海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵促進劑的製作方法
2023-05-18 11:51:06 2
專利名稱：海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵促進劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及幾丁質的一種應用與活性物質發酵促進劑，尤其是將幾丁質作為用於海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵的一種促進劑。
背景技術：
小單孢菌(Micromonospora)是放線菌中的一個稀有屬，產生了多種重要的抗生素，如慶大黴素、球紅黴素和新黴素等。生活於海洋環境中的小單孢菌通常統稱為海洋小單孢菌。它們不同於陸生的小單孢菌，例如其生長通常要求有NaCl的存在。近年來，對海洋小單孢菌生理活性物質的研究受到人們的廣泛注意。
戴桂馥等(鄭州大學學報，1996，31(2)65-69)報導了葡萄糖和青黴素能夠促進絳紅小單孢菌提高抗生素產量，但僅限於該屬的一個種，且與本發明的促進劑不同。洪文榮(中國藥科大學學報，2003，4(5)469-472)推薦了澱粉、玉米粉、葡萄糖和蛋白腖組成的配方有利於伊尼奧小單孢提高發酵產量。Ju Chu等(Process Biochemistry，2004，391145-1150)、Takenaka.S.等(FEMS Microbiology Letters，1998，16795-100)和Lazzarini.A.等(Antonievan Leeuwenhoek，2000，78399-405)分別報導了Mg+、Na+離子、硫酸酯、酮戊二酸、生物素等對某些小單孢菌抗生素髮酵的促進作用。申請號為95107909.3的發明專利申請公開了用幾丁質作為一種微生物的發酵培養基，但目的在於製備不同分子量的聚氨基糖。申請號為94100947.5和02103056.1的發明專利申請公開了利用幾丁質作為培養基，用於提高蘇雲金桿菌和淡紫擬青黴的殺蟲效果。
發明內容
本發明旨在提供一種可高效地提高抗菌效價和產量的海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵促進劑。
本發明的技術方案是將幾丁質作為海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵的一種促進劑。
在膠體幾丁質中以水作為溶劑，配成海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵促進劑。所說的液體幾丁質的含量為促進劑總質量的0.2％～3.5％，餘為溶劑。所說的溶劑為25％～100％的海水，餘為淡水。
在實用中，在膠體幾丁質中以水作為溶劑，配成海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵促進劑。再以海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵促進劑為溶劑，加入海洋小單孢菌發酵培養基(如澱粉培養基、查氏培養基、玉米粉培養基)的各種成分，攪勻，滅菌。以上述發酵培養基培養發酵分離自海洋並具有抗菌活性的海洋小單孢菌，即可提高抗菌活性100％～400％。
本發明不同於以往小單孢菌抗菌活性物質發酵的促進技術，其區別在於利用膠體幾丁質為主要成分，製備成海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵生產的一種促進劑，在常規的海洋小單孢菌發酵生產培養基中加入本促進劑，即可高效地提高抗菌效價，具有較高的經濟價值。
雖然劉志恆(放線菌現代生物學與生物技術，北京科學出版社，2003)報導了幾丁質可作為放線菌分離的選擇培養基，但並未涉及幾丁質作為抗菌活性的促進劑，也未涉及幾丁質在抗生素髮酵生產中的應用；戴桂馥等(鄭州大學學報，1996，31(2)65-69)報導了葡萄糖和青黴素能夠促進絳紅小單孢菌提高抗生素產量，但僅限於該屬的一個種且與本發明的促進劑不同；洪文榮(中國藥科大學學報，2003，4(5)469-472)推薦了澱粉、玉米粉、葡萄糖和蛋白腖組成的配方有利於伊尼奧小單孢提高發酵產量；Ju Chu等(ProcessBiochemistry，2004，391145-1150)、Takenaka.S.等(FEMS Microbiology Letters，1998，16795-100)和Lazzarim.A.等(Antonie van Leeuwenhoek，2000，78399-405)分別報導了Mg+、Na+離子、硫酸酯、酮戊二酸、生物素等對某些小單孢菌抗生素髮酵的促進作用，但均無涉及到海洋小單孢菌，同時與本發明的抗菌活性促進劑不同。
以下給出添加本發明所說促進劑與未添加促進劑抗菌活性的比較。
對分離自廈門海區、泉州灣的35株具有抗菌活性的海洋小單孢菌，以本發明的促進劑為溶劑，配製高氏一號、查氏培養基、玉米粉培養基進行發酵實驗，發酵液以紙片法為抗菌測定方法，以枯草芽孢桿菌和白色念珠菌為指示菌，32株菌株(97％以上)的抗菌活性提高了100％～400％，表1列出10株菌株發酵液的抗菌活性測定結果。實驗結果顯示，本發明的抗菌活性物質促進劑對分離自海洋、同時具有抗菌活性的小單孢菌具有普遍性，可有效地提高抗菌活性物質的發酵水平。
表1添加本發明所說促進劑與未添加促進劑的抗菌活性比較
注1、B為枯草芽孢桿菌；A為白色念珠菌。
2、抗菌活性紙片直徑5mm，試驗24小時後測定抑菌圈大小。
3、G、C、M分別為常規的高氏一號培養基、查氏培養基、玉米粉培養基；G+CH、C+CH、M+CH分別表示上述培養基添加膠體幾丁質促進劑。
具體實施例方式
以下實施例將對本發明作進一步的說明。
實施例1將幾丁質粉碎，過60目篩，製成細粉幾丁質，在1.0g細粉幾丁質中加入8mL濃度為85％的磷酸溶液，於4℃間隔攪拌20小時後，倒入100mL蒸餾水中，反覆離心沉澱洗滌至中性，製成膠體幾丁質。取上述膠體幾丁質0.2g，以25％海水和自來水為溶劑，配製成含0.2％幾丁質的海洋小單孢抗菌活性物質促進劑。以上述海洋小單孢抗菌活性促進劑為溶劑，加入常用的各種海洋小單孢發酵的高氏一號培養基(具體配方可溶性澱粉2％，KNO30.1％，NaCl 0.05％，K2HPO40.05％，MgSO40.05％，FeSO40.001％，本促進劑97.7％)，攪勻，121℃滅菌20分鐘。以上述發酵培養基培養發酵，接種具有抗菌活性的海洋小單孢菌，按常規方法進行發酵。
實施例2將幾丁質粉碎，過80目篩，製成細粉幾丁質，在1.0g細粉幾丁質中加入7mL濃度為80％的磷酸溶液，於5℃間隔攪拌18小時後，倒入80mL蒸餾水中，反覆離心沉澱洗滌至中性，製成膠體幾丁質。取上述膠體幾丁質3.5g，以100％海水為溶劑，配製成含3.5％幾丁質的海洋小單孢抗菌活性物質促進劑。以上述海洋小單孢抗菌活性促進劑為溶劑，加入常用的海洋小單孢發酵的查氏培養基(具體配方蔗糖3％，NaNO30.1％，KCl 0.05％，K2HPO40.1％，MgSO40.05％，FeSO40.001％，本促進劑96.8％)，攪勻，121℃滅菌30分鐘。以上述發酵培養基接種具有抗菌活性的海洋小單孢菌，按常規方法進行發酵。
實施例3將幾丁質粉碎，過70目篩，製成細粉幾丁質，在1.0g細粉幾丁質中加入9mL濃度為82％的磷酸溶液，於3℃間隔攪拌24小時後，倒入90mL蒸餾水中，反覆離心沉澱洗滌至中性，製成膠體幾丁質。取上述膠體幾丁質2.0g，以50％海水和自來水為溶劑，配製成含2.0％幾丁質的海洋小單孢抗菌活性物質促進劑。以上述海洋小單孢抗菌活性促進劑為溶劑，加入常用的海洋小單孢發酵的玉米粉培養基(具體配方玉米粉3％，蛋白腖0.5％，葡萄糖1％，酵母膏0.2％，本促進劑95.3％)，攪勻，121℃滅菌30分鐘。以上述發酵培養基培養發酵，接種具有抗菌活性的海洋小單孢菌，按常規方法進行發酵。
權利要求
1.幾丁質作為海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵促進劑。
2.如權利要求1所述的海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵促進劑，其特徵在於在膠體幾丁質中以水作為溶劑，配成海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵促進劑。
3.如權利要求2所述的海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵促進劑，其特徵在於所說的液體幾丁質的含量為促進劑總質量的0.2％～3.5％，餘為溶劑。
4.如權利要求2或3所述的海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵促進劑，其特徵在於所說的溶劑為25％～100％的海水，餘為淡水。
全文摘要
海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵促進劑，涉及幾丁質的一種應用與活性物質發酵促進劑，尤其是將幾丁質作為用於海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵的一種促進劑。在膠體幾丁質中以水作為溶劑。利用膠體幾丁質為主要成分，製備成海洋小單孢菌抗菌活性物質發酵生產的一種促進劑，在常規的海洋小單孢菌發酵生產培養基中加入本促進劑，即可高效地提高抗菌效價，具有較高的經濟價值。
文檔編號C12N1/20GK1587381SQ20041007504
公開日2005年3月2日 申請日期2004年8月25日 優先權日2004年8月25日
發明者黃耀堅, 胡志鈺, 鄭忠輝, 徐慶妍, 宋思楊, 蘇文金 申請人:廈門大學