利用胰腺癌癌症幹細胞特性的胰腺癌新型生物標記及用途

2023-05-18 16:42:21 1

利用胰腺癌癌症幹細胞特性的胰腺癌新型生物標記及用途
【專利摘要】本發明涉及胰腺癌幹細胞及針對胰腺癌的新的分子標記、標記檢測方法及篩選方法。本發明作為從胰腺癌細胞株中發掘的標記，是一種通過胰腺癌幹細胞標記的檢測，對胰腺癌，尤其是對早期的胰腺癌進行檢測的標記。並且，利用本發明的標記，能夠對胰腺癌進行準確的診斷及預後分析。
【專利說明】利用胰腺癌癌症幹細胞特性的胰腺癌新型生物標記及用途
【【技術領域】】
[0001]本發明涉及利用胰腺癌癌症幹細胞特異新型生物標記及其用途。
【【背景技術】】
[0002]有報告指出，癌組織與普通臟器一樣，也存在維持和再生癌組織的癌症幹細胞(cancer stem cells or tumor initiating cells),這癌症幹細胞既能干預癌症的初始的同時，對癌症治療結束後減少的癌細胞的再生方面也進行幹預，從而對癌症的復發或轉移及抗癌治療的耐性引發方面產生很深的影響(BB Zhou et al.Nature Reviews DrugDiscovery, 8:806-823 (2009))。因此，為了從根本上診斷及治療癌症，應關注癌症幹細胞，其雖然只佔癌組織的極少一部分，但對癌症的發病、維持及復發方面起著核心作用，並且，對癌症幹細胞的更多的理解也將有助於用於早期診斷的診斷用標記的研發。
[0003]胰腺癌是一種5年生存率為I~4%，平均存活期間達到5個月的致命癌症，它在人體癌症中顯示最不良的預後。80~90%患者中，在診斷時，由於是在無法進行期待完全治癒的根治性切除的狀態下發現，因此，預後不良，並且，由於治療主要依賴於抗癌療法，因此，比任何人體癌症都要迫切需要早期診斷法的研發。
[0004]到目前為止，對胰腺癌具有療效的包括5-氟尿嘧啶、吉西他濱(gemcitabine)及特羅凱(tarceva)的幾種抗癌劑的治療效果非常讓人失望，並且，對抗癌治療的反應率僅為15%上下，而此類事實啟示，為了提高胰腺癌患者的預後，迫切需要更加有效的早期診斷法及治療法的研發。
[0005]本說明書全文中 ，參照多篇論文及專利文獻，並標示了其引用。所引用的論文及專利文獻的公開內容，作為參照全部插入到本說明書中，從而更加明確地說明本發明所屬【技術領域】的水平及本發明的內容。
【發明概述】
[0006]【要解決的問題】
[0007]本
【發明者】為了發掘一種對胰腺癌癌症幹細胞和/或胰腺癌進行迅速、準確的分子診斷的新型生物標記，銳意努力研究。其結果，查明所發掘的多個生物標記能夠對根據胰腺癌癌症幹細胞的生物學特性的診斷，尤其能夠對胰腺癌進行早期診斷，並且，也是一種能夠判定預後的標記及用於今後治療目標的標誌物，從而完成本發明。
[0008]因此，本發明的目的在於，提供胰腺癌癌症幹細胞的特異生物標記檢測用試劑盒。
[0009]本發明的另一目的在於，提供胰腺癌的診斷或預後分析用試劑盒。
[0010]本發明的再一目的在於，為了提供胰腺癌的診斷或預後所需的信息，提供檢測胰腺癌癌症幹細胞標記的方法。
[0011]本發明的又一目的在於，為了提供胰腺癌的診斷或預後所需的信息，提供檢測胰腺癌標記的方法。
[0012]本發明的還有一個目的在於，提供胰腺癌的預防或治療用物質的篩選方法。[0013]本發明的其他目的在於，提供癌症的預防或治療用藥劑學組合物。[0014]本發明的其他目的在於，提供癌細胞的增殖抑制方法。[0015]本發明的其他目的在於，提供癌症的預防或治療方法。[0016]本發明的其他目的及優點將通過
【發明內容】
、權利要求書及附圖變得更加明確。[0017]【解決問題的手段】[0018]根據本發明的一實施方式，本發明提供一種胰腺癌癌症幹細胞標記檢測用試劑盒，其包含:(i)寡肽、單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合(chimeric)抗體、配體、肽核酸(PNA, Peptide nucleic acid)或適配體(aptamer),分別與選自包含基因庫(Genbank)接入號碼為AAH14372.2的蛋白質、基因庫接入號碼為CAD89908.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001077415.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAI21475.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653337.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAA27309.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW66403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAQ63403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAB34148.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH47896.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001619.1的蛋白質、基因庫接入號碼為2PD5_A的蛋白質、基因庫接入號碼為AAF72885.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653280.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF83085.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH70129.1的蛋白質、基因庫接入號碼為1X71_A的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB55338.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW68058.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF85629.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB70777.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_109591.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAD22767.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAC04252.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW47735.1的蛋白質及基因庫接入號碼為EAW97581.1的蛋白質的組中的一種以上蛋白質進行特異性結合，或者(ii)引物或探針，與編碼上述各個蛋白質的多核苷酸相結合。[0019]根據本發明的另一實施方式，本發明提供一種胰腺癌診斷或預後分析用試劑盒，其包含:(i)寡肽、單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合(chimeric)抗體、配體、肽核酸(PNA, Peptide nucleic acid)或適配體(aptamer),分別與選自包含基因庫接入號碼為AAH14372.2的蛋白質、基因庫接入號碼為CAD89908.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001077415.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAI21475.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653337.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAA27309.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW66403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAQ63403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAB34148.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH47896.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001619.1的蛋白質、基因庫接入號碼為2PD5_A的蛋白質、基因庫接入號碼為AAF72885.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653280.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF83085.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH70129.1的蛋白質、基因庫接入號碼為1X71_A的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB55338.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW68058.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF85629.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB70777.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_109591.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAD22767.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAC04252.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW47735.1的蛋白質及基因庫接入號碼為EAW97581.1的蛋白質的組中的一種以上蛋白質進行特異性結合，或者(ii)引物或探針，與編碼上述各個蛋白質的多核苷酸相結合。[0020]本
【發明者】為了發掘對胰腺癌癌症幹細胞和/或胰腺癌進行迅速、準確的分子診斷的新的生物標記，銳意努力研究。其結果，查明所發掘的多個生物標記能夠診斷出胰腺癌癌症幹細胞，尤其對胰腺癌進行早期診斷，並且，也是一種能夠判定預後的標記。
[0021]本發明的特徵在於，利用通過鑑定出從胰腺癌細胞株中分離的胰腺癌癌症幹細胞中進行特異性表達的蛋白質而被查明的新型胰腺癌癌症幹細胞標記，能夠將胰腺癌在早期進行非常準確的診斷及預後分析。
[0022]本說明書中的句子「胰腺癌的診斷或預後分析用試劑盒」意味著包含胰腺癌的診斷或預後分析用組合物的試劑盒。因此，上述術語「胰腺癌的診斷或預後分析用試劑盒」能夠與「胰腺癌的診斷或預後分析用組合物」相互交替使用或混用。
[0023]本說明書中的術語「診斷」包括判定特定疾病或疾患的一個客體的感受性(susceptibility),判定一個客體是否現在具有特定疾病或疾患，判定患有特定疾病或疾患的一個客體的預後(prognosis)(例如,鑑定預轉移性或轉移性癌症狀態,決定癌症的階段或決定對治療的癌症的反應性)或治療指標(therametrics)(例如,為了提供有關療效的信息，對客體的狀態進行監視)。
[0024]本發明中的術語「胰腺癌(pancreatic cancer)」意味著胰腺細胞中起源的癌症。胰腺癌有很多種類，但由於胰管細胞中產生的胰管腺癌佔90%左右，因此，一般來說，胰腺癌意味著胰管腺癌。除此之外，還有囊性癌(囊腺癌)、內分泌腫瘤等。胰腺癌患者中約有5?10%具有遺傳易感性，在胰腺癌患者中，存在胰腺癌家族史的情況約為7.8%左右，這與在一般人群中的胰腺癌發生率0.6%相比，頻率要高。胰腺癌是一種5年生存率在5%以下的預後非常差的癌症。其理由在於，大部分的癌症都是在進行後才能發現，因此，發現當時，能夠進行手術切除的情況在20%以內，且即使肉眼觀察到已完全切除，也會因細微的轉移而減少生存率的提聞，並且，對抗癌劑及放射治療的反應低。因此，能夠提聞生存率的最重要的方法是在無症狀或在非特異性時，早期發現並進行手術。
[0025]本
【發明者】確認，在使用本發明的標記時，能夠從個體獲得對胰腺癌的發病與否方面敏感度及可靠性高的結果。
[0026]本發明中的術語「診斷用標記,用於診斷的標記或診斷標記(diagnosis marker)」是指將胰腺癌細胞或組織與正常細胞或組織區分地進行診斷的物質，與正常細胞相比，包含在具有胰腺癌的細胞或組織中顯示增加形態的多肽或核酸(例如，mRNA等)、脂質、糖脂質、糖蛋白及糖(單糖，二糖，低聚糖等)等有機生物體分子等。對於本發明的目的，上述胰腺癌診斷標記是選自包含基因庫接入號碼為AAH14372.2的蛋白質、基因庫接入號碼為CAD89908.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001077415.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAI21475.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653337.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAA27309.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW66403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAQ63403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAB34148.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH47896.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001619.1的蛋白質、基因庫接入號碼為2PD5_A的蛋白質、基因庫接入號碼為AAF72885.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653280.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF83085.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH70129.1的蛋白質、基因庫接入號碼為1X71_A的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB55338.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW68058.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF85629.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB70777.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_109591.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAD22767.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAC04252.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW47735.1的蛋白質及基因庫接入號碼為EAW97581.1的蛋白質的組中的一種以上蛋白質，並且，是在胰腺癌癌症幹細胞中增加表達的蛋白質。此類標記不僅包含蛋白質，還包含對任一種蛋白質進行編碼的DNA或mRNA，優選地，是包含兩個以上這些標記的複合標記。
[0027]本發明中，在胰腺癌的診斷中所使用的句子「蛋白質表達水平的測定」是在生物學試樣中，從上述多個基因中確認已表達的蛋白質是否存在和確認表達程度，優選地，意味著利用對上述基因的蛋白質進行特異性結合的抗體，確認蛋白質的量。為此進行的分析方法的例子有蛋白質印跡法、酶聯免疫吸附測定(enzyme linkedimmunosorbent assay, ELISA)、放射免疫分析(RIA:Radioimmunoassay)、放射免疫擴散法(radioimmunodiffusion)、奧克特洛尼(Ouchterlony)免疫擴散法、火箭(rocket)免疫電泳、組織免疫染色、免疫沉澱法(Immunoprecipitation Assay)、補體結合試驗(ComplementFixation Assay)、突光活化細胞分選(Fluorescence Activated Cell Sorter,FACS)、蛋白晶片(protein chip)等,但本發明的分析方法並不局限於上述例子。
[0028]本發明中，「抗體」意味著對抗原性部位進行指示的特異性蛋白質分子。對於本發明的目的，抗體意味著對標記蛋白質進行特異性結合的抗體，且均包含多克隆抗體、單克隆抗體及重組抗體。
[0029]如上所述，由於查明了新型胰腺癌標記蛋白質，因此，利用它來生成抗體可以利用所屬領域廣泛公知的技術容易地進行製備。
[0030]多克隆抗體能夠通過所屬領域廣泛公知的方法進行生產，上述方法是將胰腺癌標記蛋白質抗原向動物注射後，從動物身上採血，從而獲得包含抗體的血清。此類多克隆抗體能夠從山羊、兔子、羊、猴、馬、豬、牛、狗等任一動物種類的宿主中製備而得。
[0031 ] 單克隆抗體能夠利用所屬領域廣泛公知的雜交瘤細胞的方法(hybridomamethod)(參照 Kohler 及 Milstein( 1976)European Jounral of Immunology6:511_519)或嗤菌體抗體庫(Clackson et al, Nature, 352:624-628,1991 ；Marks et al, J.Mol.Biol.，222:58，1-597，1991)技術來製備。通過上述方法製備的抗體能夠利用凝膠電泳、透析、鹽沉澱、離子交換色譜法及親和色譜法等方法來進行分離、提煉。
[0032]並且，本發明的抗體既是一種具有2個整體長度的輕鏈及具有2個整體長度的重鏈的完整的形態，也是一種包含抗體分子的功能性片段。抗體分子的功能性片段意味著至少擁有抗原結合功能的片段，其中有Fab、F (ab』)、F (ab』)2及Fv等。
[0033]本發明中，與酶的活性型相結合的適配體為寡核酸或肽分子，而適配體的一般內容在 Bock LC et al.,Nature355(6360): 564 - 6( 1992)；Hoppe-Seyler F,Butz K"Peptideaptamers:powerful new tools for molecular medicine".J Mol Med.78 (8):426 - 30(2000) ；Cohen BA, Colas P,Brent R.〃An artificial cell-cycle inhibitor isolatedfrom a combinatorial library".Proc Natl Acad Sci USA.95 (24): 14272 - 7 (1998)中已有詳細的公開。
[0034]根據本發明的優選實施例，本發明為了診斷胰腺癌癌症幹細胞和/或胰腺癌，包含與選自上述蛋白質組中的一種以上蛋白質分別進行特異性結合的寡肽、單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合(chimeric)抗體、配體、肽核酸(PNA, Peptide nucleic acid)或適配體(aptamer),更優選地,是寡肽、單克隆抗體、多克隆抗體或嵌合抗體,進而優選地,是單克隆抗體或多克隆抗體，最優選地，是單克隆抗體。
[0035]本發明中，優選地，上述抗體是與微觀粒子(micro particle)相結合的抗體(conjugated antibody)。並且,優選地,上述微觀粒子是有色乳膠(colored latex)或膠體金粒子(colloidal gold particle)。本發明中，上述抗體可以是能夠測定基於對上述20個標記的公知的mRNA基因進行編碼的蛋白質的表達水平的任何抗體，但優選地，上述試劑盒是免疫分析(immunoassay)用試劑盒,最優選地,上述試劑盒是流式突光分析試劑盒、蛋白質微陳列試劑盒或酶聯免疫吸附測定試劑盒。
[0036]上述流式螢光分析試劑盒、蛋白質微陳列試劑盒或酶聯免疫吸附測定試劑盒包含針對選自上述蛋白質組中的任一種以上的蛋白質的多克隆抗體及單克隆抗體以及對結合有標誌物的上述多克隆抗體和單克隆抗體的第二抗體。
[0037]本發明中，試劑盒的種類的例子有免疫層析試紙條試劑盒、流式螢光分析試劑盒、蛋白質微陳列試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒或免疫斑點試劑盒等，但是，在本發明中能夠使用的試劑盒的種類並不局限於上述例子。
[0038]上述試劑盒為了執行酶聯免疫吸附測定，還能追加包含所需的必要因素。酶聯免疫吸附測定試劑盒包含對標記蛋白質的特異抗體。抗體作為一種對各個標記蛋白質的特異性及親和性高，對其他蛋白質幾乎沒有交叉反應性的抗體，是單克隆抗體、多克隆抗體或重組抗體。並且，酶聯免疫吸附測定試劑盒能夠包含對於對照組蛋白質特異的抗體。除此之夕卜，酶聯免疫吸附測定試劑盒還能包含對相結合的抗體進行檢測的試劑，例如，標誌的第二抗體、發色團(chromophores)、酶(例如,與抗體相結合)及能夠與其基質或抗體相結合的其他物質等。
[0039]並且，上述試劑盒為了同時分析複合標記，還能追加包含執行蛋白質微陳列所需的必要因素。微陳列試劑盒包含在固體上相結合的標記蛋白質的特異抗體。抗體作為一種對各個標記蛋白質的特異性及親和性高，對其他蛋白質幾乎沒有交叉反應性的抗體，是單克隆抗體、多克隆抗體或重組抗體。並且，蛋白質微陳列試劑盒能夠包含對於對照組蛋白質特異的抗體。除此之外，蛋白質微陳列試劑盒還能包含對相結合的抗體進行檢測的試劑，例如，標誌的第二抗體、發色團、酶(例如，與抗體相融合)及能夠與其基質或抗體相結合的其他物質等。利用蛋白質微陳列分子分析試樣的方法是從試樣中分離蛋白質，並將分離的蛋白質與蛋白晶片進行雜交，從而形成抗原-抗體複合體，並對其進行讀取，來確認蛋白質的存在或表達程度，從而提供胰腺癌的診斷所需的信息。
[0040]流式突光分析(Luminex Assay)是在未對少量(10?20 μ I)的患者試樣進行預處理的狀態下，能夠同時測定最多100種分析物(analyte)的高通量(high-throughput)定量分析方法，上述方法由於靈敏度良好(Pg單位)，能夠在較短時間內進行定量(3?4小時)，因此，是一種能夠代替現有的酶聯免疫吸附測定(ELISA)或酶聯免疫斑點法(ELISP0T)的分析方法。上述流式突光分析(Luminex Assay)作為在96孔板(well plate)的各個孔中，能夠同時分析100種以上的生物學試樣的多路復用突光微孔板(multiplexed fluorescentmicroplate)分析方法,使用兩種雷射探測儀(laser detector)進行實時的信號傳遞,從而對區分100個以上的不同顏色組的聚苯乙烯珠(polystyrene bead)進行定量。上述100個珠以如下方法進行區別。一側是由紅色突光珠(red fluorescence bead)分成十個步驟以上,另一側是由橙色突光珠(orange fluorescence bead)分成十個步驟,來顯示強度(intensity)的差異，且它們之間的多個珠(bead)按分別不同的比例混合紅色(red)和橙色(orange)的比例(ratio),從而在整體上構成100個顏色編碼珠集(color-coded beadset)。並且，各個珠上附著著所要分析的蛋白質的抗體，因此，通過利用它的免疫抗體反應也能進行蛋白質的定量。該試樣使用兩個雷射(laser)進行分析，S卩，一個雷射(laser)檢測(detection)珠(bead)，從而獲得識別號，而另一個雷射檢測與黏附在珠上的抗體進行反應的試樣內的蛋白質。因此，能夠在一個孔中同時分析100種生物體內的蛋白質。此分析的優點在於，能夠以15 μ I左右的少量試樣也能進行檢測。
[0041]本發明的能夠執行流式螢光分析的螢光試劑盒包含對標記蛋白質特異的抗體。抗體作為一種對各個標記蛋白質的特異性及親和性高，對其他蛋白質幾乎沒有交叉反應性的抗體，是單克隆抗體、多克隆抗體或重組抗體。並且，螢光試劑盒能夠包含對於對照組蛋白質特異的抗體。除此之外，螢光試劑盒還能包含對相結合的抗體進行檢測的試劑，例如，標誌的第二抗體、發色團、酶(例如，與抗體相接合)及能夠與其基質或抗體相結合的其他物質等。上述抗體可以是與微觀粒子(micro particle)相結合的抗體(conjugated antibody),且上述微觀粒子也可以是有色乳膠(colored latex)或膠體金粒子(colloidal goldparticle)。
[0042]本發明的胰腺癌診斷或預後分析用試劑盒中，包括上述胰腺癌診斷用免疫層析試紙條的胰腺癌診斷試劑盒是一種為了執行在5分鐘內獲得分析結果的快速測試(Rapidtest)，包含所需的必要因素為特徵的診斷試劑盒。優選地，上述免疫層析試紙條包括(a)吸收試樣的樣品墊(sample pad) ; (b)與試樣內的上述20個基因組中選擇的任一種以上的基因蛋白質相結合的結合墊(conjugate pad) ; (c)處理了試線(test line)及控制線(control line)的測試膜(test membrane),上述試線包含上述20個基因組中選擇的任一種以上的基因蛋白質的單克隆抗體，Cd)吸收剩餘試樣的吸收墊(absorption pad) Ke)支撐體。並且，包含免疫層析試紙條(Immunochromatographic strip)的快速測試試劑盒包含對標記蛋白質的特異抗體。上述抗體作為一種對各個標記蛋白質的特異性及親和性高，對其他蛋白質幾乎沒有交叉反應性的抗體，是單克隆抗體、多克隆抗體或重組抗體。並且，快速測試試劑盒能夠包含對對照組蛋白質特異的抗體。除此之外，快速測試試劑盒還能包含對相結合的抗體進行檢測的試劑，例如，固定有特異抗體和第二抗體的硝酸纖維素膜、與結合了抗體的珠相結合的膜、在吸收墊和樣品墊等的診斷中所需的其他物質等。
[0043]優選地，本發明中基於免疫斑點分析的蛋白質表達水平的測定應包括以下步驟:Ca)膜上打點(dotting)生物學試樣的步驟，(b)將對選自包含上述20個基因的組中的任一種以上的基因蛋白質特異的抗體與上述打點的膜進行反應的步驟，以及(C)在上述進行反應的膜中添加接合有標誌體的第二抗體，並進行發色的步驟；優選地，上述酶聯免疫吸附測定分析方法包括以下步驟:(a)將對選自具有上述20個標記的鹼基序列的基因組中的任一種以上的基因蛋白質特意的抗體I吸附於固相體的步驟，(b)附著於上述固相體的抗體I和胰腺癌疑似患者的生物學試樣相接觸，來形成抗原-抗體複合體的步驟，(C)處理對通過具有選自結合有標誌物的上述20個標記的喊基序列的基因組中的I種以上基因進行編碼的蛋白質特異的抗體2，來與上述複合體進行結合的步驟，以及(d)檢測上述標誌物，來測定蛋白質的濃度的步驟；優選地，上述蛋白質微陳列分析方法包括以下步驟:(a)將對選自由上述20個標記組成的基因組中的I個以上基因蛋白質特異的多克隆抗體固定於晶片的步驟，(b)將上述固定的多克隆抗體I與胰腺癌疑似患者的生物學試樣相接觸，來形成抗原-抗體複合體的步驟，(c)處理對通過具有選自結合有標誌物的上述20個標記的鹼基序列的基因組中的任一種以上基因進行編碼的蛋白質特異的單克隆抗體，來與上述複合體進行結合的步驟，以及(d)檢測上述標誌物，來測定蛋白質的濃度的步驟。
[0044]通過上述分析方法，能夠對正常對照組中的抗原-抗體複合體的形成量和胰腺癌疑似患者中的抗原-抗體複合體的形成量進行比較，並在胰腺癌標記基因中判斷作為蛋白質的重要的表達量是否增加，從而診斷胰腺癌疑似患者的實際胰腺癌是否發病。
[0045]本發明中的術語「抗原-抗體複合體」意味著胰腺癌標記蛋白質和對此特異的抗體的結合物，抗原-抗體複合體的形成量能夠通過檢測標籤(detection label)的信號的大小進行定量測定。
[0046]此類檢測標籤能夠選自包含酶、螢光物、配體、發光物、微觀粒子(microparticle)、氧化還原分子及放射性同位素的組中，但並不局限於此。作為檢測標籤，在使用酶的情況下，能夠使用的酶有葡糖苷酸酶、β-D-葡萄糖苷酶、β-D-半乳糖苷酶、脲酶、過氧化物酶、鹼性磷酸酶、乙醯膽鹼酯酶、葡萄糖氧化酶、己糖激酶和焦磷酸化酶(GDPase)、核糖核酸酶(RNase)、葡萄糖氧化酶和螢光素酶、磷酸激酶、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶、穀草轉氨酶、磷酸苯酚丙酮酸脫羧酶及內醯胺酶等，且並不局限於此。螢光物包含螢光素、異硫氰酸酯、羅丹明、藻紅蛋白、藻藍蛋白、別藻藍蛋白、鄰苯二醛及螢光胺等，且並不局限於此。配體包含生物素衍生物等，且並不局限於此。發光物包含吖啶酯、蟲螢光素、螢光素酶等，且並不局限於此。微觀粒子包含膠態金、有色乳膠等，且並不局限於此。氧化還原分子包含二茂鐵、釕絡合物、紫羅鹼、醌、Ti離子、Cs離子、二醯亞胺、1，4_苯醌、對苯二酚、K4W (CN) 8、[Os (bpy)3]2+、[RU (bpy)3]2+及[MO (CN) 8]4_ 等，且並不局限於此。放射性同位素包含 3H、14C、32P、35S、36Cl、51Cr、57Co、58Co、59Fe、90Y、1251、1311 及 186Re等，且並不局限於此。
[0047]優選地，蛋白質表達水平的測定利用酶聯免疫吸附測定方法。酶聯免疫吸附測定包括直接酶聯免疫吸附測定、間接酶聯免疫吸附測定、直接夾心酶聯免疫吸附測定及間接夾心酶聯免疫吸附測定等多種酶聯免疫吸附測定方法。上述直接酶聯免疫吸附測定利用對附著於固體支撐體的抗原進行鑑定的標誌的抗體，上述間接酶聯免疫吸附測定利用在對附著於固體支撐體的抗原進行鑑定的抗體的複合體中，對捕獲抗體進行鑑定的標誌的抗體，上述直接夾心酶聯免疫吸附測定利用附著於固體支撐體的抗體和抗原的複合體中鑑定抗原的標誌的另一抗體，上述間接夾心酶聯免疫吸附測定利用與另一抗體進行反應後，鑑定此抗體的標誌的第二抗體，上述另一抗體在附著於固體支撐體的抗體和抗原的複合體中鑑定抗原。更優選地，通過夾心酶聯免疫吸附測定方法進行檢測，上述夾心酶聯免疫吸附測定方法是在固體支撐體附著抗體，對試樣進行反應後，附著對抗原-抗體複合體的抗原進行鑑定的標誌的抗體，從而進行酶發色，或者附著對鑑定抗原-抗體複合體的抗原的抗體進行標誌的第二抗體，從而進行酶發色。確認胰腺癌標記蛋白質和抗體的複合體形成程度，從而能夠確認胰腺癌是否發病。
[0048]並且，優選地，利用蛋白質印跡法，其利用對上述胰腺癌標記的一種以上抗體。在試樣中分離整體蛋白質並進行電泳，來將蛋白質按大小進行分離之後，向硝酸纖維素膜移動，從而與抗體進行反應。所生成的抗原-抗體複合體的量通過利用標誌的抗體進行確認的方法，對基於基因的表達生成的蛋白質的量進行確認，從而確認胰腺癌是否發病。上述檢測方法通過調查在對照組中的標記基因的表達量和在產生胰腺癌的細胞中的標記基因的表達量的方法形成。mRNA或蛋白質水平能夠以上述的標記蛋白質的絕對(例:yg/ml)或相對(例:信號的相對強度)差異顯示。
[0049]並且，優選地，應實施免疫組織染色，其利用對上述胰腺癌標記的一種以上抗體。採取及固定疑似正常胰臟組織及胰腺癌的組織後，利用所屬領域廣泛公知的方法製備石蠟包埋塊。將這些製備成多個Pm厚度的切片，並貼在載玻片後，通過在它和上述抗體中選擇的一個及公知的方法進行反應。之後，清洗未進行反應的抗體，且以上述檢測標籤中的一個進行標誌，從而在顯微鏡上讀取抗體是否標誌。
[0050]並且，優選地，利用蛋白晶片，上述蛋白晶片由上述胰腺癌標記的一個以上的抗體在基板上的指定位置排列，從而進行高密度的固定化。利用蛋白晶片對試樣進行分析的方法能夠通過在試樣中分離蛋白質，並將分離的蛋白質與蛋白晶片進行雜交，來形成抗原-抗體複合體，並對此進行讀取，來確認蛋白質的存在或表達程度，從而確認胰腺癌是否發病。
[0051]本發明的生物學試樣意味著組織、細胞、血液、血清、血漿、唾液、腦脊液或尿，優選地，意味著血液或血清，最優選地，意味著血清。
[0052]本發明中，用於診斷胰腺癌的句子「多核苷酸的測定」意味著作為在生物學試樣中確認對本申請的蛋白質標記進行編碼的多核苷酸是否存在和確認表達程度的過程，對多核苷酸的量進行測定。對此的分析方法包括逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)、競爭性逆轉錄-聚合酶鏈反應(Competitive RT-PCR)、實時逆轉錄-聚合酶鏈反應(Real-timeRT-PCR)> 核糖核酸酶保護測定(RPA ；RNase protection assay)、印跡雜交(Northernblotting)及DNA晶片等,但並不局限於此。
[0053]本發明中用作標記的，對上述蛋白質組中選擇的各個蛋白質標記進行編碼的鹼基序列能夠包含與其序列具有同質性的鹼基序列。
[0054]優選地，本發明中的多核苷酸意味著DNA或mRNA的片段。
[0055]本發明的診斷用試劑盒中所利用的探針或引物具有與編碼上述各個蛋白質的多核苷酸序列及多核苷酸序列互補的序列。
[0056]本發明的「引物」意味著以具有短的自由3末端羥基的核酸序列形成互補性的模板(temp late )和鹼基對，並具有用於模板鏈複製的始點功能的短核酸序列。弓I物在適當的緩衝溶液及溫度中用作聚合反應(即，DNA聚合酶或逆轉錄酶)的試劑及不同的4種核苷三磷酸的存在下，能夠公開DNA合成。本發明的引物是一種作為對各個標記基因的特異引物，具有7個至50個核苷酸序列的正義及反義核酸。引物能夠混入作為DNA合成的始點的不會變化弓I物基本性質的附加特徵。
[0057]本發明的引物能夠使用亞磷醯胺固體支撐體方法或其他廣為公知的方法進行化學合成。此類核酸序列也能利用所屬領域公知的很多方法變形。此類變形的非限制性例子包括甲基化，「覆蓋」，作為天然核苷酸的一種以上同族體的置換及核苷酸之間的變形，例如，向不帶電的連接體(例:甲基磷酸酯、磷酸三脂、亞磷醯胺及氨基甲酸鹽等)或帶電的連接體(例:磷硫酯、二硫代磷酸酯)的變形。核酸能夠包含進行一個以上的附加性共軛的殘基，例如，蛋白質(例:核酸酶、毒素、抗體、信號肽及聚賴氨酸等)、插入劑(例:吖啶、補骨脂素等)、螯合劑(例:金屬、放射性金屬、鐵、氧化金屬等)及烷化劑。本發明的核酸序列還能利用直接或間接提供信號的標誌進行變形，而上述信號是一種能夠檢測到的信號。標誌的例子有放射性同位素、螢光性分子及生物素等。
[0058]本說明書中所使用的術語「探針」意味著自然的或變形的單體或連接的線性低聚物，並包含脫氧核糖核酸及核糖核酸，也能夠與靶核苷酸序列進行特異雜交，同時，也是自然存在或人為合成的。優選地，本發明的探針為單鏈，且是寡核苷酸。
[0059]利用探針的情況下，將探針與cDNA分子進行雜交。在本發明中，適合的雜交條件能夠通過最優化的程序以一系列的過程來決定。此類程序為了樹立在研究室中使用的協議，由所屬領域技術人員以一系列的過程實施。例如，溫度、成分的濃度、雜交及清洗時間、緩衝液的成分及它們的PH及離子強度等條件依存於探針的長度及GC量及靶核苷酸序列等多種因子。用於雜交的詳細條件能夠在Joseph Sambrook, et al., Molecular Cloning, ALaboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(2001);及 M.L.M.Anderson, Nucleic Acid Hybridization, Springer-Verlag New YorkInc.N.Y.(1999)中確認。例如，上述嚴格條件中的高嚴格條件意味著在0.5M NaHP04,7% 十二燒基硫酸鈉(SDS, sodium dodecyl sulfate), ImM 乙二胺四乙酸(EDTA, EthyleneDiamine Tetraacetic Acid)中以65°C的條件進行雜交,並在0.1X標準枸椽酸鹽水(SSC,standard saline citrate)/0.1 % SDS中以68°C的條件進行清洗。或者，高嚴格條件意味著在6XSSC/0.05%焦磷酸鈉中以48°C的條件進行清洗。低嚴格條件意味著例如，在0.2XSSC/0.1% SDS中以42°C的條件進行清洗。
[0060]根據本發明的另一實施方式，本發明為了提供胰腺癌的診斷或預後所需的信息，提供一種檢測胰腺癌幹細胞標記的方法，其對選自包含人類生物學試樣中的基因庫接入號碼為AAH14372.2的蛋白質、基因庫接入號碼為CAD89908.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP001077415.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAI21475.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653337.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAA27309.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW66403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAQ63403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAB34148.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH47896.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001619.1的蛋白質、基因庫接入號碼為2PD5_A的蛋白質、基因庫接入號碼為AAF72885.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653280.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF83085.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH70129.1的蛋白質、基因庫接入號碼為1X71_A的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB55338.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW68058.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF85629.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB70777.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_109591.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAD22767.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAC04252.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW47735.1的蛋白質及基因庫接入號碼為EAW97581.1的蛋白質的組中的一種以上蛋白質或對分別編碼這些蛋白質的多核苷酸進行檢測的步驟。
[0061]根據本發明的另一實施方式，本發明為了提供胰腺癌的診斷或預後所需的信息，提供一種檢測胰腺癌標記的方法，其對選自包含人類生物學試樣中的基因庫接入號碼為AAH14372.2的蛋白質、基因庫接入號碼為CAD89908.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001077415.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAI21475.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653337.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAA27309.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW66403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAQ63403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAB34148.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH47896.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001619.1的蛋白質、基因庫接入號碼為2PD5_A的蛋白質、基因庫接入號碼為AAF72885.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653280.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF83085.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH70129.1的蛋白質、基因庫接入號碼為1X71_A的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB55338.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW68058.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF85629.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB70777.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_109591.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAD22767.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAC04252.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW47735.1的蛋白質及基因庫接入號碼為EAW97581.1的蛋白質的組中的一種以上蛋白質或對分別編碼這些蛋白質的多核苷酸進行檢測的步驟。
[0062]用於測定由上述蛋白質組組成的組中選擇的蛋白質或對這些蛋白質分別進行編碼的多核苷酸的表達水平的分析方法能夠使用所屬領域公知的方法，其中包括，例如，逆轉錄-聚合酶鏈反應、競爭性逆轉錄-聚合酶鏈反應、實時逆轉錄-聚合酶鏈反應、核糖核酸酶保護分析法(RNase protection assay)、印跡雜交及DNA晶片等,但並不局限於此。
[0063]檢測具有癌症幹細胞的胰腺癌診斷標記的本發明的方法通過以下方法執行，SP，從人類的胰臟細胞試樣中測定由上述多個蛋白質組成的組中選擇的蛋白質或對這些蛋白質分別進行編碼的多核苷酸的表達水平，並將上述測定的表達水平與正常對照組試樣的蛋白質或核苷酸的表達水平進行比較。
[0064]檢測本發明的具有癌症幹細胞的胰腺癌診斷標記的方法，在利用胰腺癌患者的細胞試樣來執行的情況下，能夠判斷採取試樣的患者的胰腺癌預後。
[0065]上述正常對照組試樣是指從沒有患癌症的人類身上採集的不包含胰臟細胞、無癌症的正常胰臟細胞及癌症幹細胞的早已確認的試樣，例如，包括在非粘結性培養條件下確認不形成球的癌症幹細胞的胰腺癌細胞株試樣或確認為非惡性的胰腺癌患者的癌症以外的細胞試樣等，但並不局限於此。在上述正常對照組試樣內，能使用如上所述的相同的方法來測定由上述多個蛋白質組成的蛋白質組中選擇的一種以上的蛋白質或對這些蛋白質進行編碼的各個多核苷酸的表達水平。
[0066]通過上述多個檢測方法能夠比較在正常對照組中的由上述多個蛋白質組成的蛋白質中選擇的一種以上的蛋白質或對此進行編碼的各個多核苷酸的表達量和作為癌症幹細胞檢測對象的胰腺癌患者中的選自由上述多個蛋白質組成的蛋白質中的一種以上的蛋白質或對此進行編碼的各個多核苷酸表達量，並判斷上述表達量是否有顯著的變化，由此可診斷胰腺癌患者試樣內是否包含癌症幹細胞。
[0067]具體而言，患者試樣中的由上述多個蛋白質組成的蛋白質中選擇的一種以上的蛋白質或對此進行編碼的各個多核苷酸表達水平佔正常對照組試樣中的由上述多個蛋白質組成的蛋白質中選擇的一種以上的蛋白質或對此進行編碼的各個多核苷酸表達水平的150%以上的情況下，判斷為包含胰腺癌癌症幹細胞。
[0068]根據本發明的另一實施方式，本發明提供一種胰腺癌的預防或治療用物質的篩選方法，其包括以下步驟:
[0069]步驟(a)，將包含選自包含基因庫接入號碼為AAH14372.2的蛋白質、基因庫接入號碼為CAD89908.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001077415.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAI21475.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653337.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAA27309.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW66403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAQ63403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAB34148.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH47896.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001619.1的蛋白質、基因庫接入號碼為2PD5_A的蛋白質、基因庫接入號碼為AAF72885.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653280.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF83085.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH70129.1的蛋白質、基因庫接入號碼為1X71_A的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB55338.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW68058.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF85629.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB70777.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_109591.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAD22767.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAC04252.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW47735.1的蛋白質及基因庫接入號碼為EAW97581.1的蛋白質的組中的一種以上蛋白質的細胞或組織與要所要分析的試樣相接觸，
[0070]步驟(b)，檢測上述步驟(a)中的一種以上蛋白質或編碼這些蛋白質的各個多核苷酸的表達量；在減少上述一種以上的蛋白質或編碼這些蛋白質的各個多核苷酸的高表達的情況下，上述試樣被判定為胰腺癌的預防或治療用物質。
[0071]本
【發明者】發現由上述多個蛋白質組成的組中選擇的蛋白質或對此進行編碼的各個多核苷酸的情況下，與一般的胰臟癌細胞不同，在胰腺癌癌症幹細胞內的多核苷酸的表達有著顯著的增加。與一般的胰臟癌細胞不同，靶蛋白或對此進行編碼的多核苷酸的表達只在胰腺癌癌症幹細胞內具有特異的顯著增加是表示它們對癌症幹細胞的生存而言是必要的因素，並且，阻斷它們的表達的物質會引導對癌症幹細胞的成長的抑制及凋亡，從而判定為有助於胰腺癌的根本治療的物質，即，胰腺癌的治療劑。
[0072]通過上述本發明的篩選方法來鑑定的胰腺癌治療劑不僅將佔癌組織的大部分的普通癌細胞作為靶，也將佔癌組織的極少一部分，卻對癌症的發病和維持、復發起著核心作用的胰腺癌癌症幹細胞作為靶，因此使胰腺癌的根本性治療成為可能。
[0073]根據本發明的又一實施方式，本發明提供一種癌症的預防或治療用藥劑學組合物，其包含谷氧還蛋白_3 (GLRX3，Glutaredoxin-3)的活性抑制劑或表達抑制劑作為有效成分。
[0074]根據本發明的優選實施例，本發明的組合物是一種藥劑學組合物，其包含(a)上述本發明的谷氧還蛋白_3的活性抑制劑或表達抑制劑的藥劑學有效量；及6)藥劑學上接受的載體。本說明書中的術語「藥劑學有效量」意味著達成上述谷氧還蛋白_3的活性抑制劑或表達抑制劑的功效或活性的充分的量。
[0075]本發明的組合物由藥劑學組合物製備的情況下，本發明的藥劑學組合物包含藥劑學上接受的載體。本發明的藥劑學組合物中包含的藥劑學上接受的載體是在製劑時通常利用的，其包含乳糖、葡萄糖、蔗糖，山梨糖醇，甘露糖醇，澱粉，阿拉伯樹膠，磷酸鈣，藻酸鹽，明膠，矽酸鈣，微晶纖維素，聚乙烯吡咯烷酮，纖維素，水，糖漿，甲基纖維素，羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂及礦物油等，但並不局限於此。本發明的藥劑學組合物除了上述成分之外，還能追加包含潤滑劑、溼潤劑、甜味劑、香味劑、乳化劑、懸浮劑及保存劑等。適合的藥劑學上接受的載體及製劑在emington』 s Pharmaceutical Sciences(19th ed.，1995)中有詳細記載。
[0076]本發明的藥劑學組合物能夠進行口服給藥或非口服給藥，而在進行非口服給藥的情況下，能夠通過靜脈注射、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、經皮給藥、黏膜給藥及點眼給藥等方式給藥。優選地，適用非口服給藥方式。
[0077]本發明的藥劑學組合物的適合的給藥劑量會根據製劑化方法、給藥方式、患者的年齡、體重、性別、病態、飲食、給藥時間、給藥途徑、排洩速度及反應靈敏度等因素，能夠下多種處方。本發明的藥劑學組合物的一般給藥劑量以成人為準，在0.0001?10000mg/kg範圍內。
[0078]本發明的藥劑學組合物根據所屬領域技術人員能夠容易實施的方法，利用藥劑學上接受的載體和/或稀釋劑進行製劑化，從而以單位容量形態製備或裝在大容量容器內進行製備。此時，劑型可以是油或水性介質中的溶液、懸浮液、糖漿或乳化液形態，或是浸膏劑、散劑、粉末劑、顆粒劑、片劑或膠囊劑的形態，且還能包含分散劑或穩定劑。
[0079]本說明書中所利用的谷氧還蛋白_3活性抑制劑或谷氧還蛋白_3表達抑制劑會減少用於表達作為癌症幹細胞標記的CD24、CD44及ESA的細胞，且會減少作為癌症幹細胞特徵的增殖率及移動能力。並且，減少球體的形成，從而最終能夠抑制視為癌症發生的初期現象的癌症幹細胞的增殖。
[0080]本發明中所利用的谷氧還蛋白_3的活性抑制劑是與谷氧還蛋白_3進行特異性結合的抗體或肽，小分子量的化合物或天然提取物。
[0081]本發明中能夠利用的，與谷氧還蛋白_3進行特異性結合的具有活性的抗體為多克隆抗體或單克隆抗體，優選為單克隆抗體。針對谷氧還蛋白_3的抗體能夠通過所屬領域通常實施的方法，例如，熔融法(Kohler and Milstein, European Journalof Immunology, 6:511-519 (1976))、重組 DNA 法(美國專利第 481656 號)或噬菌體抗體庫(Clackson et al, Nature, 352:624-628 (1991)及 Marks et al, J.Mol.Biol.，222:58，1-597 (1991))進行製備。對抗體製備的一般過程已在Harlow, E.and Lane, D., Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring HarborPress, New York, 1999;Zola, H., Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRCPress, Inc., Boca Raton, Florida, 1984 及 Coligan, CURRENT PROTOCOLS INIMMUNOLOGY, Wiley/Greene, NY, 1991中有著詳細記載，且上述多個文獻作為參照插入本說明書中。例如，產生單克隆抗體的雜交瘤細胞的製備是將不凋亡化的細胞株與抗體-產生淋巴球進行融合來組成，且在此過程中所需的技術是所屬領域技術人員公知的，因此，能夠容易地實施。多克隆抗體是將谷氧還蛋白_3蛋白質抗原向適合的動物注射，並從該動物中收集抗血清後，利用公知的親和性(affinity)技術，從抗血清中分離抗體後獲得。
[0082]與谷氧還蛋白-3進行特異性結合，從而抑制谷氧還蛋白_3活性的肽能夠通過所屬領域公知的通常的方法，例如，曬菌體顯示方式獲得(Smith GP, "Filamentous fusionphage:novel expression vectors that display cloned antigens on the virionsurface".Science228 (4705):1315 - 1317 (1985) ;Smith GP, Petrenko VA, "Phagedisplay".Chem.Rev.97 (2):391 - 410 (1997))。[0083]抑制谷氧還蛋白-3活性的小分子量的化合物能夠通過後述的篩選方法容易地獲得。
[0084]本發明中所利用的谷氧還蛋白_3表達抑制劑是與谷氧還蛋白_3基因進行特異性結合的反義寡核苷酸或siRNA寡核苷酸或shRNA寡核苷酸。
[0085]本說明書中的術語「反義寡核苷酸」意味著含有與特定mRNA的序列互補的核酸序列的DNA或RNA或它們的衍生物，且與mRNA內的互補性序列相結合，從而起到阻礙mRNA的蛋白質翻譯的作用。反義序列意味著與谷氧還蛋白_3互補並與谷氧還蛋白_3mRNA相結合的DNA或RNA序列，並能夠阻礙谷氧還蛋白_3mRNA的翻譯，向細胞質內的易位(translocation)、成熟(maturation)或其他所有整體生物學功能的必要活性。反義核酸的長度為6?100鹼基，優選為8?60鹼基，更優選為10?40鹼基。
[0086]上述反義核酸為了增進功效，能夠在一個以上的鹼基、糖或骨架(backbone)的位置變形(De Mesmaeker et al., Curr Opin Struct Biol.，5 (3):343-55 (1995))。核酸骨架能夠變形為磷硫酯、磷酸三酯、甲基磷酸、單鏈烷基、環烷基、單鏈雜原子、雜環糖之間的結合等。並且，反義核酸能夠包含一個以上的置換的糖組份(sugar moiety)。反義核酸能夠包含變形的鹼基。變形的鹼基包含次黃嘌呤、6-甲基腺嘌呤、5-me嘧啶(尤其是5-甲基胞嘧啶)、5_羥甲基胞嘧啶(HMC)、糖基HMC、龍膽二糖基-HMC (gentobiosyl HMC)、2_氨基腺嘌呤、2-硫脲嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羥甲基尿嘧啶、8-氮鳥嘌呤、7-氮雜鳥嘌呤、N6腺嘌呤、2，6_ 二氨基嘌呤等。並且，本發明的反義核酸雖然能夠提高上述反義核酸的活性及細胞的附著性，但也能與一個以上的組份(moiety)或結合物(conjugate)進行化學結合。之中包含膽固醇部分、膽固醇基部分、膽酸、硫醚、硫代膽固醇、脂族鏈、磷脂、聚胺、聚乙二醇鏈、金剛烷酯、棕櫚基部分、十八胺、乙胺-碳醯基-羥膽固醇部分等脂溶性部分，但並不局限於此。包含脂溶性部分的寡核苷酸和製備方法在本發明的【技術領域】中已公開(美國專利第5138045號，第5218105號及第5459255號)。上述變形的核酸能夠增加核酸酶的穩定性，並增加反義核酸和靶mRNA之間的結合親和力。
[0087]反義寡核苷酸的情況下，以通常的方法在試管中合成後向生物體內給藥，或使反義寡核苷酸在生物體內合成。在試管中合成反義寡核苷酸的一例是利用RNA聚合酶I。反義RNA在生物體內合成的一例是由識別部位(MCS)的起源使用反方向的載體，從而使反義RNA進行轉錄。優選地，使此類反義RNA使序列內存在翻譯終止密碼子，從而不能翻譯成肽序列。
[0088]本發明中能夠利用的反義寡核苷酸的設計參照序列目錄第一序列的核苷酸序列，從而根據所屬領域公知的方法，能夠容易製備(Weiss, B.(ed.):AntisenseOligodeoxynucleotides and Antisense RNA:NoveI Pharmacological and TherapeuticAgents, CRC Press, Boca Raton, FLj 1997; Weiss, B., et al., Antisense RNA gene therapyfor studying and modulating biological processes.Cell.Mol.Life Sc1.，55:334—358(1999))。
[0089]根據本發明的優選實施例，谷氧還蛋白_3的表達抑制劑是包含與谷氧還蛋白_3基因互補的序列的siRNA或shRNA。
[0090]本發明中，術語「siRNA」意味著對RNA的妨礙或基因移植起到介質作用的核酸分子(參照:TO00/44895，W001/36646, W099/32619, W001/29058, W099/07409 及 W000/44914)。siRNA由於能夠抑制靶基因的表達，因此，作為有效的基因敲落方法或基因治療方法提供。siRNA雖然在植物、蟲子、果蠅及寄生蟲中首次發現，但最近，研發/利用siRNA，從而應用於哺乳類細胞的研究中。[0091]本發明的siRNA分子能夠由正義鏈(與p53mRNA序列相對應(corresponding)的序列)和反義鏈(與p53mRNA序列互補的序列)位於相反的方向，從而形成雙鏈的結構。並且，根據另一實施例，本發明的siRNA分子能夠具有自補(self-complementary )正義鏈及反義鏈的單鏈結構。
[0092]siRNA不會局限於RNA之間配對的雙鏈RNA部分完全成雙，而是包含由錯配(所對應的鹼基並非互補)、隆起(一側鏈沒有對應的鹼基)等引起的無法成雙的部分。整體長度為10~100鹼基，優選地，為15~80鹼基，更優選地，為20~70鹼基。
[0093]siRNA末端結構只要是能夠通過RNAi的效果來抑制p53基因的表達的，鈍性(blunt)末端或粘性(cohesive)末端都可以。粘性末端結構是3』-末端突出結構和5』-末端突出結構都可以。
[0094]本發明的siRNA分子能夠具有在自補(self-complementary)正義鏈及反義鏈之間插入短的核苷酸序列(例如，約5~15nt)的形態，在此情況下，基於核苷酸序列的表達而形成的siRNA分子通過分子內的雜交形成髮夾結構，且在整體上形成莖和環結構。上述莖和環結構在體外或體內進行處理，從而生成可介於RNAi的活性siRNA分子。
[0095]根據本發明的優選實施例，上述siRNA是對序列表第I位的谷氧還蛋白_3基因的第591至第616核苷酸互補的序列，是序列目錄第2序列及第3序列中記載的siRNA，且上述shRNA是對序列表第I位的谷氧還蛋白_3基因的第496至第516核苷酸互補的序列，是序列目錄第4序列中記載的shRNA。
[0096]本說明書的術語「作為有效成分包含」意味著包含達成下述谷氧還蛋白-3(Glutaredoxin-3)的活性抑制劑或表達抑制劑的功效或活性所需的充分的量。本發明的組合物中包含的谷氧還蛋白_3 (Glutaredoxin-3)的活性抑制劑或表達抑制劑的定量上限能夠由所屬領域技術人員在適當的範圍內選擇並實施。
[0097]本發明的癌症預防或治療用藥劑學組合物，優選地，上述癌症是起源於癌症幹細胞的癌症，更優選地，上述癌症是胰腺癌。
[0098]根據本發明的另一實施方式，本發明提供癌症細胞的增殖抑制方法，上述方法包括抑制谷氧還蛋白-3 (Glutaredoxin-3)的活性或表達的步驟。
[0099]優選地，上述癌細胞為癌症幹細胞。
[0100]根據本發明的另一實施方式，本發明提供癌症的預防或治療方法，上述方法包括將谷氧還蛋白-3 (Glutaredoxin-3)的活性抑制劑或表達抑制劑的藥劑學有效量給藥到實驗對象(subject)的步驟。
[0101]優選地，上述癌症為胰腺癌。
[0102]【發明的效果】
[0103]歸納本發明的特徵及優點如下。
[0104](i)本發明提供對胰腺癌幹細胞及胰腺癌的新型分子標記、標記檢測方法及篩選方法。
[0105](ii)本發明作為從胰腺癌細胞株中發掘的標記，是一種能夠通過胰腺癌幹細胞標記的檢測，來檢測胰腺癌，尤其是早期的胰腺癌的標記。
[0106](iii)並且，利用本發明的標記，能夠對胰腺癌進行準確的診斷及預後分析。
【【專利附圖】

【附圖說明】】
[0107]圖1 是將多個胰腺癌細胞株(Hpac、CAPANl、CAPAN2、CFPAC, ASPCl、BXPC3、MIAPACA2及PANCl)進行球體培養的結果。表示了在Hpac、CAPANl及CAPAN2中形成球體的結果。
[0108]圖2a~圖2b是在球狀細胞中分析癌症幹細胞相關基因的表達的圖。圖2a是與Hpac黏附相比,視為癌症幹細胞信號體系的Notch、Hedgehog及wnt信號環在環狀細胞中活性化的結果。圖2b是表示幹細胞的多分化能力的oct4、nan0g及視為癌症幹細胞標記的ABGC2增加的結果。
[0109]圖3是對球狀細胞中通過實質細胞分析的癌症幹細胞標記的表達進行分析的圖。能夠確認，作為癌症幹細胞標記的CD44及PR0M2等在球狀細胞中增加。
[0110]圖4a~圖4c是確認基於眾所周知的幹細胞信號阻斷藥物對球的形成抑制的結果。圖4a是基於藥物對球的形成進行抑制的顯微鏡圖。圖4b是以圖表表示基於藥物對球的形成進行抑制時的球狀細胞的直徑差異的圖。圖4c是表示基於藥物的球的形成數量的圖表。以此類結果為基礎，能夠確認，基於幹細胞信號阻斷藥物來抑制球的形成，且球的直徑及數量也會減少。
[0111]圖5a~圖5c是對Hpac黏附細胞和球狀細胞的癌化能力的差異進行確認的結果圖像。圖5a是顯示形成腫瘤的免疫控制老鼠的胰臟和肺轉移的圖像。圖5b是摘除老鼠中觀察到胰臟及轉移的器官，從而進行H & E免疫染色的圖像。圖5c是將Hpac的黏附細胞和球狀細胞的腫瘤大小差異以圖表進行表示的。將Hpac黏附細胞和球狀細胞向免疫控制老鼠進行原位(in situ)移植，來比較腫瘤形成能力時，在移植持有癌症幹細胞的特性的Hpac球的組中，癌症的形成能力有著較高的顯示，並顯示了觀察到向肺和腹膜等器官及組織轉移的結果。
[0112]圖6是將識別的多個分泌蛋白質的表達在Hpac和Capanl細胞的黏結及球培養液中通過蛋白質印跡法進行確認的結果。可見，AKRlBl、HSP90、ALDH、波形蛋白及谷氧還蛋白-3在Hpac球或CAPANl球的培養液中有所增加。
[0113]圖 7 是在 AsPC-1、BxPC_3、Capan_l、Capan_2、Cfpac_l、HPAC、Panc_l 及 Miapaca-2的8種胰腺癌幹細胞及HPDE中提取mRNA及蛋白質，從而確認谷氧還蛋白-3的表達的結果。
[0114]圖8是向全部表達癌症幹細胞標記CN24、⑶44及ESA的細胞(⑶24+/⑶44+/ESA+ )及對3種標記都不表達的細胞(⑶24-/⑶44-/ESA-)分劃胰腺癌細胞的細胞中，對谷氧還蛋白_3的表達進行確認的結果。
[0115]圖9表示上述結果是在導入谷氧還蛋白_3siRNA和控制siRNA時，確認癌症幹細胞標記的3個種類(⑶24+/⑶44+/ESA+)的表達變化的結果。
[0116]圖1Oa及圖1Ob是在谷氧還蛋白_3擊倒(k/d)細胞株中對谷氧還蛋白_3的抑制引起的變化進行確認的結果，圖1Oa是對谷氧還蛋白_3的mRNA及蛋白質表達進行確認的蛋白質印跡法的結果，圖1Ob及圖1Oc是確認細胞增殖率的結果。
[0117]圖1la及圖1lb是確認根據谷氧還蛋白_3擊倒的癌症幹細胞的相關特性變化的結果，圖1la是確認谷氧還蛋白_3擊倒細胞株的球的形成能力的結果，圖1lb是確認生存
率及增殖率的結果。
[0118]圖12是在人體胰腺癌組織微陳列中通過免疫組織化學染色，來確認多個分泌蛋白質的圖像。這是包含AGPAT4及谷氧還蛋白-3的7個分泌蛋白質在胰腺癌組織中增加的結果。
[0119]圖13是在人體正常胰臟組織和胰腺癌組織中，確認包含AGPAT4及谷氧還蛋白_3的7個分泌蛋白質的表達的圖像。7個蛋白質都顯示，與正常胰臟組織相比，在胰腺癌組織中顯示顯著的高表達。
[0120]圖14a?圖14b是在胰腺癌患者的血清中確認現在用作胰腺癌標記的CA19-9的結果。圖14b是在胰腺癌患者的血清中確認現在用作胰腺癌標記的CEA的結果。雖然CA19-9及CEA都是現在所使用的胰腺癌診斷標記，但能夠確認的是，每個患者對CA19-9及CEA的
表達都有顯著差異。
[0121]圖15a?圖15b是使用多重親和去除系統(MARS, Multiple affinity removalcolumn system)檢測正常、慢性胰腺炎及胰腺癌患者的血清後,對通過蛋白質印跡法分泌的蛋白質中MSK2蛋白質的表達進行確認的結果。圖15a是表不MSK2蛋白質的表達的蛋白質印跡法的結果。圖15b是將MSK2蛋白質的蛋白質印跡法的結果以密度計量學進行測定，從而以圖表表示的圖。這是與正常人的血清相比，在胰腺癌血清中高表達的結果。
[0122]圖16a?圖16b是使用多重親和去除系統(MARS, Multiple affinity removalcolumn system)檢測正常、慢性胰腺炎及胰腺癌患者的血清後,對通過蛋白質印跡法分泌的蛋白質中波形蛋白(vimentin)的表達進行確認的結果。圖16a是表示波形蛋白的表達的蛋白質印跡法的結果。圖16b是將波形蛋白的蛋白質印跡法的結果以密度計量學進行測定，從而以圖表表示的。這是與正常人和慢性胰腺炎患者的血清相比，在胰腺癌血清中高表達的結果。
[0123]圖17a?圖17b是使用多重親和去除系統(MARS, Multiple affinity removalcolumn system)檢測正常、慢性胰腺炎及胰腺癌患者的血清後,對通過蛋白質印跡法分泌的蛋白質中ALDH蛋白質的表達進行確認的結果。圖17a是表不ALDH蛋白質的表達的蛋白質印跡法的結果。圖17b是將ALDH蛋白質的蛋白質印跡法的結果以密度計量學進行測定，從而以圖表表示的。這是與正常人和慢性胰腺炎患者的血清相比，在胰腺癌血清中高表達的結果。
[0124]圖18a?圖18b是使用多重親和去除系統(MARS, Multiple affinity removalcolumn system)檢測正常、慢性胰腺炎及胰腺癌患者的血清後,對通過蛋白質印跡法分泌的蛋白質中谷氧還蛋白_3蛋白質的表達進行確認的結果。圖18a是表示谷氧還蛋白-3蛋白質的表達的蛋白質印跡法的結果。圖18b是將谷氧還蛋白-3蛋白質的蛋白質印跡法的結果以密度計量學進行測定，從而以圖表表示的。這是與正常人和慢性胰腺炎患者的血清相比，在胰腺癌血清中高表達的結果。
[0125]圖19a及圖19b是在胰腺癌患者的血清中，通過酶聯免疫吸附測定確認谷氧還蛋白_3的表達的結果。圖19a是對正常對照組患者、慢性胰腺炎患者及胰腺癌患者的血液進行分離，從而比較谷氧還蛋白_3的表達的結果，圖19b是對谷氧還蛋白_3的表達程度為1800ng/ml以上的患者和1800ng/ml以下的患者的生存期間進行比較的圖表。【【具體實施方式】】
[0126]以下，通過實施例對本發明進行更加詳細的說明。這些實施例僅僅是為了對本發進行更加具體的說明的，而根據本發明的要點，本發明的範圍不會因這些實施例而受到限制是所屬領域技術人員顯而易見的。
[0127]【實施例】
[0128]在沒有其他額外提及的情況下，固體/固體為(重量/重量)份或％，固體/液體為(重量/體積)份或％ ,液體/液體為(體積/體積)份或％。
[0129]【實驗材料及方法】
[0130]【從人體胰腺癌細胞株中分離及培養具有癌症幹細胞特性的球體】
[0131]人體膜腺癌細胞株8 周(Hpac、Capanl、Cap an 2 > Cfpacl、Aspcl、Bxpc3、Miapaca2及Panel)都從美國典型培養物保藏中心(ATCC, American Type Culture Collection ；馬納薩斯，維吉尼亞州)購入，並通過美國典型培養物保藏中心提示的協議，將多個細胞株在成長培養基中培養。即，AsPC-1及BxPC-3細胞在包含10%胎牛血清(FBS ；Hyclone公司，洛根市，猶他州)的RPMI1640 (Invitrogen Gibco公司，大島，紐約)中培養，而Capan-1及CFPAC-1細胞在包含10%胎牛血清的伊斯科韋氏改良達爾伯克氏培養基(MDM，Iscove' sModified Dulbecco's Medium)(源特級胎牛血清公司:Invitrogen Gibco)中培養。Capan-2細胞在包含10%胎牛血清的麥科伊5a (Invitrogen Gibco公司)中培養,且MIA PaCa-2細胞在包含10%胎牛血清及包含2.5%馬血清的(Hyclone公司)的達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基(DMEM,dulbecco’s modified eagle medium)(源特級胎牛血清公司:Invitrogen Gibco)中培養。Hpac細胞在包含10%胎牛血清的DMEM/哈姆氏F12 (Ham，sF12XD/F12 ;源特級胎牛血清 公司:Invitrogen Gibco)中培養，且PANC-1細胞在包含10%胎牛血清的DMEM中培養。
[0132]為了球體(sphere)的培養，將多個胰腺癌細胞株向補充上皮生長因子(10ng/ml，R & D系統公司，明尼阿波利斯，明尼蘇達州)、鹼性成纖維細胞生長因子(10ng/ml，R & D系統公司)1X 膜島素 _ 轉鐵蛋白-硒化物(ITS, insulin transferring selenium,Gibco 公司)及0.5%胎牛血清的無血清DMEM/F12培養基中以1000細胞/ml的比例與6孔超低集群板(康寧公司，康寧，紐約)接種後，培養7天~10天。以相同的培養液與培養皿(能啃公司:Nalgene Nunc,羅切斯特,紐約)進行黏附，從而將在接合(adherent)的狀態下培養的細胞作為對照組。
[0133]【球狀細胞中的癌症幹細胞相關多個基因的表達分析】
[0134]使用RNA簡易試劑盒(凱傑公司，瓦倫西亞，加利福尼亞)提取Hpac黏結和球狀細胞的總RNA。通過Superscript II (Gibco BRL公司，格蘭德艾蘭，紐約)的反應，對在42°C中提取一小時的2 μ g的各個RNA進行逆轉錄反應。通過癌症幹細胞相關基因的引物和Taq聚合酶的聚合酶鏈式反應，分析球狀細胞中的癌症幹細胞相關基因的表達，並將β_肌動蛋白(Beta actin)基因的表達作為對照組。癌症幹細胞相關基因的引物鹼基序列、聚合酶鏈式反應溫度及周期數在下列表中進行顯示。
[0135]【表1】
[0136]
【權利要求】
1.一種胰腺癌癌症幹細胞標記檢測用試劑盒，其特徵在於，包含: (i)寡肽、單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合抗體、配體、肽核酸或適配體，分別與選自包含基因庫接入號碼為AAH14372.2的蛋白質、基因庫接入號碼為CAD89908.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001077415.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAI21475.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653337.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAA27309.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW66403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAQ63403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAB34148.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH47896.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001619.1的蛋白質、基因庫接入號碼為2PD5_A的蛋白質、基因庫接入號碼為AAF72885.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653280.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF83085.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH70129.1的蛋白質、基因庫接入號碼為1X71_A的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB55338.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW68058.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF85629.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB70777.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_109591.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAD22767.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAC04252.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW47735.1的蛋白質及基因庫接入號碼為EAW97581.1的蛋白質的組中的一種以上蛋白質進行特異性結合，或者 (ii)引物或探針，與編碼上述各個蛋白質的多核苷酸相結合。
2.一種胰腺癌 診斷或預後分析用試劑盒，其特徵在於，包含: (i)寡肽、單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合抗體、配體、肽核酸或適配體，分別與選自包含基因庫接入號碼為AAH14372.2的蛋白質、基因庫接入號碼為CAD89908.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001077415.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAI21475.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653337.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAA27309.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW66403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAQ63403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAB34148.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH47896.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001619.1的蛋白質、基因庫接入號碼為2PD5_A的蛋白質、基因庫接入號碼為AAF72885.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653280.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF83085.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH70129.1的蛋白質、基因庫接入號碼為1X71_A的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB55338.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW68058.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF85629.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB70777.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_109591.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAD22767.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAC04252.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW47735.1的蛋白質及基因庫接入號碼為EAW97581.1的蛋白質的組中的一種以上蛋白質進行特異性結合，或者 (ii)引物或探針，與編碼上述各個蛋白質的多核苷酸相結合。
3.根據權利要求1或2所述的胰腺癌診斷或預後分析用試劑盒，其特徵在於，上述試劑盒為免疫分析用試劑盒。
4.根據權利要求1或2所述的胰腺癌診斷或預後分析用試劑盒，其特徵在於，上述試劑盒為螢光分析試劑盒，蛋白質微陳列試劑盒或酶聯免疫吸附測定試劑盒。
5.一種胰腺癌癌症幹細胞的檢測方法，其特徵在於，包括以下步驟: 對選自包含人類生物學試樣中的基因庫接入號碼為AAH14372.2的蛋白質、基因庫接入號碼為CAD89908.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP001077415.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAI21475.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653337.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAA27309.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW66403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAQ63403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAB34148.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH47896.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001619.1的蛋白質、基因庫接入號碼為2PD5_A的蛋白質、基因庫接入號碼為AAF72885.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653280.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF83085.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH70129.1的蛋白質、基因庫接入號碼為1X71_A的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB55338.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW68058.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF85629.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB70777.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_109591.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAD22767.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAC04252.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW47735.1的蛋白質及基因庫接入號碼為EAW97581.1的蛋白質的組中的一種以上蛋白質或對分別編碼這些蛋白質的多核苷酸進行檢測的步驟。
6.一種胰腺癌診斷方法，其特徵在於，包括以下步驟: 對選自包含人類生物學試樣中的基因庫接入號碼為AAH14372.2的蛋白質、基因庫接入號碼為CAD89908.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001077415.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAI21475.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653337.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAA27309.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW66403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAQ63403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAB34148.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH47896.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001619.1的蛋白質、基因庫接入號碼為2PD5_A的蛋白質、基因庫接入號碼為AAF72885.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653280.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF83085.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH70129.1的蛋白質、基因庫接入號碼為1X71_A的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB55338.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW68058.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF85629.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB70777.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_109591.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAD22767.1的蛋白質 、基因庫接入號碼為BAC04252.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW47735.1的蛋白質及基因庫接入號碼為EAW97581.1的蛋白質的組中的一種以上蛋白質或對分別編碼這些蛋白質的多核苷酸進行檢測的步驟。
7.根據權利要求5或6所述的胰腺癌診斷方法，其特徵在於，上述胰腺癌診斷方法以抗原-抗體反應方式實施。
8.根據權利要求5或6所述的方法，其特徵在於，上述生物學試樣為血液或血清。
9.一種胰腺癌的預防或治療用物質的篩選方法，其特徵在於，包括以下步驟: 步驟U)，將包含選自包含基因庫接入號碼為AAH14372.2的蛋白質、基因庫接入號碼為CAD89908.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001077415.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAI21475.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653337.1的蛋白質、基因庫接入號碼為CAA27309.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW66403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAQ63403.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAB34148.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH47896.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_001619.1的蛋白質、基因庫接入號碼為2PD5_A的蛋白質、基因庫接入號碼為AAF72885.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_653280.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF83085.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAH70129.1的蛋白質、基因庫接入號碼為1X71_A的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB55338.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW68058.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAF85629.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAB70777.1的蛋白質、基因庫接入號碼為NP_109591.1的蛋白質、基因庫接入號碼為AAD22767.1的蛋白質、基因庫接入號碼為BAC04252.1的蛋白質、基因庫接入號碼為EAW47735.1的蛋白質及基因庫接入號碼為EAW97581.1的蛋白質的組中的一種以上蛋白質的細胞或組織與要所要分析的試樣相接觸， 步驟(b)，檢測上述步驟(a)中的一種以上蛋白質或編碼這些蛋白質的各個多核苷酸的表達量； 在減少上述一種以上的蛋白質或編碼這些蛋白質的各個多核苷酸的高表達的情況下，上述試樣被判定為胰腺癌的預防或治療用物質。
10.一種癌症的預防或治療用藥劑學組合物，其特徵在於，包含谷氧還蛋白_3的活性抑制劑或表達抑制劑作為有效成分。
11.根據權利要求10所述的癌症的預防或治療用藥劑學組合物，其特徵在於，上述癌症起源於癌症幹細胞。
12.根據權利要求10所述的癌症的預防或治療用藥劑學組合物，其特徵在於，上述癌症為胰腺癌。
13.根據權利要求10所述的癌症的預防或治療用藥劑學組合物，其特徵在於，上述有效成分是包含與谷氧還蛋白_3互補的序列的siRNA或shRNA。
14.一種癌細胞增殖的抑制方法，其特徵在於，包括對谷氧還蛋白_3活性或表達進行抑制的步驟。
15.根據權利要求14所述的癌細胞增殖的抑制方法，其特徵在於，上述癌細胞為癌症幹細胞。
16.一種癌症的預防或治療方法，其特徵在於，包括將谷氧還蛋白_3的活性抑制劑或表達抑制劑的藥劑學有效量給藥到實驗對象的步驟。
17.根據權利要求16所述的癌症的預防或治療方法，其特徵在於，上述癌症為胰腺癌。
【文檔編號】G01N33/574GK103477228SQ201280005338
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2012年1月13日 優先權日:2011年1月13日
【發明者】宋始英, 樸秀彬, 金善雅 申請人:延世大學校產學協力團