一種靈芝和人參複合提取物及其製備方法和應用的製作方法
2023-05-18 04:28:31
專利名稱:一種靈芝和人參複合提取物及其製備方法和應用的製作方法
一種靈芝和人參複合提取物及其製備方法和應用技術領域：
[0001]本發明涉及食用藥用真菌和草本植物的深加工領域，確切地說，是涉及一種對靈芝和人參的活性成分進行萃取的方法。
背景技術：
[0002]靈芝(Ganodermalucidum)是一種靈芝屬真菌,也稱為靈芝草、仙草、瑞草、神草等，是補益強壯，扶正固本的珍貴藥材，具有多種生理活性和藥理作用，是祖國傳統中藥寶庫中的珍貴藥材。從現代中醫學的觀點來看，靈芝具有無毒性、無副作用；能對全身器官有療效；可以促使全部器官機能正常化等特點。靈芝中的有效成分主要有靈芝多糖、靈芝酸、核苷類、留醇類、生物鹼類、胺基酸多肽類、無機元素和其它不飽和脂肪酸類。在我國，根據外觀對靈芝進行劃分有赤芝、紫芝、黃芝、白芝、黑芝、青芝等六種，主要分布在我國黑龍江、吉林、河北、山東、山西、內蒙古、安徽、江蘇、浙江、江西、廣東、廣西、貴州、雲南、湖南、福建及臺灣等地。其中長白山靈芝是一種生長在我國東北長白山中的赤芝。[0003]靈芝油是存在於靈芝子實體和靈芝孢子中的脂溶性揮發成分，在常溫下呈膏狀，其主要成分為靈芝酸(主要為三萜類物質)、胺基酸多肽和脂肪酸。其中三萜類物質具有強烈的藥理活性，有抑制腫瘤、止痛、鎮靜、抑制組織胺釋放、解毒、保肝、毒殺腫瘤細胞等功效。目前已知的靈芝三萜成分有一百多種。一般地講，靈芝生長期越長，其中的靈芝酸的含量就越高，而靈芝酸含量越高靈芝就越貴重。目前，靈芝油已被製成丸劑或片劑，也可以製成口服液用於抑制腫瘤，延長癌症患者的壽命。[0004]人參(Ginseng)是一種多年生草本植物，被人們稱為「百草之王」。它是馳名中外、老幼皆知的名貴藥材。目前已知人參中的藥用成分主要有人參皂甙類、有機酸及酯類、維生素類、留醇、甙類以及多種酶。在人參油中主要含有皂甙和有機酸及酯，其中人參二醇和人參三醇均是三萜類化合物，有較強的藥理活性。對久病、失血、脫液所致元氣欲脫，神疲脈微；脾氣不足之食少倦怠，嘔吐洩瀉；肺氣虛弱之氣短喘促，咳嗽無力；心氣虛衰之失眠多夢，驚悸健忘，體虛多汗；津虧之口渴，消渴；血虛之萎黃，眩暈；腎虛陽萎，尿頻，氣虛外感等有著顯著的療效。[0005]目前，超臨界二氧化碳萃取是將靈芝油從靈芝實體和靈芝孢子中高效率無成分破壞地提取出來的一種有效方法。在用超臨界二氧化碳萃取靈芝油方面的發明創造中，中國專利申請號為200610033686， 公開號為CN1850124公開的一種超臨界CO2萃取靈芝孢子油的方法，是選用破壁靈芝孢子粉為原料，混合一定量的粒狀填料，CO2壓力範圍在10 35MPa，溫度範圍在35 55°C下萃取2_5小時；一級分離釜壓力範圍在8 lOMPa，溫度範圍在30 50°C，二級分離釜壓力範圍在4 6MPa，溫度範圍在30 50°C，進行分離，獲得淡黃色靈芝孢子油。申請號為200410017468，公開號為CN1562334公開的全靈芝孢子中有效成分的超臨界CO2萃取方法，是將粉碎為顆粒的靈芝子實體與靈芝孢子混合物置於萃取釜，CO2壓力範圍在12 40MPa，溫度範圍在32 48°C下萃取3_6小時；在分離釜減壓降溫後流出呈油、膏狀態的全靈芝孢子提取物。申請號為200610000663，公開號為CN100998613公開的一種超臨界技術生產靈芝有效成分的方法，是以小麥培養靈芝菌的成品為原料，採用超臨界二氧化碳萃取技術獲得靈芝油、靈芝三萜類成分、靈芝核苷成分、靈芝留醇和生物鹼。申請號為200410005571，公開號為CN1560072公開的一種從靈芝中製備靈芝三萜酸和靈芝多糖的方法，是將靈芝子實體的顆粒物為原料，向提取罐內注入CO2和極性溶劑，提取壓力為25 50MPa，極性溶劑注入量按體積百分比為10 20%，提取溫度為35 80°C，提取時間2-4小時，得到靈芝三萜酸提取液。申請號為200810023834.9，公開號為CN101269095A的靈芝與靈芝孢子超臨界複合式加工方法，是將靈芝子實體與破壁靈芝孢子粉混合製成複合粉，利用超臨界CO2進行提取，同時滲入30% 5%夾帶劑水、乙醇，以便得到靈芝孢子油。申請號為200310107892.7，公開號為CN1607001A的用靈芝菌絲體萃取靈芝油的方法，是將靈芝菌絲體粉碎後用超臨界CO2萃取靈芝油。萃取釜內萃取壓力為15 35MPa ;萃取溫度為35 60°C ；C02流體流量為60 100kg/h ;萃取時間為0.5 4h。[0006]上述專利主要從萃取釜及分離釜中CO2的壓力、溫度及萃取時間等條件角度，在一定程度上解決了從相關靈芝子實體、靈芝孢子粉以及靈芝菌絲等原料中提取靈芝油問題。然而以一定重量比例的靈芝子實體和人參製成複合粉，用超臨界CO2方法獲取靈芝/人參複合油方面的技術還未見專利報導。從中醫學來講，靈芝油與人參油合理配伍能夠提高藥理活性，而從靈芝人參複合粉末中萃取得到的靈芝/人參複合油與簡單同比例靈芝油和人參油相加得到的混合油相比，其前者的藥理活性顯著高於後者。因此，從靈芝人參複合粉中提取靈芝/人參複合油對於相關中醫新藥的發展具有重要的意義。
發明內容
[0007]本發明的目的之一是提供一種靈芝和人參的複合提取物，具有比分別提取的靈芝和人參提取物的混合物更顯著的藥理活性。[0008]本發明的另一個目的是提供所述靈芝和人參的複合提油取物的製備方法。[0009]本發明的再一個目的是提供所述靈芝和人參的複合提油取物在藥物製備中的應用。[0010]本發明的上述目的是通過以下技術方案實現的:[0011]提供一種靈芝和人參的複合提取物，它是以1:5 5:1重量比的靈芝和人參為原料，混合製成複合粉末後，用超臨界CO2流體萃取得到的靈芝/人參複合油。[0012]所述的靈芝優選靈芝子 實體；進一步優選長白山特產的赤靈芝子實體。所述的人參優選生曬參；進一步優選長白山特產的生曬參。[0013]所述的靈芝和人參的重量比優選1:5 5:1,更優選1:2 2:1 ;最優選1:1。[0014]所述的複合粉末，優選細度為20 40目。[0015]所述的超臨界CO2流體萃取靈芝/人參複合油的方法，優選使所述的靈芝和人參複合粉末在由萃取釜、一級分離釜和二級分離釜構成的超臨界CO2流體萃取系統中，經過裝料、萃取、分離過程，得到靈芝/人參複合油。[0016]所述的裝料優選將所述的靈芝和人參的複合粉末含水率控制在12 15%，然後均勻裝填到超臨界CO2流體萃取料罐中，裝填密度控制在0.10 0.25g/cm3 ；[0017]所述的萃取優選將CO2在裝填有所述的靈芝和人參複合粉末的萃取系統中循環，同時向萃取釜打入85%乙醇作夾帶劑；按CO2流體體積和料罐橫截面積計，控制CO2流量為0.3 0.6L/h.cm2 ;萃取釜內的壓力保持在28 32MPa、溫度保持在55 60°C ;夾帶劑打入量按靈芝/人參複合粉末重量計為0.01 0.04mL/g ;萃取時間為2.5 24小時。[0018]所述的分離優選一級分離釜的壓力保持在6 8MPa、溫度保持在60 65°C;二級分離釜的壓力保持在4 6MPa、溫度保持在35 40°C。[0019]本發明還提供所述的靈芝和人參的複合提取物的製備方法，包括以下步驟:[0020]I)將靈芝和人參分別初步粉碎後，按照所述1: 5 5:1的重量比混合均勻，再進一步將靈芝和人參的混合物粉碎至20 40目；[0021]2)將步驟I)得到的靈芝和人參的複合粉末含水率控制在12 15%，然後均勻裝填到超臨界CO2流體萃取料罐中，裝填密度控制在0.10 0.25g/cm3 ；[0022]3)將CO2在由萃取釜、一級分離釜和二級分離釜構成的超臨界CO2流體萃取系統中循環，同時向萃取釜打入85%乙醇作夾帶劑；按CO2流體體積和料罐橫截面積計，控制CO2流量為0.3 0.6L/h.cm2 ;萃取釜內的壓力保持在28 32MPa、溫度保持在55 60°C ;夾帶劑打入量按靈芝/人參複合粉末重量計為0.01 0.04mL/g ;萃取時間為2.5 24小時；所述的一級分離釜的壓力保持在6 8MPa、溫度保持在60 65°C;上述的二級分離釜的壓力保持在4 6MPa、溫度保持在35 40°C，最終得到本發明所述的靈芝和人參的複合提取物。[0023]本發明所述的製備方法中， 步驟2)所述的控制靈芝和人參的複合粉末含水率，可以通過現有的多種方法完成，例如可以通過以下方法實現:[0024]首先測定靈芝子實體和生曬參的含水率。方法是將一個批次的靈芝子實體和生曬參分別取樣破碎成粒度為8 12_的塊體，稱其重量(Wtl)後放置到真空乾燥箱中，其真空度為小於50Pa，在60°C下恆溫乾燥2小時，自然冷卻至室溫後取出稱重(W)，其含水率為U = (W0-W) /X。再對同一批次的將靈芝子實體和生曬參塊體稱重，分別為Wa2和WA#，按一定重量比例貨靈芝/貨人參=1:5 5:1混合均勻並繼續破碎到20 40目粉末。根據所測定的含水率，U U入#對同一批次的靈芝子實體和生曬參複合粉用水進行加溼或乾燥處理，使複合粉的含水率保持在12 15%。[0025]本發明所述的製備方法中，步驟3)所述的CO2流體的流量Q (單位是立升/小時(L/h))與複合粉的裝填密度及料罐的橫截面積S (單位是平方釐米(cm2))有關，定義比流量q=Q/S ;所述的夾帶劑的打入量V與複合粉的重量W有關。[0026]步驟3)上述的萃取中，在所述工藝條件下萃取24小時後已基本沒有萃取物，可以認為經24小時萃取已將複合粉末中的靈芝/人參複合油完全萃取出來。定義萃取率n=x小時複合油提取重量(Wx) /24小時複合油提取重量(W24X所述的X小時複合油提取重量是指在上述工藝參量下，經X小時萃取後在一級分離釜和二級分離釜得到的複合油重量之和；所述的24小時複合油提取重量是指在同樣工藝參量下，經24小時萃取後在一級分離釜和二級分離釜得到的複合油重量之和。[0027]在本發明所述的工藝參量下，經4小時萃取，其萃取率n高於95%。經色譜分析表明，其三萜類物質含量高於22%。[0028]本發明還提供所述的靈芝和人參的複合提取物在製備抗腫瘤藥物中的應用。[0029]所述的抗腫瘤藥物優選抗口腔黏膜癌的藥物。[0030]與現有技術相比，本發明先將靈芝和人參混合制粉後，再經超臨界CO2流體萃取，得到的靈芝和人參複合提取物，不僅在靈芝和人參活性成分提取率方面取得了顯著提高，而且本發明人經過試驗發現，經本發明方法獲得的靈芝/人參複合油，比分別提取的靈芝油和人參油以同比例簡單混合得到的混合油的藥理活性顯著提高，有以下對比試驗為證:[0031]1.試驗製劑及動物飼養:[0032]取本發明實施例1製備的複合油10克，用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液配製成濃度為10g/L的靈芝/人參複合油羧甲基纖維素鈉溶液，簡稱A溶液。[0033]再取單獨用靈芝經超臨界CO2流體萃取的靈芝油5克、單獨用人參經超臨界CO2流體萃取的人參油5克,混合在一起,用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液配製成濃度為10g/L的靈芝/人參混合油羧甲基纖維素鈉溶液，簡稱B溶液。[0034]再取單獨用靈芝經超臨界CO2流體萃取的靈芝油10克，用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液配製成濃度為10g/L的靈芝油羧甲基纖維素鈉溶液,簡稱C溶液。[0035]取0.5%羧甲基纖維素鈉溶液為D溶液。[0036]6 7周齡健康的金黃地鼠240隻，體重80 100g，雌雄各半。隨機分為A、B、C和D四組，在乾燥、空氣流通、24小時光暗循環條件下雌雄分籠飼養，飼以金黃地鼠專用飼料，飲用水為普通自來水。[0037]用分析純丙酮將二甲基苯丙蒽(9，10-dimethyl-l,2-benzanthracene, DMBA,購自Sigma公司)配置成0.5% (5g/L)的DMBA丙酮液。用於誘導金黃地鼠頰囊癌變。[0038]2.試驗方案:[0039](I)A組60隻，常規飼養2周後，每日上午禁食4小時，按100mg/kg劑量將A溶液Iml經口直接餵入。每周一、三、五對金黃地鼠雙側頰囊圓周式塗布2次DMBA丙酮液，塗藥前後吹乾頰囊粘 膜，塗藥後禁水禁食2小時。塗布期間分6，9，12周(周日)各處死20隻，得到雙側頰囊標本。[0040](2)B組60隻，常規飼養2周後，按100mg/kg劑量灌胃餵服B溶液lml。其餘同A組。[0041](3)C組60隻，常規飼養2周後，按100mg/kg劑量灌胃餵服C溶液lml。其餘同A組。[0042](4) D組60隻，常規飼養2周後，灌胃餵服D溶液lml。其餘同A組。[0043]各組處死後取動物頰囊黏膜病變組織進行常規脫水、包埋、切片並作HE染色。根據WHO 口腔癌前病變協作中心12項診斷標準進行分級診斷，比較各組病損的組織學嚴重程度。並結合肉眼觀察。得到結果表I和表2所示:[0044]表中「正常」為正常黏膜:復層角化鱗狀上皮，細胞排列整齊，無釘突或釘突不明顯。棘細胞層較人之正常黏膜薄，基底層細胞明顯，類似人之正常黏膜。[0045]表中「單純增生」為上皮單純增生黏膜:上皮多數呈過度角化，少數錯角化。棘層增厚。基底膜仍整齊，固有層下有淋巴細胞、漿細胞浸潤。[0046]表中「異常增生」為上皮異常增生黏膜:多數基底細胞極性消失，上皮釘突呈釘狀、乳頭狀。上皮層次紊亂，胞核濃染，並有核仁增大，有絲分裂相增加。棘細胞層中單個或成團細胞角化。基底膜仍完整，未侵入黏膜下層。根據異型性程度和累及範圍分為輕、中、重三級。輕度和中度非典型增生，累及上皮層下部的1/3 2/3處，病因消除後可恢復正常。重度非典型增生累及上皮2/3以上尚為達到全層且很難逆轉，常轉變為癌。[0047]表中鱗癌:細胞異形性明顯，上皮增殖並突入結締組織內，呈團塊狀或條索狀排列，部分可見明顯的角化珠，核分裂象增加，細胞與胞核呈多形性。B、C組所誘導的癌均為疣狀癌，D組多為浸潤性鱗癌。[0048]表I動物頰囊黏膜組織病理觀察結果(例)[0049]
權利要求
1.一種靈芝和人參的複合提取物，其特徵在於:它是以1:5 5:1重量比的靈芝和人參為原料，混合製成複合粉末後，用超臨界CO2流體萃取得到的靈芝/人參複合油。
2.權利要求
1所述的靈芝和人參的複合提取物，其特徵在於:所述的靈芝為靈芝子實體；所述的人參為生曬參。
3.權利要求
1所述的靈芝和人參的複合提取物，其特徵在於:所述的靈芝和人參的重量比為1:5 5:1,優選1:1。
4.權利要求
1所述的靈芝和人參的複合提取物，其特徵在於:所述的複合粉末細度為20 40目。
5.權利要求
1所述的靈芝和人參的複合提取物，其特徵在於:所述的超臨界CCV流體萃取靈芝/人參複合油的方法，是所述的靈芝和人參複合粉末在由萃取釜、一級分離釜和二級分離釜構成的超臨界CO2流體萃取系統中，經過裝料、萃取、分離過程，得到靈芝/人參復口徹O
6.權利要求
5所述的靈芝和人參的複合提取物，其特徵在於:所述的裝料是將所述的靈芝和人參的複合粉末含水率控制在12 15%，然後均勻裝填到超臨界CO2流體萃取料罐中，裝填密度控制在0.10 0.25g/cm3。
7.權利要求
5所述的靈芝和人參的複合提取物，其特徵在於:所述的萃取是將CO2在裝填有所述的靈芝和人參複合粉末的萃取系統中循環，同時向萃取釜打入85%乙醇作夾帶劑；按CO2流體體積和料罐橫截面積計，控制CO2流量為0.3 0.6L/h.cm2 ;萃取釜內的壓力保持在28 32MPa、溫度保持在55 60°C;夾帶劑打入量按靈芝/人參複合粉末重量計為0.01 0.04mL/g ;萃取時間為2.5 24小時。
8.權利要求
5所述的靈芝和人參的複合提取物，其特徵在於:所述的分離是將一級分離釜的壓力保持在6 8MPa、溫度保持在60 65°C ;二級分離釜的壓力保持在4 6MPa、溫度保持在35 40°C。
9.製備權利要求
1所述的靈芝和人參的複合提取物的方法，包括以下步驟: 1)將靈芝和人參分別初步粉碎後，按照所述1:5 5:1的重量比混合均勻，再進一步將靈芝和人參的混合物粉碎至20 40目； 2)將步驟I)得到的靈芝和人參的複合粉末含水率控制在12 15%，然後均勻裝填到超臨界CO2流體萃取料罐中，裝填密度控制在0.10 0.25g/cm3 ； 3)將CO2在由萃取釜、一級分離釜和二級分離釜構成的超臨界CO2流體萃取系統中循環，同時向萃取釜打入85%乙醇作夾帶劑；按CO2流體體積和料罐橫截面積計，控制CO2流量為0.3 0.6L/h.cm2 ;萃取釜內的壓力保持在28 32MPa、溫度保持在55 60°C ;夾帶劑打入量按靈芝/人參複合粉末重量計為0.01 0.04mL/g ;萃取時間為2.5 24小時；所述的一級分離釜的壓力保持在6 8MPa、溫度保持在60 65°C;上述的二級分離釜的壓力保持在4 6MPa、溫度保持在35 40°C，最終得到所述的靈芝和人參的複合提取物。
10.權利要求
1所述的 靈芝和人參的複合提取物在製備抗腫瘤藥物中的應用。
專利摘要
本發明提供一種靈芝和人參的複合提取物，它是以1:5～5:1重量比的靈芝和人參為原料，混合製成複合粉末後，用超臨界CO2流體萃取得到的靈芝/人參複合油。本發明所述的靈芝和人參複合提取物，比分別提取的靈芝油和人參油以同比例簡單混合得到的混合油的藥理活性有顯著提高。本發明還提供所述複合提取物的製備方法，及其在製備抗腫瘤藥物中的應用。
文檔編號A61K36/258GKCN103191164SQ201310127859
公開日2013年7月10日 申請日期2013年4月12日
發明者楊海濱 申請人:吉林大學導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan