加入1mL試液，其中各自加入保持45～48℃的雙尾菌定量用的瓊脂培養基20mL並迅速混合、固化。在35～37℃條件下無氧培養48～72小時，統計出現的群，求得平均群數。製片原料及片劑各1g中的活菌數通過下式計算。
活菌數(CFU/g)＝平均群數×稀釋倍率此時，雙尾菌定量用的瓊脂培養基通過加熱以下成分中馬血以外的成分進行溶解，調整至pH為7.2，利用高壓蒸汽滅菌器在115℃條件下加熱20分鐘進行滅菌之後，冷卻至50℃，並加入馬血來製造。
牛肝臟浸出液 150mL動物肉制腖 10g酪蛋白制腖 5g酵母提取物 5g肉提取物 3g大豆制腖 3g葡萄糖 10g磷酸氫鉀 1g磷酸二氫鉀 1g澱粉 0.5gL-鹽酸半胱氨酸 0.5g硫酸鎂 0.2g氯化鈉 0.01g硫酸亞鐵 0.01g硫酸錳 7mg聚山梨醇酯80 1g瓊脂 15g
馬血 50mL精製水 790mLpH7.1～7.3另外，上述稀釋液通過混合以下成分，利用高壓蒸汽滅菌器在121℃條件下加熱15分鐘進行滅菌而調製。
無水磷酸氫鈉 6.0g磷酸二氫鉀 4.5g聚山梨醇酯80 0.5gL-鹽酸半胱氨酸 0.5g瓊脂 1.0g精製水 1000mLpH6.8～7.0[實施例3]製片時殘存率的測定製片時的殘存率利用下面計算式算出。
製片時的殘存率(％)＝1g片劑中的活菌數/1g製片原料中的活菌數×100另外，片劑的硬度利用片劑破壞強度測定器(TH-203RP富山產業株式會社製造)進行測定。
表1
保存穩定性的測定將實施例1中製造的片劑在40℃、75％RH的條件下保存，測定經過規定期間之後的活菌數。片劑中的活菌數，通過如下方法測定。取50片以上的片劑，精確測量其質量，求得平均質量。之後，通過與實施例2相同的方法求得平均群數。根據得到的值，通過下式得到了片劑9片中的活菌數。
片劑9片中的活菌數(CFU/g)＝平均群數×稀釋倍率×(平均重量(g)×10/試液採集量(g))×9根據得到的活菌數，通過下式算出穩定性(％)。
穩定性(％)＝{經過規定期間後片劑中的活菌數(CFU/片劑9片)/試驗開始時片劑中的活菌數(CFU/片劑9片)}×100表2
工業實用性顆粒劑、散劑或細粒劑，對於服用者會產生粗澀或塞牙的不適感。膠囊劑，在運輸時會變形，或被破壞的可能性較高。但是片劑形態，不會產生前述問題，對於利用者可以提供非常容易處理的藥品或食品。即，本發明的片劑，容易服用，也不必擔心運輸時會變形或被破壞。
進而，本發明的片劑，因為製片時的菌體殘存率為約20％以上，所以可以有效攝取腸內細菌。而且，本發明的片劑，在40℃、75％RH條件下保存6個月的穩定性為20％以上，所以具有可以長期保存的優點。
權利要求
1.一種含有腸內細菌的片劑，其特徵在於，製片時的菌體殘存率為20％以上，在40℃、75％RH條件下保存6個月後的穩定性為約20％以上。
2.根據權利要求1所述的片劑，其特徵在於，活菌數為1.0×105～2.0×1011CFU/g。
3.根據權利要求1所述的片劑，其特徵在於，硬度為30～300N。
4.根據權利要求1所述的片劑，其特徵在於，腸內細菌為由雙尾菌、乳酸桿菌、乳酸球菌及有孢子性乳酸菌構成的組中選擇的菌。
全文摘要
本發明提供可以有效攝取腸內細菌，且可以長期保存的含有腸內細菌的片劑。
文檔編號A61K9/20GK1522711SQ0310372
公開日2004年8月25日 申請日期2003年2月17日 優先權日2003年2月17日
發明者水口泰治, 荒井輝彥, 細川好彥, 山口智史, 史, 彥 申請人:表飛鳴製藥株式會社